第十七章寄生蟲(chóng)病原檢查技術(shù)

1、第五篇實(shí)驗(yàn)技術(shù)及抗寄生蟲(chóng)藥物第十七章寄生蟲(chóng)病原檢查技術(shù)寄生蟲(chóng)學(xué)診斷技術(shù)包括病原檢查、免疫學(xué)檢查和分子生物學(xué)檢查等三個(gè)方面。本節(jié)將主要對(duì)病原檢查的各種技術(shù)方法作一較全面的介紹第一節(jié)糞便檢查糞便檢查是診斷寄生蟲(chóng)病常用的病原學(xué)檢測(cè)方法。要取得準(zhǔn)確的結(jié)果，糞便必須新鮮，送檢時(shí)間一般不宜超過(guò)24小時(shí)。如檢查腸內(nèi)原蟲(chóng)滋養(yǎng)體，最好立即檢查，或暫時(shí)保存在35°C37°C條件下待查。盛糞便的容器須潔凈、干燥，并防止污染；糞便不可混入尿液及其它體液等，以免影響檢查結(jié)果。具體方法如下：(一) 直接涂片法(directsmearmethod)用以檢查蠕蟲(chóng)卵、原蟲(chóng)的包囊和滋養(yǎng)體。方法簡(jiǎn)便，連續(xù)作3次

2、涂片，可以提高檢出率。1蠕蟲(chóng)卵檢查滴一滴生理鹽水于潔凈的載玻片上，用棉簽棍或牙簽挑取綠豆大小的糞便塊，在生理鹽水中涂抹均勻；涂片的厚度以透過(guò)玻片隱約可辨認(rèn)書(shū)上的字跡為宜。一般在低倍鏡下檢查，如用高倍鏡觀察，需加蓋片。應(yīng)注意蟲(chóng)卵與糞便中的異物鑒別。蟲(chóng)卵都具有一定形狀和大??；卵殼表面光滑整齊，具固有的色澤；卵內(nèi)含卵細(xì)胞或幼蟲(chóng)。2原蟲(chóng)檢查（1）活滋養(yǎng)體檢查：涂片應(yīng)較薄，方法同查蠕蟲(chóng)卵。氣溫愈接近體溫，滋養(yǎng)體的活動(dòng)愈明顯。必要時(shí)可用保溫臺(tái)保持溫度。（2）包囊的碘液染色檢查：直接涂片方法同上，以一滴碘液代替生理鹽水，糞便涂抹方法同上。若同時(shí)需檢查活滋養(yǎng)體，可在玻片另一側(cè)滴一滴生理鹽水。同上法涂抹糞便標(biāo)本

3、，再蓋上蓋片。片中滴碘液的一側(cè)查包囊；另一側(cè)查活滋養(yǎng)體。碘液配方：碘化鉀4g,碘2g,蒸餾水100ml。（3）隱孢子蟲(chóng)卵囊染色檢查：目前最佳的方法為金安-酚改良抗酸染色法。其次為金胺酚染色法和改良抗酸染色法。對(duì)于新鮮糞便或經(jīng)10%福爾馬林固定保存（4C1個(gè)月內(nèi)）的含卵囊糞便都可用這三種方法染色。染色過(guò)程是先用金胺-酚染色，再用改良抗酸染色法復(fù)染。方法步驟如下：金胺酚（auramine-pheno）染色法：1）染液配制：1g/l金胺酚染色液（第一液）：金胺0.1g，石炭酸5.0g，蒸餾水100ml;3醯酸酒精（第二液）：鹽酸3ml,95%酉精100ml；5g/l高錳酸鉀液（第三液）：高錳酸鉀0.

4、5g，蒸餾水100ml。2）染色步驟：滴加第一液于晾干的糞膜上，1015分鐘后水洗；滴加第二液，1分鐘后水洗；滴加第三液，1分鐘后水洗，待干；置熒光顯微鏡檢查。低倍熒光鏡下，可見(jiàn)卵囊為一圓形小亮點(diǎn)，發(fā)出乳白色熒光。高倍鏡下卵囊呈乳白或略帶綠色，卵囊壁為一薄層，多數(shù)卵囊周?chē)钊?，中央淡染，呈環(huán)狀，核深染結(jié)構(gòu)偏位，有些卵囊全部為深染。但有些標(biāo)本可出現(xiàn)非特異的熒光顆粒，應(yīng)注意鑒別。改良抗酸（modifiedacid-fastmethod）染色法：1）染色液配制：石炭酸復(fù)紅染色液（第一液）：堿性復(fù)紅4g，95%酒精20ml，石炭酸8ml，蒸餾水100ml；10%酸溶液（第二液）：純硫酸10ml，蒸餾水

5、90ml（邊攪拌邊將硫酸徐徐傾入水中）；20g/l孔雀綠液（第三液）：20g/l孔雀綠原液1ml,蒸餾水10ml。2）染色步驟：滴加第一液于晾干的糞膜上，1.510分鐘后水洗；滴加第二液,110分鐘后水洗；滴加第三液,1分鐘后水洗,待干；置顯微鏡下觀察。經(jīng)染色后,卵囊呈玫瑰紅色,圓形或橢圓形,背景為綠色。如染色（1.5分鐘）和脫色（2分鐘）時(shí)間短,卵囊內(nèi)子孢子邊界不明顯；如染色時(shí)間長(zhǎng)（510分鐘）脫色時(shí)間需相應(yīng)延長(zhǎng),子孢子邊界明顯。卵囊內(nèi)子孢子均染為玫瑰紅色,子孢子呈月牙形,共4個(gè)。其他非特異顆粒則染成藍(lán)黑色，容易與卵囊區(qū)分。不具備熒光鏡的實(shí)驗(yàn)室，亦可用本方法先染色，然后在光鏡低、高倍下過(guò)篩檢

6、查。如發(fā)現(xiàn)小紅點(diǎn)再用油鏡觀察的效果好，可提高檢出速度和準(zhǔn)確性。金胺酚染色改良抗酸復(fù)染法用本法可克服上述染色法的缺點(diǎn)。具體方法是：先用金胺酚染色后，再用改良抗酸染色法復(fù)染。再用光學(xué)顯微鏡觀察，卵囊同抗酸染色法所見(jiàn)，但非特異性顆粒被染成蘭黑色，兩者顏色截然不同，極易鑒別，使檢出率和準(zhǔn)確性大大提高。（二）厚涂片透明法（改良加藤法）（modifiedKato'sthicksmear）厚涂片透明法適于蠕蟲(chóng)卵檢查。取約50m（g已用100目不銹鋼篩除去糞渣）糞便，置于載玻片上，覆以浸透甘油孔雀綠溶液的玻璃紙片，輕壓，使糞便鋪開(kāi)（20X25mr）。置于3036C溫箱中約半小時(shí)或25C約1小時(shí)。待糞膜

7、稍干，即可鏡檢。玻璃紙準(zhǔn)備：將玻璃紙剪成22X30mn大小的小片，浸于甘油一孔雀綠溶液（含純甘油100ml、水100ml和1ml3%孔雀綠水溶液）中至少浸泡24小時(shí)，至玻璃紙呈現(xiàn)綠色。使用此法需掌握糞膜的合適厚度和透明的時(shí)間，如糞膜厚透明時(shí)間短，蟲(chóng)卵難以發(fā)現(xiàn)；如透明時(shí)間過(guò)長(zhǎng)則蟲(chóng)卵變形，也不易辨認(rèn)。如，檢查鉤蟲(chóng)卵時(shí)，透明時(shí)間宜在30分鐘以?xún)?nèi)(三) 濃聚法(concentrationmethod)1. 沉淀法(sedimentationmethod)原蟲(chóng)包囊和蠕蟲(chóng)卵的比重大可沉積于水底，有助于提高檢出率。但比重較小的鉤蟲(chóng)卵和某些原蟲(chóng)包囊則效果較差。(1) 重力沉淀法：即自然沉淀法。本法主要用于蠕蟲(chóng)

8、卵檢查，蠕蟲(chóng)卵比重大于水，可沉于水底，使蟲(chóng)卵濃集。加之，經(jīng)水洗后，視野清晰，易于檢查。有些蟲(chóng)卵，如鉤蟲(chóng)卵，比重較輕，應(yīng)用此法效果不佳。本法缺點(diǎn)為費(fèi)時(shí)，操作煩瑣。取糞便2030g、加水制成混懸液，用金屬篩(4060孔)或2、3層濕紗布過(guò)濾，再加清水沖洗殘?jiān)?；過(guò)濾糞液在容器中靜置25分鐘，到去上液，重新加滿(mǎn)清水，以后每隔1520分鐘換水一次(共34次)，直至上清液清晰為止。最后倒去上清液，取沉渣作涂片鏡檢。檢查血吸蟲(chóng)卵時(shí)，沉淀時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，尤在室溫高于15C時(shí)，卵內(nèi)毛蚴易孵化。當(dāng)檢查包囊時(shí)，換水間隔時(shí)間宜延長(zhǎng)至約6小時(shí)(圖17-1)。圖17-1糞便自然沉淀法及毛蚴孵化法離心沉淀法(centrifu

9、galsedimentationmethod):將上述濾去粗渣的糞液離心(1500-2000rpm/min)12分鐘，倒去上液，注入清水，再離心沉淀，如此反復(fù)沉淀34次，直至上液澄清為止，最后倒去上液，取沉渣鏡檢。本法省時(shí)、省力，適用于臨床檢驗(yàn)。(3)汞碘醛離心沉淀法(merthiolate-iodine-formaldehydecentrifugationsedimentationmethod,MIFC)：本法既可濃集，又可固定和染色，適用于原蟲(chóng)包囊、滋養(yǎng)體及蠕蟲(chóng)卵和幼蟲(chóng)的檢查。如準(zhǔn)確稱(chēng)取1g糞便，即可作蠕蟲(chóng)卵的定量檢查。取糞便1g,加適量(約10ml)汞碘醛液，充分調(diào)勻，用2層脫脂紗布過(guò)濾

10、，再加入乙醚4ml,搖2分鐘，離心(2000rpm/min)12分鐘，即分成乙醚、糞渣、汞碘醛及沉淀物4層。吸棄上面3層，取沉渣鏡檢。汞碘醛配制：1) 汞醛(MF液：1/1000硫柳汞酊200ml,甲醛(40%25ml,甘油50ml，蒸餾水200ml。2) 盧戈氏液：碘5g,碘化鉀10g，蒸餾水100ml。檢查時(shí)取汞醛液2.35ml及5%盧戈氏液0.15ml混合備用。但混合液保存8小時(shí)后即變質(zhì),不應(yīng)再用；碘液亦不宜于1周后再用。(4) 醛醚沉淀法(formalin-ethersedimentation):取糞便12g置于小容器內(nèi),加水1020ml調(diào)勻,將糞便混懸液經(jīng)2層紗布(或100目金屬篩網(wǎng)

11、)過(guò)濾,離心(200rpm/min)2分鐘；倒去上層糞液,保留沉渣,加水10ml混勻,離心2分鐘；倒去上液,加10%甲醛7ml。5分鐘后加乙醚3ml，塞緊管口并充分搖勻，取下管口塞，離心2分鐘；即可見(jiàn)管內(nèi)自上而下分為4層。取管底沉渣涂片鏡檢。本法不僅濃集效果好，而且不損傷包囊和蟲(chóng)卵的形態(tài)，易于觀察和鑒定。對(duì)于含脂肪較多的糞便，本法效果優(yōu)于硫酸鋅漂浮法。但對(duì)布氏嗜碘阿米巴包囊、賈第蟲(chóng)包囊及微小膜殼絳蟲(chóng)卵等的檢查效果較差。2. 浮聚法(flotationmethod)利用比重較大的液體，使原蟲(chóng)包囊或蠕蟲(chóng)卵上浮，集中于液體表面，常用的方法有兩種：(1) 飽和鹽水浮聚法(brineflotation)

12、：此法用以檢查鉤蟲(chóng)卵效果最好，也可用于檢查其它線蟲(chóng)卵和微小膜殼絳蟲(chóng)卵。但不適于檢查吸蟲(chóng)卵和原蟲(chóng)包囊。用竹簽取黃豆粒大小的糞便置于浮聚瓶(高3.5cm，直徑約2cm的圓形直筒瓶)中，加入少量飽和鹽水調(diào)勻，再慢慢加入飽和鹽水至液面略高于瓶口，以不溢出為止。此時(shí)在瓶口覆蓋一載玻片，靜置15分鐘后，將載玻片提起并迅速翻轉(zhuǎn)，鏡檢(圖17-2)。圖17-2飽和鹽水浮聚法飽和鹽水配制：將食鹽徐徐加入盛有沸水的容器內(nèi)，不斷攪動(dòng),直至食鹽不再溶解為止（2）硫酸鋅離心浮聚法（zincsulfatecentrifugalflotationmethod）:此法適用于檢查原蟲(chóng)包囊、球蟲(chóng)卵囊、線蟲(chóng)卵和微小膜殼絳蟲(chóng)卵。取糞

13、便約1g,加1015倍的水，充分?jǐn)囁?，按離心沉淀法過(guò)濾，反復(fù)離心34次，至清水為止，最后倒去上清液，在沉渣中加入比重1.18的硫酸鋅液（33%的溶液），調(diào)勻后再加硫酸鋅溶液至距管口約1cm處，離心1分鐘。用金屬環(huán)鉤取表面的糞液置于載玻片上，加碘液一滴（查包囊），鏡檢。鉤取標(biāo)本時(shí)，用金屬環(huán)輕輕接觸液面即可，切勿攪動(dòng)。離心后應(yīng)立即取標(biāo)本鏡檢，如若放置時(shí)間超過(guò)1小以上，會(huì)因包囊或蟲(chóng)卵變形而影響觀察效果。（3）蔗糖離心浮聚法:此法適用于檢查糞便中隱孢子蟲(chóng)的卵囊。取糞便約5g,加水15-20ml，以260目尼龍袋或4層紗布過(guò)濾。取濾液離心5-10分鐘，吸棄上清液，加蔗糖溶液（蔗糖500g，蒸餾水320m

14、l,石炭酸6.5ml）再離心，然后如同飽和鹽水浮聚法，取其表面膜鏡檢（高倍或油鏡）。卵囊透明無(wú)色,囊壁光滑,內(nèi)含一小暗點(diǎn)和發(fā)出蛋黃色的子孢子。隱孢子蟲(chóng)的卵囊在漂浮液中浮力較大,常緊貼于蓋片之下,鑒于1小時(shí)后卵囊脫水變形不易辨認(rèn),故應(yīng)立即鏡檢。也可用飽和硫酸鋅溶液或飽和鹽水替代蔗糖容液。常見(jiàn)蠕蟲(chóng)卵、包囊的比重見(jiàn)表171。表17-1蠕蟲(chóng)卵、包囊的比重蟲(chóng)卵或包囊比重華支睪吸蟲(chóng)卵1.1701.190姜片吸蟲(chóng)卵1.190肝片形吸蟲(chóng)卵1.200日本血吸蟲(chóng)卵1.200帶絳蟲(chóng)卵1.140微小膜殼絳蟲(chóng)卵1.050鉤蟲(chóng)卵1.0551.080鞭蟲(chóng)卵1.150曉蟲(chóng)卵1.1051.115受精蛔蟲(chóng)卵1.1101.130未

15、受精蛔蟲(chóng)卵1.2101.230毛圓線蟲(chóng)卵1.1151.130溶組織內(nèi)阿米巴包囊1.0601.070結(jié)腸內(nèi)阿米巴包囊1.070微小內(nèi)蜒阿米巴包囊1.0651.070藍(lán)氏賈第鞭毛蟲(chóng)包囊1.0401.0603. 尼龍袋集卵法本法主要用于血吸蟲(chóng)卵的濃集。先將120目/吋（孔徑略大于血吸蟲(chóng)卵）的尼龍袋套于260目/吋（孔徑略小于血吸蟲(chóng)卵）的尼龍袋內(nèi)（兩袋的底部均不粘合，分別用金屬夾夾?。?。取糞便30g,放入搪瓷杯內(nèi)加水搗碎調(diào)勻，經(jīng)60目/吋銅篩濾入內(nèi)層尼龍袋，然后將兩個(gè)尼龍袋一起在清水桶內(nèi)緩慢上下提動(dòng)洗濾袋內(nèi)糞液，或在自來(lái)水蓮蓬頭下緩緩沖洗，至袋內(nèi)流出清水為止。將120目/吋尼龍袋提出，棄取袋內(nèi)糞渣，取

16、下260目/吋尼龍袋下端金屬夾，將袋內(nèi)糞渣全部洗入三角量杯內(nèi)，靜置15分鐘。傾去上清液，吸沉渣鏡檢?；?qū)⒊猎谷肴菬績(jī)?nèi)作血吸蟲(chóng)毛蚴孵化。本法有費(fèi)時(shí)短、蟲(chóng)卵丟失少等優(yōu)點(diǎn)，并可避免在自然沉淀過(guò)程中孵出的毛蚴在換水時(shí)被倒掉。（四）毛蚴孵化法（miracidiumhatchingmethod）為依據(jù)血吸蟲(chóng)卵內(nèi)的毛蚴在適宜溫度的清水中，短時(shí)間內(nèi)可孵出的特性而設(shè)計(jì)的方法，適用于早期血吸蟲(chóng)病患者的糞便檢查。取糞便約30g,先經(jīng)重力沉淀法濃集處理，將糞便沉渣倒入三角燒瓶?jī)?nèi)，加清水（城市中須用去氯水）至瓶口，在2030C的條件下，經(jīng)46小時(shí)后用肉眼或放大鏡觀察結(jié)果。如見(jiàn)水面下有白色點(diǎn)狀物作直線來(lái)往游動(dòng)，即是

17、毛蚴。必要時(shí)也可以用吸管將毛蚴吸出鏡檢。如無(wú)毛蚴，每隔46小時(shí)（24小時(shí)內(nèi)）觀察一次。氣溫高時(shí)，毛蚴可在短時(shí)間內(nèi)孵出，因此在夏季要用1.2%食鹽水或冰水沖洗糞便，最后一次才改用室溫清水（圖17-1）。毛蚴促孵法：將用沉淀法處理后的糞便沉渣置于三角瓶?jī)?nèi)，不加水，或?qū)⒓S便置于吸水紙上，再放在2030C溫箱中過(guò)夜。檢查時(shí)，加清水，2小時(shí)后就可見(jiàn)到孵出的毛蚴。采用此法，毛蚴孵出時(shí)間較一致，數(shù)量也較多。（五）肛門(mén)拭子法（analswab）：適用于肛周產(chǎn)卵（蟯蟲(chóng)），或常可在肛門(mén)附近發(fā)現(xiàn)蟲(chóng)卵（帶絳蟲(chóng)卵）的檢查。1 棉簽拭子法先將棉簽浸泡在生理鹽水中，取出時(shí)擠去過(guò)多的鹽水，在肛門(mén)周?chē)胧茫S后將棉簽放入盛有飽

18、和鹽水的試管中，用力攪動(dòng)，迅速提起棉簽，在試管內(nèi)壁擠干鹽水后棄去，再加飽和鹽水至管口處，覆蓋一截玻片，務(wù)使其接觸液面，5分鐘后取下載玻片鏡檢。也可將擦拭肛門(mén)的棉簽放在盛清水的試管中，經(jīng)充分浸泡，取出，在試管內(nèi)壁擠去水分后棄去。試管靜置10分鐘，或經(jīng)離心后，倒去上液，取沉渣鏡檢。2 .透明膠紙法（cellophanetape）用長(zhǎng)約6cm寬約2cm的透明膠紙有膠面，粘貼肛門(mén)周?chē)钠つw，取下后將有膠面平貼在玻片上，鏡檢。（六）鉤蚴培養(yǎng)法（culturmethodforhookwormlarvae）為根據(jù)鉤蟲(chóng)卵內(nèi)幼蟲(chóng)在適宜條件下可在短時(shí)間內(nèi)孵出的原理設(shè)計(jì)的方法。加冷開(kāi)水約1ml于潔凈試管內(nèi)（lx10

19、cm），將濾紙剪成與試管等寬但較試管稍長(zhǎng)的T字型紙條，用鉛筆書(shū)寫(xiě)受檢者姓名或編號(hào)于橫條部分。取糞便約0.20.4g，均勻地涂抹在紙條豎部的上部2/3處，再將紙條插入試管，下端浸泡在水中，以糞便不接觸水面為度。在2030C條件下培養(yǎng)。培養(yǎng)期間每天沿管壁補(bǔ)充冷開(kāi)水，以保持水面高度。3 天后用肉眼或放大鏡檢查試管底部。鉤蚴在水中常作蛇行游動(dòng)，蟲(chóng)體透明。如未發(fā)現(xiàn)鉤蚴，應(yīng)繼續(xù)培養(yǎng)觀察至第5天。氣溫太低時(shí)可將培養(yǎng)管放入溫水（30C左右）中數(shù)分鐘后，再行檢查（圖17-3）圖17-3鉤蚴培養(yǎng)法此法亦可用于分離人體腸道內(nèi)各種阿米巴滋養(yǎng)體及人毛滴蟲(chóng)滋養(yǎng)體，且能提高檢出率。但是，每管糞便量應(yīng)為1.0g;適宜溫度為2

20、530C;培養(yǎng)時(shí)間為24天。臨床上為了及時(shí)報(bào)告致病原蟲(chóng)，可于培養(yǎng)48小時(shí)后鏡檢。（七）蟲(chóng)卵計(jì)數(shù)法（eggcount）蟲(chóng)卵計(jì)數(shù)用于估計(jì)人體內(nèi)寄生蟲(chóng)的感染度，常用司徒爾（Stoll）氏法，即司氏稀釋蟲(chóng)卵計(jì)數(shù)法（圖17-4）。圖17-4司徒氏稀釋蟲(chóng)卵記數(shù)瓶在（左）及吸管（右）圖17-5定量板用特制的三角燒瓶（或普通三角燒瓶），容量為65ml左右，在燒瓶的頸部相當(dāng)于56和60ml處，有兩個(gè)刻度。先把0.1ml/LNaOH溶液到入瓶?jī)?nèi)至56ml處，再慢慢地加入糞便，到液面上升到60ml處，然后放進(jìn)玻璃珠10余顆，用橡膠塞塞緊瓶口，充分搖動(dòng)，使其成為十分均勻的混懸液。計(jì)數(shù)時(shí)充分搖勻，用有刻度的小吸管吸取0

21、.075或0.15ml糞液置于載玻片上，加蓋片，在低倍鏡下計(jì)數(shù)全片的蟲(chóng)卵數(shù)，乘以2000.075ml）或100（吸0.15ml）即得每克糞便蟲(chóng)卵數(shù)。由于糞便的性狀明顯地影響估算結(jié)果，因此不成形的糞便的蟲(chóng)卵數(shù)應(yīng)再乘糞便性狀系數(shù)，即半成形糞便x1.5，軟濕形糞便X2,粥狀糞便X3,水瀉糞便X4。每克糞便含卵數(shù)X24小時(shí)糞便克數(shù)雌蟲(chóng)數(shù)=已知雌蟲(chóng)數(shù)每天排卵總數(shù)成蟲(chóng)總數(shù)二雌蟲(chóng)總數(shù)X2（八）定量透明法定量透明法適用于各種糞便內(nèi)蠕蟲(chóng)卵的檢查及計(jì)數(shù)。此法系應(yīng)用改良聚苯乙烯作定量板（圖216）,大小為40X30X1.37mm模孔為一長(zhǎng)圓孔，大小為8X4mm兩端呈半圓形，所取的糞樣平均為41.7mg。操作時(shí)將大小

22、約4X4cm的100目尼龍網(wǎng)或金屬篩網(wǎng)覆蓋在糞便標(biāo)本上，自篩網(wǎng)上用刮片刮取糞便，置定量板與載玻片上，用一手的兩指壓住定量板的兩端，將刮片上的糞便填滿(mǎn)模孔，刮去多余糞便。掀起定量板，載玻片上留下一個(gè)長(zhǎng)形糞樣，然后在糞條上覆蓋含甘油一孔雀綠溶液的大小約為5.02.6cm的玻璃紙條，展平后加壓，使玻璃紙下的糞便鋪成長(zhǎng)橢圓形。經(jīng)12小時(shí)糞便透明后置鏡下計(jì)數(shù)。將所得蟲(chóng)卵數(shù)X24,再乘上述糞便性狀系數(shù)，即為每克糞便蟲(chóng)卵數(shù)（eggspergram,EPG）常見(jiàn)蠕蟲(chóng)的每條雌蟲(chóng)每天排卵數(shù)如212。（九）淘蟲(chóng)檢查法為考核驅(qū)蟲(chóng)療效，常需從糞便中淘取蠕蟲(chóng)進(jìn)行鑒定與計(jì)數(shù)。取患者服藥后2472小時(shí)的全部糞便，加水?dāng)嚢?，?/p>

23、篩（40目）或紗布濾出糞渣，經(jīng)水反復(fù)沖洗后，倒在盛有清水的大型玻皿內(nèi)。檢查混雜在糞渣中的蟲(chóng)體時(shí)，應(yīng)在玻皿下襯以黑紙。（十）帶絳蟲(chóng)孕節(jié)檢查法絳蟲(chóng)節(jié)片用清水洗凈，置于兩節(jié)玻片之間，輕輕壓平，對(duì)光觀察內(nèi)部結(jié)構(gòu)，并根據(jù)子宮分支情況鑒定蟲(chóng)種。也可以用注射器從孕節(jié)后端正中部插入子宮內(nèi)徐徐注射炭素墨水或卡紅，待子宮分支顯現(xiàn)后計(jì)數(shù)?？t染液配制：鉀明磯飽和液100ml，卡紅3g,冰醋酸10ml?；旌鸵褐糜?7C溫箱內(nèi)過(guò)夜，過(guò)濾后即可應(yīng)用。表17-2各種蠕蟲(chóng)每條雌蟲(chóng)每日排卵數(shù)來(lái)源于不同資料的數(shù)目可能不同蟲(chóng)名產(chǎn)卵數(shù)/日/條（平均數(shù)）華支睪吸蟲(chóng)16004000(2400)姜片蟲(chóng)1500048000(25000)衛(wèi)氏

24、并殖吸蟲(chóng)1000020000日本血吸蟲(chóng)10003500豬帶絳蟲(chóng)3000050000/孕節(jié)牛帶絳蟲(chóng)97000124000/孕節(jié)十二指腸鉤蟲(chóng)1000030000(24000)美洲鉤蟲(chóng)500010000(9000)蛔蟲(chóng)234000245000(240000)鞭蟲(chóng)10007000(2000)第二節(jié)血液檢查血液檢查是診斷瘧疾、絲蟲(chóng)病的基本方法。涂制血膜用的載玻片用前需經(jīng)洗滌液處理，自來(lái)水、蒸餾水沖洗，在95%酒精中浸泡，擦干或烤干后使用。采血針用前必須消毒或用一次性針，一人一針以免交叉感染。洗滌液配制：常用玻璃器皿的洗滌液為鉻酸洗液，含工業(yè)濃硫酸100ml重鉻酸鉀80g,水1000ml。先用冷水將重鉻酸

25、鉀溶化，然后徐徐加入濃硫酸，同時(shí)用玻璃棒攪拌。（一）檢查瘧原蟲(chóng)（1）取血與涂片：用75%酒精棉球消毒耳垂，待干后用左手拇指與食指捏著耳垂下方，并使耳垂下側(cè)方皮膚崩緊，右手持取血針、刺破皮膚，擠出血滴。薄、厚血膜可涂制在同一張玻片上（圖17-6）間日瘧原蟲(chóng)宜在發(fā)作后數(shù)小時(shí)采血；惡性瘧在發(fā)作初期采血可見(jiàn)大量環(huán)狀體，1周后可見(jiàn)配子體。圖17-6薄、厚血膜制作1）薄血膜制片：在載玻片1/3與2/3交界處蘸血一小滴，以一端緣光滑的2）載片為推片，將推片的一端置于血滴之前，待血液沿推片端緣擴(kuò)散后，自右向左推成薄血膜。操作時(shí)兩載片間的角度為3045°,推動(dòng)速度適宜。理想的薄血膜，應(yīng)是一層均勻分布的

26、血細(xì)胞，血細(xì)胞間無(wú)空隙且涂血膜末端呈掃帚狀。3）厚血膜制片：于載玻片的另一端（右）1/3處蘸血一小滴（約10mm3），以推片的一角，將血滴自?xún)?nèi)向外作螺旋形攤開(kāi)，使之成為直徑約0.81cm，厚薄均勻的厚血膜。厚血膜為多層血細(xì)胞的重疊，約等于20倍薄血膜的厚度（2）固定與染色：血片必須充分涼干否則染色時(shí)容易脫落。固定時(shí)用小玻棒蘸甲醇或無(wú)水酒精在薄血膜上輕輕抹過(guò)。如薄、厚血膜在同一玻片上，切勿將固定液帶到厚血膜上，因厚血膜固定之前必須進(jìn)行溶血?？捎玫喂艿嗡诤裱ど?，待血膜呈灰白色時(shí)，將水倒去，涼干。在稀釋各種染液和沖洗血膜時(shí)，如用緩沖液則染色效果更佳。緩沖液的配制如下：磷酸氫二鈉液：無(wú)水磷酸氫二鈉

27、（Na2HPO4）9.64g或Na2HPO4。2出011.867g或Na2HPO47H2。17.872g或NaHP0412出023.877g，蒸餾水1000ml。M/15磷酸二氫鉀液：磷酸二氫鉀（KH2PO4）9.073g,蒸餾水1000ml。使用時(shí)將上述原液按下頁(yè)表配制成不同的pH緩沖液：表17-3緩沖液配制pHM/15KH2PO4（ml）M/15NaH2PO4（ml）蒸餾水（ml）6.84.95.1907.06.33.7907.27.32.790染色時(shí)臨時(shí)配制成pH7.0或7.2的緩沖液。常用的染色劑有姬氏染劑（Giemsa'sstain）瑞士染劑（Wright'sstai

28、n）1）Giemsa染色法：此法染色效果良好，血膜褪色較慢，保存時(shí)間較久，但染色時(shí)間較長(zhǎng)。染液配置：姬氏染劑粉1g，甲醇50ml，純甘油50ml。將姬氏染劑粉置于研缽中（最好用瑪瑙研缽），加小量甘油充分研磨，加甘油再磨，直至50ml甘油加完為止，倒入棕色玻瓶中。然后分幾次用少量甲醇沖洗缽中的甘油染粉，倒入玻瓶直至50ml甲醇用完為止，塞緊瓶塞，充分搖勻，置65C溫箱內(nèi)24小時(shí)或室溫內(nèi)一周后過(guò)濾，備用。染色方法：用pH7.07.2的緩沖液，將姬氏染液稀釋?zhuān)槐壤s為1520份緩沖液加一份姬氏染液。用蠟筆劃出染色范圍，將稀釋的姬氏染液滴于已固定的薄、厚血膜上，染色半小時(shí)（室溫），再用上述緩沖液沖洗。

29、血片涼干后鏡檢。2）快速姬氏染色法：姬氏染液1ml，加緩沖液5ml，如前法染色5分鐘后用緩沖液沖洗，涼干后鏡檢。3）Wright染色法：此法操作簡(jiǎn)便，適用于臨床診斷，但甲醇蒸發(fā)甚快，掌握不當(dāng)易在血片上發(fā)生染液沉淀，并較易褪色，保存時(shí)間不長(zhǎng)。多用于臨時(shí)性檢驗(yàn)。 染液配制：瑞氏染劑粉0.10.5g,甲醇97ml，甘油3ml。將瑞氏染劑加入甘油中充分研磨，然后加少量甲醇，研磨后倒入瓶?jī)?nèi)，再分幾次用甲醇沖洗缽中的甘油溶液，倒入瓶?jī)?nèi)，直至用完為止。搖勻，24小時(shí)后過(guò)濾待用。一般1、2周后再過(guò)濾。 染色方法：瑞氏染劑含甲醇，薄血膜不需先固定；而厚血膜則需先經(jīng)溶血，待血膜干后才能染色。染色前先將溶過(guò)血的厚血

30、膜和薄血膜一起用蠟筆劃好染色范圍，以防滴加染液時(shí)外溢。滴染液使覆蓋全部厚、薄血膜上，30秒至1分鐘后用滴管加等量的蒸餾水，輕輕搖動(dòng)載玻片，使蒸餾水和染液混合均勻，此時(shí)出現(xiàn)一層燦銅色浮膜(染色)，35分鐘后用水緩慢從玻片一端沖洗(注意勿先倒去染液或直對(duì)血膜沖洗)，涼干后鏡檢。(二)檢查微絲蚴(1) 新鮮血片檢查：晚間9時(shí)到次晨2時(shí)取血1滴滴于載玻片上，加蓋片，在低倍鏡下觀察，發(fā)現(xiàn)蛇形游動(dòng)的幼蟲(chóng)后，仍需做染色檢查，以確定蟲(chóng)種。(2) 厚血膜檢查：厚血膜的制作、溶血、固定與姬氏液染色同瘧原蟲(chóng)。但需取血3滴，也可用Delafieid蘇木染色法染色。該染液的配制方法如下：取蘇木素1g溶于純酒精或95%的

31、酒精10ml中，加飽和硫酸鋁銨(8%10%)100ml，倒入棕色瓶中，瓶口用兩層紗布扎緊，在陽(yáng)光下氧化24周，過(guò)濾，加甘油25ml和甲醇25ml，用時(shí)稀釋10倍左右，將溶血、固定的厚血膜置于德氏蘇木素液內(nèi)1015分鐘，在1%酸酒精中分色12分鐘，蒸餾水洗滌15分鐘，至血膜呈藍(lán)色，再用1%伊紅染色0.51分鐘，以水洗滌25分鐘，涼干后鏡檢。(3)活微絲蚴濃集法：在離心管內(nèi)加蒸餾水半管，加血液1012滴，再加生理鹽水混勻，離心(3000rpm/min)沉淀3分鐘，取沉渣檢查。或取靜脈血1ml，置于盛有0.1ml3.8%枸櫞酸鈉的試管中，搖勻，加水9ml，俟紅細(xì)胞溶化后，再離心2分鐘，倒去上清液，加

32、水再離心，取沉渣鏡檢。第三節(jié)排泄物與分泌物等的檢查1痰液痰中可能查見(jiàn)肺吸蟲(chóng)卵、溶組織內(nèi)阿米巴滋養(yǎng)體、棘球蚴的原頭蚴、糞類(lèi)圓線蟲(chóng)幼蟲(chóng)、蛔蚴、鉤蚴、塵螨等；卡氏肺孢子蟲(chóng)的包囊也可出現(xiàn)于痰中，但檢出率很低。（1）肺吸蟲(chóng)卵檢查：可先用直接涂片法檢查，如為陰性，改為濃集法集卵，以提高檢出率。直接涂片法：在潔凈載玻片上先加12滴生理鹽水，挑取痰液少許，最好選帶鐵銹色的痰，涂成痰膜，加蓋片鏡檢。如未發(fā)現(xiàn)肺吸蟲(chóng)卵，但見(jiàn)有夏科雷登晶體，提示可能是肺吸蟲(chóng)患者，多次涂片檢查為陰性者，可改用濃集法。濃集法：收集24小時(shí)痰液，置于玻璃杯中，加入等量10%NaOH溶液，用玻棒攪勻后，放入37C溫箱內(nèi)，數(shù)小時(shí)后痰液消化成稀

33、液狀。分裝于數(shù)個(gè)離心管內(nèi)，以1500rpm/min離心510分鐘，棄去上清液，取沉渣數(shù)滴涂片檢查。（2）溶組織內(nèi)阿米巴大滋養(yǎng)體檢查：取新鮮痰液作涂片。天冷時(shí)應(yīng)注意鏡臺(tái)上載玻片保溫。高倍鏡觀察，如為阿米巴滋養(yǎng)體，可見(jiàn)其伸出偽足并作定向運(yùn)動(dòng)。(3) 上述其他蠕蟲(chóng)幼蟲(chóng)及螨類(lèi)等宜用濃集法檢查。2. 十二指腸液和膽汁用十二指腸引流管抽取十二指腸液及膽汁，以直接涂片法鏡檢；也可以經(jīng)離心濃集后，取沉渣鏡檢?？蓹z查藍(lán)氏賈第鞭毛蟲(chóng)滋養(yǎng)體、華支睪吸蟲(chóng)卵、肝片形吸蟲(chóng)卵和布氏姜片蟲(chóng)卵等；在急性阿米巴肝膿腫患者膽汁中偶可發(fā)現(xiàn)大滋養(yǎng)體。檢查方法：可將各部分十二指腸引流液滴于載玻片上，加蓋片后直接鏡檢。為提高檢出率，常將各

34、部分引流液加生理鹽水稀釋攪拌后，分裝于離心管內(nèi)，以2000rpm/min,離心510分鐘，吸取沉渣涂片鏡檢。如引流液過(guò)于粘稠，應(yīng)先加10%NaOH消化后再離心。引流中的賈第蟲(chóng)滋養(yǎng)體常附著在粘液小塊上，或蟲(chóng)體聚集成絮片狀物。肝片形吸蟲(chóng)卵與姜片蟲(chóng)卵不易鑒別，但前者可出現(xiàn)于膽汁；而后者只見(jiàn)于十二指腸液中。3. 尿液取尿液35ml，離心(2000rpm/min)35分鐘，后取沉渣鏡檢。但乳糜尿需加等量乙醚，用力振蕩，使脂肪溶于乙醚。然后吸去脂肪層，離心，取沉渣鏡檢?？刹橐?jiàn)陰道毛滴蟲(chóng)、微絲蚴、埃及血吸蟲(chóng)卵4. 鞘膜積液主要檢查班氏微絲蚴。陰囊皮膚經(jīng)碘酒精消毒后，用注射器抽取鞘膜積液作直接涂片檢查，也可以

35、加適量生理鹽水稀釋離心，取沉渣鏡檢。5陰道分泌物檢查陰道毛滴蟲(chóng)。直接涂片法：用消毒棉簽在受檢者陰道后穹窿、子宮頸及陰道壁上取分泌物，然后用生理鹽水涂片法鏡檢，即可發(fā)現(xiàn)活動(dòng)的蟲(chóng)體。天氣寒冷時(shí)，應(yīng)注意保溫。懸滴法：先在一蓋玻片周緣涂一薄層凡士林，中間滴12滴生理鹽水。將陰道分泌物涂于生理鹽水中，翻轉(zhuǎn)蓋片小心覆蓋在一具凹孔的載玻片上，稍加壓使兩片粘合，液滴即懸于蓋片下面，鏡檢。第四節(jié)其他器官組織檢查1骨髓穿刺主要檢查杜氏利什曼原蟲(chóng)無(wú)鞭毛體。一般常作髂骨穿刺，囑患者側(cè)臥，暴露髂骨部位。視年齡大小，選用1720號(hào)帶有針芯的干燥無(wú)菌穿刺針，從髂骨前上棘后約1cm處刺入皮下當(dāng)針尖觸及骨面時(shí)，再慢慢地鉆入骨內(nèi)約0.51.0cm,即可拔出針芯，接一2ml干燥注射器，抽取骨髓液。取少許骨髓液作涂片；甲醇固定，同薄血膜染色法染色,油鏡檢查。2淋巴結(jié)穿刺（1）利什曼原蟲(chóng)：檢出率低于骨髓穿刺,但方法簡(jiǎn)便、安全。對(duì)于以往治療的患者,因其淋巴結(jié)內(nèi)原蟲(chóng)消失較慢,故仍有一定價(jià)值。穿