微生物檢驗(yàn)與控制

1、 藥品微生物檢驗(yàn)與控制 培訓(xùn)主題：1、新修訂的“微生物限度檢查法”介紹2、藥品微生物實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理和質(zhì)量保證3、藥品微生物檢驗(yàn)操作技術(shù)4、潔凈環(huán)境微生物監(jiān)測234中國藥典修訂版整體特點(diǎn)：n微生物檢驗(yàn)方法與國外藥典接近n符合微生物生長特性（利于微生物的檢出、利于微生物的檢出、更易生長更易生長）n標(biāo)準(zhǔn)與國際藥典USP/EP/JP相近無菌控制無菌控制也適用于非無菌產(chǎn)品（無菌觀念：無菌觀念：不要人為引入微生物不要人為引入微生物）控制貫穿于一個藥物或生物制劑從研發(fā)到市場從研發(fā)到市場到成品控制的整個過程整個過程中的各種微生物控制的整合整合將提高最終產(chǎn)品微生物質(zhì)量的保證微生物學(xué)是開發(fā)、生產(chǎn)及成品測試的一部分

2、非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查： 微生物計(jì)數(shù)法主要特點(diǎn)n需氧菌概念？n回收率測試方法與合格限度培養(yǎng)基適用性檢查：n培養(yǎng)基： 胰酪大豆胨瓊脂/胰酪大豆胨肉湯？ TSA / TSB 沙氏葡萄糖瓊脂/沙氏葡萄糖肉湯 SDA 需氧菌總數(shù)計(jì)數(shù)：n培養(yǎng)基：胰酪大豆胨瓊脂 TSA n試驗(yàn)菌株：金黃色普通球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌、白色念珠菌、黑曲霉菌（？）n接種量：不大于100 cfu（以前是多少？以前是多少？）n培養(yǎng)條件：溫度：30-35 時間：不超過3天；不超過5天霉菌和菌總數(shù)計(jì)數(shù)：n培養(yǎng)基：沙氏葡萄糖瓊脂 SDA n試驗(yàn)菌株：白色念珠菌、黑曲霉菌n接種量：不大于100 cfun培養(yǎng)條件：溫度：20-2

3、5（？） 時間：不超過5天培養(yǎng)基適用性檢查：n范圍： - 成品培養(yǎng)基（新引入概念）（？） - 由脫水培養(yǎng)基制成的培養(yǎng)基 - 按處方配制的培養(yǎng)基培養(yǎng)基適用性檢查合格標(biāo)準(zhǔn)：1、回收率比值：0.5-2 范圍內(nèi)（以前是多少？以前是多少？）；2、菌落：形態(tài)大小與對照培養(yǎng)基一致；（平板上長平板上長五花八門的菌落怎么辦？五花八門的菌落怎么辦？）3、液體培養(yǎng)基：被檢液體培養(yǎng)基與對照培養(yǎng) 基比較，生長良好?；厥章剩簄USP34-61： For solid media, growth obtained must not differ by a factor greater than 2 from the calc

4、ulated value for a standardized inoculum。 對于固體培養(yǎng)基，獲得的生長結(jié)果不得超過由標(biāo)準(zhǔn)接種而來的計(jì)算值的兩倍范圍兩倍范圍。 對照組計(jì)數(shù)對照組計(jì)數(shù) 測試組計(jì)數(shù)測試組計(jì)數(shù) 2 X 對照組計(jì)數(shù)對照組計(jì)數(shù) 2計(jì)數(shù)方法適用性試驗(yàn)：n實(shí)質(zhì)：微生物計(jì)數(shù)方法驗(yàn)證。微生物計(jì)數(shù)方法驗(yàn)證。n幾個數(shù)字要求： - 接種菌懸液的體積不大于供試液的1% - 菌懸液含菌量不大于100cfu - 抗菌或抑菌活性的標(biāo)準(zhǔn)：回收率低于50%（？）（涂布法：涂布時候0.1ml里應(yīng)含有100cfu菌懸液，所以可用上一級的稀釋液）微生物測試方法n平皿法 1、傾注法； 2、涂布法（新增）、涂布法（新

5、增）n薄膜過濾法nMPN法（一般用在食品行業(yè)）涂布法：n新引入的方法n關(guān)鍵點(diǎn)：涂布供試液不少于0.1mL.微生物限度標(biāo)準(zhǔn)解釋：n101 可以接受的最大菌數(shù)為20；n102 可以接受的最大菌數(shù)為200；n103 可以接受的最大菌數(shù)為2000；非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查： 控制菌檢查法培養(yǎng)基適用性檢查n培養(yǎng)基促生長能力檢查 分離培養(yǎng)基在規(guī)定的最短時間內(nèi)促生長能力考察。分離培養(yǎng)基在規(guī)定的最短時間內(nèi)促生長能力考察。 n培養(yǎng)基抑菌能力檢查 分離培養(yǎng)基在規(guī)定的最長時間內(nèi)的抑菌能力考察。分離培養(yǎng)基在規(guī)定的最長時間內(nèi)的抑菌能力考察。檢驗(yàn)方法適用性試驗(yàn)：n實(shí)質(zhì)：控制菌檢驗(yàn)方法驗(yàn)證?？刂凭鷻z驗(yàn)方法驗(yàn)證。 n適用性試

6、驗(yàn)： 規(guī)定最短時間培養(yǎng)，試驗(yàn)菌檢出能力試驗(yàn)。規(guī)定最短時間培養(yǎng)，試驗(yàn)菌檢出能力試驗(yàn)。供試品檢查：n規(guī)定最長時間下的控制菌試驗(yàn)。微生物控制菌檢驗(yàn)結(jié)果解釋：-陽性。產(chǎn)品報(bào)廢。產(chǎn)品報(bào)廢。-陰性，（1）未檢出； （2）非控制菌。怎么辦？怎么辦？微生物實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)技術(shù)作為重要組成的微生物控制：原料和組分的微生物控制（源頭）環(huán)境的微生物控制（動態(tài)時取樣點(diǎn)如何確定？）生產(chǎn)過程的微生物控制（比A級區(qū)更好的區(qū)域是什么？）成品的微生物控制所有微生物控制的整合人員的微生物控制微生物實(shí)驗(yàn)室重要的控制點(diǎn)：-無菌技術(shù)（人員是關(guān)鍵）-培養(yǎng)基控制-菌種控制-設(shè)備控制-實(shí)驗(yàn)室布局和運(yùn)作-數(shù)據(jù)文件控制-員工培訓(xùn)無菌技術(shù)：防止和保持無

7、菌物品及無菌區(qū)域不被污染的操作方法和管理方法。 -無菌環(huán)境 -滅菌 -消毒 -衛(wèi)生要求 -無菌操作技術(shù)培養(yǎng)基微生物實(shí)驗(yàn)室工作質(zhì)量的核心是培養(yǎng)基，應(yīng)根據(jù)既定的目的選用正確的培養(yǎng)基。生產(chǎn)商應(yīng)提供相關(guān)的COA和說明書: -配制 -儲存 -菌種選用水: -純化水，去離子水，蒸餾水 -記錄用量成分的測量: -校準(zhǔn)過的天平，天平的量程應(yīng)準(zhǔn)確 -清潔的容器和工具 -記錄稱量培養(yǎng)基不要過度加熱-加熱幫助溶解，通常培養(yǎng)基變深說明過度加熱-添加劑加入后需充分混合清潔的玻璃器皿 -防止外來污染和抑菌劑 -玻璃器皿清潔培養(yǎng)基滅菌條件 -供應(yīng)商提供參數(shù)，或自己驗(yàn)證 -高壓蒸汽滅菌，過濾除菌 -驗(yàn)證應(yīng)考慮無菌和培養(yǎng)基生長

8、能力 - 濕 熱 滅 菌 要 考 慮 裝 載 分 布 ， 通 常 1 2 1 1 2 1 15min15min（我們應(yīng)該怎么做？）（我們應(yīng)該怎么做？）培養(yǎng)基滅菌條件 -在無菌和過度加熱之間平衡在無菌和過度加熱之間平衡 -消毒鍋滅菌結(jié)束后，不建議在其中存儲培養(yǎng)基 -不正確的加熱、滅菌條件會影響培養(yǎng)基的 顏色 澄清度 pH 凝固能力 促生長能力 選擇性 制備培養(yǎng)基的儲存: -低于0，凝膠結(jié)構(gòu)破壞 -避光 避熱 -瓊脂培養(yǎng)基密封 融化 -重復(fù)融化應(yīng)被限制（不超過一次）， 防止過度加熱或潛在污染 -融化時，使用 水浴或流通蒸汽 微波爐，熱板要防止過度加熱 -融化的培養(yǎng)基儲存 在4045水浴不應(yīng)超過8小

9、時 澆制平皿前擦干 培養(yǎng)基應(yīng)標(biāo)示: -制備批號 -制備日期，有效期 -培養(yǎng)基名稱有效期確定 -根據(jù)成分，配方，容器，儲存條件等確定 -生長能力試驗(yàn)數(shù)據(jù)支持培養(yǎng)基儲存:培養(yǎng)基應(yīng)根據(jù)生產(chǎn)商的說明書，并在驗(yàn)證過的條件下儲存培養(yǎng)基儲存不得超過有效期重要區(qū)域環(huán)控用培養(yǎng)基必須 -雙層包裝 -最終滅菌（？）最終滅菌（？），否則進(jìn)行全數(shù)預(yù)培養(yǎng)及用前檢查成品TSA平板可直接放常溫？培養(yǎng)基質(zhì)量控制：所有待用的培養(yǎng)基應(yīng)檢查：-生長能力 每批制備的培養(yǎng)基均需進(jìn)行 測試菌種根據(jù)藥典，供應(yīng)商說明及環(huán)境中分離得到的菌株 生長能力測試不合格 -調(diào)查 -不得使用該批號-無菌-pH，0.2(瓊脂有什么好的測試方法？瓊脂有什么好的

10、測試方法？)-容器/平皿的完整性-抑制或指示能力定期穩(wěn)定性檢查以確認(rèn)儲存效期微生物菌種保藏：？建立標(biāo)準(zhǔn)程序處理、保存菌種。防止污染和特性變化-必須小心地處理-使用前確認(rèn)菌種的身份，純度-根據(jù)生產(chǎn)商說明書復(fù)蘇菌種，使用接種技術(shù)- -70以下或冷凍干燥保存儲備菌種，可延長保存周期-開啟后不要重新冷凍菌種-追溯傳代次數(shù)，不超過五代五代（？）實(shí)驗(yàn)室設(shè)備維護(hù)-絕大部分實(shí)驗(yàn)室設(shè)備需要進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)的驗(yàn)證（IQ、OQ、PQ）-定期校準(zhǔn)、保養(yǎng)-定期進(jìn)行性能檢查-根據(jù)設(shè)備的特性和使用狀況確定頻率-定期清潔、消毒實(shí)驗(yàn)室布局和運(yùn)作：目的：實(shí)驗(yàn)室布局應(yīng)該有利于實(shí)驗(yàn)室運(yùn)作。 -防止交叉污染 -活動分區(qū) -注意安全實(shí)驗(yàn)室應(yīng)通過

11、不同的進(jìn)入通路和隔斷來區(qū)分“潔凈”區(qū)和“陽性”區(qū)，包括更衣，清潔，消毒。潔凈區(qū)的生物安全柜僅用于無菌和潔凈的操作。樣品發(fā)現(xiàn)微生物生長，后續(xù)的工作應(yīng)轉(zhuǎn)移至“陽性”區(qū)樣品處理：-大部分樣品，水或環(huán)控樣品中的微生物對操作、儲存 環(huán)境敏感。-減少樣品，取樣與測試間的間隔時間，并控制儲存條 件。-遠(yuǎn)距離的轉(zhuǎn)移需確認(rèn)轉(zhuǎn)移條件對測試及樣品的影響。-可能的話，在無菌條件下，使用無菌技術(shù)取樣，即使 是非無菌樣品。-取樣記錄 樣品信息、取樣日期、送樣日期、人員/部門，實(shí)驗(yàn) 室樣品，接受及確認(rèn) 人員培訓(xùn)：制藥企業(yè)微生物實(shí)驗(yàn)室人員-應(yīng)該接受過微生物學(xué)或相關(guān)健康科學(xué)的正規(guī)學(xué)習(xí)（在校學(xué)習(xí)）-相關(guān)SOP的培訓(xùn)-被賦予保持其

12、技術(shù)和經(jīng)驗(yàn)的職責(zé)程序SOP應(yīng)易于理解并作為培訓(xùn)計(jì)劃的基礎(chǔ)SOP的編號或標(biāo)題提供了一個便利的將培訓(xùn)文件化方法每個崗位應(yīng)有相應(yīng)培訓(xùn)要求，進(jìn)行上崗前資質(zhì)確認(rèn)文件：實(shí)驗(yàn)室文件至少包括（不僅限于此）：-微生物人員培訓(xùn)和能力確認(rèn)（上崗資質(zhì)）-設(shè)備驗(yàn)證、校準(zhǔn)和維護(hù)-測試中的設(shè)備性能（如溫度記錄）-培養(yǎng)基制備、無菌檢查、生長能力測試、選擇性能力-培養(yǎng)基清單與控制-根據(jù)程序進(jìn)行測試的重要參數(shù)-數(shù)據(jù)和計(jì)算的確認(rèn)-經(jīng)QA人員或相應(yīng)領(lǐng)導(dǎo)審核過的報(bào)告-超標(biāo)調(diào)查結(jié)果實(shí)驗(yàn)室結(jié)果：記錄重要的測試步驟及參數(shù)，用以確認(rèn)結(jié)果的完整性，并為能重復(fù)測試提供信息至少應(yīng)包括（不僅限于此）：-日期-測試樣品-微生物檢驗(yàn)人員名字-程序編號-測

13、試結(jié)果-偏差（如有）-測試參數(shù)(設(shè)備，菌種，培養(yǎng)基)-管理人員審核簽名實(shí)驗(yàn)室維護(hù)：設(shè)備-重要設(shè)備記錄在測試記錄上-校準(zhǔn)計(jì)劃-適用的話，有使用記錄-重要的溫度記錄（水浴，培養(yǎng)箱，滅菌鍋）應(yīng)該具溯源性數(shù)據(jù)糾錯-錯誤的地方劃一橫線，簽名和日期空白紙應(yīng)如何劃掉？空白紙應(yīng)如何劃掉？潔凈環(huán)境微生物測試與評估1、清潔和消毒執(zhí)行清潔和消毒程序是整個工廠管理的重要組成。要用環(huán)境監(jiān)測數(shù)據(jù)來評價這些程序的有效性n影響消毒消毒的因素：消毒劑類型，左右時間，待消毒表面n消毒劑效率測試n殘留去除2、取樣位置的選擇：n哪些部位的微生物污染最可能對產(chǎn)品質(zhì)量造成不良影響？n在生產(chǎn)過程中，什么地點(diǎn)最容易長菌？n取樣點(diǎn)的選擇需要統(tǒng)

14、計(jì)學(xué)設(shè)計(jì)或根據(jù)網(wǎng)格法來確定？ 在常規(guī)監(jiān)測中，有一些點(diǎn)需要周轉(zhuǎn)取樣嗎？n哪些地方是清潔、消毒或滅菌時最難覆蓋/接觸或最難湊效的部位？n什么活動會導(dǎo)致污染的擴(kuò)散？n在某一部位的取樣操作，足以導(dǎo)致測試數(shù)據(jù)的差錯或污染產(chǎn)品？取樣只應(yīng)在生產(chǎn)結(jié)尾換班時進(jìn)行嗎？3、取樣頻率n批生產(chǎn)動態(tài)監(jiān)測n日常監(jiān)測n輪轉(zhuǎn)監(jiān)測選擇取樣頻率的關(guān)鍵點(diǎn)是盡可能鑒別出系統(tǒng)潛在的缺陷。塵埃粒子和微生物非生物粒子數(shù)量和活的微生物濃度之間的關(guān)系在科學(xué)上未達(dá)成絕對的一致當(dāng)操作人員是粒子的來源時，以下的結(jié)論是成立的，即潔凈室中的粒子越少，空氣中微生物存在的可能性就越小。潔凈環(huán)境監(jiān)測-大量的藥品除了微生物以外還有粒子限度的 要求-部分懸浮粒子與

15、微生物有關(guān)-潔凈室監(jiān)測計(jì)劃包括微生物與粒子數(shù)兩方面是正常的及恰當(dāng)?shù)沫h(huán)境微生物監(jiān)測方案：1、需氧微生物監(jiān)測2、霉菌/酵母菌監(jiān)測通常厭氧菌不必常規(guī)檢測，但如果無菌環(huán)境中發(fā)現(xiàn)此類微生物，需增加取樣頻率。潔凈環(huán)境監(jiān)測主要方面：微生物監(jiān)測無菌藥品：n沒有任何活體微生物的藥品。（理論定義）n符合現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的藥品。 檢驗(yàn)項(xiàng)目：無菌檢驗(yàn) 限度規(guī)格：檢驗(yàn)結(jié)果陰性 檢驗(yàn)方法：現(xiàn)行藥典的檢驗(yàn)方法 取樣方法：現(xiàn)行藥典規(guī)定的取樣方法 無菌產(chǎn)品 Vs 無菌檢驗(yàn)合格 整批產(chǎn)品無菌整批產(chǎn)品無菌 = 無菌檢驗(yàn)合格的產(chǎn)品無菌檢驗(yàn)合格的產(chǎn)品 無菌檢驗(yàn)合格的產(chǎn)品無菌檢驗(yàn)合格的產(chǎn)品 整批產(chǎn)品無菌整批產(chǎn)品無菌無菌檢驗(yàn)的局限性：n無菌檢

16、驗(yàn)無法對整批產(chǎn)品進(jìn)行100%檢驗(yàn)n用于無菌檢驗(yàn)的培養(yǎng)基存在局限性n無菌檢驗(yàn)環(huán)境只是一個相對無菌的環(huán)境n（如果如果A級長菌了，應(yīng)該怎么辦？級長菌了，應(yīng)該怎么辦？）潔凈區(qū)微生物監(jiān)測的動態(tài)標(biāo)準(zhǔn)潔凈區(qū)微生物監(jiān)測的動態(tài)標(biāo)準(zhǔn)（GMP2010版）版）潔凈度級別浮游菌cfu/m3沉降菌（90mm）cfu /4小時表面微生物接觸（55mm）cfu /碟5指手套cfu /手套A級1111B級10555C級1005025D級20010050潔凈室微生物監(jiān)測的三個方面：第一、浮游菌第二、沉降菌第三、表面微生物環(huán)境監(jiān)測取樣點(diǎn)的設(shè)置（動態(tài)、靜態(tài)？動態(tài)、靜態(tài)？）應(yīng)該考慮但不局限于以下因素：n該點(diǎn)最易受微生物污染，很有可能對

17、產(chǎn)品質(zhì)量造成不良影響n該點(diǎn)在實(shí)際生產(chǎn)中微生物便于微生物繁殖n統(tǒng)計(jì)學(xué)上的要求（不能一個點(diǎn)，太少，要2-3個）n該點(diǎn)不易清潔、消毒n房間的潔凈度級別n可能污染產(chǎn)品的采樣點(diǎn)取樣頻率：n單一取樣方案不適合于所有環(huán)境單一取樣方案不適合于所有環(huán)境。n選擇監(jiān)測頻率的關(guān)鍵是能夠確定潛在的系統(tǒng)缺陷。n每個點(diǎn)的檢驗(yàn)頻率可以少于系統(tǒng)或區(qū)域的檢驗(yàn)頻率。n在多種情況下，批生產(chǎn)時進(jìn)行監(jiān)測可以滿足常規(guī)區(qū)域監(jiān)測的要求。采樣點(diǎn)示例：系統(tǒng)采樣點(diǎn)潔凈空氣近開放口/灌裝頭室內(nèi)空氣靠近工作區(qū)生產(chǎn)用水使用點(diǎn)表面（設(shè)施）地面、門把手、墻面、容器表面表面（設(shè)備）灌裝線、控制面板、膠塞容器壓縮空氣距離壓縮機(jī)最遠(yuǎn)端無菌試驗(yàn)裝置靠近真空源處灌裝線

18、操作人手指取樣層流空氣活動頻繁處MMSCIP滅菌滅菌直接包材直接包材接觸部接觸部0.4520% m/sGrade”A”Grade”B”風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)操作者不能進(jìn)入Grade”A”區(qū)域。關(guān)鍵點(diǎn)關(guān)鍵點(diǎn)無菌生產(chǎn)區(qū)的環(huán)境監(jiān)測：1、考慮以下方面： - 潔凈度級別 - 空調(diào)凈化系統(tǒng)驗(yàn)證中獲得的結(jié)果 - 風(fēng)險(xiǎn)評估2、合理確定取樣點(diǎn)的位置： - 污染風(fēng)險(xiǎn)分析 - 每個位置與工藝的關(guān)系 - 對人流和物流有良好理解 - 強(qiáng)調(diào)產(chǎn)品存在風(fēng)險(xiǎn)的區(qū)域沉降菌監(jiān)測n采樣點(diǎn)的位置 a) 工作區(qū)采樣點(diǎn)位置離地0.8m1.5m左右（略高于工作面）？ b) 可在關(guān)鍵設(shè)備或關(guān)鍵工作活動范圍處增加測點(diǎn)。沉降菌監(jiān)測n最小培養(yǎng)皿數(shù)沉降菌測試時

19、間n沉降平皿的暴露時間少于4小時；n如果同一位置使用多個沉降平皿進(jìn)行監(jiān)測并累計(jì)計(jì)數(shù)，單個沉降平皿的暴露時間可以少于4小時。表面微生物取樣點(diǎn)設(shè)置 取樣點(diǎn) 設(shè)置原則設(shè)備表面是否與產(chǎn)品接觸墻面 距離地面高度約1.2-1.5m處地面房間中央，人員活動較多處潔凈服表面袖口，肘部，胸前等環(huán)境監(jiān)測培養(yǎng)基的選擇微生物總數(shù)n細(xì)菌數(shù)：在細(xì)菌培養(yǎng)基上菌落形成單位的平均數(shù)。n真菌數(shù)：在真菌培養(yǎng)基上菌落形成單位的平均數(shù)。微生物總數(shù) = 細(xì)菌數(shù) + 真菌數(shù)細(xì)菌、真菌培養(yǎng)基：中國藥典歐洲藥典細(xì)菌營養(yǎng)瓊脂3035 3天TSA3035 5天霉菌、酵母菌玫瑰紅鈉瓊脂2328 5天SDA2025 5天酵母菌酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂2

20、328 5天/GB/T 16293-2010 GB/T 16294-2010n采用大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基（TSA）配制的培養(yǎng)皿經(jīng)采樣后，在30 35 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，時間不少于2d；n采用沙氏培養(yǎng)基（SDA）配制的培養(yǎng)皿經(jīng)采樣后，在20 25 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，時間不少于5d。微生物計(jì)數(shù)的困惑 ！n細(xì)菌培養(yǎng)基上生長的真菌如何計(jì)數(shù)？n真菌培養(yǎng)基上生長的細(xì)菌如何計(jì)數(shù)？總好氧微生物數(shù)（TAMC）：定義：在TSA（大豆酪蛋白瓊脂）培養(yǎng)基上 生長的包括真菌的菌落形成單位總的 數(shù)量。培養(yǎng)溫度/時間： 1、細(xì)菌： 3035 5天。 2、細(xì)菌： 3035 2天； 霉菌或酵母菌： 2025 3天。酵母菌和霉菌總數(shù)（TY

21、MC）：定義：在SDA（沙氏葡萄糖瓊脂）培養(yǎng)基上 生長的包括細(xì)菌的菌落形成單位總的 數(shù)量。培養(yǎng)溫度/時間： 2025 5天。計(jì)數(shù)原則：1、TAMC時，如果真菌被發(fā)現(xiàn)生長，應(yīng)該被 作為TAMC計(jì)數(shù)的一部分。2、TYMC時，如果細(xì)菌被發(fā)現(xiàn)生長，應(yīng)該被 作為TYMC計(jì)數(shù)的一部分。 3、當(dāng)TYMC由于細(xì)菌的生長而超過了可接受 標(biāo)準(zhǔn)，應(yīng)當(dāng)使用含有抗生素的SDA培養(yǎng)基。培養(yǎng)條件：CHP2010中國藥典2010年版 二部 附錄附錄XIX XIX Q Q “藥品微生物實(shí)驗(yàn)室規(guī)范指導(dǎo)原則藥品微生物實(shí)驗(yàn)室規(guī)范指導(dǎo)原則” 用于環(huán)境監(jiān)測的培養(yǎng)基須特別防護(hù)，最好要雙層包裝和終端滅菌，如果不能采用終端滅菌的培養(yǎng)基，那么在

22、使用前應(yīng)進(jìn)行100%的預(yù)培養(yǎng)以防止外來的污染物帶到環(huán)境中以避免出現(xiàn)假陽性的結(jié)果。微生物良好實(shí)驗(yàn)室規(guī)范USP MICROBIOLOGICAL EVALUATION OF CLEAN ROOMS AND OTHER CONTROLLED ENVIRONMENTS潔凈室和其他受控環(huán)境的微生物學(xué)評估 media should be examined for sterility and for growth promotion as indicated under Sterility Tests 71 培養(yǎng)基也應(yīng)像無菌檢測中標(biāo)示的那做無菌檢 測和促生長檢驗(yàn)。 假陽性（False positive）n測試

23、結(jié)果實(shí)際應(yīng)該沒有微生物生長，但被 判為發(fā)現(xiàn)生長或陽性。n產(chǎn)生原因： 1、非無菌培養(yǎng)基平板引人污染； 2、非無菌操作帶來污染。 假陰性（False negative）n測試結(jié)果實(shí)際應(yīng)該有微生物生長，但被判 為未見生長或陰性。n產(chǎn)生原因： 1、培養(yǎng)基選擇不正確； 2、培養(yǎng)基促生長試驗(yàn)失??； 3、培養(yǎng)條件不正確。 GB/T 16293-2010 / GB/T 16293-2010附錄B:B.3 培養(yǎng)基平皿培養(yǎng)及保存 制備好的培養(yǎng)基平皿宜在28保存，一般以一周為宜或按廠商提供的標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行。采用適宜的方法在平皿上做好培養(yǎng)基的名稱、制備日期劑量的標(biāo)記。 環(huán)境測試培養(yǎng)基：1、TSA（大豆酪蛋白瓊脂） 用于細(xì)菌取樣。 培養(yǎng)溫度/時間：3035 不少于2天。2、 SDA（大豆酪蛋白瓊脂） 用于霉菌和酵母菌取樣。 培養(yǎng)溫度/時間：2025 不少于5天。環(huán)境測試培養(yǎng)基：3、用戶認(rèn)可并驗(yàn)證了的培養(yǎng)基。 以上摘自：GB/T 16293-2010 GB/T 16294-2010環(huán)境監(jiān)測中常忽視的兩個方面：1、忽視潔凈環(huán)境中的影響因素2、忽視培養(yǎng)基的選擇 消毒劑/殺孢子劑常見的化學(xué)消毒劑：1、酚類2、醛類3、過氧化