DNA重組技術課件

1、1定向基因改造設想定向基因改造設想 23基因工程的別名基因工程的別名操作環(huán)境操作環(huán)境操作對象操作對象操作水平操作水平基本過程基本過程結果結果4 基因工程基因工程需要哪些基需要哪些基本工具本工具? ?5分子手術刀分子手術刀限制性內切酶限制性內切酶67一、限制性核酸內切酶一、限制性核酸內切酶8思考思考 在自然界中有一些生物的在自然界中有一些生物的DNADNA可能進入另一種可能進入另一種生物的細胞中。我們有沒有學過相關的實例？生物的細胞中。我們有沒有學過相關的實例？ 細菌為什么不會因外源細菌為什么不會因外源DNADNA的入侵而滅絕？的入侵而滅絕？9黏性末端黏性末端平末端平末端10內切酶切割內切酶切割

2、DNADNA后形成的末端后形成的末端黏性末端、平黏性末端、平末端是如何形成的？末端是如何形成的？11121314 限制酶存在于原核細胞中的作用是限制酶存在于原核細胞中的作用是什么？為什么限制酶不剪切細菌本身的什么？為什么限制酶不剪切細菌本身的DNA？15二、連接酶二、連接酶“分子縫合針分子縫合針”.作用：連接磷酸二酯鍵作用：連接磷酸二酯鍵16 限制酶切割后產生兩種不同的末端。限制酶切割后產生兩種不同的末端。那么恢復它們的連接時，所用那么恢復它們的連接時，所用DNA連接連接酶是否可以不加選擇？酶是否可以不加選擇？E.coliDNAE.coliDNA連接酶：連接黏性末端連接酶：連接黏性末端T T4

3、 4DNADNA連接酶：連接黏性末端和平末端連接酶：連接黏性末端和平末端.DNA.DNA連接酶的種類連接酶的種類17DNA聚合酶和聚合酶和DNA連接酶有何連接酶有何相同點和不同點？相同點和不同點？18DNADNA連接酶連接酶DNADNA聚合酶聚合酶連接連接DNADNA鏈鏈連接部位連接部位相同點相同點雙鏈雙鏈單鏈單鏈在兩在兩DNADNA片段之間形片段之間形成磷酸二酯鍵成磷酸二酯鍵將單個核苷酸加將單個核苷酸加到已存在的核酸到已存在的核酸片段的片段的33末端的末端的羥基上，形成磷羥基上，形成磷酸二酯鍵酸二酯鍵都能形成都能形成磷酸二酯鍵磷酸二酯鍵二者都由蛋白質構成二者都由蛋白質構成19假如目的基因導入

4、受體細胞后不能復制假如目的基因導入受體細胞后不能復制將怎樣？將怎樣？作為載體沒有切割位點將怎樣？作為載體沒有切割位點將怎樣？目的基因是否進入受體細胞，你如何察目的基因是否進入受體細胞，你如何察覺？覺？如果載體對受體細胞有害將怎樣？如果載體對受體細胞有害將怎樣？三、基因進入受體細胞的載體三、基因進入受體細胞的載體 “分子運輸車分子運輸車”201. 載體的必要條件載體的必要條件 能自我復制，能自我復制，或能進入受體生物細胞并或能進入受體生物細胞并在受體生物細胞內復制并表達；在受體生物細胞內復制并表達； 有切割位點有切割位點 有遺傳標記基因有遺傳標記基因 對受體細胞無害、容易分離對受體細胞無害、容易

5、分離 比較容易得到比較容易得到能復制并帶著插能復制并帶著插入的目的基因一入的目的基因一起復制起復制有切割位點有切割位點有標記基因的存有標記基因的存在，可用含青霉在，可用含青霉素的培養(yǎng)基鑒別。素的培養(yǎng)基鑒別。22常用的分子運輸車常用的分子運輸車有哪些？有哪些？23小結基因工程基因工程的工具的工具限制酶限制酶主要存在于原核生物中主要存在于原核生物中具有專一性具有專一性(識別序列識別序列)切開切開DNA分子的磷酸二酯鍵分子的磷酸二酯鍵DNA連連接酶接酶連接磷酸二酯鍵連接磷酸二酯鍵種類種類E.coliDNA連接酶連接酶T4 DNADNA連接酶連接酶運載運載工具工具具備的具備的條件條件結構簡單結構簡單,

6、大小適中大小適中能在宿主細胞中自能在宿主細胞中自我復制并穩(wěn)定存在我復制并穩(wěn)定存在具一個多個限制酶切位點具一個多個限制酶切位點具標記基因具標記基因質粒、質粒、噬菌體衍生物、動植物病毒噬菌體衍生物、動植物病毒241.在基因工程中，切割運載體和含有目的在基因工程中，切割運載體和含有目的基因的基因的DNA片段，需使用（片段，需使用（ ）同種限制酶同種限制酶 B. 兩種限制酶兩種限制酶同種連接酶同種連接酶 D. 兩種連接酶兩種連接酶252627 大腸桿菌的一種限制酶大腸桿菌的一種限制酶（EcoR)EcoR)能識別能識別GAATTCGAATTC序列，序列，并在并在G G和和A A之間切開形成黏性末之間切開形成黏性