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文檔簡介

1、實(shí)驗(yàn)十六 紫外吸收法測定核酸含量 目的要求 學(xué)習(xí)紫外線（UV）吸收法 測定核酸濃度 的原理。 1實(shí)驗(yàn)原理 核酸及其衍生物，核苷酸、核苷、嘌呤和嘧啶有吸收UV的性質(zhì)，其吸收高峰在260nm波長處。核酸的摩爾消光系數(shù)（或稱吸收系數(shù)）用來表示。為每升溶液中含有1克原子核酸磷的光吸收值（即A值）（表）。測得未知濃度核酸溶液的A260nm值，即可以計算出其中RNA或DNA的含量。該法操作簡便，迅速，并對被測樣品無損，用量也少。 2試劑和器材試劑：鉬酸銨過氯酸沉淀劑：取3.6mL 70%過氯酸和0.25g鉬酸銨溶于96.4mL蒸餾水中，即成0.25%鉬酸銨2.5%過氯酸溶液。5-6%氨水：用25-30%氨

2、水稀釋5倍。 材料 酵母RNA干粉。 請節(jié)約使用。 每八個同學(xué)用一份， 即50 ml/8人31.準(zhǔn)確稱取待測核酸樣品0.5g，加少量0.01mol/L NaOH調(diào)成糊狀,再加適量水，用5-6%氨水調(diào)至pH7.0，定容至50mL。2.取兩支離心管，甲管加入2mL樣品溶液和2mL蒸餾水，乙管加入2mL樣 品溶液和2mL沉淀劑?；靹颍诒∩戏胖?0min。 3.在3000r/min下離心10min。從甲、乙兩管中分別吸取0.5 mL上清液，用蒸餾水定容至50mL。選擇厚度為1cm的石英比色杯，在260nm波長處測定A值。 4.測定A280的值。求出A260/A280.判斷RNA的純度。 RNA=A260/A280=2.0操作方法 4二、計算公式 A260 RNA濃度 = x N 0.024 x L 式中， A260為甲管稀釋液在260nm波長處A值減去乙管稀釋液在260nm波長處A值； L 比色杯的厚度，1cm； N 為稀釋倍數(shù)； 0.024每毫升溶液內(nèi)含1gRNA的A值； 1mL待測樣品液中核酸（微克） 核酸 1mL待測樣品液中制品的毫克數(shù) 在本實(shí)驗(yàn)中，1mL待測液中制品量為50g。 51. 紫外分光光度計使用前要預(yù)熱。2. 比色皿應(yīng)成套使用，注意保護(hù),不能拿在光面上。3. 離心機(jī)使用前必須將離心管平衡，對稱放置。調(diào)速必須 從低到高，離心完等轉(zhuǎn)子完全停下后，再打開蓋子，然 后

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