藥物分析072芳香胺類藥物的分析

1、第二節(jié) 苯乙胺類藥物Phenethylamine 藥物分析072芳香胺類藥物的分析結(jié)構(gòu) (Structure) 擬腎上腺素類藥物，分子結(jié)構(gòu)中具有苯乙胺基本結(jié)構(gòu)腎上腺素(adrenaline)鹽酸克倫特羅(clenbuterol hydrochloride)硫酸沙丁胺醇(salbutamol sulfate)鹽酸麻黃堿(ephedrine hydrochloride) R1 R2 R3 HX2022/7/152藥物分析072芳香胺類藥物的分析化學(xué)性質(zhì) (feature)弱 堿 性：烴胺基側(cè)鏈，仲胺氮弱堿性，游離堿難溶于水，易溶于有機(jī)溶劑；其鹽可溶于水酚羥基特性：鄰苯二酚（或苯酚）結(jié)構(gòu)，與金屬離子

2、絡(luò)合呈色；在空氣中或遇光、熱易氧化，色澤變深；在堿性溶液中更易變色。光學(xué)活性：手性碳原子，具有旋光性。苯環(huán)取代基特性：如鹽酸克倫特羅芳伯氨基；紫外、紅外吸收特性進(jìn)行定性、定量分析。2022/7/153藥物分析072芳香胺類藥物的分析鑒別試驗(yàn) (identification)與三氯化鐵反應(yīng)、與甲醛硫酸反應(yīng)藥物三氯化鐵甲醛硫酸腎上腺素Adrenaline0.1mol/L鹽酸液中顯翠綠色，加氨試液顯紫色，紫紅色紅色重酒石酸去甲腎上腺素Noradrenaline bitartrate翠綠色，加碳酸氫鈉試液顯藍(lán)色，紅色淡紅色鹽酸去氧腎上腺素Phenylephrine hydrochloride紫色玫瑰紅

3、，橙紅，深棕紅鹽酸異丙腎上腺素Isoprenaline hydrochloride深綠色，滴加新制5%碳酸氫鈉液，顯藍(lán)紫色，紅色棕色，暗紫色鹽酸多巴胺Dopamine hydrochloride墨綠色，滴加1%氨溶液，顯紫紅色2022/7/154藥物分析072芳香胺類藥物的分析鑒別試驗(yàn) (identification)氧化反應(yīng)（酚羥基，易被碘、過氧化氫、鐵氰化鉀氧化呈現(xiàn)不同顏色）腎上腺素碘或過氧化氫中性或酸性腎上腺素紅放置棕紅色多聚體鹽酸異丙腎上腺素偏酸性條件碘異丙腎上腺素紅硫代硫酸鈉重酒石酸去甲腎上腺素酒石酸氫鉀飽和液pH 3.56碘試液放置5min硫代硫酸鈉溶液為無色或僅顯微紅色或淡紫色腎

4、上腺素或鹽酸異丙腎上腺素明顯的紅棕色或紫色淡紅色溶液2022/7/155藥物分析072芳香胺類藥物的分析鑒別試驗(yàn) (identification)紫外特征吸收藥物溶劑濃度(mg/ml)nm (nm)吸收度 (A)重酒石酸間羥胺水0.10272鹽酸異丙腎上腺素水0.052800.50鹽酸多巴胺0.5%硫酸0.03280鹽酸芬氟拉明0.1mol/L鹽酸0.25263, 270鹽酸苯乙雙胍水0.012340.60鹽酸克倫特羅0.1mol/L鹽酸0.03243, 296硫酸沙丁胺醇水0.08274鹽酸偽麻黃堿水0.50251, 257, 263紅外特征吸收：上述藥物還可采用紅外吸收光譜進(jìn)行鑒別。202

5、2/7/156藥物分析072芳香胺類藥物的分析鑒別試驗(yàn) (identification)與亞硝基鐵氰化鈉反應(yīng)(Rimini試驗(yàn))重酒石酸間羥胺水溶解亞硝基鐵氰化鈉試液丙酮數(shù)滴，碳酸氫鈉少量紅紫色脂肪伯氨基的專屬反應(yīng)丙酮不含有甲醛重酒石酸間羥胺的脂肪伯氨基2022/7/157藥物分析072芳香胺類藥物的分析鑒別試驗(yàn) (identification)雙縮脲反應(yīng)鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿，芳環(huán)側(cè)鏈具有氨基醇結(jié)構(gòu)，可顯雙縮脲特征反應(yīng)。例：Chp2000，鑒別鹽酸麻黃堿方法：取本品1%水溶液1ml，加硫酸銅試液2滴與20%氫氧化鈉液1ml，即顯藍(lán)紫色，加乙醚1ml振搖、放置，乙醚層顯紫紅色，水層變?yōu)樗{(lán)色。

6、2022/7/158藥物分析072芳香胺類藥物的分析特殊雜質(zhì)檢查 (Detection of specific impurities)酮體檢查生產(chǎn)工藝：酮體氫化還原制得，若氫化不完全則引入酮體雜質(zhì)。 藥物 檢查的雜質(zhì) 溶劑樣品濃度(mg/ml)測定波長(nm) A腎上腺素 腎上腺酮HCl(92000) 2.0 310不得過0.05鹽酸去氧腎上腺素 酮體 水 2.0 310不得大于0.20重酒石酸去甲腎上腺素去甲腎上腺酮 水 2.0 310不得大于0.05鹽酸異丙腎上腺素 酮體 水 2.0 310不得大于0.15鹽酸甲氧明 酮胺 水 1.5 347不得大于0.06紫外分光光度法檢查酮體的條件及要

7、求2022/7/159藥物分析072芳香胺類藥物的分析特殊雜質(zhì)檢查 (Detection of specific impurities)TLC法檢查有關(guān)物質(zhì)例：鹽酸去氧腎上腺素、硫酸沙丁胺醇檢查方法：避光操作。取本品，加甲醇制成每1ml含20mg的溶液，作為供試品溶液；精密量取上述溶液適量，加甲醇稀釋成每1ml中含0.10mg的溶液，作為對照溶液。吸取上述兩種溶液各10l，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以異丙醇氯仿濃氨溶液(80:5:15)為展開劑，展開后，晾干，噴以重氮苯磺酸試液使顯色。供試品溶液如顯雜質(zhì)斑點(diǎn)，與對照溶液的主斑點(diǎn)比較，不得更深。2022/7/1510藥物分析072芳香胺類藥物的

8、分析特殊雜質(zhì)檢查 (Detection of specific impurities)鹽酸苯乙雙胍中有關(guān)雙胍的檢查（Chp2000版）有關(guān)雙胍 取本品1.00g ，置10ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，照紙色譜法（附錄 A）試驗(yàn)，精密吸取上述溶液0.2ml ，分別點(diǎn)于兩張色譜濾紙條(7.5cm 50cm) 上，并以甲醇作空白點(diǎn)于另一色譜濾紙條，樣點(diǎn)直徑均為0.5 1cm ；照下行法，將上述色譜濾紙條同置展開室內(nèi)，以醋酸乙酯乙醇水(6:3:1) 為展開劑，展開至前沿距下端約7cm 處，取出，晾干，用顯色劑（取10鐵氰化鉀溶液1ml ，加10 亞硝基鐵氰化鈉溶液與10氫氧化鈉溶液各1ml

9、 ，搖勻，放置15min，加水10ml與丙酮 12ml，混勻）噴其中一張點(diǎn)樣紙條（有關(guān)雙胍顯紅色帶，Rf值約為0.1 ），參照此色譜帶，在另一張點(diǎn)樣及空白紙條上，剪取其相應(yīng)部分并向外延伸1cm ，并分剪成碎條，精 密吸取甲醇各20ml分別進(jìn)行萃取后，照分光光度法（附錄 A），在232nm 的波長處測定吸收度，不得過0.48。 2022/7/1511藥物分析072芳香胺類藥物的分析含量測定(Assay)原 料：非水溶液滴定法、溴量法制 劑：比色法提取容量法紫外分光光度法高效液相色譜法2022/7/1512藥物分析072芳香胺類藥物的分析含量測定 (Assay)1、非水溶液滴定法弱堿性冰醋酸為溶劑

10、醋酸汞消除氫鹵酸的干擾結(jié)晶紫為指示劑 （鹽酸甲氧明的指示劑為萘酚苯甲醇，也可電位法指示終點(diǎn)）若堿性較弱則加醋酐使突躍明顯例：重酒石酸去甲腎上腺素直接滴定 鹽酸克倫特羅加醋酸汞消除氫鹵酸干擾； 由于堿性較弱，電位法指示終點(diǎn) 硫酸沙丁胺醇加入醋酐以增大突躍，結(jié)晶紫為指示劑注：加入醋酐注意防止氨基被乙?；?，所以在冰醋酸溶解樣品后應(yīng)放冷后再加醋酐。2022/7/1513藥物分析072芳香胺類藥物的分析含量測定 (Assay)2、溴量法基本原理：測定方法：取本品約0.1g，精密稱定，置碘瓶中，加水20ml使溶解，精密加溴 滴定液(0.1mol/L)50ml，再加鹽酸5ml,立即密塞，放置15分鐘并時(shí)時(shí)振

11、搖，注意微開瓶 塞，加碘化鉀試液10ml ，立即密塞，振搖后，用硫代硫酸鈉滴定液(0.1mol/L)滴定，至 近終點(diǎn)時(shí)，加淀粉指示液，繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失，并將滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。每 1ml溴滴定液(0.1mol/L)相當(dāng)于3.395mg 的C9H13NO2HCl。 2022/7/1514藥物分析072芳香胺類藥物的分析含量測定 (Assay)3、比色法測定原理：注意：由于偶合劑（N-(1-萘基)-乙二胺）與亞硝酸也能顯色干擾測定，所以在重氮化后，應(yīng)加入氨基磺酸銨分解剩余的亞硝酸。2022/7/1515藥物分析072芳香胺類藥物的分析比色法含量測定例：鹽酸克倫特羅栓（Chp2005）【含量

12、測定】 對照品溶液的制備 精密稱取鹽酸克侖特羅對照品適量，加鹽酸溶液 (9100)制成每1ml 中含7.2g的溶液。 供試品溶液的制備 取本品20粒，精密稱定，切成小片，精密稱取適量（約相當(dāng)于 鹽酸克侖特羅0.36mg），置分液漏斗中，加溫?zé)岬穆确?0ml使溶解，用鹽酸溶液(9 100)振搖提取3 次(20ml、15ml、10ml) ，分取酸提取液，置50ml量瓶中，用鹽酸溶液(9 100)稀釋至刻度，搖勻，濾過，收集續(xù)濾液，即得。 測定法 精密量取對照品溶液與供試品溶液各15ml，分置25ml量瓶中，各加鹽酸溶 液(9100)5ml 與0.1 亞硝酸鈉溶液1ml ，搖勻，放置3 分鐘，各加0

13、.5 氨基磺酸 銨溶液1ml ，混勻，時(shí)時(shí)振搖10分鐘，再各加0.1 鹽酸萘乙二胺溶液1ml,混勻，放置 10分鐘，用鹽酸溶液(9100)稀釋至刻度，搖勻，照分光光度法（附錄 B），在 500 nm的波長處分別測定吸收度，計(jì)算，即得。2022/7/1516藥物分析072芳香胺類藥物的分析含量測定 (Assay)4、提取酸堿滴定法原理：溶解性鹽酸鹽或硫酸鹽可溶于水，游離堿不溶于水，溶于有機(jī)溶劑。方法：供試品溶于水或礦酸，加入適量堿性試劑使藥物游離，用適當(dāng)?shù)挠袡C(jī)溶劑提取，將提取液蒸干，殘?jiān)屑又行砸掖既芙?，用?biāo)準(zhǔn)酸滴定液直接滴定（或在提取液中加定量過量的標(biāo)準(zhǔn)酸滴定液，蒸去有機(jī)溶劑后，再用標(biāo)準(zhǔn)堿滴定

14、液回滴定）。例：硫酸苯丙胺加水溶解加氫氧化鈉試液8ml 加氯化鈉使飽和乙醚多次提取合并乙醚液精密加硫酸滴定液（0.05mol/L）25ml振搖低溫蒸去乙醚放冷至室溫加甲基紅指示液2滴用氫氧化鈉（0.1mol/L）滴定。每1ml硫酸滴定液（0.05mol/L）相當(dāng)于18.42mg的C18H26N2H2SO4。2022/7/1517藥物分析072芳香胺類藥物的分析含量測定 (Assay)5、熒光分光光度法 基本原理：腎上腺素含有的鄰苯二酚結(jié)構(gòu)，被弱氧化劑氧化，生成腎上腺素紅，發(fā)生轉(zhuǎn)位為N-甲基-3,5,6-三羥基吲哚（THI）。(Tri- Hydroxyl- Indole-)本法還可用于測定微量兒

15、茶酚胺類藥物。2022/7/1518藥物分析072芳香胺類藥物的分析含量測定 (Assay)6、高效液相色譜法高效分離，高靈敏度和高選擇性可用于制劑常規(guī)分析，臨床藥物監(jiān)測和體內(nèi)藥物動力學(xué)研究。例1：重酒石酸去甲腎上腺素注射液分析色譜條件：色譜柱：ODS流動相：0.14%庚烷基磺酸鈉溶液甲醇(65:35)，用磷酸調(diào)pH至3.00.1，流速：1.0ml/min檢測波長：280nm測定方法：精密量取本品適量（約相當(dāng)于重酒石酸去甲腎上腺素4mg），置25ml量瓶中， 加醋酸溶液（125）稀釋至刻度，搖勻，取2l注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取重酒石 酸去甲腎腺素對照品適量，精密稱定，加醋酸溶液（125

16、）制成每1ml中含0.16mg的溶液， 同法測定。按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得。 2022/7/1519藥物分析072芳香胺類藥物的分析含量測定 (Assay)6、高效液相色譜法例1：HPLC-EChD法測定血漿中兒茶酚胺類藥物色譜條件：色譜柱：ODS型鍵合相 流動相：離子對試劑 檢測器：電化學(xué)檢測器供試品溶液的制備：氧化鋁吸附洗脫2022/7/1520藥物分析072芳香胺類藥物的分析含量測定 (Assay)7、衍生化氣相色譜法例：鹽酸芬氟拉明 (fenfluramine hydrochloride)由于結(jié)構(gòu)中的仲胺基極性極強(qiáng)，使得氣相色譜法測定值波動較大，因此將樣品溶解后經(jīng)堿化乙酸乙酯提取，加

17、入內(nèi)標(biāo)，提取液用三氟乙酸酐進(jìn)行?；苌?，將衍生化產(chǎn)物在5%SE-30的色譜柱上分析，用FID檢測器檢測。2022/7/1521藥物分析072芳香胺類藥物的分析第三節(jié) 芳氧丙醇胺類藥物典型藥物：氧烯洛爾 (Oxprenolol, 別名烯丙氧心胺，心得平，Tracosal, Trasacor, Trasieor )腎上腺素受體阻滯藥 鹽酸卡替洛爾 (Carteolol hydrochloride)受體阻滯藥 2022/7/1522藥物分析072芳香胺類藥物的分析鑒別反應(yīng) (identification)化學(xué)鑒別氧烯洛爾：取本品0.1g，加乙醇2ml溶解后，滴加0.1mol/L高錳酸鉀溶液1ml，

18、振 搖數(shù)分鐘，高錳酸鉀顏色消褪，并產(chǎn)生棕色沉淀。 鹽酸卡替洛爾：取本品約0.1g，加水5ml使溶解，加硫氰酸鉻銨試液5滴，即生成淡紅色沉淀。 紫外吸收峰特征 氧烯洛爾水溶液 (40g/ml): 在275nm 的波長處有最大吸收。 鹽酸卡替洛爾 (8g/ml): 在215nm 與252nm的波長處有最大吸收。 2022/7/1523藥物分析072芳香胺類藥物的分析鹽酸卡替洛爾的有關(guān)物質(zhì)檢查TLC法，自身對照法檢查方法：取本品0.20g，加甲醇10ml使溶解，作為供試品溶液；精密量取2ml，置100ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，精密量取1ml，置10ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為對照溶液。照薄層色譜法 (附錄 B)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液備10l，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以氯仿-甲醇-濃氨溶液 (50:20:1)為展開劑，展開后，晾干，置紫外光燈(254nm)下檢視。供試品溶液如顯雜質(zhì)斑點(diǎn)，與對照溶液的 主斑點(diǎn)比較，不得