最全的液相色譜知識(shí) 整理

1、最全的液相色譜知識(shí)（包括原理，維護(hù)，基礎(chǔ)操作，處理方法）HPLC日常維護(hù)-進(jìn)樣閥問題可能原因解決方法手動(dòng)進(jìn)樣閥，轉(zhuǎn)動(dòng)不靈轉(zhuǎn)子密封損壞更換或調(diào)整轉(zhuǎn)子密封轉(zhuǎn)子太緊調(diào)整轉(zhuǎn)子的松緊度手動(dòng)進(jìn)樣閥，載樣困難 進(jìn)樣閥安裝不當(dāng)重新安裝定量環(huán)阻塞清洗或更換定量環(huán)進(jìn)樣器污染清洗或更換進(jìn)樣器管路阻塞清洗或更換管路自動(dòng)進(jìn)樣閥，不能轉(zhuǎn)動(dòng)無壓力（或電源）提供恰當(dāng)?shù)膲毫Γ娫矗┺D(zhuǎn)子太緊調(diào)整轉(zhuǎn)子的松緊度進(jìn)樣閥安裝不當(dāng)重新安裝自動(dòng)進(jìn)樣閥，其它問題阻塞清洗或更換阻塞部件機(jī)械故障見隨機(jī)維修手冊(cè)控制器故障維修或更換控制器 出現(xiàn)問題可能原因解決方法保留時(shí)間變化柱溫變化柱恒溫，必要時(shí)需配置恒溫箱 等度與梯度間未能充分平衡至少用10倍柱體

2、積的流動(dòng)相平衡柱緩沖液容量不夠用25mmol/L的緩沖液柱污染每天沖洗柱柱內(nèi)條件變化穩(wěn)定進(jìn)樣條件,調(diào)節(jié)流動(dòng)相柱快達(dá)到壽命采用保護(hù)柱 保留時(shí)間縮短流速增加檢查泵,重新設(shè)定流速樣品超載降低樣品量鍵合相流失流動(dòng)相PH值保持在37.5檢查柱的方向流動(dòng)相組成變化防止流動(dòng)相蒸發(fā)或沉淀溫度增加柱恒溫保留時(shí)間延長(zhǎng)流速下降管路泄漏,換泵密封圈,排除泵內(nèi)氣泡硅膠柱上活性點(diǎn)變化用流動(dòng)相改性劑,如加三乙胺,或采用堿至鈍化柱鍵合相流失流動(dòng)相PH值保持在37.5檢查柱的方向流動(dòng)相組成變化防止流動(dòng)相蒸發(fā)或沉淀溫度降低柱恒溫出現(xiàn)肩峰或分叉樣品體積過大用流動(dòng)相配樣,總的樣品體積小于第一峰的15%樣品溶劑過強(qiáng)采用較弱的樣品溶劑柱

3、塌陷或形成短路通道更換色譜柱,采用較弱腐蝕性條件柱內(nèi)燒結(jié)不銹鋼失效更換燒結(jié)不銹鋼,加在線過濾器,過濾樣品進(jìn)樣器損壞更換進(jìn)樣器轉(zhuǎn)子鬼峰進(jìn)樣閥殘余峰每次用后用強(qiáng)溶劑清洗閥,改進(jìn)閥和樣品的清洗樣品中未知物處理樣品柱未平衡重新平衡柱,用流動(dòng)相作樣品溶劑 (尤其是離子對(duì)色譜)三氟乙酸(TFA)氧化(肽譜)每天新配,用抗氧化劑水污染(反相)通過變化平衡時(shí)間檢查水質(zhì)量，用HPLC級(jí)的水基線噪聲氣泡(尖銳峰)流動(dòng)相脫氣,加柱后背壓污染(隨機(jī)噪聲) 清洗柱,凈化樣品,用HPLC級(jí)試劑檢測(cè)器燈連續(xù)噪聲更換氘燈電干擾(偶然噪聲) 采用穩(wěn)壓電源,檢查干擾的來源(如水浴等)檢測(cè)器中有氣泡流動(dòng)相脫氣,加柱后背壓峰拖尾柱超

4、載降低樣品量,增加柱直徑采用較高容量的固定相峰干擾清潔樣品,調(diào)整流動(dòng)相硅羥基作用加三乙胺,用堿致鈍化柱增加緩沖液或鹽的 濃度降低流動(dòng)相PH值,鈍化樣品柱內(nèi)燒結(jié)不銹鋼失效更換燒結(jié)不銹鋼,加在線過濾器,過濾樣品柱塌陷或形成短路通道更換色譜柱,采用較弱腐蝕性條件死體積或柱外體積過大連接點(diǎn)降至最低,對(duì)所有連接點(diǎn)作合適調(diào)整,盡可能采用細(xì)內(nèi)徑的連接管柱效下降用較低腐蝕條件,更換柱,采用保護(hù)柱 峰展寬進(jìn)樣體積過大用流動(dòng)相配樣,總的樣品體積小于第一峰的15%在進(jìn)樣閥中造成峰擴(kuò)展進(jìn)樣前后排出氣泡以降低擴(kuò)散數(shù)據(jù)系統(tǒng)采樣速率太慢設(shè)定速率應(yīng)是每峰大于10點(diǎn)檢測(cè)器時(shí)間常數(shù)過大設(shè)定時(shí)間常數(shù)為感興趣第一峰半寬的10%流動(dòng)相

5、粘度過高增加柱溫,采用低粘度流動(dòng)相 檢測(cè)池體積過大用小體積池,卸下熱交換器保留時(shí)間過長(zhǎng)等度洗脫時(shí)增加溶劑含量也可用梯度洗脫柱外體積過大 將連接管徑和連接管長(zhǎng)度降至最小樣品過載 進(jìn)小濃度小體積樣品 流動(dòng)相a、流動(dòng)相對(duì)樣品具有一定的溶解能力 b、流動(dòng)相具有一定惰性，與樣品不產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)(特殊情況除外)。 c、流動(dòng)相的黏度要盡量小 d、流動(dòng)相的物化性質(zhì)要與使用的檢測(cè)器相適應(yīng) e、流動(dòng)相沸點(diǎn)不要太低，否則容易產(chǎn)生氣泡，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)無法進(jìn)行。 f、在流動(dòng)相配制好后，一定要進(jìn)行脫氣。 1.流動(dòng)相必須用HPLC級(jí)的試劑. 2.流動(dòng)相過濾后要用超聲波脫氣.脫氣后應(yīng)該恢復(fù)到濕溫后使用. 3.長(zhǎng)時(shí)間不使用儀器,應(yīng)該將

6、柱子取下用堵頭封好保存.4.每次做完樣品后應(yīng)該用溶解樣品的溶劑清洗進(jìn)樣器. 流動(dòng)相對(duì)樣品有適當(dāng)?shù)娜芙舛?，但不與樣品發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，也不與固定液互溶；流動(dòng)相的純度要高（至少分析純）、粘度要小，以免帶進(jìn)雜質(zhì)和組分在流動(dòng)相中擴(kuò)散系數(shù)下降；流動(dòng)相應(yīng)與所用檢測(cè)器相匹配，不應(yīng)對(duì)組分檢測(cè)產(chǎn)生干擾作用。對(duì)于一根特定的色譜柱，要追求最佳柱效，最好使用最佳流速。對(duì)于內(nèi)徑為4.6mm的色譜柱，流速一般選擇1mlmin，對(duì)于內(nèi)徑為4.0mm的色譜柱，流速0.8mlmin為佳。 當(dāng)選用最佳流速時(shí)，分析時(shí)間可能延長(zhǎng)?？刹捎酶淖兞鲃?dòng)相的洗滌強(qiáng)度的方法以縮短分析時(shí)間(如使用反相柱時(shí)，可適當(dāng)增加甲醇或乙腈的含量)。 流動(dòng)相一般貯

7、存于玻璃、聚四氟乙烯或不銹鋼容器內(nèi)，不能貯存在塑料容器中。因許多有機(jī)溶劑如甲醇、乙酸等可浸出塑料表面的增塑劑，導(dǎo)致溶劑受污染。種被污染的溶劑如用于HPLC系統(tǒng)，可能造成柱效降低。貯存容器一定要蓋嚴(yán)，防止溶劑揮發(fā)引起組成變化，也防止氧和二氧化碳溶入流動(dòng)相。 磷酸鹽、乙酸鹽緩沖液很易長(zhǎng)霉，應(yīng)盡量新鮮配制使用，不要貯存。如確需貯存，可在冰箱內(nèi)冷藏，并在3天內(nèi)使用，用前應(yīng)重新濾過。容器應(yīng)定期清洗，特別是盛水、緩沖液和混合溶液的瓶子，以除去底部的雜質(zhì)沉淀和可能生長(zhǎng)的微生物。因甲醇有防腐作用，所以盛甲醇的瓶子無此現(xiàn)象。 1、 為了延長(zhǎng)泵的使用壽命和維持其輸液的穩(wěn)定性請(qǐng)按照以下注意事項(xiàng)操作：1、 防止任何固

8、體微粒進(jìn)入泵體，因?yàn)閴m埃或其它任何雜質(zhì)都會(huì)磨損柱塞、密封環(huán)、缸體和單向閥，因此應(yīng)預(yù)先除去流動(dòng)相中的任何固體微粒。流動(dòng)相最好在玻璃容器內(nèi)蒸餾，而常用的方法是過濾，可采用Millipore濾膜（0.2um 或0.45um ）等濾器。泵的入口都應(yīng)該連接砂濾棒（或片），輸液泵的濾器應(yīng)經(jīng)常換。 2、 流動(dòng)相不應(yīng)含有任何腐蝕性物質(zhì)，含有緩沖液的流動(dòng)相不應(yīng)保留在泵內(nèi)，尤其是停泵過夜或更長(zhǎng)時(shí)間的情況下。如果將含有緩沖液的流動(dòng)相留在泵內(nèi)，由于蒸發(fā)或泄漏，甚至只是由于溶液的靜止，就可能析出鹽的微小晶體，些晶體將和上述固體微粒一樣損壞密封環(huán)和柱塞等。因此，必須泵入純水充分清洗后，再換成適合于色譜柱保存和有利于泵維護(hù)

9、的溶劑（對(duì)于反相鍵合固定相，可以是甲醇或甲醇和水）。 3、 泵工作時(shí)要留心防止溶劑瓶?jī)?nèi)的流動(dòng)相用完，否則空泵運(yùn)轉(zhuǎn)也磨損柱塞、密封環(huán)或缸體，最終產(chǎn)生漏液。 4、 輸液泵的工作壓力不要超過規(guī)定的最高壓力，否則會(huì)使高壓密封環(huán)變形，產(chǎn)生漏液。 5、 流動(dòng)相應(yīng)該先脫氣，以免在泵內(nèi)產(chǎn)生氣泡，影響流量的穩(wěn)定性，如果有大喊大量氣泡，泵就無法工作。 二、如果輸液泵產(chǎn)生故障，須查明原因，采取相應(yīng)的措施排除故障： 1、 沒有流動(dòng)相流出，又無壓力指示。原因可能是泵內(nèi)有大量的氣體，這時(shí)可打開泄壓閥，使泵在較大的流量（5ml/min）下運(yùn)轉(zhuǎn)，將氣泡排盡，也可用一50ml的注射器在泵出口處幫助抽出氣體。另一個(gè)原因可能是密封

10、環(huán)磨損，需更換。 2、 壓力的流量不穩(wěn)。原因可能是氣泡，需要排除，或者是單向閥內(nèi)有異物，可以卸下單向閥，浸入丙酮內(nèi)，進(jìn)行超聲清洗。有時(shí)有可能是砂濾棒內(nèi)有氣泡或被鹽的微小晶體粒或滋生的微生物部分堵塞，這時(shí)，卸下砂濾棒浸入流動(dòng)相內(nèi)，超聲除氣泡，或?qū)⑸盀V棒（片）浸入稀酸（如4mol/L硝酸）內(nèi)迅速除去微生物或?qū)Ⅺ}溶解，再立即清洗。 3、 壓力過高的原因，是管路被堵塞，需要清除或清洗。壓力降低的原因則可能是管路有泄漏。檢查堵塞或泄漏時(shí)可以逐段進(jìn)行。 2、 新柱柱效低 柱外死體積大.樣品在流動(dòng)相中溶解不好，影響傳質(zhì)過程。 -換連接管，重新連接色譜柱，降低死體積。使用合適的流動(dòng)相或使用流動(dòng)相溶解樣品。 5

11、、 新柱接到儀器上后，柱頭漏液。 柱接頭與儀器之間連接管的壓環(huán)變形量不夠。 -用扳手順時(shí)針方向擰緊14圈直到不漏液為止。 6、 新柱接到儀器上后，啟動(dòng)儀器沒有柱壓降。 柱放置時(shí)間過長(zhǎng)柱內(nèi)充裝的液體己揮發(fā)干。 -繼續(xù)開泵，用流動(dòng)相將柱內(nèi)氣體置換掉。 7、 新柱接到儀器上后，檢測(cè)器出口不斷有小氣泡出現(xiàn)。 柱放置時(shí)間過長(zhǎng)柱內(nèi)充裝的液體己揮發(fā)干。 -繼續(xù)開泵，用流動(dòng)相將柱內(nèi)氣體置換掉。 流動(dòng)相脫氣不徹底特別是MeOHH20體系由于氫鍵作用很容易出現(xiàn)氣泡。 -配好流動(dòng)相后一定要進(jìn)行脫氣處理。 8、 新柱接到儀器上后柱壓降不斷增加，甚至超過儀器的耐壓限。 柱入口濾片被固體顆粒堵塞(或被毒菌堵塞)。 -更換

12、或清洗柱入口濾片；用045m過濾膜過濾流動(dòng)相除去微小顆粒物。 3、 舊色譜柱柱效低，分離不好，柱入口床層塌陷。 填料被流動(dòng)相溶蝕而流失。 -用同型填料填補(bǔ)柱效可部分恢復(fù)。對(duì)硅膠質(zhì)填料，流動(dòng)相PH值在27范圍內(nèi)，否則可能被溶蝕。 4、 舊色譜柱柱效低分離不好，有時(shí)出現(xiàn)雙峰。 入門填料被污染變質(zhì)所致。 -用強(qiáng)溶劑沖洗。刮除被污染的床層，用同型的填料填補(bǔ)柱效可部分恢復(fù)。污染嚴(yán)重，則廢棄或重新填裝。 1、 柱壓升高; 色譜柱入U(xiǎn)濾片被流動(dòng)相或樣品中顆粒堵住。樣品組分在濾片上沉淀堵住濾片。 卸下入口接頭的濾片，使用1：1的硝酸溶液超聲清洗5min，再用水、甲醇清洗除去水份。樣品及流動(dòng)相使用045m濾膜除

13、去微量雜質(zhì)。使用流動(dòng)相作溶劑配制樣品。 9、 b進(jìn)樣次數(shù)增加柱壓降逐漸增加。 樣品中含有不溶于流動(dòng)相的微小顆粒物。樣品在流動(dòng)相中析出微小結(jié)晶。 用045m過濾膜過濾樣品。推薦使用流動(dòng)相溶解樣品。 10、 使用段時(shí)間后，柱效下降，分離不好。 柱填料被流動(dòng)相溶解而流失。柱填料被樣品雜質(zhì)污染。 推薦使用予柱。如柱床層塌陷，用相同型號(hào)填料填補(bǔ)。推薦使用保護(hù)柱或用強(qiáng)溶劑沖洗色譜柱除去污染雜質(zhì)。 11、 b柱使用一段時(shí)間后，柱效下降出現(xiàn)雙峰。 柱入口床層被污染使柱填料變質(zhì)。 用強(qiáng)溶劑沖洗除去雜質(zhì)。 12、 柱使用段時(shí)間后，柱效下降，出現(xiàn)峰拖尾。 柱入口床層被污染。 用強(qiáng)溶劑沖洗20-30ml，若效果不明顯

14、應(yīng)廢棄。 13、 進(jìn)樣量增大與峰面積增加不成正比即進(jìn)樣量與峰面積不是線性關(guān)系。 樣品在流動(dòng)相中的溶解度小，只有部分樣品被流動(dòng)相沖如色譜柱中而另一部分則沉積在柱人口端。 用流動(dòng)相溶解樣品。樣品的濃度不宜太大。進(jìn)樣量不宜過大。 14、 使用緩沖液作流動(dòng)相時(shí)，柱壓降升高很快。 霉菌生長(zhǎng)所致。 在流動(dòng)相中加入有毒物質(zhì)或加疊氯化鈉防止霉菌生長(zhǎng)。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后先用純水后用MeOH各沖洗20-30ml后關(guān)機(jī)。15、 用5m顆粒填料柱時(shí)， 以MeOHH20作流動(dòng)相柱壓較高。 MeOH與水之間由于氫鍵作用黏度增大。 可用乙腈水體系使柱壓降低，分離效率更好。16、 長(zhǎng)時(shí)間放置的色譜柱，出現(xiàn)雙峰。 柱床層出現(xiàn)干裂。 柱

15、放置時(shí)，最好使用相應(yīng)的溶劑充填好，防止受大的機(jī)械震動(dòng)，如床層干裂應(yīng)廢棄掉。 17、 流動(dòng)相洗滌強(qiáng)度由弱漸強(qiáng)時(shí)出現(xiàn)很多雜質(zhì)峰。 強(qiáng)溶劑將弱溶劑洗不出的雜質(zhì)沖出來。 不影響柱的性能。 18、 柱使用一段時(shí)間后保留值逐漸縮短。 柱中固定相流失所致。 更換色譜柱。檢查所用的色譜條件是否合適。 19、 在U V色譜圖中，靠近死時(shí)間處出現(xiàn)負(fù)峰。 進(jìn)樣時(shí)壓力波動(dòng)所致。樣品溶劑比流動(dòng)相的UV吸收值低。 采用閥進(jìn)樣。 用流動(dòng)相溶解樣品。 HPLC靈敏度不夠 1、 樣品量不足，解決辦法為增加樣品量 2、 樣品未從柱子中流出?？筛鶕?jù)樣品的化學(xué)性質(zhì)改變流動(dòng)相或柱子 3、 樣品與檢測(cè)器不匹配。根據(jù)樣品化學(xué)性質(zhì)調(diào)整波長(zhǎng)或

16、改換檢測(cè)器 4、 檢測(cè)器衰減太多。調(diào)整衰減即可。 5、檢測(cè)器時(shí)間常數(shù)太大。解決辦法為降低時(shí)間參數(shù)6、檢測(cè)器池窗污染。解決辦法為清洗池窗。 7、檢測(cè)池中有氣泡。解決辦法為排氣。 8、記錄儀測(cè)壓范圍不當(dāng)。調(diào)整電壓范圍即可。 9、流動(dòng)相流量不合適。調(diào)整流速即可。 10、檢測(cè)器與記錄儀超出校正曲線。解決辦法為檢查記錄儀與檢測(cè)器，重作校正曲線。為什么HPLC柱柱壓過高 1、 拆去保護(hù)預(yù)柱，看柱壓是否還高，否則是保護(hù)柱的問題，若柱壓仍高，再檢查； 2、 把色譜柱從儀器上取下，看壓力是否下降，否則是管路堵塞，需清洗，若壓力下降，再檢查； 3、 將柱子的進(jìn)出口反過來接在儀器上，用10倍柱體積的流動(dòng)相沖洗柱子，

17、（此時(shí)不要連接檢測(cè)器，以防固體顆粒進(jìn)入流動(dòng)池）。時(shí)，如果柱壓仍不下降，再檢查； 4、 換柱子入口篩板，若柱壓下降，說明您的溶劑或樣品含有顆粒雜質(zhì)，正是這些雜質(zhì)將篩板堵塞引起壓力上升。若柱壓還高，請(qǐng)與廠商聯(lián)系。 一般情況下，在進(jìn)樣器與保護(hù)柱之間接一在線過濾器便可避免柱壓過高的問題，SGE提供的Rheodyne 7315型過濾器就是解決這一問題的最佳選擇。 液相色譜中峰出現(xiàn)拖尾或出現(xiàn)雙峰的原因是什么？ 1、 篩板堵塞或柱失效，解決辦法是反向沖洗柱子，替換篩板或更換柱子。 2、 存在干擾峰，解決辦法為使用較長(zhǎng)的柱子，改換流動(dòng)相或更換選擇性好的柱子 如何解決HPLC進(jìn)行分析時(shí)保留時(shí)間發(fā)生漂移或急速變化

18、 漂移現(xiàn)象 1、溫度控制不好，解決方法是采用恒溫裝置，保持柱溫恒定 2、流動(dòng)相發(fā)生變化，解決辦法是防止流動(dòng)相發(fā)生蒸發(fā)、反應(yīng)等 3、柱子未平衡好，需對(duì)柱子進(jìn)行更長(zhǎng)時(shí)間的平衡快速變化現(xiàn)象 1. 流速發(fā)生變化，解決辦法是重新設(shè)定流速，使之保持穩(wěn)定 2、 泵中有氣泡，可通過排氣等操作將氣泡趕出。 3、 流動(dòng)相不合適，解決辦法為改換流動(dòng)相或使流動(dòng)相在控制室內(nèi)進(jìn)行適當(dāng)混合 HPLC 儀器問題 1、 我的HPLC泵壓明顯的偏高，請(qǐng)問可能的原因？ 答：流速設(shè)定過高；流動(dòng)相或進(jìn)樣中有機(jī)械雜質(zhì)，造成保護(hù)柱、柱前篩板或在線過濾器阻塞；流動(dòng)相粘度過大；柱溫過低；緩沖鹽結(jié)晶；壓力傳感器故障。 2、 基線不穩(wěn)，上下波動(dòng)或

19、漂移的原因是什么，如何解決？ 答：a.流動(dòng)相有溶解氣體；用超聲波脫氣15-30分鐘或用充氦氣脫氣 b.單向閥堵塞；取下單向閥，用超聲波在純水中超20分鐘左右，去處堵塞物 c.泵密封損壞，造成壓力波動(dòng)；更換泵密封 d.系統(tǒng)存在漏液點(diǎn)；確定漏液位置并維修 f.柱后產(chǎn)生氣泡；流通池出液口加負(fù)壓調(diào)整器 g.檢測(cè)器沒有設(shè)定在最大吸收波長(zhǎng)處；將波長(zhǎng)調(diào)整至最大吸收波長(zhǎng)處 h.柱平衡慢，特別是流動(dòng)相發(fā)生變化時(shí)；用中等強(qiáng)度的溶劑進(jìn)行沖洗，更改流動(dòng)相時(shí)，在分析前用10-20倍體積的新流動(dòng)相對(duì)柱子進(jìn)行沖洗。 3、 接頭處為何經(jīng)常漏液，如何處理？ 答：接頭沒有擰緊；擰松后再緊，手緊接頭以手勁為限，不要使用工具，不銹鋼

20、接頭先用手?jǐn)Q緊，再用專用扳手緊1/4-1/2圈，注意接頭中的管路一定要通到底，否則會(huì)留下死體積。接頭被污染或磨損；建議更換接頭。接頭不匹配，建議使用同一品牌的配件。 4、 進(jìn)樣閥漏液是如何造成的？ 答：a.轉(zhuǎn)子密封損壞；更換轉(zhuǎn)子密封 b.定量環(huán)阻塞；清洗或更換定量環(huán) c.進(jìn)樣口密封松動(dòng)；調(diào)整松緊度 d.進(jìn)樣針頭尺寸不合適，一般是過短；使用恰當(dāng)?shù)倪M(jìn)樣針（注意針頭形狀） e.廢液管中產(chǎn)生虹吸；清空廢液管 譜圖問題 1、 問：造成峰拖尾的原因是什么，如何消除？ 答：a.篩板阻塞；反沖色譜柱、更換進(jìn)口篩板 b.色譜柱塌陷；填充色譜柱 c.有干擾物質(zhì)的存在；使用更長(zhǎng)的色譜柱、改變流動(dòng)相或更換色譜柱 e.

21、流動(dòng)相PH值不合適；調(diào)整PH值，對(duì)于堿性化合物，低PH值更有利于得到對(duì)稱峰 f.樣品與填料表面的溶化點(diǎn)發(fā)生反應(yīng)；加入離子對(duì)試劑或堿性揮發(fā)性修飾劑或更改色譜柱 2、 問：造成峰分叉的原因是什么，如何消除？ 答：保護(hù)柱或分析柱污染；取下保護(hù)柱再進(jìn)行分析。如果必要更換保護(hù)柱。如果分析柱阻塞，拆下來清洗。如果問題仍然存在，可能是柱子被強(qiáng)保留物質(zhì)污染，運(yùn)用適當(dāng)?shù)脑偕胧?。如果問題仍然存在，入口可能被阻塞，更換篩板或更換色譜柱。樣品溶劑不溶于流動(dòng)相；改變樣品溶劑，如果可能采取流動(dòng)相作為樣品溶劑。 3、 問：K值增加時(shí)，拖尾更嚴(yán)重，這是為什么？ 答：反相模式，二級(jí)保留效應(yīng)； a.加入三乙胺（或堿性樣品） b

22、.加入乙酸（或酸性樣品） c.加入鹽或緩沖劑（或離子化樣品） d.更換一支柱子 4、 問：保留時(shí)間的波動(dòng)有幾種可能的原因？ 答：溫控不當(dāng)；調(diào)節(jié)好柱溫。流動(dòng)相組分變化；防止流動(dòng)相蒸發(fā)、反應(yīng)等，做梯度時(shí)尤其要注意流動(dòng)相混合的均勻。色譜柱沒有平衡；在每一次運(yùn)行之前給予足夠的時(shí)間平衡色譜柱。 液相色譜常用符號(hào)與術(shù)語表 ACN 乙腈 Acetonitrile AUFS 滿量程的吸光度單位 Absorbance units, full scale As 峰不對(duì)稱因子 B 二元流動(dòng)相中的強(qiáng)溶劑；例如：反相HPLC的甲醇/水混合液中的甲醇 BSA 牛血清白蛋白（蛋白質(zhì)） Bovine serum albumi

23、n CAF 咖啡因（中性溶質(zhì)） Caffeine CRF 色譜響應(yīng)因子 Chromatographic response function；色譜圖總分離度的定量指標(biāo) dc 色譜柱內(nèi)徑（cm） DMOA 二甲基辛胺 Dimethyloctylamine DNB 2,4-二硝基甲酰（基） 2，4-Dinitrobenzoyl dp 色譜柱填料的粒度（cm） DRYLAB 液相資源公司（LC Resources INC.)的計(jì)算機(jī)模擬軟件。DRYLAB I用于等度預(yù)測(cè)，DRYLAB G用于梯度預(yù)測(cè) F 流動(dòng)相的流速（ml/min） FC-113 1，1，2-三氟-1，2，2-三氯乙烷 GPC 凝膠滲

24、透色譜法 Gel-permeation chromatography HA 酸性溶質(zhì)，能電離出A- Hex 己烷 Hexane hr 二相鄰譜帶之間的谷高 HVA 高香草酸 Homovanillic acid h 峰高 h1,h2 相鄰譜峰1和譜峰2的峰高 IEC 離子交換色譜法 Ion-exchange chromatography IP 離子對(duì) Ion-pair IPC 離子對(duì)色譜法 Ion-pair chromatography J 色譜峰強(qiáng)度參數(shù) K 所給譜峰的容量因子，k=(tR-t0)/t0=tR/t0，tR=t0(1+k) k 梯度洗脫過程中，某溶質(zhì)的k的平均值或有效值 kw 以

25、水做流動(dòng)相k的外推值 k1,k2 相鄰譜峰1和譜峰2的容量因子 L 色譜柱長(zhǎng)度（cm） Lc 檢測(cè)器流動(dòng)池光路的長(zhǎng)度（cm） M 溶質(zhì)的分子量 MC 二氯甲烷 Methylene chloride MDST 混合設(shè)計(jì)統(tǒng)計(jì)技術(shù) Mixture-design statistical technique；一種優(yōu)化流動(dòng)相的軟件 MeOH 甲醇 Methanol MTBE 甲基叔丁醚 Methyl-t-butyl ether MW 溶質(zhì)的分子量 N 色譜柱塔板數(shù) NAPA N-乙酰普魯卡因胺 N-Acetylprocainamide（堿性溶質(zhì)） N0 檢測(cè)器的基線噪音 ODS 十八烷基硅烷 Octade

26、cylsilyl P 色譜柱的壓力降通常以巴（bar）表示，也用psi；另外，也用作柱極性參數(shù) PA 普魯卡因胺 Procainamide（堿性物質(zhì)） PAH 聚芳香烴 Polyaromatic Hydrocarbon PESOS 優(yōu)化流動(dòng)相的計(jì)算機(jī)軟件（美國(guó)Perkin-Elmer產(chǎn)品） pKa 溶質(zhì)酸性常數(shù)的負(fù)對(duì)數(shù)；當(dāng)pH=pKa時(shí)，溶質(zhì)中有一半是電離的 Rk 保留值范圍，Rk=（最末譜峰k）/（最初譜峰k） RRM 相對(duì)分離度圖（通常N=10000） Rs 相鄰二譜峰的分離度 S 當(dāng)流動(dòng)相中的%B改變時(shí)，測(cè)量溶質(zhì)保留值的變化速率的參數(shù) SAL 水楊酸 Salicylic Acid SEC

27、 尺寸排阻色譜法 Size-exclusion chromatography S/N 信噪比 Signal to noise ratio t 分離時(shí)間（min）（樣品進(jìn)樣時(shí)t=0） tp 梯度系統(tǒng)的滯后時(shí)間（min） TBA 四丁基銨離子 Tetrabutylammonium ion TEA 三乙胺 Triethylamine THF 四氫呋喃 Tetrahydrofuran tk 在用于校正等度洗脫溶劑強(qiáng)度的流動(dòng)相離開梯度混合器時(shí)，梯度洗脫的時(shí)間 TLC 薄層色譜法 Thin-layer chromatography TMA 四甲基銨 Tetramethylammonium（鹽） TMS 三

28、甲基硅烷 Trimethylsilyl t0 色譜柱的死時(shí)間（min） tR 溶質(zhì)的保留時(shí)間（min）tG 梯度時(shí)間（min），即梯度開始至結(jié)束的時(shí)間 t1,t2 相鄰譜峰1和譜峰2的保留時(shí)間（min） ti 色譜圖中第一峰的保留時(shí)間（min） tf 色譜圖中最末峰的保留時(shí)間（min） tg tf-ti tx (tf-ti)/2 UV 紫外光 Vm 色譜柱的死體積（mL），Vm=t0F VMA 香草扁桃酸 Vanillymandelic acid wm 化合物的進(jìn)樣量 w1,w2 相鄰譜峰1和譜峰2于半峰高處（W1/2）的寬度（min） W1,W2 相鄰譜峰1和譜峰2的基線寬度（min） W1

29、/2 半峰高處的譜帶寬度 xd,xe,xn 溶劑選擇參數(shù)，分別用于測(cè)定溶劑的酸度、堿度和偶極性的程度 ? 分離因子，?=k2/k1 ? 梯度洗脫期間流動(dòng)相成分的變化 ?o 溶劑強(qiáng)度參數(shù) ? 化合物的克分子吸收系數(shù) ? 流動(dòng)相的粘度（Pa?s) ? 流動(dòng)相中強(qiáng)溶劑的體積份數(shù) %B 二元流動(dòng)相中強(qiáng)溶劑的體積百分比（%v） A、峰拖尾 原因 解決方法 1、 篩板阻塞 1、a、反沖色譜柱 b、換進(jìn)口篩板 c、更換色譜柱 2、 色譜柱塌陷 2、填充色譜柱 3、 干擾峰 3、a、使用更長(zhǎng)的色譜柱 b、改變流動(dòng)相或更換色譜柱 4、流動(dòng)相PH選擇錯(cuò)誤 4、調(diào)整PH值。對(duì)于堿性化合物，低PH值更有利于得到對(duì)稱峰

30、 5、樣品與填料表面的溶化點(diǎn)發(fā)生反應(yīng)圖 5、a、加入離子對(duì)試劑或堿性揮發(fā)性修飾劑 b、更改色譜柱 B、峰前延 原因 解決方法 1、 柱溫低 1、升高柱溫 2、 樣品溶劑選擇不恰當(dāng) 2、使用流動(dòng)相作為樣品溶劑 3、 樣品過載 3、降低樣品含量 4、 色譜柱損壞 4、見A1、A2 C、峰分叉 原因 解決方法 1、 保護(hù)柱或分析柱污染圖 1、取下保護(hù)柱再進(jìn)行分析。如果必要更換保護(hù)柱。如果分析柱阻塞，拆下來清洗。如果問題仍然存在，可能是柱子被強(qiáng)保留物質(zhì)污染，運(yùn)用適當(dāng)?shù)脑偕胧?。如果問題仍然存在，入口可能被阻塞，更換篩板或更換色譜柱。 2、 樣品溶劑不溶于流動(dòng)相 2、改變樣品溶劑。如果可能采取流動(dòng)相作為

31、樣品溶劑。 D、峰變形 原因 解決方法 1、 樣品過載 1、減少樣品載量 E、早出的峰變形 原因 解決方法 1、樣品溶劑選擇不恰當(dāng) 1、a、減少進(jìn)樣體積 b、運(yùn)用低極性樣品溶劑 F、早出的峰拖尾程度大于晚出的峰 原因 解決方法 1、 柱外效應(yīng) 1、a、調(diào)整系統(tǒng)連接（使用更短、內(nèi)徑更小的管路）b、使用小體積的流通池。 G、K增加時(shí)，脫尾更嚴(yán)重 原因 解決方法 1、 二級(jí)保留效應(yīng)，反相模式 1、a、加入三乙胺（或堿性樣品）b、加入乙酸（或酸性樣品）c、加入鹽或緩沖劑（或離子化樣品）d、更換一支柱子 2、 二級(jí)保留效應(yīng)，正相模式 2、a、加入三乙胺（或堿性樣品）b、加入乙酸（或酸性樣品）c、加入水（

32、或多官能團(tuán)化合物）d、試用另方法 3、 二級(jí)保留效應(yīng)，離子對(duì) 3、加入三乙胺（或堿性樣品） H、酸性或堿性化合物的峰拖尾 原因 解決方法 1、 緩沖不合適 1、a、使用濃度50-100mM的緩沖液 b、使用Pka等于流動(dòng)相PH值的緩沖液 I、額外的峰 原因 解決方法 1、 樣品中有其他組份 1、正常 2、 前一次進(jìn)樣的洗脫峰 2、a、增加運(yùn)行時(shí)間或梯度斜率b、提高流速 3、 空位或鬼峰 3、a、檢查流動(dòng)相是否純凈b、使用流動(dòng)相作為樣品溶劑c、減少進(jìn)樣體積J、保留時(shí)間波動(dòng) 原因 解決方法 1、 溫控不當(dāng) 1、調(diào)好柱溫 2、 流動(dòng)相組分變化 2、防止變化（蒸發(fā)、反應(yīng)等） 3、色譜柱沒有平衡 3、在

33、每一次運(yùn)行之前給予足夠的時(shí)間平衡色譜柱K、保留時(shí)間不斷變化 原因 解決方法 1、 流速變化 1、重新設(shè)定流速 2、 泵中有氣泡 2、從泵中除去氣泡 3、 流動(dòng)相選擇不恰當(dāng) 3、a、更換合適的流動(dòng)相b、選擇合適的混合流動(dòng)相L、基線漂移 1、 柱溫波動(dòng)。（即使是很小的溫度變化都會(huì)引起基線的波動(dòng)。通常影響示差檢測(cè)器、電導(dǎo)檢測(cè)器、較低靈敏度的紫外檢測(cè)器或其它光電類檢測(cè)器。） 解決方法：控制好柱子和流動(dòng)相的溫度，在檢測(cè)器之前使用熱交換器圖 2、 流動(dòng)相不均勻。（流動(dòng)相條件變化引起的基線漂移大于溫度導(dǎo)致的漂移。） 解決方法：使用HPLC級(jí)的溶劑，高純度的鹽和添加劑。流動(dòng)相在使用前進(jìn)行脫氣，使用中使用氦氣。

34、 3、 流通池被污染或有氣體 解決方法：用甲醇或其他強(qiáng)極性溶劑沖洗流通池。如有需要，可以用1N的硝酸。（不要用鹽酸） 4、 檢測(cè)器出口阻塞。（高壓造成流通池窗口破裂，產(chǎn)生噪音基線） 解決方法：取出阻塞物或換管子。參考檢測(cè)器手冊(cè)更換流通池窗。 5、 流動(dòng)相配比不當(dāng)或流速變化 解決方法：更改配比或流速。為避免問題可定期檢查流動(dòng)相組成及流速。 6、 柱平衡慢，特別是流動(dòng)相發(fā)生變化時(shí) 解決方法：用中等強(qiáng)度的溶劑進(jìn)行沖洗，更改流動(dòng)相時(shí)，在分析前用10-20倍體積的新流動(dòng)相對(duì)柱子進(jìn)行沖洗。 7、 流動(dòng)相污染、變質(zhì)或由低品質(zhì)溶劑配成 解決方法：檢查流動(dòng)相的組成。使用高品質(zhì)的化學(xué)試劑及HPLC級(jí)的溶劑 8、

35、樣品中有強(qiáng)保留的物質(zhì)（高K值）以饅頭峰樣被洗脫出，從而表現(xiàn)出一個(gè)逐步升高的基線。 解決方法：使用保護(hù)柱，如有必要，在進(jìn)樣之間或在分析過程中，定期用強(qiáng)溶劑沖洗柱子。9、 使用循環(huán)溶劑，但檢測(cè)器未調(diào)整。 解決方法：重新設(shè)定基線。當(dāng)檢測(cè)器動(dòng)力學(xué)范圍發(fā)生變化時(shí)，使用新的流動(dòng)相。 10、 檢測(cè)器沒有設(shè)定在最大吸收波長(zhǎng)處。 解決方法：將波長(zhǎng)調(diào)整至最大吸收波長(zhǎng)處 M、基線噪音（規(guī)則的） 1、 在流動(dòng)相、檢測(cè)器或泵中有空氣 解決方法：流動(dòng)相脫氣。沖洗系統(tǒng)以除去檢測(cè)器或泵中的空氣。 2、 漏液 解決方法：檢查管路接頭是否松動(dòng)，泵是否漏液，是否有鹽析出和不正常的噪音。如有必要，更換泵密封。 3、 流動(dòng)相混合不完全 解決方法：用手搖動(dòng)使混合均勻或使用低粘度的溶劑 4、 溫度影響（柱溫過高，檢測(cè)器未加熱） 解決方法：減少差異或加上熱交換器 5、 在同一條線上有其他電子設(shè)備 解決方法：斷開LC、檢測(cè)器和記錄儀，檢查干擾是否來自于外部，加以更正。6、 泵振動(dòng) 解決方法：在系統(tǒng)中加入脈沖阻尼器 N、基線噪音（不規(guī)則的） 1、 漏液 解決方法：檢查接頭是否松動(dòng)，泵是否漏液，是否有鹽析出和不正常的噪音。如有必要，更換密封。檢查流通池是否漏液。 2、 流動(dòng)相污染、變質(zhì)或由低質(zhì)溶劑配成 解決方法：檢查流動(dòng)相的組成。 3、 流動(dòng)相各溶