菊花的組織培養(yǎng)(市公開課)

1、課題課題1 1 菊花的組織培養(yǎng)菊花的組織培養(yǎng) 學(xué)習(xí)目標(biāo)學(xué)習(xí)目標(biāo) 掌握植物組織培養(yǎng)相關(guān)理論知識(shí)。掌握植物組織培養(yǎng)相關(guān)理論知識(shí)。 熟悉植物組織培養(yǎng)的基本過程。熟悉植物組織培養(yǎng)的基本過程。 理解細(xì)胞分化概念及脫分化，再分化。理解細(xì)胞分化概念及脫分化，再分化。 課題重點(diǎn)與難點(diǎn)課題重點(diǎn)與難點(diǎn) 課題重點(diǎn)：植物組織培養(yǎng)的基本過程。課題重點(diǎn)：植物組織培養(yǎng)的基本過程。 課題難點(diǎn)：植物組織培養(yǎng)過程中使用的無菌課題難點(diǎn)：植物組織培養(yǎng)過程中使用的無菌技術(shù)，細(xì)胞分化，脫分化，再分化。技術(shù)，細(xì)胞分化，脫分化，再分化?；顒?dòng)一：活動(dòng)一：1.什么是什么是細(xì)胞分化細(xì)胞分化？原因和結(jié)果？原因和結(jié)果？2.什么是什么是脫分化、再分化脫

2、分化、再分化？ 3.愈傷組織愈傷組織是怎樣形成的？有什么特點(diǎn)？是怎樣形成的？有什么特點(diǎn)？4.組織培養(yǎng)的組織培養(yǎng)的過程過程？以及組織培養(yǎng)的？以及組織培養(yǎng)的理論基礎(chǔ)理論基礎(chǔ)？活動(dòng)二：活動(dòng)二：1. 影響組織培養(yǎng)的因素？影響組織培養(yǎng)的因素？2.菊花組織培養(yǎng)應(yīng)注意的問題？菊花組織培養(yǎng)應(yīng)注意的問題？ 活動(dòng)三：活動(dòng)三：用自己的話把菊花組織培養(yǎng)的操作用自己的話把菊花組織培養(yǎng)的操作流程給描述出來流程給描述出來?（提示：（提示：怎樣配制怎樣配制MS培培養(yǎng)基養(yǎng)基?外植體消毒應(yīng)如何進(jìn)行外植體消毒應(yīng)如何進(jìn)行?接種、培養(yǎng)、接種、培養(yǎng)、移栽時(shí)應(yīng)注意什么問題移栽時(shí)應(yīng)注意什么問題? ）活動(dòng)一：活動(dòng)一：什么是什么是細(xì)胞分化細(xì)胞分

3、化？原因和結(jié)果？原因和結(jié)果？什么是什么是脫分化、再分化脫分化、再分化？ 愈傷組織愈傷組織是怎樣形成的？有什么特點(diǎn)？是怎樣形成的？有什么特點(diǎn)？組織培養(yǎng)的組織培養(yǎng)的過程過程？以及組織培養(yǎng)的？以及組織培養(yǎng)的理論基礎(chǔ)理論基礎(chǔ)？基礎(chǔ)知識(shí)基礎(chǔ)知識(shí)-相關(guān)概念相關(guān)概念 細(xì)胞分化：細(xì)胞分化： 在個(gè)體發(fā)育中，相同細(xì)胞的后代在形態(tài)、在個(gè)體發(fā)育中，相同細(xì)胞的后代在形態(tài)、 結(jié)構(gòu)、生理功能上發(fā)生穩(wěn)定性差異的過程結(jié)構(gòu)、生理功能上發(fā)生穩(wěn)定性差異的過程 基因在特定的時(shí)間和空間條件下的基因在特定的時(shí)間和空間條件下的選擇性表達(dá)的結(jié)果選擇性表達(dá)的結(jié)果形成各種組織器官形成各種組織器官結(jié)果：結(jié)果：原因：原因：2.2.脫分化：脫分化：由高

4、度分化的植物組織或細(xì)胞產(chǎn)生愈傷組織由高度分化的植物組織或細(xì)胞產(chǎn)生愈傷組織的過程，又叫去分化。的過程，又叫去分化。概念：概念： 脫分化產(chǎn)生的愈傷組織繼續(xù)進(jìn)行培養(yǎng)，又可脫分化產(chǎn)生的愈傷組織繼續(xù)進(jìn)行培養(yǎng)，又可以重新分化成根或芽等器官。以重新分化成根或芽等器官。3.3.再分化：再分化： 愈傷組織是愈傷組織是外植體外植體通過通過細(xì)胞分裂細(xì)胞分裂形成的，其細(xì)胞形成的，其細(xì)胞排列排列疏松而無規(guī)則疏松而無規(guī)則，高度高度液泡化液泡化呈呈無定形無定形狀態(tài)的薄狀態(tài)的薄壁細(xì)胞。壁細(xì)胞。4.4.愈傷組織愈傷組織 5.外植體外植體：由活體植物體上提取下來的，接種由活體植物體上提取下來的，接種在培養(yǎng)基上的無菌細(xì)胞、組織、器

5、官等。在培養(yǎng)基上的無菌細(xì)胞、組織、器官等。6.植物組織培養(yǎng)的基本過程植物組織培養(yǎng)的基本過程 離體器官、 組織或細(xì)胞 脫分化 愈傷組織 再分化 根、芽 植物體 離體條件下利用人工培養(yǎng)條件在無菌情況下離體條件下利用人工培養(yǎng)條件在無菌情況下培養(yǎng)、生長(zhǎng)、發(fā)育再生出完整植株的過程。培養(yǎng)、生長(zhǎng)、發(fā)育再生出完整植株的過程。7.植物組織培養(yǎng)的理論基礎(chǔ)：植物組織培養(yǎng)的理論基礎(chǔ)：細(xì)胞全能性：具有某種生物細(xì)胞全能性：具有某種生物全套遺傳信息全套遺傳信息的的任何一個(gè)活細(xì)胞，都具有發(fā)育成任何一個(gè)活細(xì)胞，都具有發(fā)育成完整個(gè)體完整個(gè)體的的能力能力，即每個(gè)生物細(xì)胞都具有，即每個(gè)生物細(xì)胞都具有全能性全能性。細(xì)胞全能性表達(dá)條件細(xì)

6、胞全能性表達(dá)條件： 離體、離體、一定的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、激素和其他一定的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、激素和其他 外界條件外界條件活動(dòng)二：活動(dòng)二： 影響組織培養(yǎng)的因素？影響組織培養(yǎng)的因素？ 菊花組織培養(yǎng)應(yīng)注意的問題？菊花組織培養(yǎng)應(yīng)注意的問題？影響植物組織培養(yǎng)的因素：影響植物組織培養(yǎng)的因素： 不同植物的組織培養(yǎng)難度不同不同植物的組織培養(yǎng)難度不同 同一種植物的不同組織培養(yǎng)難度不同同一種植物的不同組織培養(yǎng)難度不同 菊花的組織培養(yǎng)：菊花的組織培養(yǎng)：一般選擇未開化植株的一般選擇未開化植株的莖上部新萌生的側(cè)枝莖上部新萌生的側(cè)枝（1）、外植體的選?。⑼庵搀w的選取 （2）、培養(yǎng)基的配制）、培養(yǎng)基的配制(MS培養(yǎng)基培養(yǎng)基) 大量元素：大

7、量元素：N、P、K、Ca、Mg、S 微量元素：微量元素：B、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、I、Co 有機(jī)物：甘氨酸、煙酸、肌醇、維生素、蔗糖等有機(jī)物：甘氨酸、煙酸、肌醇、維生素、蔗糖等 植物激素：生長(zhǎng)素、細(xì)胞分裂素、赤霉素等植物激素：生長(zhǎng)素、細(xì)胞分裂素、赤霉素等討論：你能說出各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的作用嗎？同專題討論：你能說出各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的作用嗎？同專題2 2中微生物培養(yǎng)基的配方相比，中微生物培養(yǎng)基的配方相比，MSMS培養(yǎng)基的配方培養(yǎng)基的配方有哪些明顯的不同？有哪些明顯的不同？答：答：微量元素和大量元素提供植物細(xì)胞生活所必微量元素和大量元素提供植物細(xì)胞生活所必需的無機(jī)鹽；蔗糖提供碳源，同時(shí)能夠維持細(xì)胞需

8、的無機(jī)鹽；蔗糖提供碳源，同時(shí)能夠維持細(xì)胞的滲透壓；甘氨酸、維生素等物質(zhì)主要是為了滿的滲透壓；甘氨酸、維生素等物質(zhì)主要是為了滿足離體植物細(xì)胞在正常代謝途徑受到一定影響后足離體植物細(xì)胞在正常代謝途徑受到一定影響后所產(chǎn)生的特殊營(yíng)養(yǎng)需求。微生物培養(yǎng)基以有機(jī)營(yíng)所產(chǎn)生的特殊營(yíng)養(yǎng)需求。微生物培養(yǎng)基以有機(jī)營(yíng)養(yǎng)為主。與微生物的培養(yǎng)不同，養(yǎng)為主。與微生物的培養(yǎng)不同，MSMS培養(yǎng)基則需培養(yǎng)基則需提供大量無機(jī)營(yíng)養(yǎng)，無機(jī)鹽混合物包括植物生長(zhǎng)提供大量無機(jī)營(yíng)養(yǎng)，無機(jī)鹽混合物包括植物生長(zhǎng)必須的大量元素和微量元素兩大類。必須的大量元素和微量元素兩大類。（4）、消毒）、消毒在培養(yǎng)的整個(gè)過程中，都需要是一個(gè)無菌環(huán)境在培養(yǎng)的整個(gè)過程

9、中，都需要是一個(gè)無菌環(huán)境 （5）、）、pH、溫度、光照、溫度、光照菊花：菊花： pH=5.8 溫度控制在溫度控制在1822 每日光每日光照照12h 用自己的話把菊花組織培養(yǎng)的操作流程給用自己的話把菊花組織培養(yǎng)的操作流程給描述出來描述出來?（提示：（提示：怎樣配制怎樣配制MS培養(yǎng)基培養(yǎng)基?外外植體消毒應(yīng)如何進(jìn)行植體消毒應(yīng)如何進(jìn)行?接種、培養(yǎng)、移栽時(shí)接種、培養(yǎng)、移栽時(shí)應(yīng)注意什么問題應(yīng)注意什么問題? ）活動(dòng)三：活動(dòng)三：制備制備MS固體固體培養(yǎng)基培養(yǎng)基外植體消毒外植體消毒 接種接種 培培 養(yǎng)養(yǎng)栽栽 培培 實(shí)驗(yàn)操作實(shí)驗(yàn)操作 移移 栽栽沖洗沖洗酒精酒精無菌水沖洗無菌水沖洗氯化汞氯化汞無菌無菌水沖洗至少三次

10、之上水沖洗至少三次之上流水沖洗流水沖洗酒精酒精無菌水沖洗無菌水沖洗氯化汞氯化汞無菌水沖洗至少三次之上無菌水沖洗至少三次之上思考：你打算做幾組重復(fù)？打算設(shè)置對(duì)照實(shí)驗(yàn)思考：你打算做幾組重復(fù)？打算設(shè)置對(duì)照實(shí)驗(yàn)嗎？嗎？ 答：每種材料或配方至少要做一組以上的重復(fù)。答：每種材料或配方至少要做一組以上的重復(fù)。設(shè)置對(duì)照實(shí)驗(yàn)可以取用一個(gè)經(jīng)過滅菌的裝有培養(yǎng)設(shè)置對(duì)照實(shí)驗(yàn)可以取用一個(gè)經(jīng)過滅菌的裝有培養(yǎng)基的錐形瓶，與接種操作后的錐形瓶一同培養(yǎng)，基的錐形瓶，與接種操作后的錐形瓶一同培養(yǎng)，用以說明培養(yǎng)基制作合格，沒有被雜菌污染。用以說明培養(yǎng)基制作合格，沒有被雜菌污染。思思 考考 在整個(gè)操作過程中，是如何來實(shí)現(xiàn)無菌環(huán)境的？在整個(gè)操作過程中，是如何來實(shí)現(xiàn)無菌環(huán)