實驗八、透射電子顯微鏡及掃描電子顯微鏡的使用ppt課件

1、實驗實驗 八八-1細胞超微結(jié)構(gòu)觀察與透細胞超微結(jié)構(gòu)觀察與透射電子顯微鏡的使用射電子顯微鏡的使用掌握透射電子顯微鏡的成像基本原理及其掌握透射電子顯微鏡的成像基本原理及其應(yīng)用應(yīng)用實驗?zāi)康呐c要求實驗?zāi)康呐c要求一、透射電子顯微鏡的成像基本原理一、透射電子顯微鏡的成像基本原理在真空條件下，電子束經(jīng)高壓加速后，在真空條件下，電子束經(jīng)高壓加速后，穿透樣品時形成散射電子和透射電子，穿透樣品時形成散射電子和透射電子，它們在電磁透鏡的作用下在熒光屏上它們在電磁透鏡的作用下在熒光屏上成像。成像。顯微鏡顯微鏡分辨本領(lǐng)分辨本領(lǐng)光源光源透鏡透鏡真空真空成像原理成像原理LMTEM200nm100nm0.1nm可見光可見光（

2、400-700） 紫外光紫外光（約（約200nm)電子束電子束（0.01-0.9）玻璃透鏡玻璃透鏡玻璃透鏡玻璃透鏡電磁透鏡電磁透鏡不要求真空不要求真空不要求真空不要求真空要求真空要求真空1.33x10-51.33x10-3Pa利用樣品對光的吸收形利用樣品對光的吸收形成明暗反差和顏色變化成明暗反差和顏色變化利用樣品對電子的散射利用樣品對電子的散射和透射形成明暗反差和透射形成明暗反差電鏡與光鏡的比較電鏡與光鏡的比較 超薄切片技術(shù)超薄切片技術(shù) 用于電鏡觀察的樣本制備用于電鏡觀察的樣本制備負染色技術(shù)負染色技術(shù)Negative staining） 染色背景，襯托出樣品的精細結(jié)構(gòu)染色背景，襯托出樣品的精細

3、結(jié)構(gòu)冰凍蝕刻技術(shù)冰凍蝕刻技術(shù)Freeze etching） 冰凍斷裂與蝕刻復(fù)型：主要用來觀察膜斷裂面的蛋白質(zhì)顆粒冰凍斷裂與蝕刻復(fù)型：主要用來觀察膜斷裂面的蛋白質(zhì)顆粒 和膜表面結(jié)構(gòu)。和膜表面結(jié)構(gòu)。電鏡三維重構(gòu)技術(shù)電鏡三維重構(gòu)技術(shù)電子顯微術(shù)、電子衍射與計算機圖象處理相結(jié)合而形成的電子顯微術(shù)、電子衍射與計算機圖象處理相結(jié)合而形成的 具有重要應(yīng)用前景的一門新技術(shù)。具有重要應(yīng)用前景的一門新技術(shù)。電鏡三維重構(gòu)技術(shù)與電鏡三維重構(gòu)技術(shù)與X-射線晶體衍射技術(shù)及核磁共振射線晶體衍射技術(shù)及核磁共振 分析技術(shù)相結(jié)合，是當(dāng)前結(jié)構(gòu)生物學(xué)分析技術(shù)相結(jié)合，是當(dāng)前結(jié)構(gòu)生物學(xué)Structural Biology） （主要研究生物

4、大分子空間結(jié)構(gòu)及其相互關(guān)系的主要實驗手段。（主要研究生物大分子空間結(jié)構(gòu)及其相互關(guān)系的主要實驗手段。 主要電鏡制樣技術(shù)主要電鏡制樣技術(shù)超薄切片技術(shù)主要包括取材、固定、超薄切片技術(shù)主要包括取材、固定、包埋、切片、染色等步驟。包埋、切片、染色等步驟。二、作業(yè)二、作業(yè):試比較電子顯微鏡與普通光學(xué)顯試比較電子顯微鏡與普通光學(xué)顯微鏡的異同。微鏡的異同。實驗八實驗八 -2 細胞超微結(jié)構(gòu)觀察與掃描電子顯微鏡的使細胞超微結(jié)構(gòu)觀察與掃描電子顯微鏡的使用用利用二次電子信號成像來觀察樣品的表面形利用二次電子信號成像來觀察樣品的表面形態(tài)。電子態(tài)。電子“探針掃描，激發(fā)樣品表面放出探針掃描，激發(fā)樣品表面放出二次電子，探測器收集二次電子成像。二次電子，探測器收集二次電子成像。一、實驗原理一、實