盆栽鹽處理條件下甜高粱種子萌發(fā)及苗期生理觀測實驗方案

1、盆栽鹽脅迫下甜高粱種子萌發(fā)及苗期生理觀測實驗方案實驗一 鹽土盆栽條件下貝利等3種甜高粱的種子萌發(fā)統(tǒng)計 一、實驗目的 1. 了解鹽堿地概念及目前國內(nèi)外土壤鹽漬化現(xiàn)狀及防治措施； 2. 了解實驗條件下土壤鹽度與實際鹽分間的轉換關系及調(diào)控方法； 3. 掌握便攜式土壤多參數(shù)測定儀測定要領，依此確定播種墑情； 4. 觀測土壤鹽分動態(tài)變化，思考如何及時調(diào)整，以維持實驗的鹽分梯度的穩(wěn)定。 二、實驗原理鹽堿地是鹽堿化土壤的總稱，土壤層中含有易檢出的可溶性鹽。受自然及集約灌溉方式等因素的影響，我國鹽堿地多分布于沿海淡水與海水交匯地區(qū)、有地質海洋沉積物析出且較干旱的西北地區(qū)，鹽堿地主要含有由鈉離子、鈣離子、鎂離子

2、以及碳酸根、碳酸氫根、氯離子、硫酸根離子組合而成的12種鹽。土壤或水體中含鹽量的表示方法較多，通常以25下的電導率（EC：dS/m）為主。鹽堿土的鹽分由多種離子組成，研究時常以NaCl含量來簡化表示，EC值與可溶性鹽（復合鹽或NaCl）含量之間的換算為：1dS/m=0.64g/L（11mmol/L、0.064%），土壤鹽度與其飽和浸提液EC值之間的關系為：當EC4dS/m（0.252%），土壤為鹽土；EC值介于48dS/m（0.2%0.5%），為輕度鹽漬化；EC值介于915dS/m（0.5%0.975%），為中度鹽漬化；EC>15dS/m（0.975%），土壤為重度鹽漬化。不同地區(qū)及不同

3、時期，土壤鹽漬化標準有所變動，然大致與之相當。目前國內(nèi)大部分鹽土鹽度在0.4%0.7%1。世界范圍內(nèi)，受過度耕作及不合理灌溉等自然及人為因素等的影響，6%土壤含鹽堿，且在主要由人口帶來的糧食增產(chǎn)需求增加的作用下，預計到本世紀中葉，一半的耕地將鹽漬化2 ，我國鹽堿地約1億公頃3，寧夏遙感院、農(nóng)發(fā)辦等的調(diào)查指出，寧夏引黃灌區(qū)鹽堿地達14.79萬公頃，占該區(qū)耕地面積的33.54%，鹽堿荒地面積為5.57萬公頃4。土壤表層鹽分富集，既與海水運動、鹽分沉積等自然作用有關，更多的還是由人為因素導致的?？v觀歷史，隨著人口增加、社會的繁榮，土壤鹽漬化就愈演愈烈。且其發(fā)展勢頭，只能適度減緩，而不能從根本上逆轉，

4、故形勢較為嚴峻，改良往往也收效甚微。較好的辦法，只能減少人為干預，且提供必要條件使之逐漸恢復，卻較難回到最初的狀態(tài)，且人們還需要經(jīng)受住生存需求的考驗。然而，在漫長進化之路上，一些植在遭受鹽堿脅迫的同時，逐漸提高了對環(huán)境的適應能力，能獲得生存的機會。從中，能給我們提供一些啟示：從中選擇合適的物種，加以種植，切斷鹽漬化與荒漠化之間的聯(lián)系，結合輔助措施，逐步實現(xiàn)改良當?shù)厣鷳B(tài)的目的；了解其適應策略，將之與傳統(tǒng)作物種植結合，在生產(chǎn)過程中，逐步改變原有粗放方式，在實現(xiàn)增產(chǎn)的同時，達到節(jié)約資源、保護耕地等目的。POGO土壤多參數(shù)測定儀由三部分組成：能感應土壤溫度、水分、電導率等的Hydra精密探頭、供電器及

5、裝有儀器控制軟件的PAD，測定時在三者相連且各部分狀態(tài)正常的情況下，通過PAD上的HydraMon軟件控制沒入土壤中的探頭，就能實現(xiàn)對樣地土壤溫度、水分、電導率等指標的快速測量與記錄(Hydra Probe Manual 92915 July 2007)。在自然條件下，土壤鹽分組成一般較為復雜，在實驗條件下，常以添加同等比重的單鹽來模擬自然鹽分的影響，通常有兩種表示方法：鹽分濃度（）、鹽分比重（%），前者用在水培條件下，后者用在盆栽或大田環(huán)境下。本實驗，考慮到甜高粱的生長離不開土壤，故以往土里按比例添加氯化鈉的方式進行鹽分條件模擬。如土壤重量5，往里面加30，混合均勻，則該土壤鹽分為0.6%，

6、近似于水培條件下100的鹽濃度，此時已達到中度鹽脅迫水平。甜高粱出苗率既受種子前處理程度、播種量等自身因素的影響，還取決于播種深度、土壤含水量、土壤溫度及鹽分含量等多種外在因素的作用，總的來說，土壤墑情，對出苗率的影響較大。在田間條件下，一般在土壤溫濕度為20左右的初夏進行甜高粱播種，播種深度以35cm為宜5，播種量及種植密度則取決于所選品種、土壤條件及種植目的。本實驗由于是在初春之際于溫室中進行，條件應有一些變動：播種深度為2cm，7號盆播25粒，8號盆播30粒。 三、材料、儀器與試劑 （1）材料：貝利、考力、遼甜1號甜高粱種子，農(nóng)家菜地土壤； （2）儀器：POGO土壤多參數(shù)測定儀（RS48

7、5）、恒溫培養(yǎng)振蕩器（ZWY-100H）； （3）試劑：無水乙醇（AR）、氯化鈉（AR） 四、實驗步驟1. 鹽土配制 （1）鹽分梯度設置：、； （2） 土壤鹽分添加：準備7號塑料花盆（20cm×18cm）30個、8號塑料花盆（24cm×18cm）15個，先往兩種規(guī)格花盆里各加2、5菜地土壤，接著將它們按5盆一行，排成9行，前3行放大盆、后6行放小盆，每3行設置一個能區(qū)分的間距，并將每列對齊。之后按鹽分梯度設置依次往每行的盆里添加已稱量好的鹽分，并混合均勻。加完后，澆適量水（小盆200mL、大盆400mL），利用POGO測定儀測試并記錄各盆中電導率數(shù)值，換算成鹽分含量后，與理

8、論值比較，若出現(xiàn)較大差異，思考其中的原因。2. 種子處理與播種 （1）種子處理：選取籽粒飽滿的貝利、考力、遼甜1號種子各600粒，放到3個250mL潔凈錐形瓶中，各加50mL75%乙醇溶液，浸泡15min，之后倒掉溶液，用純水清洗3次，各加50mL純水，覆膜，置于恒溫培養(yǎng)振蕩器中，設定溫度為40、轉速為120r/min，搖約10h，待露白即可。 （2）播種：準備潔凈濾紙，將3個品種露白的種子分別倒到濾紙上，按三點法進行播種，大盆播遼甜1號，一盆30粒，小盆分別播貝利、考力，每盆25粒。播種前澆透水，讓土面平整，將種子均勻放在表面，再覆土2cm。之后，覆膜保溫，促其萌發(fā)。待一周后，觀察并統(tǒng)計貝利

9、、考力、遼甜1號形態(tài)指標，為期一周。表1 鹽分梯度及品種分布情況列表品種種處理遼甜1號（土量5kg）（0g）（10g）（20g）（30g）（40g）（0g）（10g）（20g）（30g）（40g）（0g）（10g）（20g）（30g）（40g）貝利（土量2kg）（0g）（4g）（8g）（12g）（16g）（0g）（4g）（8g）（12g）（16g）（0g）（4g）（8g）（12g）（16g）考力（同上）（0g）（4g）（8g）（12g）（16g）（0g）（4g）（8g）（12g）（16g）（0g）（4g）（8g）（12g）（16g）3. 形態(tài)指標觀測6 （1）觀測指標：發(fā)芽勢、發(fā)芽率、芽苗長、

10、根長、發(fā)芽相對鹽害率 （2）測算方法：發(fā)芽率=發(fā)芽勢=發(fā)芽指數(shù)=活力指數(shù)=相對芽長=相對根長=鹽害程度=公式中，是指播種后第天的出苗數(shù)，則是對應的天數(shù)，是幼苗鮮重。 五、實驗結果1、 土壤鹽分監(jiān)測表2 土壤鹽分實際測定值品種種處理遼甜1號貝利考力 2、土壤鹽分對3種甜高粱形態(tài)指標的影響表2 3種甜高粱在不同土壤鹽分脅迫下形態(tài)指標的觀測含鹽量（%）GR（%）GEVISL（cm）RL（cm）SFW（g）RFW（g）0%0.2%0.4%0.6%0.8%表中發(fā)芽率；發(fā)芽勢；種子活力指數(shù)；芽長；根長；芽鮮重；根鮮重；下同。表3 甜高粱在不同鹽分土壤中所受脅迫程度比較參考指標含鹽量（%）均值標準差變異系數(shù)

11、（%）發(fā)芽率0.2%0.4%0.6%0.8%發(fā)芽勢0.2%0.4%0.6%0.8%根鮮重0.2%0.4%0.6%0.8% 六、注意事項1. 種子前處理時應選好種、消毒時間要嚴格控制在15min，置于搖床上培養(yǎng)時，水不能加太多，沒過種子表面1cm即可，所設溫度溫度不能太高、轉速適宜即可。2. 播種前，為保證一定的土壤含水量，應澆一定的水，且注意少量多次，花盆容土量一定，保水有限，土壤鹽分會隨著多余的水分而流出。3. 在使用POGO土壤多參數(shù)測定儀時，應提前給供電器和PAD充電，連接接頭時，注意接口，探頭應輕拿輕放，用完之后，請將泥土清理干凈。4. 播種過程中，先將土面攤平，再均勻播種，按三點法播

12、種，單點播種數(shù)量510粒為宜。4楊琪.中科院合肥研究所給鹽堿地披“綠衣”N.中國科學報,2014,07.5盧慶善.甜高粱M.北京:中國農(nóng)業(yè)科學技術出版社,2008.4:150-163.實驗二 鹽脅迫下甜高粱幼苗光合作用測定 一、實驗目的 1. 通過實驗，掌握植物體葉片光合作用測定原理及方法； 2. 經(jīng)過對觀測值的整理、分析，得出鹽脅迫對光合作用影響及其差異； 二、實驗原理作為地球上一重要的生命現(xiàn)象，光合作用一直備受關注，相關研究已不斷深入，測量方法也得到革新，已從關注干物質積累的稱重法，過渡到觀測氣體變化的滴定法、氧氣電極法，繼而發(fā)展到利用紅外線二氧化碳氣體分析儀（）等工具組合來實現(xiàn)光合作用的

13、實時、自動化、智能化測定。二氧化碳作為光合作用中被植物加以利用的原料，分析其含量變化，就能實現(xiàn)對光合強度的測量，然而光合作用通常是一個緩慢且微觀的過程，二氧化碳濃度變化較難實時測量，的出現(xiàn)使之成為了可能。能吸收途經(jīng)的紅外線，紅外線因此而引起輻射能減小，變化關系服從朗博-比爾定律，即因受二氧化碳吸收而引起的紅外線輻射能降低量與二氧化碳吸收系數(shù)（K）、濃度（C）、氣體層厚度（L）有關，表達式為1：紅外光源發(fā)射出1-20的紅外光，通過一定長度的氣室吸收后，經(jīng)過一個4.26波長的窄帶濾光片后，由紅外傳感器監(jiān)測透過4.26波長紅外光的強度，以此計算二氧化碳氣體的濃度。在實現(xiàn)對二氧化碳濃度的微量實時監(jiān)測之

14、后，輔以水分、溫度傳感器、人工紅藍光源等，再加載計算用的軟件，即可構建出現(xiàn)代意義上的光合測定系統(tǒng)。本次實驗所用的測定系統(tǒng)，便由此發(fā)展而來。Li-6400光合測定系統(tǒng)，由美國生物科技公司開發(fā)，屬于該公司第三代產(chǎn)品，也是目前較好的測定系統(tǒng)。它使用兩套紅外分析器，一個作為對照，稱之為參比室，一個測量樣品，稱之為樣品室，同時測量兩個室的CO2濃度差，即差分法2。此外還沿用開路式、測量中的匹配模式、環(huán)境控制等以提高結果的可靠程度，并借助第56代系統(tǒng)軟件，實現(xiàn)數(shù)據(jù)的實時顯示與自動控制。圖1 開路式示意圖圖2 匹配模式示圖3 測量模式圖4控制二氧化碳濃度下測量意圖 三、材料、儀器與試劑 （1）材料：貝利、考

15、力、遼甜1號甜高粱幼苗葉片； （2）儀器：LI-6400光合測定系統(tǒng)； （3）試劑：干燥劑； 四、實驗步驟 1.系統(tǒng)預熱 （1）儀器連接：將系統(tǒng)從保護箱中取出，裝好支架，取出分析器和連接線，先將連接線的一頭和主系統(tǒng)相應插口相連，連接時先找準位置，注意均勻用力，也不用將螺絲擰太緊，能固定即可，在將另一頭和分析器相連，PEAK管中黑色的與樣品室接口相連，白色的與參比室接口相連，注意區(qū)分；另外圓形接口端與分析器相連時，應紅點相對，直插直拔，不用太大勁，連接好了之后，給主機裝電池，打開電池盒上方電源開關，儀器在正常情況下，即開始啟動； （2）日常檢查：1)檢查溫度 檢查h行三個溫度值Tblock, T

16、air和 Tleaf，是否合理，且彼此相差應該在1以內(nèi)； 葉溫熱電偶的位置是否正確，直接測量葉片溫度時，葉溫熱電偶的結點位置應高于葉室墊圈約1mm，保證夾葉片時能與葉片充分接觸；如果使用能量平衡方法測量葉片溫度，則葉溫熱電偶的結點位置應低于葉室墊圈1mm，確保夾葉片時，接觸不到葉片。 2)檢查光源和光量子傳感器 檢查光源是否工作，且工作正常（有光源時，無光源該檢查忽略）； 檢查g行 ParIn_m 和ParOut_m傳感器是否有響應。 3)檢查大氣壓傳感器 檢查g行Prss_kPa值是否合理。一般在海平面大氣壓值約100kPa ，海拔300米大氣壓約為 97 kPa ，海拔1500米約83 k

17、Pa 且隨天氣變化，大氣壓可能會有1到2 kPa的變化。 4)檢查葉室混合扇 在測量菜單中，按2，f1，按O關閉，或按F打開葉室混合扇，將分析器頭部放到耳朵旁邊，聽分析器頭部聲音是否隨著風扇關閉、打開有變化，如果有變化，表示正常。 5)檢查是否存在氣路堵塞 在測量菜單中，按2，f2，設定流速為1000，將化學管旋鈕擰到完全bypass，檢查b行flow能否達到650以上，如果都能達到，則說明氣路沒有堵塞；如果發(fā)現(xiàn)有達不到的現(xiàn)象，則分別檢查兩個化學藥品管，方法都是將調(diào)解旋鈕從bypass一側完全旋到scrub一側，檢查流速下降是否大于20，如果大于20，,同時在擰化學藥品管時，伴隨有較大噪聲，則

18、相應藥品管存在氣路堵塞。 常見堵塞地方是：化學管內(nèi)過濾嘴；化學管頂部的兩個聚乙烯透明管。6)葉室的漏氣檢查 要檢查是否漏氣，需要化學管調(diào)到完全吸收位置，然后在葉室周圍吹氣，如果發(fā)現(xiàn)a行樣品室CO2的讀數(shù)變化大于2ppm，說明葉室可能有漏氣。 常發(fā)生漏氣的地方：上下葉室泡沫墊圈；上下葉室的O形密封圈；排氣管；葉室后部三孔泡沫墊。 7)檢查流速零點 關閉泵(測量菜單，按2，f2，按N)，然后關閉葉室混合扇（按2，f1，按O）； 檢查b行Flow是否在±2ppm之間，如果在，表示正常；如果不在此范圍，需進入校準菜單，進行Flow meter zero。 注意：完成后，切記要將流速再調(diào)節(jié)回5

19、00，將混合風扇設置在Fast狀態(tài)。8)檢查CO2和H2O IRGAs零點 將兩個化學管都旋至完全吸收位置，完全閉合葉室且保證是空的； 等待大約5分鐘，參比室和樣品室CO2和H2O會降到零附近。如果CO2讀數(shù)在±5ppm以內(nèi)；H2O在±0.5毫摩爾每摩爾以內(nèi)，說明零點正常，不需要校準。如果它們超過這個范圍，且還有下降的趨勢，我們建議您再等大約10min，此時可以檢查干擾零點的其它原因，如化學藥品失效、AGC電壓值異常、樣品室太臟或葉室漏氣等。排除以上原因后，如果數(shù)據(jù)穩(wěn)定后還不能達到要求，需進入校準菜單，進行IRGAs zero。 9)校準葉溫熱電偶的零點 拔開紫色插頭， 檢

20、查h行Tblock和Tleaf溫度差值是否在0.1以內(nèi)，如果大于0.1，則需要調(diào)節(jié)電位調(diào)節(jié)器進行校準，使得Tleaf和Tblock之間相等或相差0.1以內(nèi)。用一字型螺絲刀對分析器底部電位調(diào)節(jié)器進行溫度校準，順時針旋轉Tleaf升高，反之降低，直到Tleaf基本等于Tblock。完成后將紫色插頭重新插好。 10)檢查匹配閥 檢查匹配閥是否工作；（注意匹配前將兩個化學藥品管擰到完全bypass） 應該在每天開始測量前，進行一次匹配。建議每測量一葉片都先匹配一下，待數(shù)據(jù)穩(wěn)定后再記錄，如果做實驗時，每次測量都要改變CO2濃度，那么每改變一次CO2濃度，也需要進行一次匹配。2. 給定光強下光合速率測定

21、（1）裝好化學藥品，連接硬件（如果使用CF卡，則插入主機后面固定小槽內(nèi)）。 （2）開機，配置界面選擇Factory default，連接狀態(tài)按“Y”，進入主菜單，預熱約20分鐘。 （3）進行日常檢查。 （4）打開葉室，夾好測量的植物葉片。 （5）按1, f1（Open LogFile）, 選擇將數(shù)據(jù)存入的位置（主機 or CF卡），建立一個文件，enter，輸入一個remark，enter。 （6）等待a行參數(shù)穩(wěn)定，b行CO2值波動< 0.2 mol mol-1，Photo參數(shù)穩(wěn)定在小數(shù)點之后一位； c行參數(shù)在正常范圍內(nèi)（ Cond> 0、Ci > 0、Tr > 0）。

22、 （7）按f1(Log)記錄數(shù)據(jù)。每測定一片葉進行一次Match。 （8）更換另一葉片，按f4，添加remark, 重復47步驟，進行測量。 （9）按f3（Close file），保存數(shù)據(jù)文件。 （10）用RS-232數(shù)據(jù)線連接電腦和LI-6400XT，按Esc退回主界面，按f5（Utility Menu），按上下箭頭選擇“File Exchange Mode”，在電腦上預先安裝SimFX軟件，雙擊打開LI6400FileEx，點擊File，選擇Prefs，選擇Com端口，按Connect，連接成功后，選擇文件傳輸?shù)街付ㄎ恢茫–F卡內(nèi)的數(shù)據(jù)也可在退出卡后，直接插入電腦讀卡器來導出數(shù)據(jù)）。 （1

23、1）按Esc，退回主界面，關機。 （12）切記把化學管旋鈕旋至中間松弛狀態(tài)；旋松葉室固定螺絲，保持葉室處于打開狀態(tài)。3. 光合日變化測定選擇一個晴天，換上透明葉室，提前開機預熱，在此期間進行日常檢查，之后依品種與處理進行光合日變化測定：將植株移至光下，把葉片置于葉室中，合上葉室，并讓陽光垂直照射進葉室，待穩(wěn)定之后，即記錄數(shù)據(jù)，每個植株測三個葉片，沒個處理測三株，以此測定上午9:0011:30，下午3:005:30階段光合變化情況。 4. 光響應曲線測定 （1）測定前的準備工作：測定光響應曲線之前，要進行光誘導。在估測的飽和光強下誘導至穩(wěn)定的最大凈光合速率（）。此飽和光強不能太大，否則可能產(chǎn)生光

24、抑制。確定最適誘導光強和誘導時間，大概30分鐘左右。 （2）硬件安裝與連接：安裝紅藍光源；裝好化學藥品；連接硬件（如果使用CF卡，則 插入主機后面固定小槽內(nèi)）。 （3）開機，配置界面選擇紅藍光源，連接狀態(tài)按“Y”，進入主菜單，預熱約20分鐘。 （4）按f4進入測量菜單；進行日常檢查。 （5）在測量界面下，按2，再按f3(CO2 Mixer)，按上下箭頭鍵選擇 Reference CO2，按OK，設定參比室CO2濃度為環(huán)境CO2濃度(約400mol mol-1)，按enter。（可選擇） （6）打開葉室，夾好葉片，閉合葉室。 （7）按1,f1, Open LogFile, 選擇將數(shù)據(jù)存入的位置（

25、主機 or CF卡），建立一個文件，enter，輸入一個remark，enter。 （8）按5，f1(Auto prog)，進入自動測量界面，按上下箭頭鍵選擇LightCurve2，enter進入，命名文件，enter，添加remark，enter，出現(xiàn)Summary SetPts for Qutm 展開后在SetPts 處展開設置光強梯度，自高到低設定光強梯度如1500 1000 500 200 150 100 50 20 0(注意數(shù)值間一定空格間隔，上面數(shù)值僅供參考)，enter后，在Stability wait處設置最小等待時間Minimum wait time (secs):120和最

26、大等待時間Maximum wait time(secs):設定300，enter，在Match 設定下將|CO2|設定為50，其余值不變，按F5，start，進入自動測量，等待測量結束（第5行F1處的*消失）。 （9）按1，f3(Close file)保存文件。更換葉片，重復48步驟。 （10）用RS-232數(shù)據(jù)線連接電腦和LI-6400，按esc退回主界面，按f5（Utility Menu）按上下箭頭選擇“File Exchange Mode”，在電腦上預先安裝SimFX軟件，雙擊打開LI6400FileEx，點擊File，選擇Prefs，選擇Com端口，按Connect，連接成功后，選擇文

27、件傳輸?shù)街付ㄎ恢茫–F卡內(nèi)的數(shù)據(jù)也可在退出卡后，直接插入電腦讀卡器來導出數(shù)據(jù)）。 （11）關機。按Esc，退回主界面，關閉電源。 五、實驗結果 1. 一定光強下的光合測定結果 表1 鹽脅迫下3種甜高粱幼苗葉光合作用數(shù)值品種種處理遼甜1號貝利考力 2. 光合日變化規(guī)律 3. 光響應曲線 六、注意事項1. 測定系統(tǒng)屬于精密儀器，測量過程周期較長且涉及跟換葉室等操作，需要提前熟悉并嚴格按照要求操作，注意多學、多思考；2. 測量過程中，要留意儀器狀態(tài)，若出現(xiàn)為負的，需要查找原因，注意匹配；3. 進行光合響應曲線測定時，需要把握時間，待植株完全處于活化狀態(tài)時或經(jīng)過一定光強的誘導之后，再進行自動化測量，注

28、意葉室閉合位置是否恰當，太緊了會損傷葉片。實驗三 鹽脅迫下甜高粱幼苗葉片葉綠素含量測定 一、實驗目的 1. 通過實驗，掌握植物體葉片葉綠素測定的原理及方法； 2. 經(jīng)過對觀測值的整理、分析，得出鹽脅迫對葉綠素影響及其差異； 二、實驗原理根據(jù)葉綠體色素提取液對可見光譜的吸收，利用分光光度計在某一特定波長測定其吸光度，即可用公式計算出提取液中各色素的含量。根據(jù)Lambert-Beer定律，某有色溶液的吸光度A與其中溶質濃度C和液層厚度L成正比，即，式中：比例常數(shù)。當溶液濃度以百分濃度為單位，液層厚度為1cm時，為該物質的吸光系數(shù)。各種有色物質溶液在不同波長下的吸光系數(shù)可通過測定已知濃度的純物質在不

29、同波長下的吸光度而求得。如果溶液中有數(shù)種吸光物質，則此混合液在某一波長下的總吸光度等于各組分在相應波長下吸光度的總和，這就是吸光度的加和性。據(jù)此，葉綠素測定有多種方法可供選擇：目視比色法、葉綠素儀活體測定法、分光光度法。用分光光度法測定葉綠體色素混合提取液中各組分含量時，只需測定該提取液在三個特定波長下的吸光度A，并根據(jù)葉綠素a、b及類胡蘿卜素在該波長下的吸光系數(shù)即可求出其濃度。在測定葉綠素a、b時為了排除類胡蘿卜素的干擾，所用單色光的波長選擇葉綠素在紅光區(qū)的最大吸收峰。 三、材料、儀器與試劑 （1）材料：貝利、考力、遼甜1號甜高粱幼苗葉片； （2）儀器：分光光度計；電子分析天平；研缽；剪刀；

30、濾紙；玻璃棒；容量瓶； （3）試劑：80%丙酮；石英砂；碳酸鈣粉末； 四、實驗步驟1. 葉綠素的提取 用打孔器取新鮮甜高粱幼苗葉片1，擦凈組織表面污物，剪碎（去掉中脈），切成細絲，置于10離心管中（內(nèi)含580%丙酮）,帶回實驗室后，置于黑暗條件下靜置過夜，即為葉綠素提取液1。2. 葉綠素的測定 取光徑為1的玻璃比色皿，加入葉綠素提取液至離杯口1處，以丙酮溶液作為對照，分別測定該提取液在646、663處的吸光度值，并一一記錄。4. 計算公式2根據(jù)由于20世紀40年代末提出的葉綠素計算公式及后來等的補充，葉綠素含量作如下計算：=式中：、葉綠素的濃度； 類胡蘿卜素總的濃度； 提取液在相應波長處的吸光

31、度值； 提取液中色素濃度（），由樣品吸光度值及換算公式求得； 提取液總體積（）； 稀釋倍數(shù); 樣品面積（）。 五、實驗結果 1. 脯氨酸測定結果 表1 葉綠素含量測定記錄編號鮮重面積表2 鹽脅迫下3種甜高粱幼苗葉綠素的含量品種種處理遼甜1號貝利考力 六、注意事項1. 為了保證結果可靠，試劑現(xiàn)配現(xiàn)用，可提前將萃取液置于離心管中，將葉片從植株上取下之后即放入離心管，密封保存，以較少離體葉片在環(huán)境中暴露的時間。2. 分光光度計在使用前需要預熱1020min，盡量選擇較精密的分光光度計，且在進行測定時，需要將玻璃比色皿清洗干凈。3. 每個處理取三株、每次測定做三組平行，最后結果取均值。實驗四 鹽脅迫下

32、甜高粱幼苗葉片脯氨酸含量測定 一、實驗目的 1. 通過實驗，掌握植物體內(nèi)脯氨酸測定的原理及方法； 2. 經(jīng)過對觀測值的整理、分析，得出材料脅迫耐受性的差異； 二、實驗原理在逆境條件下（旱、熱、冷、凍），植物體內(nèi)脯氨酸的含量顯著增加，植物體內(nèi)脯氨酸含量在一定程度上反映了植物的抗逆性，抗旱性強的品種積累的脯氨酸多。因此測定脯氨酸含量可以作為抗旱育種的生理指標。另外，由于脯氨酸親水性極強，能穩(wěn)定原生質膠體及組織內(nèi)的代謝過程，因而能降低冰點，有防止細胞脫水的作用。在低溫條件下，植物組織中脯氨酸增加，可提高植物的抗寒性，因此，亦可作為抗寒育種的生理指標?；腔畻钏釋Ω彼嵊刑囟ǚ磻?，當用磺基水楊酸提取植

33、物樣品時，脯氨酸便游離于磺基水楊酸溶液中，不受樣品狀態(tài)的影響，并能減少其它氨基酸的干擾。然后用酸性茚三酮加熱處理后，茚三酮與脯氨酸反應，生成穩(wěn)定的紅色化合物，再用甲苯處理，則色素全部轉移至甲苯中，色素的深淺即表示脯氨酸含量的高低。在520nm波長下測定吸光度，即可從標準曲線上查出脯氨酸的含量。 三、材料、儀器與試劑 （1）材料：貝利、考力、遼甜1號甜高粱幼苗葉片； （2）儀器：離心機，分光光度計；電子分析天平；恒溫水??；研缽；試管；移液管（1ml、5ml）、試管架；移液管架；洗耳球；剪刀； （3）試劑：茚三酮，冰醋酸，磷酸，磺基水楊酸，脯氨酸，甲苯； （4）溶液配制：2.5%酸性茚三酮顯色液：

34、將1.25茚三酮溶于30冰醋酸及206磷酸中（70攪拌溶解），冷卻后置于棕色試劑瓶，冷藏，兩天內(nèi)有效；3磺基水楊酸：稱取3磺基水楊酸，于100容量瓶中加純水定容；10脯氨酸標準溶液配制：稱取10脯氨酸，置于100潔凈容量瓶中，并用純水定容。 四、實驗步驟 1. 繪制標準曲線 （1）取6支試管，編號，按下表配制每管含量為010g的脯氨酸標準液，加入表中試劑后，置于沸水浴中加熱30min。取出冷卻，各試管再加入4ml甲苯，振蕩30秒鐘，靜置片刻，使色素全部轉至甲苯溶液；試 劑管 號01234510g·ml-1脯氨酸標準液（ml）蒸餾水（ml）冰醋酸（ml）2.5酸性茚三酮（ml）0222

35、0.21.8220.41.6220.61.4220.81.2221.01.022每管脯氨酸含量（g）0246810 （2）輕輕吸取各管上層脯氨酸甲苯溶液至比色杯中，以甲苯溶液為空白對照，在520mm波長處測定吸光度（A）值； （3）以15號管脯氨酸含量為橫坐標，吸光度值為縱坐標，繪制標準曲線。2. 葉片中脯氨酸的提取稱取不同處理的植物葉片各0.5g，剪碎之后，分別置于具塞試管中，然后向各管分別加入5ml 3的磺基水楊酸溶液，在沸水浴中提取10min（提取過程中要經(jīng)常搖動），冷卻后過濾于干凈的試管中，濾液即為脯氨酸的提取液。3. 葉片中脯氨酸含量測定 吸取2ml提取液于帶玻塞試管中，加入2ml冰

36、醋酸及3ml 2.5酸性茚三酮試劑，在沸水浴中加熱40min，溶液即呈紅色。冷卻后加入4ml甲苯，搖蕩30秒鐘，靜置片刻，取上層液至10ml離心管中，在3000r/min離心5min。用吸管輕輕吸取上層脯氨酸紅色甲苯溶液于比色杯中，以甲苯溶液為空白對照，在520mm波長處測定吸光度（A）值，根據(jù)標準曲線計算樣品中脯氨酸的濃度，再結合下面的公式，計算樣品中具體含量。4. 計算公式=式中：提取液中脯氨酸濃度（），由樣品吸光度值及標準曲線求得； 提取液總體積（）； 所吸取樣液體積（）; 樣品質量（）。 五、實驗結果 1. 脯氨酸測定結果 表2 鹽脅迫下3種甜高粱幼苗葉片脯氨酸含量品種種處理遼甜1號貝利考力 六、注意事項1. 為了保證結果可靠，試劑現(xiàn)配現(xiàn)用，可提前將萃取液置于離心管中，將葉片從植株上取下之后即放入離心管，密封保存，以較少離體葉片在環(huán)境中暴露的時間。2. 分光光度計在使用前需要預熱1020min，盡量選擇較精密的分光光度計，且在進行測定時，需要將玻璃比色皿清洗干凈。3. 每個處理取三株、每次測定做三組平行，最后結果取均值。實驗五 鹽脅迫下甜高粱幼苗葉片丙二