答辯 PPT 模板

1、基于 DGGE 方法對(duì)食品加工廠單增李斯特優(yōu)勢共棲菌的分析引言實(shí)驗(yàn)材料與方法實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析結(jié)論第一 針對(duì)課題的要求，了解當(dāng)前李斯特菌以及生物被膜在國內(nèi) 外的研究進(jìn)展及成果第二 挑選材料，利用各種儀器采用DGGE方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)第三 根據(jù)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析生物被膜中單增李斯特菌的優(yōu)勢共棲菌第四 對(duì)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行全面的總結(jié)，并對(duì)以后的工作進(jìn)行展望一、引言一、引言 單核細(xì)胞增生李斯特菌是一種人畜共患的食源性致病菌。李斯特菌的發(fā)病率不高，但是致死率卻高達(dá)20%-30%，目前已經(jīng)被世界衛(wèi)生組織列入四大食源性病原菌之一。近年來，大量的單核增生李斯特菌被發(fā)現(xiàn)于許多的食品加工廠中，許多消毒劑都難以有效清除。生物被膜的形成正是

2、對(duì)消毒劑產(chǎn)生抗性的重要原因之一。單核增生李斯特菌與其共棲菌共同形成生物被膜，有效抵抗消毒劑的殺滅。因此研究單核增生李斯特菌生物被膜共棲菌菌種特征就尤其重要。研究背景一、引言一、引言 正是由于李斯特菌的嚴(yán)重危害性以及生物被膜在菌體對(duì)消毒劑的耐受中發(fā)揮非常重要的作用，現(xiàn)在用消毒劑已經(jīng)越來越難將其有效清除。因此本研究采用DGGE的實(shí)驗(yàn)方法，重點(diǎn)研究單核增生李斯特菌生物被膜中優(yōu)勢共棲菌的菌群信息，旨在通過混合菌生物被膜特征的研究找到有效消滅單核細(xì)胞增生李斯特菌的辦法，并且為在食品加工環(huán)境中控制單核增生李斯特菌生物被膜的形成和污染奠定理論基礎(chǔ)。目的與意義二、實(shí)驗(yàn)材料與方法二、實(shí)驗(yàn)材料與方法 變形梯度電泳

3、儀 基因組 DNA 提取試劑盒 PCR儀二、實(shí)驗(yàn)材料與方法二、實(shí)驗(yàn)材料與方法實(shí)驗(yàn)方法樣品DNA的提取DGGE前的PCR擴(kuò)增和純化DGGE操作條帶回收及純化克隆 克隆子測序三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析用基因組DNA提取試劑盒提取總DNA后，經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳分離鑒定，得到8個(gè)樣品基因組的DNA提取結(jié)果，如下圖所示：提取DNA條帶亮度大，條帶清晰且無雜帶。注：M表示100bp ladder Marker，樣品左為3Q，中為5Q、6Q，右為1-2、1-3、2-3、3-2、3-3三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析宏基因組的16S rDNA的V3區(qū)PCR產(chǎn)物電泳圖以8個(gè)樣本的基因組總DNA為

4、模板，采用帶GC夾子的引物擴(kuò)增，PCR產(chǎn)物用1.5%瓊脂糖凝膠電泳檢測，結(jié)果如右圖所示，條帶清晰，無雜帶，無引物二聚體。三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析由圖可知，8個(gè)不同的地漏樣品呈現(xiàn)出不同菌種的DGGE指紋特征譜帶，每個(gè)樣品有10-16個(gè)條帶，同一個(gè)地區(qū)不同取樣點(diǎn)的DGGE譜圖表現(xiàn)出一定的相似性，菌種差異性較少，微生物群落多樣性相似，優(yōu)勢條帶相似。 8個(gè)地漏樣品的DGGE電泳圖三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析 8個(gè)地漏樣品的PCR-DGGE的亮帶分析（部分）獲得的測序結(jié)果如右圖，測序結(jié)果經(jīng)檢驗(yàn)，最終確定條帶對(duì)應(yīng)的菌株種屬。經(jīng)鑒定，b1、b3、b7三條條帶分別為3Q、5Q和6Q樣品中的優(yōu)勢菌種嗜冷假單胞菌，b12、b17、b20分別為1-2、3-2和3-3樣品的優(yōu)勢菌種嗜水氣單胞菌，條帶b13、b15分別為1-3、2-3樣品的優(yōu)勢菌種克雷伯氏菌和產(chǎn)酸克雷伯氏菌。四、結(jié)論四、結(jié)論本實(shí)驗(yàn)證實(shí)了地漏樣品中與單核增生李斯特菌共棲的優(yōu)勢菌有嗜冷假單胞菌、假單胞菌、克雷伯氏菌、產(chǎn)酸克雷伯氏菌和嗜水氣單胞菌。正是這些共棲菌與LM共同形成的生物被膜給LM提供了一個(gè)避難所,使單增李斯特菌避免了來自消毒劑的清除和滅活。因此,本實(shí)驗(yàn)從食品加工設(shè)備中分離鑒定出以上優(yōu)勢共棲菌,有利于為有效控制