實(shí)驗(yàn)四紅細(xì)胞抗體吸收試驗(yàn)

1、實(shí)驗(yàn)八 紅細(xì)胞抗體吸收試驗(yàn)Erythrocyte antibody absorption test一、檢測原理 1.一定稀釋度的抗體加入已知抗原的紅細(xì)胞（檢測抗體）一定稀釋度的抗體加入已知抗原的紅細(xì)胞（檢測抗體） 或被檢紅細(xì)胞加入已知效價(jià)的特異性抗血清（檢測紅細(xì)胞或被檢紅細(xì)胞加入已知效價(jià)的特異性抗血清（檢測紅細(xì)胞抗原）抗原） 2.溶液中的抗體就會(huì)結(jié)合到紅細(xì)胞上，離心后將經(jīng)過抗原溶液中的抗體就會(huì)結(jié)合到紅細(xì)胞上，離心后將經(jīng)過抗原吸收的血清和紅細(xì)胞分開。吸收的血清和紅細(xì)胞分開。 3.將吸收前、后的血清倍比稀釋再與已知抗原的紅細(xì)胞共將吸收前、后的血清倍比稀釋再與已知抗原的紅細(xì)胞共同溫育，檢查血清和紅細(xì)

2、胞中抗體效價(jià)是否降低或消失。同溫育，檢查血清和紅細(xì)胞中抗體效價(jià)是否降低或消失。若明顯降低或消失，證明抗體已被紅細(xì)胞吸附，血清中含若明顯降低或消失，證明抗體已被紅細(xì)胞吸附，血清中含有與紅細(xì)胞抗原相對應(yīng)的抗體，或被檢紅細(xì)胞血型與加入有與紅細(xì)胞抗原相對應(yīng)的抗體，或被檢紅細(xì)胞血型與加入的已知抗原的紅細(xì)胞相同。的已知抗原的紅細(xì)胞相同。 二、儀器和試劑【器材】尖滴管、刻度吸管、小試管、離心機(jī)?！緲?biāo)本】靜脈血?！驹噭?標(biāo)準(zhǔn)抗A、抗B血清。22% A型及B型紅細(xì)胞生理鹽水懸液。3生理鹽水。三、實(shí)驗(yàn)步驟n采集靜脈血采集靜脈血23mln分離血標(biāo)本分離血標(biāo)本: 分離出血清和紅細(xì)胞，分別作好標(biāo)記分離出血清和紅細(xì)胞，

3、分別作好標(biāo)記 .n制備壓積紅細(xì)胞制備壓積紅細(xì)胞 將患者紅細(xì)胞用生理鹽水洗滌將患者紅細(xì)胞用生理鹽水洗滌3次，次，離心后棄去上層液。離心后棄去上層液。n標(biāo)定抗血清標(biāo)定抗血清 將標(biāo)準(zhǔn)抗將標(biāo)準(zhǔn)抗A（抗（抗B）血清倍比稀釋，分別加入等量）血清倍比稀釋，分別加入等量2% A型型及及B型紅細(xì)胞生理鹽水懸液，室溫下反應(yīng)型紅細(xì)胞生理鹽水懸液，室溫下反應(yīng)15min后，后，1 000r/min離心離心 1min，觀察凝集結(jié)果。選擇出現(xiàn)（）凝集強(qiáng)度最高的，觀察凝集結(jié)果。選擇出現(xiàn)（）凝集強(qiáng)度最高的1管稀釋度管稀釋度作為抗作為抗A（抗（抗B）吸收用作標(biāo)定血清（一般應(yīng)稀釋到）吸收用作標(biāo)定血清（一般應(yīng)稀釋到1 32）。）。

4、姓名血漿姓名血球壓積RBC抗A標(biāo)定抗A標(biāo)定已準(zhǔn)備好2%ARBC2%BRBC三、實(shí)驗(yàn)步驟抗體吸收：抗體吸收：n取取2支小試管，分別標(biāo)記抗支小試管，分別標(biāo)記抗A、抗、抗B。 n按標(biāo)記分別加入抗按標(biāo)記分別加入抗A、抗、抗B標(biāo)定血清標(biāo)定血清0.5ml。n分別加入被檢者壓積紅細(xì)胞分別加入被檢者壓積紅細(xì)胞0.5ml。 n混勻，混勻，4放置放置1h，每，每10min搖動(dòng)搖動(dòng)1次，使其充分接觸次，使其充分接觸 n1 000r/min離心離心3min后，將上清液分別移入另后，將上清液分別移入另2支試管，并支試管，并標(biāo)記抗標(biāo)記抗A吸收液和抗吸收液和抗B吸收液吸收液。 抗A標(biāo)定抗B標(biāo)定0.5ml0.5ml0.5ml

5、壓積RBC0.5ml壓積RBC4放置1h1 000r/min離心3min抗B吸收液抗A吸收液三、實(shí)驗(yàn)步驟n抗體鑒定：抗體鑒定：20支小試管支小試管12340.2mln.s0.2mln.s0.2mln.s0.2mln.s0.2mln.s抗B吸收液0.2ml抗A吸收液0.2ml未吸收抗A標(biāo)定液0.2ml未吸收抗B標(biāo)定液0.2ml0.2 ml2 : 4 : 8 : 16 : 320.2 ml0.2 ml0.2 ml0.2ml2%A型RBC0.2ml2%B型RBC混勻，1000r/min，1min，觀察四、結(jié)果判斷：吸收后抗體效價(jià)較吸收前降低2個(gè)滴度以上（Am亞型除外）者為陽性 n吸收后抗吸收后抗A效

6、價(jià)較未吸收抗效價(jià)較未吸收抗A效價(jià)顯著降低或消失為效價(jià)顯著降低或消失為A型型 n吸收后抗吸收后抗B效價(jià)較未吸收抗效價(jià)較未吸收抗B效價(jià)顯著降低或消失者為效價(jià)顯著降低或消失者為B型型 n吸收后抗吸收后抗A及抗及抗B效價(jià)都較未吸收抗效價(jià)都較未吸收抗A及抗及抗B效價(jià)顯著降低者為效價(jià)顯著降低者為AB型型 n吸收后抗吸收后抗A及抗及抗B效價(jià)較未吸收抗效價(jià)較未吸收抗A及抗及抗B效價(jià)無明顯差異者為效價(jià)無明顯差異者為O型。型。n如試驗(yàn)的目的是鑒定如試驗(yàn)的目的是鑒定A亞型，則按被檢紅細(xì)胞的吸收強(qiáng)度亞型，則按被檢紅細(xì)胞的吸收強(qiáng)度A1A2A3AXAm規(guī)律來判定規(guī)律來判定 五、報(bào)告方式n本人血型為：六、注意事項(xiàng)n抗抗A、抗、抗B血清應(yīng)標(biāo)定，其效價(jià)不宜過高，應(yīng)血清應(yīng)標(biāo)定，其效價(jià)不宜過高，應(yīng)先將抗血清的效價(jià)稀釋到先將抗血清的效價(jià)稀釋到1 32為宜。因?yàn)榭篂橐恕Ｒ驗(yàn)榭寡蹇贵w效價(jià)太高，抗血清中的抗體被亞型紅血清抗體效價(jià)太高，抗血清中的抗體被亞型紅細(xì)胞吸收后，效價(jià)下降不明顯，難以判斷結(jié)果細(xì)胞吸收后，效價(jià)下降不明顯，難以判斷結(jié)果 n洗滌紅細(xì)胞時(shí)生理鹽水應(yīng)盡量除盡，以免抗血洗滌紅細(xì)胞時(shí)生理