生物化學(xué)及分子生物學(xué)進(jìn)展基礎(chǔ)期末考試總結(jié)

1、-. z.生物化學(xué)與分子生物學(xué)進(jìn)展根底概論、目的基因分子克隆的載體核酸序列分析聚合酶鏈反響自學(xué)分子克隆技術(shù)常用的工具酶自學(xué)腫瘤轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制新生血管研究與轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)細(xì)胞周期與細(xì)胞增殖基因打靶的設(shè)計(jì)與實(shí)現(xiàn)細(xì)胞分化的分子機(jī)制醫(yī)學(xué)系統(tǒng)生物學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)一、1.操縱子那*圖以乳糖操縱子為例，其組成：大腸桿菌乳糖操縱子含Z、Y、A三個(gè)構(gòu)造基因，分別編碼半乳糖苷酶、透酶和半乳糖苷乙酰轉(zhuǎn)移酶，此外還有一個(gè)操縱序列O，一個(gè)啟動(dòng)子P和一個(gè)調(diào)節(jié)基因I存在誘導(dǎo)物乳糖時(shí)，mRNA得到轉(zhuǎn)錄；不存在誘導(dǎo)物時(shí)，mRNA無法轉(zhuǎn)錄。1阻遏蛋白的負(fù)性調(diào)節(jié)：沒有乳糖存在時(shí)，I基因編碼的阻遏蛋白結(jié)合于操縱序列O處，乳糖操縱

2、子處于阻遏狀態(tài)，不能合成分解乳糖的三種酶；有乳糖存在時(shí)，乳糖作為誘導(dǎo)物誘導(dǎo)阻遏蛋白變構(gòu)，不能結(jié)合于操縱序列，乳糖操縱子被誘導(dǎo)開放合成分解乳糖的三種酶。2CAP的正性調(diào)節(jié)：在啟動(dòng)子上游有CAP結(jié)合位點(diǎn)，當(dāng)大腸桿菌從以葡萄糖為碳源的環(huán)境轉(zhuǎn)變?yōu)橐匀樘菫樘荚吹沫h(huán)境時(shí)，cAMP濃度升高，與CAP結(jié)合，使CAP發(fā)生變構(gòu)，CAP結(jié)合于乳糖操縱子啟動(dòng)序列附近的CAP結(jié)合位點(diǎn)，激活RNA聚合酶活性，促進(jìn)構(gòu)造基因轉(zhuǎn)錄，調(diào)節(jié)蛋白結(jié)合于操縱子后促進(jìn)構(gòu)造基因的轉(zhuǎn)錄，對(duì)乳糖操縱子實(shí)行正調(diào)控，加速合成分解乳糖的三種酶。2.概念1基因診斷：利用分子生物學(xué)技術(shù)，通過檢測(cè)基因及基因表達(dá)產(chǎn)物的存在狀態(tài)，對(duì)人體疾病作出診斷的方法?；?/p>

3、因診斷檢測(cè)的目標(biāo)分子是DNA、RNA，也可以是蛋白質(zhì)或者多肽。2基因治療：指將目的基因通過基因轉(zhuǎn)移技術(shù)病毒載體介導(dǎo)或者非病毒載體介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移技術(shù)導(dǎo)入靶細(xì)胞內(nèi)，目的基因表達(dá)產(chǎn)物對(duì)疾病起治療作用。包括直接導(dǎo)入外源正?；?、采用適當(dāng)?shù)募夹g(shù)抑制細(xì)胞內(nèi)過度表達(dá)的基因、將特定的基因?qū)敕遣∽兗?xì)胞等。3pBR322：大小為4.36kb的環(huán)狀雙鏈DNA，其堿基序列已經(jīng)全部清楚，是最早應(yīng)用于基因工程的大腸桿菌質(zhì)粒載體之一，有過百個(gè)限制性內(nèi)切酶切點(diǎn)，一種限制性內(nèi)切酶只有單一切口的位點(diǎn)也多達(dá)數(shù)十個(gè)。4pUC質(zhì)粒系列：是在pBR322根底上改建成的。大小約2.69kb，去除了pBR322的抗四環(huán)素區(qū)段，含LacZ基

4、因及其啟動(dòng)子的操縱基因、M13的多聚接頭polylinker。含有易于檢測(cè)是否有外源DNA插入的標(biāo)記基因LacZ，可利用互補(bǔ)原理進(jìn)展藍(lán)白篩選。3.分子醫(yī)學(xué)的主要研究?jī)?nèi)容分子醫(yī)學(xué)是指從基因的角度重新認(rèn)識(shí)疾病，運(yùn)用基因技術(shù)預(yù)防、診斷和治療疾病。研究?jī)?nèi)容主要包括疾病的分子機(jī)理、基因診斷、基因治療和基因預(yù)防這四個(gè)方面。1疾病的分子機(jī)理：探索疾病的原因，是有效治療疾病的前提。基因科學(xué)的開展，為人類從細(xì)胞內(nèi)部的微觀生理學(xué)和分子生物學(xué)水平上尋找病因提供了新的思路。以尿黑酸癥為例，一種常染色體隱性遺傳病，病因?yàn)橄忍煨匀狈δ蚝谒嵫趸富虮磉_(dá)。2疾病的基因診斷：從廣義上講，大多數(shù)疾病都可以從遺傳物質(zhì)的變化中尋找

5、出原因。而從技術(shù)上看，只要找到了與疾病相關(guān)的基因，基因診斷便立即可以實(shí)現(xiàn)。以P53抑癌基因?yàn)槔?，典型病癥出現(xiàn)之前的很長(zhǎng)時(shí)間，細(xì)胞癌變的信息已經(jīng)在基因上表達(dá)出來了。3疾病的基因治療：即是通過基因水平的操作來治療疾病的方法。包括體細(xì)胞治療和生殖細(xì)胞治療兩種，后者所產(chǎn)生的性狀可代代相傳。4疾病的基因預(yù)防：研制基因疫苗，即能編碼*種特異性抗原并在人體或動(dòng)物體細(xì)胞內(nèi)表達(dá)這種抗原的DNA或RNA等。4.基因載體在基因工程中的作用基因載體的功能包括運(yùn)送外源基因高校轉(zhuǎn)入受體細(xì)胞、為外源基因提供復(fù)制或整合能力以及為外源基因的擴(kuò)增或表達(dá)提供必要的條件，分為質(zhì)粒、噬菌體、腺病毒載體、逆轉(zhuǎn)錄病毒載體等。質(zhì)粒載體的主要

6、用途有：1保存和克隆小于2kb的目的基因，2構(gòu)建基因組文庫和cDNA文庫，3用于目的基因的測(cè)序，4作為核酸雜交時(shí)探針的來源。噬菌體可以容納較大的目的基因，基因文庫構(gòu)建常使用載體。二、1. 掌握PCR技術(shù)的原理及根本步驟 PCR技術(shù)的原理：以擬擴(kuò)增的DNA分子為模板，以一對(duì)分別與模板互補(bǔ)的寡核苷酸片段為引物，在DNA聚合酶的作用下，按照半保存復(fù)制的機(jī)理沿著模板鏈延伸直至完成新的DNA合成。通過不斷重復(fù)這一過程，可以使目的DNA片段得到擴(kuò)增。另一方面，新合成的DNA片段也可以作為模板，因而PCR技術(shù)可使DNA的合成量呈指數(shù)型增長(zhǎng)。根本步驟：包括變性-退火-延伸三個(gè)根本反響步驟。1DNA變性(90-

7、96)：雙鏈DNA模板在熱作用下，氫鍵斷裂，形成單鏈DNA。2退火(復(fù)性)(40-65)：系統(tǒng)溫度降低，引物與DNA模板結(jié)合，形成局部雙鏈。3延伸(68-75)：在Taq酶(在72左右最正確的活性)的作用下，以dNTP為原料，從引物的5端3端延伸，合成與模板互補(bǔ)的DNA鏈2. 熟悉PCR技術(shù)的廣泛應(yīng)用1生物學(xué)根底研究目的基因擴(kuò)增和鑒定；DNA序列測(cè)定；定點(diǎn)突變；基因表達(dá)分析2醫(yī)學(xué)臨床應(yīng)用遺傳疾病基因診斷；致病病原體檢測(cè)；癌基因檢測(cè)；器官移植組織配型3法醫(yī)學(xué)物證鑒定個(gè)體識(shí)別；親子鑒定4其他動(dòng)、植物檢疫轉(zhuǎn)基因動(dòng)植物檢測(cè)；生物物種鑒定，系統(tǒng)進(jìn)化研究；分子考古學(xué)恐龍DNA分析等三、1. 試從PCR的原

8、理和應(yīng)用角度，談?wù)勂溆泻螌?shí)用價(jià)值2.為了不同的實(shí)驗(yàn)需要，產(chǎn)生了不同種類的PCR，其各自的作用是什么？1不對(duì)稱PCR：擴(kuò)增產(chǎn)生特異長(zhǎng)度的單鏈DNA，采用兩種不同濃度的引物，可用于制備核酸序列測(cè)定的模板、制備雜交探針和基因組DNA構(gòu)造功能的研究2反向PCR：可對(duì)未知序列擴(kuò)增后進(jìn)展分析,如探索鄰接DNA片段的序列；用于僅知局部序列的全長(zhǎng)cDNA的克隆,擴(kuò)增基因文庫的插入DNA；建立基因組步移文庫。3多重PCR：在同一PCR反響體系中，設(shè)計(jì)多對(duì)引物，同時(shí)擴(kuò)增一份DNA樣品中幾個(gè)不同靶區(qū)域的DNA片段，這一過程稱為多重PCR?？捎糜跈z測(cè)特定基因序列的大小、缺失、突變是否存在。4LP-PCR：利用同位素、

9、熒光素等對(duì)PCR引物進(jìn)展標(biāo)記，用以直觀地檢測(cè)目的基因。特別適合大量臨床標(biāo)本的基因診斷可同時(shí)檢測(cè)多種基因成分。5錨定PCR：首先合成第一鏈cDNA,然后再添加一同聚物尾polydG),與同聚物尾配對(duì)的3錨定引物帶有限制性內(nèi)切位點(diǎn)polydC)一起作PCR擴(kuò)增。PCR的局限-需了解靶基因片段兩側(cè)的序列。6PCR固相分析法：可用于基因芯片的制作7原位PCR：直接用細(xì)胞涂片或石蠟包埋組織切片在單個(gè)細(xì)胞中進(jìn)展擴(kuò)增?？蛇M(jìn)展細(xì)胞內(nèi)定位。適用于檢測(cè)病理切片中含量較少的靶序列。利用該法可檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)病毒感染、細(xì)胞內(nèi)基因重排、以及分析細(xì)胞內(nèi)RNA表達(dá)產(chǎn)物等方面發(fā)揮一定作用。在檢測(cè)細(xì)胞的潛在感染方面也具有重要意義。8

10、逆轉(zhuǎn)錄PCR：主要檢測(cè)mRNA的表達(dá)水平，通過逆轉(zhuǎn)錄可以得到我們想要的目的基因，為下一步研究做準(zhǔn)備。9熒光定量PCR: Realtime PCR 常用的兩種方法分別為：Sybr green熒光染料摻入法和Taqman probe探針法SYBR green 在PCR反響體系中，參加過量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后，發(fā)射熒光信號(hào)，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會(huì)發(fā)射任何熒光信號(hào)，從而保證熒光信號(hào)的增加與PCR產(chǎn)物的增加完全同步。此方法適用：a.靈敏度高：使用SYBR可使熒光效果增強(qiáng)到1000倍以上b.通用性好,不需要設(shè)計(jì)探針,方法簡(jiǎn)便,省時(shí),價(jià)格低廉。c.通用型方法

11、，在國內(nèi)外科研中普遍使用。d.高通量大規(guī)模的定量PCR檢測(cè)e.專一性要求不高的定量PCR檢測(cè)。Taqman Probe PCR擴(kuò)增時(shí)在參加一對(duì)引物的同時(shí)參加一個(gè)特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標(biāo)記一個(gè)報(bào)告熒光基團(tuán)和一個(gè)淬滅熒光基團(tuán)。探針完整時(shí)，報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收；PCR擴(kuò)增時(shí)，Taq酶的5-3外切酶活性將探針酶切降解，使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)別離，從而熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào)，即每擴(kuò)增一條DNA鏈，就有一個(gè)熒光分子形成，實(shí)現(xiàn)了熒光信號(hào)的累積與PCR產(chǎn)物形成完全同步此方法適用：a.具有高適應(yīng)性和可靠性，實(shí)驗(yàn)結(jié)果穩(wěn)定重復(fù)性好，特異性更高。b.適用于擴(kuò)增序列專

12、一的體系的檢測(cè)。c.樣品中靶基因含量過低的定量PCR檢測(cè)。d.靶基因的特異序列較短，無論怎樣優(yōu)化引物設(shè)計(jì)條件都不能解決。e.存在與靶基因同源的序列，在PCR中容易出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增，對(duì)特異性要求較高的定量。f.廣泛用于人類傳染病的診斷和病原定量,在動(dòng)物病原體基因的檢測(cè),畜禽產(chǎn)品的檢驗(yàn)檢疫,生物制品的鑒定。3.Sanger雙脫氧終止法測(cè)序的原理DNA鏈末端合成終止法Sanger法，原理：1單鏈DNA模板與寡核苷酸引物雜交，新的DNA鏈在DNA聚合酶催化下從引物末端進(jìn)展合成。在反響混合物中除了有模板DNA、引物、DNA聚合酶和4種底物dNTPs之外，還參加一定比例的四種2,3-雙脫氧核苷三磷酸ddN

13、TPs(終止核苷)之一。例如，參加ddATP，則所得到的合成物產(chǎn)生一系列嵌套的DNA片段，通過熒光標(biāo)記替代發(fā)現(xiàn)其中每一個(gè)片段終止于序列的A堿基對(duì)。對(duì)其他三種堿基，采用同樣的方法，但需要不同的熒光標(biāo)記。2所有標(biāo)記的DNA片段混合物經(jīng)過電泳別離大小不同的片段，并對(duì)這四種標(biāo)記的片段進(jìn)展掃描。然后通過*一程序判斷條碼的順序并預(yù)測(cè)序列。4.大規(guī)?；蚪M測(cè)序的兩種策略逐步克隆法全基因組霰彈法完整基因組的測(cè)序過程一般包括三個(gè)步驟：1).建立克隆的物理圖譜，如酵母人工染色體YACYeast Artificial Chromosome克隆、細(xì)菌人工染色體BACBacterial Artificial Chrom

14、osome克隆等；2).利用鳥槍法Shotgun Strategy測(cè)定每個(gè)克隆的序列；3).序列拼裝和注釋。當(dāng)?shù)玫揭欢蜠NA序列之后，可以利用序列分析工具，進(jìn)展序列的拼接；繼而通過與數(shù)據(jù)庫序列的比擬，得到與該序列相關(guān)的信息，如基因、調(diào)控元件、重復(fù)區(qū)域等，進(jìn)而對(duì)序列的生物學(xué)特性進(jìn)展注釋。BAC文庫指細(xì)菌人工染色體(BAC)文庫，直接用途是大片段DNA在基因組上定位。兩種大規(guī)模基因組測(cè)序策略的比擬四、1.概念：限制性內(nèi)切酶：能識(shí)別并切斷外來DNA分子的*些部位，使外來DNA失去活性，限制外來噬菌體的繁殖，把這類酶稱為限制性核酸內(nèi)切酶。切割不同來源的DNA分子，而產(chǎn)生特征性限制性酶切圖譜，具有重大應(yīng)

15、用價(jià)值“分子手術(shù)刀。存在于細(xì)菌體內(nèi)。限制性核酸內(nèi)切酶與外切酶的區(qū)別：凡能從多核苷酸鏈的末端開場(chǎng)水解核酸的酶稱為核酸外切酶，凡能從多核苷酸鏈中間開場(chǎng)水解核酸的酶稱為核酸內(nèi)切酶。而能識(shí)別特定的核苷酸順序,并從特定位點(diǎn)水解核酸的內(nèi)切酶稱為限制性核酸內(nèi)切酶限制酶。2.應(yīng)用這些酶的要求：1).盡可能使用能在相應(yīng)時(shí)間內(nèi)獲得完全酶解的最少酶量；2).減少反響體系中甘油的含量；3).除Mg2+外不加其他重金屬離子；4).適當(dāng)提高反響系統(tǒng)的離子強(qiáng)度；5).盡可能除去反響系統(tǒng)中可能存在的有機(jī)溶劑，如沉淀DNA用的乙醇。3.為什么說限制性內(nèi)切酶被譽(yù)為分子生物學(xué)家的手術(shù)刀，結(jié)合第1、2章所學(xué)內(nèi)容，論述其在基因工程中的

16、意義？限制性核酸內(nèi)切酶主要從細(xì)菌中獲得，由于性質(zhì)上的差異，現(xiàn)在把它們分為三型：I類：系復(fù)合功能酶，即對(duì)雙鏈DNA有切割、甲基化、解旋的活性。不適用于基因工程。只在腸道菌中發(fā)現(xiàn)。類：基因工程的工具酶。類：切割位點(diǎn)不在識(shí)別位點(diǎn)，一般離識(shí)別位點(diǎn)25bp27bp，對(duì)分子克隆操作亦無實(shí)用意義。類限制酶為單鏈多肽，反響條件只需Mg2+，對(duì)DNA的水解有很強(qiáng)的特異性。它要求嚴(yán)格的識(shí)別序列和切割位點(diǎn)，切割位點(diǎn)所要求的序列中有一個(gè)堿基的變異、缺失或修飾都不再能被水解。其中大多數(shù)可用于分子克隆，使得分子生物學(xué)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果具有高度的準(zhǔn)確性、可重復(fù)性，被譽(yù)為分子生物學(xué)家的手術(shù)刀。基因工程的目的就是將目的基因?qū)氲剿拗髦?/p>

17、，如何導(dǎo)入？不可能直接把基因放進(jìn)去對(duì)吧，需要一個(gè)載體，這就是基因工程的關(guān)鍵步驟，那又如何將載體和目的基因連接起來呢？而且我們要知道連接的位置，所以用限制性內(nèi)切酶，可以很好的將目的基因與質(zhì)粒相連，而且可以準(zhǔn)確的判斷其位置。4.試述大腸桿菌DNA聚合酶的酶學(xué)特點(diǎn)和應(yīng)用價(jià)值。大腸桿菌DNA聚合酶(E.coli DNA polymerase)主要有3種作用：5-3的聚合作用。但不是復(fù)制染色體而是修補(bǔ)DNA，填補(bǔ)DNA上的空隙或是切除RNA引物后留下的空隙。3-5的外切酶活性。消除在聚合作用中摻入的錯(cuò)誤核苷酸。5-3外切酶活性。切除受損傷的DNA。它在切口平移(nick translation)中應(yīng)用。

18、應(yīng)用：1).隨機(jī)引物標(biāo)記核酸探針2).5-粘端補(bǔ)平或3端標(biāo)記3).合成cDNA的第二鏈：?jiǎn)捂渃DNA3-端可形成發(fā)卡構(gòu)造，便于DNA聚合酶I發(fā)揮53聚合酶活性，合成cDNA的第二鏈。由于其具有5-3外切核酸酶活性，現(xiàn)在已不再用于此應(yīng)用。4).DNA序列分析5).3-端的末端標(biāo)記：先用此酶的35核酸外切酶活性，切除凸出的3-粘端，形成5-凸出粘端；在以其53聚合酶活性使其使其補(bǔ)平，在高濃度dNTP的條件下，3-端的外切反響與dNTP的攙入反響到達(dá)平衡。假設(shè)dNTP中有放射性標(biāo)記的核苷酸，即可使產(chǎn)物成為3-末端的帶標(biāo)記的DNA。？2切口平移法標(biāo)記DNA：在Dnase的作用的根底上產(chǎn)生連內(nèi)切口，應(yīng)用

19、此酶的53聚合酶活性和53外切酶活性的同步聯(lián)合反響，使切口沿DNA鏈從5-端向3-端移動(dòng)。假設(shè)用聚合反響的原料dNTP帶有放射性核素-32P，就能使生成的雙鏈帶有標(biāo)記物。根據(jù)此原理可做DNA雜交探針。五、1.闡述影響腫瘤轉(zhuǎn)移的因素有哪些？惡性腫瘤細(xì)胞具有轉(zhuǎn)移性，但并非所有惡性腫瘤均發(fā)生轉(zhuǎn)移，決定腫瘤是否轉(zhuǎn)移除腫瘤本身因素外，尚包括宿主整體因素及其他外界因素。具體如下：一、局部腫瘤團(tuán)素 1腫瘤大?。阂话阒v腫瘤越大其轉(zhuǎn)移時(shí)機(jī)亦越多。 2生長(zhǎng)速度快者較生長(zhǎng)慢者易發(fā)生轉(zhuǎn)移。 3分化程度：分化程度愈差，惡性程度亦愈高，轉(zhuǎn)移愈早。 4腫瘤分類：肉瘤多較癌發(fā)生轉(zhuǎn)移為早，且多經(jīng)血道轉(zhuǎn)移，而癌則多經(jīng)淋巴道轉(zhuǎn)移。

20、二、機(jī)體全身性因素 1免疫狀態(tài)：免疫功能低下或存在免疫方面缺陷者，較易生腫瘤，且易轉(zhuǎn)移，轉(zhuǎn)移時(shí)間早。 2內(nèi)分泌狀態(tài)：*些腫瘤的發(fā)生與激素水平的變化有關(guān)，而有些激素如類固醇激素、ACTH、生長(zhǎng)激素，對(duì)*些腫瘤的轉(zhuǎn)移具有促進(jìn)作用。 3高級(jí)神經(jīng)活動(dòng)功能紊亂，可促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)及轉(zhuǎn)移。 4組織損傷：腫瘤轉(zhuǎn)移易發(fā)生于組織損傷處。 5凝血因子：近年來已有人試用抗凝療法以減少腫瘤轉(zhuǎn)移發(fā)生時(shí)機(jī)，降低其轉(zhuǎn)移率。三、外界因素 1不正常的體檢：盲目屢次及粗暴地進(jìn)展體格檢查腫瘤被過度擠壓而發(fā)生轉(zhuǎn)移。 2理療和人工按摩：可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的脫落、生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。 3不恰當(dāng)?shù)氖中g(shù)操作：手術(shù)粗糙、過度牽拉、擠壓、盲目擴(kuò)大性探查、不恰

21、當(dāng)?shù)拇┐桃约扒腥』顧z(小切口)等，都有促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移可能。2.根據(jù)腫瘤轉(zhuǎn)移的過程和分子機(jī)制分析阻止腫瘤轉(zhuǎn)移的策略和手段有哪些？1、基因調(diào)控下的腫瘤轉(zhuǎn)移：腫瘤轉(zhuǎn)移與促進(jìn)基因和抑制基因之間表達(dá)失衡相關(guān)。2、粘附分子與腫瘤轉(zhuǎn)移：粘附因子是一類介導(dǎo)細(xì)胞與細(xì)胞、細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)間粘附作用的膜外表糖蛋白。在腫瘤轉(zhuǎn)移的每個(gè)環(huán)節(jié)均包含粘附與別離粘附解聚兩個(gè)方面。3、血管生成與腫瘤轉(zhuǎn)移：腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移與血管形成密切相關(guān)、腫瘤新生毛細(xì)血管是在周邊組織原有的血管根底上延伸擴(kuò)展形成、腫瘤本身能誘導(dǎo)血管的形成。4纖溶酶及其調(diào)節(jié)因子與腫瘤轉(zhuǎn)移：纖維蛋白溶解酶能水解大多數(shù)細(xì)胞外基質(zhì)物質(zhì)，在血管形成、腫瘤細(xì)胞脫落、基質(zhì)浸潤(rùn)、

22、侵入和逸出循環(huán)系統(tǒng)、繼發(fā)臟器移行和微環(huán)境改造等發(fā)揮重要作用。5基質(zhì)金屬蛋白酶及其抑制劑與腫瘤轉(zhuǎn)移：細(xì)胞外基質(zhì)的溶解酶系統(tǒng)由一個(gè)龐大的蛋白溶解酶家族組成，稱為MMPs， MMPs及其抑制劑TIMP在腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移過程中擔(dān)任重要角色抗腫瘤轉(zhuǎn)移的策略和手段：六、1.概念，細(xì)胞分化：指多細(xì)胞生物成長(zhǎng)發(fā)育中，在一些內(nèi)在機(jī)制作用下，細(xì)胞在構(gòu)造、形態(tài)、生理功能及生化特征等方面逐漸產(chǎn)生穩(wěn)定性差異，成為多種不同的細(xì)胞類型，以形成個(gè)體不同的組織、器官和系統(tǒng)。細(xì)胞增殖：指細(xì)胞分裂和再生的過程，細(xì)胞通過分裂進(jìn)展增殖，使遺傳信息傳給子代，保持物種的延續(xù)和數(shù)量增多。七、1.試述細(xì)胞周期的時(shí)相及其特征。1G1期：細(xì)胞周期的

23、大局部時(shí)相處于G1期，動(dòng)物細(xì)胞一般為612小時(shí)。該期主要的生化活動(dòng)是合成RNA和蛋白質(zhì)。2S期：此期一般持續(xù)68小時(shí)，其長(zhǎng)短主要由基因組的復(fù)雜度決定。該期主要的生化活動(dòng)是復(fù)制DNA。3G2期：是最短的時(shí)相。該期主要的生化活動(dòng)是合成一些與有絲分裂有關(guān)的蛋白質(zhì)。4M期：該期很短，一般持續(xù)0.52小時(shí)。該期生化合成停頓，細(xì)胞形態(tài)發(fā)生改變，一個(gè)母細(xì)胞分裂成2個(gè)子代細(xì)胞。2.試述周期素及CDK的種類、構(gòu)造與功能。在多細(xì)胞真核生物中，參與細(xì)胞周期的蛋白激酶則有許多種，催化亞基包括CDK1，2，3，4，5，6，7，調(diào)節(jié)亞基包括周期素A,B,C,D,E,H,其中周期素D又分為D1，D2，及D3。周期素依賴的蛋

24、白激酶(CDK)；屬于絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，本身并無催化蛋白質(zhì)磷酸化的活性。在細(xì)胞周期的*一個(gè)時(shí)相，它們可以和cycin結(jié)合形成復(fù)合物。在人體細(xì)胞內(nèi)，控制G1期的主要是CDk4,CDk6和cyclinD的相互作用。Cyciln在細(xì)胞周期的特定時(shí)相與CDK細(xì)胞結(jié)合，起著調(diào)節(jié)CDK的調(diào)節(jié)亞基的作用。在G1期中，CDK4和CDK6與cyclinD相結(jié)合，CDK2與cyclinE結(jié)合；在S期和G2期時(shí)CDK2則于cyclinA結(jié)合；而在M期時(shí)，CDK1與cyclinA,cyclinB結(jié)合。在G1期中發(fā)揮作用的稱為G1 cyclin,包括cyclinC,D和E。cyclinD和cyclinE依賴的兩類CDK調(diào)節(jié)G1/S限制點(diǎn)的控制。在G2/M調(diào)控點(diǎn)發(fā)揮作用的稱為M cyclin,M cyclin包括cyclinA,B和H。cyclinA和cyclinB依賴的CDK調(diào)節(jié)G2/M的控制。一旦周期素表達(dá)，它就會(huì)與CDK結(jié)合，或者再通過化學(xué)修飾，使CDK出現(xiàn)蛋白激酶的活性。3.調(diào)控細(xì)胞周期的關(guān)鍵分子及其調(diào)控機(jī)制。細(xì)胞周期調(diào)控的核心蛋白：1周期蛋白依賴性蛋白激酶(Cyclin-dependent kinases,Cdks)：細(xì)胞周期調(diào)節(jié)的中心環(huán)節(jié)。一類