實驗二血涂片及染色

1、血涂片制備和染色血涂片制備和染色 【目的【目的】掌握血涂片的制備和染色。掌握血涂片的制備和染色。 【原理【原理】把血液制成細胞分布均勻的薄膜涂片，把血液制成細胞分布均勻的薄膜涂片，用瑞氏染液染色。不同的細胞種類及細胞的不用瑞氏染液染色。不同的細胞種類及細胞的不同成分，對酸性及堿性染料的結(jié)合能力不同，同成分，對酸性及堿性染料的結(jié)合能力不同，而使各種細胞呈現(xiàn)出各自的染色特點。而使各種細胞呈現(xiàn)出各自的染色特點。 【器材【器材】載玻片、推片、洗耳球、顯微鏡、香載玻片、推片、洗耳球、顯微鏡、香柏油、拭鏡紙、清潔液。柏油、拭鏡紙、清潔液。 【標本【標本】EDTA，靜脈血。，靜脈血。瑞氏染色法瑞氏染色法 【

2、試劑【試劑】 1瑞氏瑞氏(Wright)染液染液 (1)I液液:包含瑞氏染料包含瑞氏染料1.0g、純甲醇、純甲醇600ml、甘油、甘油15ml。 (2)液液:磷酸鹽緩沖液磷酸鹽緩沖液(pH6.46.8)，含磷酸二氫，含磷酸二氫鉀鉀0.3g、磷酸氫二鈉、磷酸氫二鈉0.2g、蒸餾水加至、蒸餾水加至 1 000ml。 (1)采血采血 (2)推片，推片與載片夾角推片，推片與載片夾角3045平穩(wěn)地向前平穩(wěn)地向前移動，血膜應呈舌狀，頭、體、尾三部分，且移動，血膜應呈舌狀，頭、體、尾三部分，且清晰可見。清晰可見。 (3)干燥干燥: 晃動?；蝿?。37溫箱中促干。溫箱中促干。 (4)染色染色: 將玻片平置于染色

3、架上，滴加將玻片平置于染色架上，滴加 (液液)35滴，滴，約約0.5lmin后，滴加等量緩沖液后，滴加等量緩沖液(液液)，搖動玻片混勻。，搖動玻片混勻。 (5)沖洗沖洗: 5-10min后用流水沖去染液，待干。后用流水沖去染液，待干。 (6)觀察結(jié)果觀察結(jié)果: 將干燥后的血涂片置顯微鏡下觀察。用低將干燥后的血涂片置顯微鏡下觀察。用低倍鏡觀察血涂片體、尾交界處的血細胞。倍鏡觀察血涂片體、尾交界處的血細胞。一張良好血涂片的要求：一張良好血涂片的要求：l 厚薄適宜厚薄適宜l 頭體尾明顯頭體尾明顯l 細胞分布均勻細胞分布均勻l 邊緣整齊邊緣整齊l 兩端和兩邊留有空隙兩端和兩邊留有空隙血涂片分布不血涂片

4、分布不均主要原因：均主要原因： 推片邊緣不齊、推片邊緣不齊、用力不均勻、用力不均勻、載片不清潔載片不清潔 H2O甲醇甲醇H2O甲醇甲醇5. 注意事項注意事項 血膜要干透后才能染色，否則染色時易脫落；血膜要干透后才能染色，否則染色時易脫落； 染色時間與染液濃度、室溫及細胞多少有關，染色時間與染液濃度、室溫及細胞多少有關，一般染液淡、染色時間長些效果好；一般染液淡、染色時間長些效果好； 染液不能過少，以防蒸發(fā)沉淀；染液不能過少，以防蒸發(fā)沉淀； 沖洗時不能先倒掉染液，應以流水沖，防染料沖洗時不能先倒掉染液，應以流水沖，防染料沉著。沖洗時間也不能長；沉著。沖洗時間也不能長； 染色過淡時可復染，復染時先將染料稀釋好；染色過淡時可復染，復染時先將染料稀釋好； 染色過深可用水沖洗或浸泡，還可用甲醇脫色；染色過深可用水沖洗或浸泡，還可用甲醇脫色； 分類最佳區(qū)域為體、尾交界處。分類最佳區(qū)域為體、尾交界處。 4. 影響瑞氏染色效果的一些因素：影響瑞氏染色效果的一些因素： A. 染料放置時間