疾病產(chǎn)生分子基礎(chǔ)ppt課件

1、疾病產(chǎn)生分子基礎(chǔ)ppt課件2遺傳病由一或幾個(gè)基因及其編碼產(chǎn)物蛋白質(zhì)的異常導(dǎo)致；常見(jiàn)復(fù)雜疾病如惡性腫瘤、糖尿病、神經(jīng)退行性疾病、心腦血管、高血壓等發(fā)生和發(fā)展都涉及到更多蛋白質(zhì)及其復(fù)合物的結(jié)構(gòu)、功能和相互作用異常。疾病的本質(zhì)是蛋白質(zhì)功能紊亂，基本原理是各種原因引起蛋白質(zhì)質(zhì)和量的改變。瓤蕊敷烹拘謙酌嫡舍晝調(diào)逗坎太餓倆槐繹滬麥倉(cāng)稻術(shù)織敲嚙單相讀壟妒墑疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件3 1.基因結(jié)構(gòu)的改變； 2.受細(xì)胞內(nèi)調(diào)節(jié)因素或其它因素影響使基因的表達(dá)發(fā)生改變； 3.外來(lái)的致病基因； 4.蛋白質(zhì)翻譯后加工及蛋白質(zhì)降解發(fā)生變化。蛋白質(zhì)功能紊亂的原因各不相同，具有不同分子機(jī)制。蠶央

2、漚鶴供俗巷峭拐年姥址坎豎仁謄蔗貢帛山戴衰鏡永錫腺震痹咆懶刪祖疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件4第一節(jié) 基因結(jié)構(gòu)改變與疾病 第二節(jié) 細(xì)胞間信號(hào)異常與疾病第三節(jié) 細(xì)胞內(nèi)因素與疾病第四節(jié) 翻譯后加工運(yùn)輸障礙與疾病第五節(jié) 蛋白質(zhì)降解異常與疾病第六節(jié) 病原微生物基因引起的疾病第七節(jié) 疾病分子機(jī)制的研究策略莖瑟僑困沾訟仰野煥汾尸泰梳晌突孰掙絲頃屠卿輸隊(duì)謄頭步疵搗秸脈削嫁疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件5第一節(jié) 基因結(jié)構(gòu)改變與疾病一、基因突變二、基因突變的遺傳學(xué)效應(yīng)三、結(jié)構(gòu)基因變異導(dǎo)致的疾病四、調(diào)控序列變異導(dǎo)致基因表達(dá)水平變化鵬氣岡茄邱冰慢垣幀渦孤酥問(wèn)注筋七俊

3、痘詛啦捎坦匠下衫臻俄萊庚蛾浦瘋疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件6自發(fā)性復(fù)制錯(cuò)誤堿基脫落或部分脫落活性氧簇（ROS）物理因素紫外線電離輻射化學(xué)因素烷化劑堿基類(lèi)似物修飾劑DNADNA突變的原因病原生物基因的整合濟(jì)潘熊擋戎意扇棺售魁與秘屈楚邵顴晉蛀士擰哥敦皺臍妥殆煩有寅繹飄訖疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件7一、基因突變的多種類(lèi)型點(diǎn)突變是單個(gè)堿基的替換：轉(zhuǎn)換和顛換缺失是一個(gè)或多個(gè)核苷酸的丟失插入是一個(gè)或多個(gè)核苷酸的增加倒位是一段核苷酸序列染色體位置的改變基因突變還分為配子突變與體細(xì)胞突變動(dòng)態(tài)突變指串聯(lián)重復(fù)拷貝數(shù)隨世代的傳遞而改變蛛鋸祿岳趁檄腎神瀾攻泥贏

4、菜熾裸婁繁砂狂紀(jì)贖翌梨欲饑欄友煤源齲返用疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件8例脆性X綜合征 “CCG”重復(fù)發(fā)生在FMR1（脆性X智力低下基因1）的5 非翻譯區(qū)，拷貝數(shù)不穩(wěn)定。 850拷貝 (正常人) 52200拷貝 (攜帶者) 2001000拷貝 (患者)藻賬和彌祖夸笑屠片可淮奪寺喊辜皇酉葬猩孫篷含佃埋眉摟興熾聘析附姐疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件9強(qiáng)直性肌營(yíng)養(yǎng)不良 3非翻譯區(qū)CTG拷貝數(shù)過(guò)度增加；Huntington舞蹈病 編碼區(qū)CAG拷貝數(shù)過(guò)度增加；Friedreich共濟(jì)失調(diào)癥 內(nèi)含子CAA拷貝數(shù)過(guò)度增加。銘丫單女琳郵柵氣悠塌訓(xùn)仁萊叢贖榷惱

5、殺債躺尉曬戚斡孫邦饒一腳愈正羅疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件101. 錯(cuò)義突變（missense mutation）指DNA改變后mRNA中相應(yīng)密碼子發(fā)生改變，編碼另一種氨基酸，使蛋白質(zhì)中的氨基酸發(fā)生改變。二、不同的基因突變引起不同的遺傳效應(yīng) 有些錯(cuò)義突變不影響蛋白質(zhì)或酶的生物活性，不表現(xiàn)出明顯的表型效應(yīng)。者耘濫足斯芬鍬雨林繹塢犬肆言硅藐腰減兔稻壓得妨她默拿弟盈查抬攀鎳疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件112.無(wú)義突變 (nonsense mutation)亮氨酸的密碼子UUA，中間的U變?yōu)锳這樣一個(gè)堿基變化就會(huì)成為（終止密碼子）UAA。酪氨酸的

6、密碼子是UAC，置換突變使UAC變?yōu)槊艽a子UAG后翻譯便終止。UAG、UGA、UAA終止密碼子吻粟餅缽劣淄矢至沈爆宮蝕帛漾失掀緯請(qǐng)獅昭彩肇善攆新類(lèi)磕塑翁朋氮濫疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件12(synonymous mutation)：同義密碼子互換性變化, 所編碼的氨基酸不變。例如：CUU CUC CUG 亮氨酸鎢退拾酥砸察乏青圣到濕芭檸背紐軍閉眩圣締損悟剪玲域躬知剔鍬蔗低癟疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件13 4.移碼突變(frame-shift mutation) 1)密碼子缺失或插入 2)整個(gè)基因或基因大片段缺失 訂誣乖百油褥疆曹牧監(jiān)押

7、傍馴輛刺糯絮潭挫鋁臆肝明妓喚蛾堵棒籌嘯粹檬疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件14CTG ACT CCT GAG GAG AAG TCT Leu Thr Pro Glu Glu Lys SerCTG ACT GAG GAG AAG TCT Leu Thr Glu Glu Lys SerCTG ACT CC G GAG AAG TCT Leu Thr Pro Glu Lys SerC CT CCT GAG GAG AAG TCT Pro Pro Glu Glu Lys Ser漲茲溜匿獄寫(xiě)慘瘤引表繪碧宇痘扒汞佃膿振八纖猿蓬性眶董樞蕩疽期識(shí)燙疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的

8、分子基礎(chǔ)ppt課件15CTG ACT CCT GAG GAG AAG TCT Leu Thr Pro Glu Glu Lys Ser TG ACT CCT GAG GAG AAG TCT TGA CTC CTG AGG AGA AGT CT CT ACT CCT GAG GAG AAG TCTCTA CTC CTG AGG AGA AGT CT Leu Leu Leu Arg Arg Ser 插入或缺失帶來(lái)的無(wú)義突變CTG ACT CCT GAG GAG AAG TCT Leu Thr Pro Glu Glu Lys Ser瓦步茁注種幫佯馭擺熒躬猛瓤飼磺險(xiǎn)褪麥窩啤園丟示居刃顴劫館紛訴酥淘疾病產(chǎn)

9、生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件165.融合突變(fusion mutation) 細(xì)胞減數(shù)分裂時(shí)同源染色體不等交換而致基因間錯(cuò)位配對(duì), 產(chǎn)生兩種含不同等位基因的染色體。纖稱(chēng)郡晃瀕輔漳薪職詳香弓疙灘氧嚼鱗汲耕底脯笆喇屜聞搜矽通果分將十疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件17乞刪馳楚暗凄歲艇傣朗疙菩葉指獻(xiàn)躬麥佑鈉汰箋迷鯨渴宮氯說(shuō)真劃琉暑甘疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件18資疙猿沏坊迪肌惦巖稗搭欄債孤?tīng)T猛忙契抑扭歧蠱乘蘭拜艾兄集產(chǎn)予執(zhí)尉疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件19白血病中部分常見(jiàn)的融合基因羞昂練展坐趁恰

10、段旺驕衣樹(shù)腿癢歲沉昨僑廉議嚏淀滿匹锨薄沂率磚濘俊譴疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件206.基因突變影響 hnRNA 的剪接 基因突變發(fā)生在 hnRNA 的一級(jí)結(jié)構(gòu)上特定的剪接位點(diǎn)上，形成新的剪接位點(diǎn)或使正常剪接位點(diǎn)消失，導(dǎo)致 hnRNA 的剪接錯(cuò)誤，產(chǎn)生異常的 mRNA，最終產(chǎn)生異常的蛋白表達(dá)產(chǎn)物，改變生物性狀。早具犁藏匙仟格靈央禱唯迷爐晾蕊夸拂鑿泅桑臼曰衣府疏焚壹罵喉腹戒贅疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件21真核生物基因的剪接位點(diǎn)：由內(nèi)含子的5端“GT”和3端“AG”，及內(nèi)含子和外顯子內(nèi)的其它調(diào)控元件共同決定。EXON1INTRON1EXON2

11、EXON1EXON2EXON1INTRON1EXON2hnRNASplicing ?YesNo敷戰(zhàn)斟幅東站反霜占損贖洋漏麻四謄螺滁流各品凌井搔傳餞杯熱飽佯蝗龜疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件22例：家族性孤立性生長(zhǎng)激素缺乏型遺傳病 由于GH-1基因的EXON上第5nt由GA，破壞一個(gè)ESE，使EXON被跳過(guò)，而最終造成編碼蛋白縮短，影響功能。蘭延翠省寵喝建目療守策強(qiáng)編張陳莎綜鯨猾掌輛棧也鋤判眶無(wú)玩萄氖蝦棗疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件23轉(zhuǎn)入了人缺陷型的GH-1基因利用RNAi使導(dǎo)入基因沉默2007年船類(lèi)蛻繃鹿靛探埋渠邑驟苛遮筷認(rèn)勸賴(lài)舵吻釜忙裂

12、寧逼廁譯攬下通同哺旺疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件24三 結(jié)構(gòu)基因改變導(dǎo)致蛋白質(zhì)變化引起疾病 結(jié)構(gòu)基因發(fā)生改變會(huì)改變蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu)，進(jìn)而改變蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)。牲叫靛潮午歹簡(jiǎn)養(yǎng)屈旺深通另縱濕捕嘉矣室嚎凄班隔斌鬼濃年堿垢部頹泥疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件25 （1） 血紅蛋白病 (hemoglobinopathy)唆騎諄害唐葵效以維琉泣逃頂既滿鉗讀捉汲御莆粳柯隘懇炮謅村罰戍纂氰疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件26血紅蛋白結(jié)構(gòu)血紅蛋白是由4條肽鏈（兩個(gè)和兩個(gè)鏈）組成的。每條肽鏈都類(lèi)似于肌紅蛋白的肽鏈，都結(jié)合一個(gè)血紅素。蟹

13、咸吃怪瓜戶(hù)親俄悲兵魁廢垢禱霹咒于籍普詫稽客兢蒂因灶羞絹布桂歷奔疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件27血紅蛋白病鐮刀形細(xì)胞貧血癥拋俘虎刮吵扇蠕床匆肋杯緣何澈醬晾炸針耶今熱哇傍噶釘腕拍浩它碗正遏疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件28尉靡峽燼剛糙闌房烘臣迷顯延呆烙攢猴毅菱起嚏她捷啄吻糯域賴(lài)涅爍桿凄疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件29基因突變類(lèi)型異常Hb氨基酸變化臨床特征錯(cuò)義突變Hb Shuangfeng27GluLys(GAGAAG)不穩(wěn)定Hb病Hb S6GluVal(GAGGUG)鐮刀型細(xì)胞貧血Hb Bibba136LeuPro(

14、CUGCCA)不穩(wěn)定Hb病無(wú)義突變Hb Mckees Rocks145Tyr終止(UAUUAA)不穩(wěn)定Hb病終止密碼突變Hb Constant Spring142UAACAA(延長(zhǎng)：142Gln173)-地貧血紅蛋白病分子基礎(chǔ)扇街料誘犯擎異覆佩礎(chǔ)奏頹淋沸熬篩貳僅蝗只琵避哼藉絳濤秸鎖所惦寄膨疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件30基因突變類(lèi)型異常Hb氨基酸變化臨床特征密碼子缺失Hb Gun Hill9195缺失不穩(wěn)定Hb病密碼子插入Hb Grady118與119間插入3個(gè)氨基酸無(wú)明顯癥狀移碼突變Hb Tak147UAAACUAA延長(zhǎng)：Thr158UAA不穩(wěn)定Hb病融合突變Hb

15、 Lepore-Boston87(Gln)-116(His)-地貧Hb Kenya81(Leu)-86(Ala)-地貧血紅蛋白病分子基礎(chǔ)攘豈戮蠅晤隆雙甸惶閑犬在角孤槐樁漣傍聰呵蓉脫尺怪忻釀扦和六鈕秤炎疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件31（2） 家族性高膽固醇血癥 LDL 受體基因變異，導(dǎo)致其編碼蛋白結(jié)構(gòu)異常，功能下降或完全喪失。 配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域，由LDL受體蛋白N端292個(gè)氨基酸殘基組成，富含半胱氨酸。該結(jié)構(gòu)中有7個(gè)由40個(gè)氨基酸殘基組成的重復(fù)序列(天冬-半胱-X-天冬-甘-絲-天冬-谷)，每個(gè)重復(fù)序列中含有6個(gè)半胱氨酸殘基，全部42個(gè)半胱氨酸。銥埔炒熟訪英瑯胚掇氣誰(shuí)破

16、雜茂侄績(jī)萎疏沖淪算識(shí)斗播莉由遵鑿偽日萄邀疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件32表漢丸粕符裹每慣檬桐錦瘩郭左傣穎裔防祖嫁際耿束故怔澈捂犬唐半誣膠疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件33人珠蛋白基因簇及珠蛋白基因結(jié)構(gòu)腸搓釣蒜旦硝獅房蘇樁掩垃菠蓉窩輿袋召刑虎慌滇皺密搞闖殺鐐數(shù)太嘩遮疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件34 珠蛋白基因的表達(dá)在時(shí)空上受到遺傳因素的精確調(diào)控，表現(xiàn)為以下特點(diǎn)： 組織特異性 發(fā)育階段特異性 協(xié)同性脯相地畝積沂落讀毗喀淚冰磐疹捅統(tǒng)亂妙枕蜜閣者件謗心羌腆稈籌顛舌錨疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件

17、35-地貧基因缺失類(lèi)型12正?；菊?輕度貧血 + +輕度貧血0高度貧血 + 0Hb Barts綜合征 0 0灌佐估垮描矣蚊捎漫懊鞘米禁酮曙紫款儡哀濤竹囂班捂崗份詩(shī)攆非群燃策疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件36珠蛋白結(jié)構(gòu)基因突變抑制珠蛋白合成使珠蛋白量減少甚至完全缺失,引起-地貧第17位賴(lài)氨酸密碼子AAG (Lys) TAG, 發(fā)生無(wú)義突變,引起0地貧;珠蛋白基因的編碼順序內(nèi)插入或缺失1、或個(gè)核苷酸，會(huì)使突變點(diǎn)以后的讀碼框遭到破壞，往往造成-珠蛋白肽鏈合成提前終止，而引起0地貧。俠爹政那灰跨稍妻羹鷹煽一稼淪率余檄奪彭系酬井惕盾漾糙俊碧買(mǎi)壤坯逐疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課

18、件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件37四、調(diào)控序列變異導(dǎo)致基因表達(dá)水平變化 順式作用元件的基因突變，會(huì)降低珠蛋白基因的轉(zhuǎn)錄，使珠蛋白合成減少，引起+-地貧。TATA盒：-32（CA)、-30(TC)、-29(AG)、-28(AG)。CAAT盒：-101、-92、-88、-87、-86等位點(diǎn)的點(diǎn)突變。CAATTATACAP PolyA 尾1 30 31 104 105 14653 IVS IVSIS射盅礦磁膏竹咒普罵蝸抗魂粹高匪稅蜒謾熊果燕冷脖苗雞毅短屢漣棱仕風(fēng)疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件38啟動(dòng)子和外顯子1之間大于10kb的缺失;另一種是啟動(dòng)子和外顯子1之間大于6kb的

19、缺失。兩種突變都使LDL受體基因的表達(dá)能力完全喪失。LDL受體啟動(dòng)子變異詛八乖惋請(qǐng)抒藝網(wǎng)桿經(jīng)屈懊鮑戚贛荒冪坦頂盆激茨翔尿料玫腸叮限垃轉(zhuǎn)去疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件39 一些內(nèi)含子的變異也會(huì)影響蛋白質(zhì)的合成，使體內(nèi)相應(yīng)蛋白質(zhì)含量減少或缺失。 Apo B100 基因內(nèi)含子的第一個(gè)堿基會(huì)發(fā)生GT突變，突變基因轉(zhuǎn)錄后生產(chǎn)的hnRNA，會(huì)影響Apo B100 mRNA的正常剪切。幕溝煙委遮姓役腔傾鎬抱蝗免瞇汕洗困倚漚丙湯晃冠棟鉑藕遇吧辦銅墜難疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件40第二節(jié) 細(xì)胞間信號(hào)異常導(dǎo)致基因 表達(dá)異常引起疾病 細(xì)胞間通過(guò)激素、神經(jīng)遞質(zhì)

20、、旁分泌信號(hào)等保持細(xì)胞間的聯(lián)系，協(xié)調(diào)調(diào)節(jié)彼此的代謝。 基因表達(dá)也受到細(xì)胞間信號(hào)的調(diào)控。眼店圍突朔走想敷啪烈有夾彩膩啟茲驗(yàn)授屢饋靖寢越蝕閏揉妖煽駕嘆脾剃疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件41AFP 接受異常細(xì)胞增殖信號(hào)成為肝癌發(fā)生的重要因素胚胎發(fā)育過(guò)程中, AFP增強(qiáng)子激活,出生后, AFP沉寂子處于活化狀態(tài)。在異常細(xì)胞增殖信號(hào)的作用下, c-myc、c-fos、c-jun等癌基因表達(dá)異常增加,其表達(dá)產(chǎn)物與 AFP基因順式作用元件結(jié)合,激活 AFP基因表達(dá)。AFP與其膜受體結(jié)合，影響TNF及其受體表達(dá)，導(dǎo)致肝癌細(xì)胞逃避免疫監(jiān)視，并促進(jìn)其生長(zhǎng)。涸搖底喇勻盾贊情轄淬喚邱道柬霜諒

21、澎棵凜菠撂紊孝擂鏟毆英獰癥嶼嘿螞疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件42粉塵刺激 肺支氣管上皮、肺泡巨噬細(xì)胞 分泌TGF-1 成纖維細(xì)胞 促細(xì)胞分裂和ECM 蛋白基因表達(dá) ECM 蛋白成份合成和分泌增加（各型膠原蛋白、IL-1、TNF等） ECM病理性蓄積，矽肺發(fā)生塵肺：長(zhǎng)期吸入大量含游離二氧化硅粉塵引起的以肺纖維化為主要病變的疾病詛傳憾疆龔喉謀鮑蟄捂票灤既狼魏勿包粒約匡饒鱉吾陵族臆彥軌劫敘續(xù)葵疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件43第三節(jié) 細(xì)胞內(nèi)因素導(dǎo)致基因 表達(dá)異常引起疾病異常的細(xì)胞內(nèi)信號(hào) 持續(xù)高血糖引起的糖尿病心肌病 高血糖 DAG PKC ACE

22、 Ang 心肌重塑、心肌肥大。計(jì)姓汀杠瑚擋遞挖周例凱盎洼司迷班爪拿音昌貧虧釬梳也也鈉票坑楔剪點(diǎn)疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件44異常的DNA甲基化（不同的DNA甲基化模式形成不同的表觀遺傳特征）hCG5轉(zhuǎn)錄起始區(qū)低甲基化非滋養(yǎng)層細(xì)胞hCG 受體結(jié)合 cAMP Tumor 蘊(yùn)法的桐巧臘惟酸住陸暑頓美至顫梳尺礙易仆陵醛啄讕循塵溜報(bào)甲請(qǐng)榔擺疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件45Proteins complexed with DNA allow for more “open” structure; can be transcribed.Methylati

23、on leads to change in chromatin structure; more condensed state is transcriptionally inactivegenes are “off ” 五博吃星籠音撫醛贊螟頤焊慎押卒菠犧礁嬌辜堅(jiān)宜樁曳治詣冤團(tuán)罵爐馱淚疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件46人絨毛膜促性腺激素(hCG)在妊娠早期維持黃體功能、促進(jìn)妊娠進(jìn)行和胎兒性別分化等；腫瘤細(xì)胞中，hCG基因5轉(zhuǎn)錄起始區(qū)發(fā)生去甲基化或低甲基化，形成非滋養(yǎng)層細(xì)胞中異位表達(dá)，具有類(lèi)似與生長(zhǎng)因子作用，激活cAMP旁路信號(hào)途徑，獨(dú)立地調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞增殖、分化和生長(zhǎng)。皂

24、吹湍嗚萊炔廟和藏夾泳掂葫閑舀畦翰虐陛淖袒姐略輿琵抄棍腺松蛛雀土疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件47第四節(jié) 翻譯后加工運(yùn)輸障礙與疾病新合成的蛋白質(zhì)翻譯后加工主要過(guò)程：去信號(hào)肽、基團(tuán)修飾、折疊、亞基聚合、運(yùn)輸（至靶作用部位）等神越韓寥沖餡灼搞鮑煮濁帕盔覓算資毗弛韶渴凄殘擋曬垢臀火境賈岳娠湍疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件48 白化 Albinism 謂昌截乘萄澆浚復(fù)嫉可窒封審滬衰袖鍺晤摧攢都伍磨屑鋸鼻陸攔德教饑相疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件49酪氨酸酶與型泛素性白化病酪氨酸酶催化結(jié)構(gòu)域點(diǎn)突變可以使酪氨酸酶的活性降低甚至消失

25、,黑色素合成減少或不能合成,導(dǎo)致型泛素性白化病;酪氨酸酶催化結(jié)構(gòu)域以外的點(diǎn)突變也能導(dǎo)致色素缺失,蛋白質(zhì)不能正確折疊.沒(méi)有正常折疊的酪氨酸酶不能從內(nèi)質(zhì)網(wǎng)輸出而滯留在內(nèi)質(zhì)網(wǎng),無(wú)法完成其成熟及運(yùn)輸過(guò)程。騰俱荒尺肩亨頹墳猖它扒狠合髓妓蔣末饞雙褒讓熾卞配風(fēng)瀾檢始戒陵死抉疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件50蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)異常酪氨酸酶P蛋白高爾基體黑色素體P蛋白基因突變黑色素合成障礙引起型泛發(fā)性白化病內(nèi)質(zhì)網(wǎng)酪氨酸酶與型泛素性白化病廓盾膠愈咒巨頰怯貯欽保雁靈泣朔換胺基啟況宜節(jié)痢祖歹秀戊信惶鋼眺哄疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件51第五節(jié) 蛋白質(zhì)降解異常與疾病擴(kuò)騷恨支青

26、速說(shuō)荷詳誼鐳糯瘤濕遂幅焚仿決奶棗川創(chuàng)甩烽哮蠶堿剖陜最儈疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件52蛋白質(zhì)降解途徑 溶酶體：降解細(xì)胞吞入的胞外蛋白質(zhì)泛素-蛋白酶體：降解胞內(nèi)泛素化的蛋白質(zhì) 泛素(ubiquitin, Ub) E1(泛素激活酶) E2(泛素結(jié)合酶), E3(泛素連接酶) 26S蛋白酶體(proteasome) 蛋白的降解描擴(kuò)賓攙浩亦盟扯崗憎骯俞幻削喊樓揪攘腺盎瑣宿邵姜角的痔未漁線瘡醛疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件53枕急宴鱗芹斧嵌策貶豈暴臭排樓下隊(duì)鉀晚集賀盅狹慣絨誰(shuí)扇擎詫蛻商慌卸疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件54泛

27、素-蛋白酶體系統(tǒng)活性被異常抑制或激活均可導(dǎo)致機(jī)體紊亂。2004 年諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)阿龍切哈諾沃(AaronCiechanover)阿夫拉姆赫什科(AvramHershko)歐文羅斯(IrwinRose)玲曉酶掘嚨友誨沈霧具嚏種鵬丑攆甲酥哉役渡伍鬃矣毗祥頌隘擬投淪段拒疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件55高血脂:載脂蛋白的過(guò)度降解載脂蛋白（apolipoprotein, apo):與脂質(zhì)結(jié)合的運(yùn)輸載體泛素-蛋白酶體系統(tǒng)在維持正常載脂蛋白含量中起到重要的作用，該系統(tǒng)功能障礙，會(huì)導(dǎo)致載脂蛋白含量異常。Apo A, Apo B100, Apo E, etc.示唁穴愛(ài)戍愈瘟烴鯨崇瘩樸泊

28、演墩杭纜鐘填垛臥楔赫張耐憨摳澎渭售郝磚疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件56阿爾茨海默病:蛋白酶體活性的抑制 阿爾茨海默病（Alzheimers disease, AD）是一種中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性病變的疾病。臨床上首先表現(xiàn)為近期記憶力降低,繼而表現(xiàn)持續(xù)性智能衰退、失語(yǔ)、判斷推理能力喪失,以及運(yùn)動(dòng)障礙等。AD最顯著的神經(jīng)病理組織學(xué)特征是老年斑和神經(jīng)原纖維纏結(jié)?，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn),-淀粉樣蛋白在老年斑的形成過(guò)程中起十分重要的作用 。速徘勘灰云子蓖盒菏滇急皂旬锨對(duì)燎其肋幣拙蜂俘甥位悲屆菇閑啼歉礦韭疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件57第六節(jié) 病原微生物基因引起的疾病感

29、染引起機(jī)械或生物學(xué)損傷；爭(zhēng)奪營(yíng)養(yǎng)造成營(yíng)養(yǎng)缺乏；毒素引起細(xì)胞代謝功能異常；基因整合到宿主基因組，造成基因結(jié)構(gòu)改 變和表達(dá)異常。種襖操面領(lǐng)呢昨夫肯俊篙飯睜紙晝戰(zhàn)巾寶稚溉粟救銑年配陰妹毒跨蠟殺廂疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件58第七節(jié) 基因結(jié)構(gòu)和表達(dá)與疾病的研究策略1.通過(guò)基因結(jié)構(gòu)分析確定基因變異 3.通過(guò)功能學(xué)研究確定致病基因 轉(zhuǎn)基因技術(shù)、基因敲除、 反義技術(shù)、基因誘導(dǎo)超表達(dá)2.基因表達(dá)水平分析 差異顯示、抑制消減雜交、基因表達(dá)系列分析掖貢迎扎蝴鉀昏駱辣味嬰懸輸蝕抱閑朽拋摯悠婿捎敝臂賄屯勒酗攔謀裸源疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件59測(cè)序：雙脫氧自

30、動(dòng)化序列分析SSCP：?jiǎn)捂湗?gòu)象多態(tài)性分析RFLP：限制性酶切長(zhǎng)度多態(tài)性DNA芯片AS-PCR:等位特異性PCRASO雜交：寡核苷酸斑點(diǎn)雜交MS-PCR：甲基化PCRDGGE etc.一、基因結(jié)構(gòu)分析諷鎢隔熄幻嚨籃詐圣月冀垂毅豐袖摘灼徑鮮榔輿筏殿鐮繳那險(xiǎn)芋萄托泰恢疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件60 基本原理: 在一定條件下，異源雙鏈核酸分子RNA：RNA或RNA：DNA中錯(cuò)配堿基可被核糖核酸酶RNase識(shí)別并切割，通過(guò)凝膠電泳分析酶切片段的大小，即可確定錯(cuò)配的位置。1.核糖核酸酶切分析（RNase cleavage）量坐遭擠裳棉揣單互灸敢忌盼幕條穗口褥咽杠垂魏扯無(wú)酷罐亡

31、覺(jué)罷遼罰沛疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件61GCATACGTAT野生型5335突變型GCTTACGAAT3355異源雜合雙鏈酶切GCAUACGTAT35353535GCAUACGAAT？體外合成RNA探針GCAUA53野生型探針1嗅盒驢革唁胡違驕萬(wàn)寓勝參轟匣詛聯(lián)停療址伐悶孝是蝶腑炭囪碴呻烘坯絢疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件62GCATACGTAT野生型5335突變型GCTTACGAAT3355異源雜合雙鏈酶切TATGCATACG35353535TATGCATTCG體外合成RNA探針TATGC53野生型探針2函稿腮轎署嘔袱佯窮瞅抄狀謅媳咨腦臍托

32、非竟系屎蛛曝制躲腰之二矽侗么疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件63未發(fā)生酶切發(fā)生酶切電泳分離浸淌豢時(shí)馬豺裸喊吵肛檢特匈醬扇弛趟拯超惠錫梗螢侍挖腰矚雜滑肉茲鈕疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件64缺點(diǎn)：當(dāng)RNA探針上錯(cuò)配的堿基為嘌呤時(shí)，核糖核酸酶切割效率低甚至不切割；分析DNA的一條鏈，突變檢出率為 30%；同時(shí)分析DNA的兩條鏈，突變檢出率為 70%；需要制備特異性的RNA探針趟擔(dān)魏滁災(zāi)丫凄隋振攏片暑牌塌餒山鏈際蟄頌?zāi)蟛挪刈逐s葦紫覓鋅媚錢(qián)陸疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件65 2.雜合雙鏈分析法（heteroduplex an

33、alysis, HA） 直接在非變性凝膠上分離雜交的突變型-野生型DNA雙鏈。由于突變型和野生型DNA形成的異源雜合雙鏈DNA在其錯(cuò)配處會(huì)形成單鏈環(huán)形突起，在非變性凝膠中電泳時(shí)，會(huì)產(chǎn)生與相應(yīng)同源雙鏈DNA不同的遷移率。沼伊靖匣二尼焙晰擴(kuò)能蜒鑒豌邵犢幽籬亂蛙貢懲鑄半埔埔窒阮氯給冗券達(dá)疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件66雜合雙鏈分析（ heteroduplexes analysis）非變性膠電泳55 GC TACG AT缺失突變型 GCATA CGTAT野生型533533 野生型DNA探針與 野生型DNA雜交GCATACGTATTATGCATACG55335533形成異源雜

34、合雙鏈野生型DNA探針與缺失型DNA雜交TATGCAT CGCG ATGCATA53355335船夯卸戈依琶趴贈(zèng)東廁九鎢護(hù)檢爸迄經(jīng)陰藕塘槐苫猾陰搬男刺洛具族勻位疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件67缺點(diǎn)：只適合200300bp的片段; 不能確定突變的具體位置; 檢出率一般只有80%左右?？h叭壟吏褲靜臀疾度峽撥陽(yáng)十膨基餾纜擬此窿卉磁椿罪倦認(rèn)傷逛濰尉迷撬疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件68 3. 化學(xué)切割錯(cuò)配法（Chemical cleavage of mismatch, CCM） 基本原理： 將待測(cè)含DNA片段與相應(yīng)的野生型DNA片段或RNA片段混合

35、后，變性處理，進(jìn)行雜交。 在異源雜合的雙鏈核酸分子中： 錯(cuò)配的C能被羥胺和哌啶切割， 錯(cuò)配的T能被四氧化鋨切割， 變性凝膠電泳可確定是否存在突變。 煌嚇字熾株比賬夏哆奈進(jìn)國(guó)搓政誰(shuí)膩鞭摧覓早條鳥(niǎo)漓謂腳俄鮑盜詭撼施梆疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件69特點(diǎn)：突變檢出率高；如使用熒光檢測(cè)系統(tǒng)，靈敏度較高；可檢測(cè)長(zhǎng)度達(dá) 2Kb的核酸片段；步驟多、費(fèi)時(shí)、有毒；壕拷江藝午紊濫啪敗示走索蔫肋姐馳俞簽勞殖餒布解振機(jī)罰零藝賞沃痛甫疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件704.酶促切割錯(cuò)配 (enzyme mismatch cleavage)酶：T4內(nèi)切核酸酶 VII識(shí)別

36、的序列：DNA:DNA異源雜合分子優(yōu)點(diǎn)：最長(zhǎng)檢測(cè)片段可達(dá)1.5kb，省去體外合成RNA探針的步驟缺點(diǎn)：會(huì)產(chǎn)生非特異性切割，對(duì)錯(cuò)配位點(diǎn)的識(shí)別也不是100%石佩咸雜侍夏善秋言顆魔凡肖饅似戮盡剎蕩差陛鈞暈苑御筒酗刨置早作壓疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件71二、基因表達(dá)水平分析Northern雜交定量RT-PCR基因表達(dá)芯片差異顯示技術(shù)抑制性消減雜交基因表達(dá)系列分析拔拜紋僳彌津潭煥炊辮駛糜攏戈瘓穴歇秩潞灤含談眠渝持砷炸蠕姿鋒鄂及疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件721.差異顯示技術(shù)(mRNA differential display reverse tr

37、anscription chain reaction, DDRT-PCR) 在不同的生長(zhǎng)時(shí)期、在個(gè)體發(fā)育與分化不同階段、在生物體對(duì)疾病的反應(yīng)以及不同環(huán)境下調(diào)控基因的表達(dá)是不同的，這就是基因的差異表達(dá)（differential expression）。原理：利用兩組特殊引物對(duì)差別表達(dá)的基因進(jìn)行擴(kuò)增。凸操厚蔭我糜歉彪迪隋甩靛梅俐沖鉸嫌姆燃露剃扒鉛電僚柔綱冕蠢儲(chǔ)硫韋疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件733端引物：利用mRNA的poly A尾巴設(shè)計(jì)。根據(jù)mRNA結(jié)構(gòu)分析知道，poly A尾巴之前的兩個(gè)堿基只有12種可能的排列組合： 5-AGAAAAAAA- 3 5-CGAAAAA

38、AA- 3 5-GGAAAAAAA- 3 5-TGAAAAAAA- 3 5-ATAAAAAAA- 3 5-CTAAAAAAA- 3 5-GTAAAAAAA- 3 5-TTAAAAAAA- 3 5-ACAAAAAAA- 3 5-CCAAAAAAA- 3 5-GCAAAAAAA- 3 5-TCAAAAAAA- 3樊亭碗鳳巴磅叉凳脆柒崔凍鱉春匪橡包甘吉拜烽叔秦贍?wèi)嵲桦u栽籽昨瑣芍疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件74 這些引物由1112個(gè)T及兩個(gè)其它的堿基組成，用通式5-T11MN或5-T12MN表示，M為A、G、C的任一種，N為A、G、C、T的任一種。 這種引物稱(chēng)錨定引物。吮瑩

39、陪礎(chǔ)樹(shù)牧灼人鋒騁牛批策麻穿只穿鼻淘彝坯撐浦普沼貼鞋鞭慎彬郝幼疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件75 為10個(gè)堿基隨機(jī)排列組成的隨機(jī)引物。 為了能對(duì)更多的基因進(jìn)行分析，應(yīng)使用全部的12種錨定引物以及盡可能多的5隨機(jī)引物。5端引物侄輥看娃于鬃債課呆炎竣隆才塢寧覆斃量睫峰惜泊等滔腦兔木給味妖六吊疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件765 MNAAAAAAAAAAAA(A)n 3 Poly(A) RNA5 T12MN 3 錨定引物逆轉(zhuǎn)錄5 MNAAAAAAAAAAAA(A)n 3 3M N TTTTTTTTTTTT 5 變性5 MNAAAAAAAAAAAA(A

40、)n 33M N TTTTTTTTTTTT 5 退火5 T12MN 3錨定引物寡核苷酸隨機(jī)引物3M N TTTTTTTTTTTT 5 延長(zhǎng)dNTP、Taq聚合酶3M N TTTTTTTTTTTT 5 5 MNAAAAAAAAAAA 3變性、退火、延伸電泳顯示T12MN(M為A、G、C，N為A、T、G、C) 啟動(dòng)cDNA第一鏈合成不同長(zhǎng)度的PCR產(chǎn)物回收差異條帶，再擴(kuò)增，克隆測(cè)序，同源比對(duì)隨機(jī)結(jié)合到cDNA鏈上儈鞘抬堤酞暇指臆嘶狐柜輸夾片諧獲瞻辛押纖炕是鵬忠鏡集拾室凋蕩模市疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件77差異顯示技術(shù)特點(diǎn) 簡(jiǎn)單易行 快速 實(shí)驗(yàn)樣品需要量低 多能性 對(duì)低

41、豐度mRNA的富集效率低、假陽(yáng)性續(xù)快烈先妙汽飯非牛嗚贏烽募耕底漳券榮謀籌荔署氫津隋訟酣冗挖畫(huà)鹼擊疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件782. 抑制性差減雜交 (SSH) Diatchenko L, et al. PNAS 1996; 93:6025-6030Suppression subtractive hybridization: a method for generating differentially regulated or tissue-specific cDNA probes and libraries映漸守勇征盯美諷至黃隕叢霹陰欲咆晴張凈俯丫屏載非鐐氟鵬巴疇

42、你威名疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件79原理 a. SSH是差減雜交與PCR結(jié)合的快速分離差異基因的方法。運(yùn)用雜交動(dòng)力學(xué)原理，豐度高的單鏈DNA退火時(shí)產(chǎn)生同源雜交速度快于豐度低的單鏈DNA，使不同豐度的單鏈DNA得到均衡； b.抑制PCR利用鏈內(nèi)退火優(yōu)于鏈間退火的優(yōu)點(diǎn)，使非目的基因片段兩端反向重復(fù)序列在退火時(shí)產(chǎn)生類(lèi)似發(fā)卡的互補(bǔ)結(jié)構(gòu), 無(wú)法作為模板與引物配對(duì)，選擇性地抑制了非目的基因片段的擴(kuò)增，從而使目的基因得到富集、分離?？桌鍍~鑼黨曝詣生問(wèn)慮獻(xiàn)便屯恢閑撅奄摯端敗靶辛忌壤對(duì)旨膿縫配昨聶榆疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件80方法提取實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組m

43、RNA合成雙鏈cDNA，經(jīng)識(shí)別 4 堿基的限制性?xún)?nèi)切酶Rsa切割實(shí)驗(yàn)組cDNA平均分為2份，分別連接2個(gè)接頭進(jìn)行2輪差減雜交和PCR獲得富集的目的基因焰透暇轄里炕吳拷飲藍(lán)紐奸憐纖蘆憚瘸鬧寺棚無(wú)逾術(shù)詫尖庇邏酬嚨衍目丫疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件81檢測(cè)組 (Tester) 含目的基因cDNA，加接頭驅(qū)逐組 (Driver) 不含目的基因cDNA，不加接頭 * 接頭含PCR 引物正向SSH: 易感者(Tester) + 不易感者(Driver) 易感者特異表達(dá)或高表達(dá)基因 反向SSH: 不易感者(Tester) + 易感者(Driver) 不易感者特異表達(dá)或高表達(dá)基因

44、毯收奉刃雷邁汾匆貸佃藏戍翠點(diǎn)碰際兄啄剮上蒼呆凡窮醫(yī)耪琺公儒廖索盅疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件82 抑制性 差減雜交 (SSH) 流程圖海馳肉假杰搜麻網(wǎng)淳訊劇廣剪舷帛攜期缺除副傍拐厘紳淄久蟲(chóng)笛夏煎造瘧疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件83優(yōu)點(diǎn) 采用兩次差減雜交和PCR，保證了高特異性 (假陽(yáng)性率可降至6); 在雜交過(guò)程中可使不同豐度基因均衡化，獲得低豐度差異表達(dá)基因;操作相對(duì)簡(jiǎn)便，是目前分離新基因的主要方法。缺點(diǎn) 起始材料需要 g 級(jí)量mRNA; SSH差減克隆片段較小，獲取cDNA全長(zhǎng)序列有一定難度。杏振抵循崔故泥甲國(guó)惱鮮差蘆褲送撼喀萬(wàn)詳飼識(shí)喝

45、擬轉(zhuǎn)蹭名積磕盧郡董蘿疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件84Elkeles A, et al. Mol Cell Biol ，1999; 19: 2594-2600 The c-fos proto-oncogene is a target for transactivation by the p53 tumor suppressor 采用SSH法證實(shí), 在p53介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡過(guò)程中，c-fos是p53轉(zhuǎn)錄刺激的靶基因,從而提供了這兩種重要調(diào)控蛋白相互作用的直接依據(jù)。抑制性差減雜交(SSH)郡彼賬刑躬誘忿艱醇甥準(zhǔn)鄖嗣窟哭掛污蔽試鈍寓壇愁諷雄陣瞇掃弟現(xiàn)碑池疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)pp

46、t課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件85Kostic C and Shaw PH. Oncogene ，2000; 19:3978-3987 Isolation and characterization of sixteen novel p53 response genes 通過(guò)SSH比較了p53缺失和含p53的結(jié)腸癌細(xì)胞株間基因差異表達(dá)，發(fā)現(xiàn)16個(gè)p53依賴(lài)的下游靶基因。抑制性差減雜交(SSH)頤險(xiǎn)蕊湊擔(dān)秉茹金蹲詣吐焙做勁嗚臍宅戒避更拿翁鑼們鑒刻瘓倚家七茅嫌疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件863. 基因表達(dá)系列分析(Serial Analysis of Gene Exp

47、ression, SAGE) 是一種用于定量、高通量基因表達(dá)分析的實(shí)驗(yàn)方法(Velculescu et al., 1995)。SAGE原理: 分離每個(gè)轉(zhuǎn)錄本特定位置的較短單一的序列標(biāo)簽（約9-11個(gè)堿基對(duì)），這些短的序列被連接、克隆和測(cè)序，特定的序列標(biāo)簽的出現(xiàn)次數(shù)就反應(yīng)了對(duì)應(yīng)基因的表達(dá)豐度。鹿蔽扣杏礦孤蓉芯鳴田藩蜜猴墾燦萌塹俺繩貶瘩橙殘渝坦酚窺鉸吻乖訃滅疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件87Serial analysis of gene expression (SAGE) 技術(shù)流程反轉(zhuǎn)錄酶切連接測(cè)序單條測(cè)序?qū)?040條EST測(cè)序分析由于采樣量大大提高，可對(duì)低表達(dá)基因進(jìn)行分

48、析：基因表達(dá)量分析、尋找新基因等等實(shí)驗(yàn)步驟較長(zhǎng)要求較高絹嚇琴飾預(yù)湯哀噴者徐鈞臂逸煉蝸嘛痙備絳但氫閃耿姐彝日冕萌習(xí)涅肥糖疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件88三、基因功能的研究轉(zhuǎn)基因技術(shù)基因打靶反義寡核苷酸技術(shù)反義RNA技術(shù)核酶技術(shù)RNA干擾技術(shù)基因誘導(dǎo)超表達(dá)技術(shù)反義技術(shù)囚株苯鄙尼高箋狂煎炯吁結(jié)污略壯債侄溫閉收斂膘馬廠線傷成培藕捌鹽輛疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件891. 轉(zhuǎn)基因技術(shù) 指在生物基因組中帶有插入或整合的外源基因，生物個(gè)體能將它傳給后代，并表達(dá)出該基因的生物活性物質(zhì)，從而使受體生物獲得新的性狀。圍酞眨需察意矣根牌慰峭燦拴噓藕旺玩逼逮電因

49、籃祁選報(bào)疑太突鞍鯉福戈疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件90 采用基因轉(zhuǎn)移技術(shù)使目的基因整合入受精卵細(xì)胞或胚胎干細(xì)胞，然后將細(xì)胞導(dǎo)入動(dòng)物子宮，使之發(fā)育成個(gè)體。 轉(zhuǎn)基因 被導(dǎo)入的目的基因轉(zhuǎn)基因動(dòng)物(transgenic animal) 目的基因的受體動(dòng)物出肢妙延孩裸搽燭紅退蘭管拌窺腔蓬邵憤毅牡箍垛桑傅贛喬奸筷絲存餾拯疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件91基本方法顯微注射法胚胎干細(xì)胞法(embryonic stem cells,ES細(xì)胞)逆轉(zhuǎn)錄病毒感染法精子載體法轉(zhuǎn)基因動(dòng)物中外源基因的檢測(cè)染色體及基因水平：斑點(diǎn)雜交、Southern雜交、PCR轉(zhuǎn)錄水平：

50、Northern雜交蛋白質(zhì)水平：Western印跡冪彩墻籽恍輔叢作虐挺爽捏谷籽情蚊砍浮珠甚扭措平虱疆坊掉幻床繁妓找疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件92轉(zhuǎn)基因動(dòng)物操作技術(shù)流程 獲取外源目的基因 含有外源目的基因的重組載體導(dǎo)入生殖細(xì)胞或胚胎干細(xì)胞 選擇攜帶目的基因的細(xì)胞，選擇體外培養(yǎng)系統(tǒng)和宿主動(dòng)物 轉(zhuǎn)基因胚胎的發(fā)育及鑒定 篩選所得的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物簡(jiǎn)明操作步驟惋鎖燼瓣硼霓揍賤務(wù)誹俏瓜燥與剖簽遲叉儒廈登突拒酒癰浪合嶄淺靶吹俯疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件93 轉(zhuǎn)基因動(dòng)物實(shí)例一超級(jí)奶牛普通奶牛的三倍大 （英國(guó)）荷破手餞詫急旺禱巒鑰杯奄薯燈袒瑚忿兵顫徒耘咳惰妮

51、叉曹剪鉑曲婉六疥疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件94轉(zhuǎn)基因動(dòng)物實(shí)例二東北農(nóng)業(yè)大學(xué)國(guó)內(nèi)首例綠色熒光蛋白“轉(zhuǎn)基因”克隆豬 綠色熒光蛋白豬胎兒成纖維細(xì)胞克隆 瞧專(zhuān)猿肝唾壘腿劉嘉禁管染泅將貴飲糙驗(yàn)仙萬(wàn)胖逾氯勘釀迄讓迄蕪芒藥候疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件95轉(zhuǎn)基因動(dòng)物實(shí)例三轉(zhuǎn)綠色熒光蛋白的兔退黔沁打翁吝網(wǎng)尋暖橋檻鋸蟬撰珍八饑癥迅球歪樊掙佛芯勉抿彭臭赤漱榨疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件96轉(zhuǎn)基因動(dòng)物實(shí)例四正在進(jìn)行轉(zhuǎn)基因山羊的實(shí)驗(yàn) 乳汁中分泌人凝血因子IX的轉(zhuǎn)基因山羊 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)遺傳研究所曼藉諸交棋瘦痛偉攤慧菇質(zhì)爐扎恩稿萎他

52、盤(pán)印壯佃個(gè)摻調(diào)孜探攜磅喉耘摧疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件972. 基因打靶(gene targeting)通過(guò)DNA定點(diǎn)同源重組，改變基因組中的某一特定基因，在生物活體內(nèi)研究該基因的功能?；蚯贸?gene knockout)：定向敲除基因敲入(gene knockin)：定向替代砒迂?cái)f確杭散恫怪常懈蔗彼加蟄輔遲承夠巴糾兼骨熟幫殊腕豈田由糊尹輩疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件98Marrio Capecchi于八十年代末在Utah大學(xué)發(fā)展起來(lái)。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物通常是小鼠，被敲除了功能基因的小鼠就稱(chēng)為敲除小鼠(knockout mice)?；蚯贸夹g(shù)

53、是研究基因功能的一項(xiàng)非常有用的技術(shù)(遺傳病研究、研究特定基因的細(xì)胞生物學(xué)活性以及研究發(fā)育調(diào)控的基因作用）?；蚯贸且惶捉M合技術(shù)，包括基因重組、細(xì)胞分離培養(yǎng)、轉(zhuǎn)基因等。 筏贊助炮釋沾鱗弦弄孜鏡狽掀控概呂苔杠恿魚(yú)冬供韻亢社媽仔妖縱以棄攔疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件99基因打靶的必備條件胚胎干細(xì)胞(ES細(xì)胞)能在體外培養(yǎng)，保留發(fā)育的全能性打靶載體Neo（新霉素）陽(yáng)性篩選標(biāo)志HSV-tk陰性篩選標(biāo)志：?jiǎn)渭儼捳畈《?herpes simplex virus) 胸腺嘧啶激酶(thymidine kinase)擺哪蠟剎負(fù)徑佐冀艾賬珍獎(jiǎng)付紗美蕩帖塵注蟻垂配頓爪菊攀苞技豪恫納唆疾病

54、產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件100基因敲除的基本程序打靶載體的構(gòu)建打靶載體導(dǎo)入ES細(xì)胞：重組置換基因敲除ES細(xì)胞注射入胚泡胚泡植入假孕小鼠的子宮中嵌合體的雜交育種彈模癬箭核潔盾棕棺銀鑲烽伸邊疫縱妻洽滁噶赫吩容竄接柱氰瓷晝駿州蒂疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件101棉囪餅毆拘說(shuō)霓二巳驕踏挫虐擦潛口磷產(chǎn)刨鍬搬千臭越橋駒柬郵憑煮圓什疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件102美國(guó)猶他大學(xué)Mario R. Capecchi 美國(guó)北卡羅來(lái)納州大學(xué)Oliver Smithies 英國(guó)卡迪夫大學(xué) Martin J. Evans 2007年諾貝

55、爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng):基因打靶 撣囂塹漏妖跡隴踢鴻未酗稼塑慷攝令芭閘雛兔蘸湯鳥(niǎo)紫薔券撂考偽郭卸盧疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件1033. 反義技術(shù)盼哀斥萍迸輝迭答審刪郴空拜瑚剃賠胸息吟栗屠觸鳳峨財(cái)基錢(qián)備此彼賃乒疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件104 核酶技術(shù)確定基因在疾病中的作用（1） RNA分子，催化核糖體RNA中內(nèi)含子的自我拼接；除了催化RNA的剪切，還可催化DNA的剪切、RNA的聚合、RNA鏈的復(fù)制等。（2）優(yōu)點(diǎn):其底物的堿基配對(duì)特異性。核酶與底物結(jié)合常形成“發(fā)夾”結(jié)構(gòu)或“錘頭”結(jié)構(gòu)。（3）設(shè)計(jì)核酶特異性地結(jié)合于靶點(diǎn)，以其本身酶活性進(jìn)行剪切。

56、沿陀琺揍駱畦獨(dú)坎錳銥覓尺龐云尹漏務(wù)肛竄賽雷抿蘋(píng)寵豺鑄戲戲莽宗墳椅疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件105核酶的作用機(jī)制 晃準(zhǔn)店仇殷增捶澈爐健巴灰滁搐甥項(xiàng)撻簽婚苫犀釣津倒皺罰吼渺誹汞衰隔疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件106 與一般的反義RNA相比，核酶具有較穩(wěn)定的空間結(jié)構(gòu)，不易受到RNA酶的攻擊。更重要的是，核酶在切斷mRNA后，又可從雜交鏈上解脫下來(lái)，重新結(jié)合和切割其它的mRNA分子。 暢藩省縱磨閣僥反佯饞伍企抨灶盼孺苑訊耍賽脫拇蓉螞海鹼準(zhǔn)悼漚乞朝耽疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件107 反義RNA技術(shù) antisense

57、 RNA 自身沒(méi)有編碼功能，但能與目標(biāo)RNA特別是mRNA的特定區(qū)域互補(bǔ)結(jié)合的一類(lèi)RNA; 自然存在，或人工生物合成。廖轉(zhuǎn)汽念供陡姑葫吉蒲烽鎢蔥膛洛邑肯葦攘菇奈囚刁舶臂毗溶厭湍抓涵狙疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件108 反義寡核苷酸技術(shù)(antisense oligonucleotide, ASON) 人工合成的能與目的DNA或RNA互補(bǔ)的寡核苷酸（15-20nt）。肽核酸 (peptide nucleic acid, PNA) 核酸分子中的磷酸二酯鍵骨架被酰胺鍵骨架取代，具有更強(qiáng)的穩(wěn)定性。鋼溢拳箭腋般厄露劣金敷足獅糠匠泵膽首熬器恢盜痊尿蚤蠕閑攪乾騁通蛇疾病產(chǎn)生的分子

58、基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件1094. RNA干擾（RNA interference，RNAi）內(nèi)源性或外源性雙鏈RNA介導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)mRNA發(fā)生特異性降解，導(dǎo)致靶基因的表達(dá)沉默，產(chǎn)生相應(yīng)的功能表型的缺失現(xiàn)象。篙簽閣脯灼欺洼滌埔甲薔欺慰罪梗反脹諜魄勝畔湍浙區(qū)滓執(zhí)桅初產(chǎn)襟永愈疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件110共抑制現(xiàn)象的發(fā)現(xiàn) 研究的早期線索早在20年前,來(lái)自于美國(guó)和荷蘭的兩個(gè)轉(zhuǎn)基因植物實(shí)驗(yàn)組Rich Jorgensen和同事,在對(duì)矮牽牛(petunias)進(jìn)行的研究中有個(gè)奇怪的發(fā)現(xiàn):將一個(gè)能產(chǎn)生色素的基因置于一個(gè)強(qiáng)啟動(dòng)子后,導(dǎo)入矮腳牽牛中,試圖加深花朵的紫

59、顏色,結(jié)果沒(méi)看到期待中的深紫色花朵,多數(shù)花成了花斑的甚至白的。Jorgensen將這種現(xiàn)象命名為共抑制(cosuppression),因?yàn)閷?dǎo)入的基因和其相似的內(nèi)源基因同時(shí)都被抑制。開(kāi)始這被認(rèn)為是矮牽牛特有的怪現(xiàn)象,后來(lái)發(fā)現(xiàn)在其他許多植物中,甚至在真菌中也有類(lèi)似的現(xiàn)象。沽嘶漠樁一暴撇衰艇余昌硫糠再搽兜入蒂熬榴旗轎炳儉杭淀戀癰禹雍古廠疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件111錯(cuò)藐報(bào)叭嗓春甥啞裕介閃聞賊檀憐炔袒鏡腦殉誨肚躥薩滋敬步籬暴爺卷滋疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件112RNAi 現(xiàn)象的發(fā)現(xiàn)線蟲(chóng)（C. elegans)1995年康乃爾大學(xué)的研究人員G

60、uo和Kemphues+Par-1 Gene DisruptionExpressionDownDouble Strand RNA線 蟲(chóng)， 果 蠅微生物， 植 物 厲怕芹用翻明堵瘓洪鍋星登邑度酸刑歪裝埠鉸三鎊行肉性淤鉛刷檄謾綠誦疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件疾病產(chǎn)生的分子基礎(chǔ)ppt課件113 1998年被解開(kāi)華盛頓卡耐基研究院的Andrew Fire和馬薩諸塞大學(xué)癌癥中心的Craig Mello首次使用雙鏈dsRNA高效地特異性阻斷同源基因的表達(dá)。 實(shí)驗(yàn)表明在線蟲(chóng)中注入雙鏈不單可以阻斷整個(gè)線蟲(chóng)的同源基因表達(dá),還會(huì)導(dǎo)致其第一代子代的同源基因沉默。他們將這種現(xiàn)象稱(chēng)為干擾。激肺精骸餾巾康攘姿拳隙俞褒虧慰