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1、實(shí)驗(yàn)一、蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)測定和沉淀反應(yīng)一、目的1.了解蛋白質(zhì)的兩性解離性質(zhì)2.學(xué)習(xí)測定蛋白質(zhì)等電點(diǎn)的一種方法3.加深對蛋白質(zhì)膠體溶液穩(wěn)定因素的認(rèn)識4.了解沉淀蛋白質(zhì)的幾種方法及其實(shí)用意義1二、原理 蛋白質(zhì)是兩性電解質(zhì)。在蛋白質(zhì)溶液中存在下列平衡:等電點(diǎn):當(dāng)溶液的pH達(dá)到一定數(shù)值時(shí),蛋白質(zhì)顆粒上正負(fù)電荷的數(shù)目 相等,在電場中,蛋白質(zhì)既不向陰極移動(dòng),也不向陽極移動(dòng),此時(shí)溶液的pH值稱為此種蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)。 2四、操作步驟(一)酪蛋白等電點(diǎn)的測定(1)取同樣規(guī)格的試管4支,加入各試劑,然后混勻。此時(shí) 4個(gè)管的pH依次為5.9、5.5、4.7、3.5。(2)各加酪蛋白的醋酸鈉溶液1mL, 加一管,搖勻一
2、管。觀察其混濁度。靜置10分鐘后,再觀察其混濁度。最混濁的一管pH即為酪蛋白的等電點(diǎn)。 3(二)蛋白質(zhì)的沉淀及變性1、蛋白質(zhì)的鹽析 蛋白質(zhì)的鹽析: 無機(jī)鹽(硫酸銨、硫酸鈉、氯化鈉等)的濃溶液能析出蛋白質(zhì)。鹽的濃度不同,析出的蛋白質(zhì)也不同。如球蛋白可在半飽和硫酸銨溶液中析出,而清蛋白則在飽和硫酸銨溶液中才能析出。鹽溶:由鹽析獲得的蛋白質(zhì)沉淀,當(dāng)降低其鹽類濃度時(shí),又能再溶解,故蛋白質(zhì)的鹽析作用是可逆過程。于試管中加入蛋白質(zhì)溶液5mL ,再加等量的飽和硫酸銨溶液,混勻后靜置數(shù)分鐘則析出球蛋白的沉淀。倒出少量混濁沉淀,加少量水,觀察是否溶解,為什么?將管內(nèi)容物過濾,向?yàn)V液中添加硫酸銨粉末到不再溶解為止
3、。此時(shí)析出沉淀為清蛋白。取出部分清蛋白,加少量蒸餾水,觀察沉淀的再溶解。42、重金屬離子沉淀蛋白質(zhì) 重金屬離子與蛋白質(zhì)結(jié)合成不溶于水的復(fù)合物。取1支試管,加入蛋白質(zhì)溶液2mL,再加3%硝酸銀溶液12滴,振蕩試管,有沉淀產(chǎn)生。放置片刻,傾去上清液,向沉淀中加入少量的水,沉淀是否溶解?為什么?53、某些有機(jī)酸沉淀蛋白質(zhì) 取1支試管,加入蛋白質(zhì)溶液2mL,再加入1ml5%三氯乙酸溶液,振蕩試管,觀察沉淀的生成。放置片刻傾出清液,向沉淀中加入少量水,觀察沉淀是否溶解。64、有機(jī)溶劑沉淀蛋白質(zhì) 取1支試管,加入2mL蛋白質(zhì)溶液,再加入2mL95%乙醇。觀察沉淀的生成(如果沉淀不明顯,加點(diǎn)NaCl,混勻。75、乙醇引起的變性與沉淀 取3支試管,編號。依下表順序加入試劑1.向各管內(nèi)加水4ml,在2,3管內(nèi)各加一滴甲基紅2.第二管中用0.1molL醋酸溶液中和。第三管用0.05mol/L碳酸鈉溶液中和,觀察各管的顏色變化和沉淀生成3.每管再加0.1mol/L鹽酸溶液數(shù)滴,觀察沉淀的再溶解8五、注意事項(xiàng)等電點(diǎn)測定的實(shí)驗(yàn)要求各種試劑的濃度和加入量必須相當(dāng)準(zhǔn)確。9六、實(shí)驗(yàn)報(bào)告以表格形式總結(jié)實(shí)驗(yàn)結(jié)果,包括觀察到的
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