水產(chǎn)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)：水產(chǎn)微生物學(xué)綜合實(shí)驗(yàn)

1、水產(chǎn)微生物學(xué)綜合實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)報(bào)告一：實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)題目：分析魚腸道細(xì)菌的種類和組成的方法 一、目的意義 二、實(shí)驗(yàn)方案 三、預(yù)期問題與擬采取的解決辦法實(shí)驗(yàn)報(bào)告二題目：水產(chǎn)微生物學(xué)綜合實(shí)驗(yàn) 一、目的 二、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容與步驟 三、結(jié)果與分析 四、思考題： P21-六（1、4）；P28-六（1、2）； P34-六（1、2、3、4）；P38-六（1）；一、實(shí)驗(yàn)安排周（一）：器皿洗滌、培養(yǎng)基制備（見安排）、滅菌 周（二）：血清學(xué)反應(yīng)（如凝集反應(yīng)不能觀察結(jié)果，可第二天觀察）； 倒平板、劃線分離（每人二套）； 液體接種（平板計(jì)數(shù)和顯微計(jì)數(shù)用）：大腸桿菌 (一人一支)。周（三）：血清學(xué)反應(yīng)結(jié)果觀察； 斜面接種(生化反應(yīng)用)：

2、產(chǎn)氣、變形、大腸、枯草、嗜水氣 單胞菌、金黃色葡萄球菌；(二人一套) 劃線平板轉(zhuǎn)接斜面(每人從劃線平板中挑選一個(gè)單菌落接一 支斜面，作為未知菌) 平板菌落計(jì)數(shù)(二人一套) 顯微計(jì)數(shù)(每人數(shù)一遍，結(jié)果取平均值)周（四）：生理生化反應(yīng)接種(二人一套，見安排) 平板菌落計(jì)數(shù)結(jié)果觀察(如果菌落很小，可在第五天觀察) 未知菌革蘭氏染色。周（五）：生理生化反應(yīng)結(jié)果觀察 清洗用具、寫實(shí)驗(yàn)報(bào)告。周（一）器皿洗滌、培養(yǎng)基制備（見安排）、滅菌還要準(zhǔn)備的材料：培養(yǎng)皿、無菌試管、無菌移液管、無菌水、血清管生理鹽水、小燒杯、吸嘴周（二）：血清學(xué)反應(yīng)（2人1組）步驟：1、抗血清的稀釋。采取倍比稀釋法。取干凈小試管10支，

3、排列在試管架上，依次注明號(hào)碼，每支試管加入0.2mL生理鹽水。 吸取嗜水氣單胞菌抗血清0.2mL加入第1管，在管內(nèi)連續(xù)吹吸3次，使血清與生理鹽水充分混合，然后吸取0.2mL加入第2管，同樣混勻后吸取0.2mL加入第3管，依此法直至第9管，混勻后從第9管中吸取0.2mL棄去。第10管不加血清作為對(duì)照。此時(shí)從第1管到第9管的血清稀釋倍數(shù)分別1:2,1:4,1:8,1:16,1:32,1:64,1:128,1:256,1:512。 2、加入抗原。從第10管開始，由后向前每支管依次加入0.2mL嗜水氣單胞菌菌懸液。此時(shí)血清稀釋倍數(shù)相應(yīng)加大一倍。 3、抗原抗體反應(yīng)。把各管混合液振搖混勻，置37過夜，觀察

4、結(jié)果。 周（二）：倒平板、劃線分離（每人二套）注意事項(xiàng)：每畫一組線，接種環(huán)需滅菌一次（即每個(gè)培養(yǎng)皿只取材料一次）培養(yǎng)基：牛肉膏蛋白胨（第5組），每4人1瓶，培養(yǎng)皿1包周（二）：液體接種（每人1套）培養(yǎng)基：營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基（第七組）菌種：大腸桿菌接種方法：周（三）：血清學(xué)反應(yīng)結(jié)果觀察記錄：直至第幾管有可見反應(yīng)？并換算成實(shí)驗(yàn)用 血清的抗體效價(jià)-血清稀釋的倍數(shù)周（三）： 斜面接種（2人1組）培養(yǎng)基：牛肉膏蛋白胨斜面（第八組），每組8支。菌種：產(chǎn)氣桿菌、變形桿菌、大腸桿菌、枯草桿菌、 嗜水氣單胞菌、金黃色葡萄球菌、未知菌2支接種方法：注意事項(xiàng)：無菌操作、注明菌種名稱來自劃線平板上的單菌落周（三）：平板菌

5、落計(jì)數(shù)(2人1組)培養(yǎng)基：牛肉膏蛋白胨固體（第5組），每組1瓶；培養(yǎng)皿每組1包菌種：選周（二）液體接種的大腸桿菌（2選1或混合后用）方法：十倍系列稀釋至第6管 第4管至第6管的稀釋菌懸液各取0.2mL，加入編好號(hào)的培 養(yǎng)皿，每個(gè)稀釋度3個(gè)培養(yǎng)皿 溶化培養(yǎng)基，冷卻至約45，倒入培養(yǎng)皿，輕轉(zhuǎn)混勻，平 放于實(shí)驗(yàn)臺(tái)上待完全凝固后，倒置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。注意：做好記號(hào)（稀釋度、實(shí)驗(yàn)者），無菌操作規(guī)范原液0.5ml4.5ml0.5ml周（三）：顯微計(jì)數(shù)（每人2次）菌懸液：同平板菌落計(jì)數(shù)方法：要求：每人計(jì)數(shù)2次（計(jì)數(shù)板上的2個(gè)計(jì)數(shù)室），記錄每次計(jì)數(shù)結(jié)果，并計(jì)算平均值（注明與哪位同學(xué)一組）周（四）生理生化反應(yīng)接種(二人一套，見安排) 平板菌落計(jì)數(shù)結(jié)果觀察(如果菌落很小，可繼續(xù)培養(yǎng)24小時(shí)后觀察)未知菌革蘭氏染色（詳細(xì)記錄細(xì)菌形態(tài)、革蘭氏反應(yīng)結(jié)果）。 “產(chǎn)硫化氫試驗(yàn)”的第21號(hào)試管改“產(chǎn)H2S菌”為 “變形桿菌”； 改所有的“未知菌”為“嗜水氣單胞菌”； 所有的“未知菌”應(yīng)為同一