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1、動(dòng)物組織中核酸的提取及其組成成分的鑒定生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn) CQMU 2008添教材1實(shí)驗(yàn)思路動(dòng)物肝組織提取 (勻漿)核酸分離 (離心)水解核酸核酸沉淀物糖、磷酸、堿基分別鑒定實(shí)驗(yàn)?zāi)康牧私獗緦?shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)思路學(xué)習(xí)離心技術(shù),掌握離心機(jī)的正確使用2氨基萘酚磺酸濃酸【鑒定的原理】核糖糖醛 + 3,5二羥甲苯(地衣酚)綠色復(fù)合物3H2O磷酸 + 鉬酸銨磷鉬酸還原鉬蘭(蘭色)脫氧核糖濃酸-羥基-酮基戊醛 + 二苯胺3H2O蘭色化合物3【操作】1.制備勻漿 豬肝 + 沙 + 研磨勻漿 + 生理鹽水 2.分離抽提肝勻漿倒入刻度離心管立即加入2%三氯醋酸4ml攪勻靜置、離心(3000轉(zhuǎn)/分,3分鐘)、傾去上清液
2、沉淀物中再加入10%NaCl溶液4ml攪勻再置于沸水浴中加熱5分鐘,用玻棒不斷攪拌取出冷卻后再離心(3000轉(zhuǎn)/分,3分鐘)4將上清液倒入小燒杯內(nèi)取4ml 95%乙醇,逐滴加入小燒杯白色沉淀物,靜置5分鐘,轉(zhuǎn)入離心管再離心(3000轉(zhuǎn)/分,3分鐘)傾去上清液,即得到核酸納的白色沉淀3.核酸水解含有核酸離心管加入5%H2SO4溶液4ml用玻棒攪勻,在沸水中加熱5分鐘核酸水解液54.RNA和DNA成分鑒定1)磷酸鑒定:取試管2支,分別標(biāo)明測(cè)定管與對(duì)照管,按講義操作(觀察顏色有何不同)2)核糖鑒定:取試管2支,分別標(biāo)明測(cè)定管與對(duì)照管,按講義操作(比較兩管顏色)6離心機(jī)使用注意事項(xiàng):1.記住離心管編號(hào);2.離心管必須先平衡后才對(duì)稱(chēng)放入離心機(jī);3.避免液體灑在離心機(jī)上面或鉆頭中;4.
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