生理科學實驗-實驗19電驚厥201202

1、實驗19 藥物抗驚厥作用Experiment 19. The anti-convulsion function of drugs藥物對抗電刺激引起小鼠驚厥的作用唐法娣（fadit)浙江大學醫(yī)學院2012.2觀察抗癜癇藥sodium phenobarbital（苯巴比妥鈉）預防性對抗電刺激引起的小鼠驚厥作用。實驗目的 電驚厥法是利用電流刺激動物誘發(fā)驚厥，并利用這種實驗模型來篩選抗癲癇大發(fā)作的藥物。目前最常用的方法是最大電休克發(fā)作實驗(maximal electroshock seizure test,MES)。一般認為，MES是癲癇大發(fā)作的實驗模型，受試化合物若能明顯對抗MES，則該化合物有可能

2、發(fā)展成為在臨床上治療癲癇大發(fā)作有效的藥物。實驗原理1.苯巴比妥能選擇性地抑制癲癇灶中的異常神經(jīng)元、防止或減少其過度放電，抑制病灶的點燃和傳播。這種抑制作用與腦內(nèi)抑制性遞質(zhì)-氨基丁酸的含量增高有關。2.動物實驗表明苯巴比妥能提高電刺激大腦皮層運動區(qū)及間腦的最低閾值。苯巴比妥 的作用機制動物: ICR小鼠藥品：0.5% sodium phenobarbital 溶液儀器：JTC-1型驚厥及痛覺實驗交流電刺激器 【它是用于電驚厥及痛覺實驗的專用交流刺激器： 輸出電壓范圍：0120伏（50Hz交流電壓）連續(xù)可調(diào)； 輸出電流：不小于100毫安； 刺激模式：單刺激、連續(xù)刺激，外觸發(fā)程控； 刺激時間：0.2

3、、0.3、0.4、0.5、0.6（秒）； 刺激周期：單刺激、1、2、5、10（秒）?！?. 材料將“輸出電壓”調(diào)到20伏刺激時間設為0.5s刺激周期設為單刺激如不發(fā)生驚厥，將輸出電壓增大，再試2. 方法2.1 準備將輸出電壓調(diào)到20伏、時間0.5s，刺激周期設為單刺激(第1次電驚厥試驗) 挑選發(fā)生電驚厥反應的小鼠（用苦味酸標記1、2、3-） ip 0.5%苯巴比妥鈉0.1ml/10g ip生理鹽水0.1ml/10g 15min 電驚厥試驗(第2次) 記錄結(jié)果（+發(fā)生驚厥、-未發(fā)生驚厥）2. 方法2.2 實驗流程2.3 操作和觀察 先將電驚厥儀輸出線的鱷魚夾尖端用生理鹽水浸濕，一個夾子夾小鼠兩耳

4、根間的皮膚，另一個夾下顎部。 電驚厥刺激 驚厥指標： 雙后腿強直 驚厥發(fā)生過程： 僵直屈曲期 后肢伸直期 陣攣期 恢復期2. 方法 將有電驚厥反應的小鼠,稱體重后用苦味酸分別做記號,編為甲、乙兩組,甲鼠 ip 5g/L phenobarbital sodium 溶液0.1ml/10g，乙鼠ip生理鹽水0.1ml/10g。 注射15min后，按照各個小鼠第一次發(fā)生驚厥的電壓，再次進行電驚厥實驗，觀察是否再次發(fā)生驚厥。 記錄結(jié)果。 實驗結(jié)束將小鼠脫頸處死。2. 方法3. 結(jié)果表1. 電驚厥實驗結(jié)果匯總表表2. 苯巴比妥鈉對電刺激引起小鼠驚厥作用的影響4.討論思考題：電刺激引起小鼠驚厥的發(fā)生機制；分

5、析苯巴比妥鈉抗電刺激引起小鼠驚厥作用的機制。電驚厥實驗有什么意義? 注意事項（1）實驗前選擇動物,電刺激后不產(chǎn)生后肢強直者不用于實驗。（2）注意安全 用右手從籠盒內(nèi)將小鼠尾部捉住并提起，放在籠蓋（或表面粗糙的物體）上，輕輕向后拉鼠尾，在小鼠向前掙脫時，用左手拇指和食指抓住兩耳和頸部皮膚，無名指、小指和手掌心夾住背部皮膚和尾部。小鼠的捉拿方法小鼠腹腔注射腹腔注射時，使小鼠頭部朝下，將注射針與小鼠腹部皮膚呈90；由下腹中線偏左或偏右約1-2 mm處下針，約插入3-5 mm即可開始將藥劑注入腹腔。小鼠脫頸處死方法 方法是用左手拇指、食指用力向下按壓鼠頭及頸部，右手抓住鼠尾根部用力拉向后上方，造成頸椎

6、脫臼，脊髓與腦干斷離。優(yōu)點：腦干與脊髓分離時動物感覺不到痛的刺激，只破壞脊髓，體內(nèi)臟器完整無損，適于采樣時使用。缺點：施力不當，特別是施力不夠時，動物不能立即死亡，會造成動物疼痛以及肺、脾、腎等臟器充血和淤血。49/生理科學實驗課程精品課程網(wǎng)站 小鼠電驚厥的發(fā)生機制？巴比妥抗驚厥的作用機制？電驚厥實驗有什么意義?問題實驗19. 藥物對抗電刺激引起小鼠驚厥的作用1. 摘要（結(jié)構(gòu)式摘要:目的、方法、結(jié)果、結(jié)論）2. 材料和方法：2.1 材料：2.2 方法：3. 實驗結(jié)果3.1 原始數(shù)據(jù)表實驗報告要求：表1. 電驚厥實驗結(jié)果匯總表實驗小組 生理鹽水組 苯巴比妥鈉驚厥未驚厥驚厥未驚厥1110222003320024100152003611037200282002920021020033.2 統(tǒng)計結(jié)果 組別動物數(shù) 驚厥百分率X2值 生理鹽水組 苯巴比妥鈉組3.3 結(jié)果敘述表2.苯巴比妥鈉對電刺激引起小鼠驚厥作用的影響4. 討論 5. 參考文獻專著 作