醫(yī)藥工業(yè)潔凈室(區(qū))懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測試方法參考模板

1、ICS 13.040.30C 10中華人民共和國國家標準  GB/T 16292162941996  醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測試方法  Test method for airborne particles, airborne microbeand settling microbe in clean room(area)of the pharmaceutical industry   1996-04-10發(fā)布 1996-10-01實施     

2、 國家技術(shù)監(jiān)督局 發(fā)布目 次 GB/T 162921996 醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）懸浮粒子的測試方法GB/T 162931996 醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）浮游菌的測試方法GB/T 162941996 醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）沉降菌的測試方法                          GB/T 162921996前 言本標準等效采用

3、美國聯(lián)邦標準FS-209E1992潔凈室和潔凈區(qū)內(nèi)空氣浮游粒子潔凈等級，并參考JGJ 7190潔凈室施工及驗收規(guī)范制定的。懸浮粒子和微生物的測試是評價醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）空氣潔凈度的主要指標。本標準用懸浮粒子的測試來評價潔凈室（區(qū)）空氣中的塵粒數(shù)。醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）的懸浮粒子測試方法，應(yīng)采用本標準。本標準從生效之日起，廢止YY/T 014193。本標準的附錄A是標準的附錄。本標準的附錄B是提示的附錄。本標準由國家醫(yī)藥管理局提出并歸口。本標準起草單位：上海醫(yī)藥管理局藥品測試所。本標準主要起草人：紀煒、徐進慶、沈建華。      

4、60;       中華人民共和國國家標準GB/T162921996醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）懸浮粒子的測 試 方 法Test method for airborne particles in cleanroom (area) of the pharmaceutical industry 1 范圍本標準規(guī)定了醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）中懸浮粒子的測試方法和懸浮粒子而言的空氣潔凈度的評定。本標準適用于醫(yī)藥工業(yè)潔凈（區(qū)）中懸浮粒子潔凈度的監(jiān)測和潔凈度等級的驗證。2 引用標準下列標準所包含的條文，通過在本標準中引用而構(gòu)成為本標準的條

5、文。本標準出版時，所示版本均為有效，所有標準都會被修訂，使用本標準的各方應(yīng)探討使用下列標準最新版本的可能性。JGJ 7190 潔凈室施工及驗收規(guī)范3 定義本標準采用下列定義。3.1 潔凈室（區(qū)） clean room（area）對塵粒及微生物污染規(guī)定需進行環(huán)境控制的房間或區(qū)域。其建筑結(jié)構(gòu)、裝備及其使用均具有減少對該區(qū)域內(nèi)污染源的介入、產(chǎn)生和滯留的功能。3.2 局部空氣凈化 localized air purification僅使室內(nèi)工作區(qū)域特定的局部空間的空氣含懸浮粒子濃度達到規(guī)定的空氣潔凈度級別，這種方式稱局部空氣凈化。3.3 粒子 particle一般尺寸為0.0011000m的固態(tài)和液態(tài)

6、物質(zhì)。3.4 潔凈度 cleanliness潔凈環(huán)境內(nèi)單位體積空氣中含大于或等于某一粒徑的懸浮粒子的允許統(tǒng)計數(shù)。3.5 單向流 unidirectional air flow（普稱為層流laminar flow）沿著平行流線，以一定流速、單一通路、單一方向流動的氣流。3.6 非單向流 nonunidirectional air flow（曾稱為亂流turbulent flow）具有多個通路循環(huán)特性或氣流方向不平行的，不滿足單向流定義的氣流。3.7 t分布 t distribution正態(tài)總體中的一種抽樣分布，其分布函數(shù)為總體平均值一樣本平均值標準誤差  t ··&

7、#183;··········(1)3.8 置信上限（UCL） upper confidence limit從正態(tài)分布抽樣得到的實際均值按給定的置信度（此外為95%）計算得到的估計上限將大于此實際均值，則稱計算得到的這一均值估計上限為置信上限。3.9 靜態(tài)測試 at-rest test潔凈室（區(qū)）凈化空氣調(diào)節(jié)系統(tǒng)已處于正常運行狀態(tài)，工藝設(shè)備已安裝，潔凈室（區(qū)）內(nèi)沒有生產(chǎn)人員的情況下進行的測試。3.10 動態(tài)測試 operational test潔凈室（區(qū)）已處于正常生產(chǎn)狀態(tài)下進行的測試。4 測試

8、方法4.1 方法提要本測試方法采用計數(shù)濃度法，即通過測定潔凈環(huán)境內(nèi)單位體積空氣中含大于或等于某粒徑的懸浮粒子數(shù)，來評定潔凈室（區(qū)）的懸浮粒子潔凈度等級。4.2 儀器 a）光散射粒子計數(shù)器（用于粒徑大于或等于0.5m的懸浮粒子計數(shù)）；b）濾膜顯微鏡（用于粒徑大于或等于5m的懸浮粒子計數(shù)）。4.2.1 光散射粒子計數(shù)器原理空氣中的懸浮粒子在光的照射下產(chǎn)生光散射現(xiàn)象，散射光的強度與粒子的表面積成正比。4.2.2 光散射粒子計數(shù)器使用要點使用儀器時應(yīng)嚴格按照儀器說明書操作。4.2.2.1 儀器開機，預熱至穩(wěn)定后，方可按說明書的規(guī)定對儀器進行校正。4.2.2.2 采樣管口置采樣點采樣時，在確認計數(shù)穩(wěn)定后

9、方可開始連續(xù)讀數(shù)。4.2.2.3 采樣管必須干凈，嚴禁滲漏。4.2.2.4 采樣管的長度應(yīng)根據(jù)儀器的允許長度。除另有規(guī)定外，長度不得大于1.5m。4.2.2.5 計數(shù)器采樣口和儀器工作位置應(yīng)處在同一氣壓和溫度下，以免產(chǎn)生測量誤差。4.2.2.6 必須按照儀器的檢定周期，定期對儀器作檢定。以保證測試數(shù)據(jù)的可靠性。5 測試規(guī)則5.1 測試條件5.1.1 溫度和濕度潔凈室（區(qū)）的溫度和相對濕度應(yīng)與其生產(chǎn)及工藝要求相適應(yīng)（溫度控制在1824,相對濕度控制在45%60%之間為宜）。5.1.2 壓差空氣潔凈度不同的潔凈室（區(qū)）之間的壓差應(yīng)4.9Pa，空氣潔凈度級別要求高的潔凈室（區(qū)）對相鄰的空氣潔凈度級別

10、低的潔凈室（區(qū)）一般要求呈相對正壓。5.2 測試狀態(tài)有靜態(tài)測試和動態(tài)測試。靜態(tài)測試時，室內(nèi)測試人員不得多于2人。測試報告中應(yīng)標明測試時所采用的狀態(tài)。5.3 測試時間5.3.1 對單向流，測試應(yīng)在凈化空氣調(diào)節(jié)系統(tǒng)正常運行時間不少于10min后開始。5.3.2 對非單向流，測試應(yīng)在凈化空氣調(diào)節(jié)系統(tǒng)正常運行時間不少于30min后開始。5.4 懸浮粒子計數(shù)5.4.1 采樣點數(shù)目及其布置懸浮粒子潔凈度監(jiān)測的采樣點數(shù)目及其布置應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品的生產(chǎn)及工藝關(guān)鍵操作區(qū)設(shè)置。采樣點布置規(guī)則見附錄A（標準的附錄）。懸浮粒子潔凈度等級驗證的采樣點數(shù)目應(yīng)按5.4.1.1和5.4.1.2布置。5.4.1.1 最少采樣點數(shù)目懸

11、浮粒子潔凈度測試的最少采樣點數(shù)目可查表1確定。表1 最少采樣點數(shù)目面 積m2潔 凈 度 級 別10010 000100 000<10232210<2042220<4082240<1001642100<20040103200<40080206400<100016040131 000<2 000400100322 00080020063注：表中的面積，對于單向流潔凈室，指的是送風面積，對非單向流潔凈室，指的是房間面積。5.4.1.2 采樣點的位置 a）采樣點一般在離地面0.8m高度的水平面上均勻布置。b）采樣點多于5點時，也可以在離地面0.8m1.5

12、m高度的區(qū)域內(nèi)分層布置，但每層不少于5點。5.4.2 采樣點的限定對任何小潔凈室或局部空氣凈化區(qū)域，采樣點的數(shù)目不得少于2個，總采樣次數(shù)不得不于5次。每個采樣點的采樣次數(shù)可以多于1次，且不同采樣點的采樣次數(shù)可以不同。5.4.3 采樣量不同潔凈度級別每次最小的采樣量見表2。    表2 最小采樣量潔凈度級別采樣量，L/次0.5m5m1005.6610 0002.838.5100 0002.838.55.4.4 采樣注意事項5.4.4.1 在確認潔凈室（區(qū)）送風量和壓差達到要求后，方可進行采樣。5.4.4.2 對于單向流，計數(shù)器采樣管口朝向應(yīng)正對氣流方向，對

13、于非單向流，采樣管口宜向上。5.4.4.3 布置采樣點時，應(yīng)避開回風口。5.4.4.4 采樣時，測試人員應(yīng)在采樣口的下風側(cè)。6 結(jié)果計算懸浮粒子濃度的采樣數(shù)據(jù)應(yīng)按下述步驟作統(tǒng)計計算：6.1 采樣點的平均粒子濃度C1+C2 +···+CNN A= ···············（2）式中：A某一采樣點的平均粒子濃度，粒/m3; Ci某一采樣點的粒子濃度（i=1，2，···，N），粒/ m3

14、； N某一采樣點上的采樣次數(shù)，次。6.2 平均值的均值A(chǔ)1+A2 +···+ALL M= ···············（3）式中：M平均值的均值，即潔凈室（區(qū)）的平均粒子濃度，粒/m3； Ai某一采樣點的平均粒子濃度（i=1，2，···，L），粒/m3； L某一潔凈室（區(qū)）內(nèi)的總采樣點數(shù)，個。6.3 標準誤差（A1-M）2 +（A2-M）2 +（AL-M）2L（L-1） SE=

15、83;·····················（4） 式中：SE平均值均值的標準誤差，粒/ m3 。6.4 置信上限 UCL=M+t×SE ···············（5）式中：UCL平均值均值的95%置信上限，粒/ m3；

16、 t95%置信上限的t分布系數(shù)，見表3。表3 95%置信上限的t分布系數(shù)采樣點數(shù)L23456789>9t6.312.922.352.132.021.941.901.86 注：當采樣點數(shù)多于9點時，不需要計算UCL。7 結(jié)果評定判斷懸浮粒子潔凈度級別應(yīng)依據(jù)下述二個條件。7.1 每個采樣點的平均粒子濃度必須低于或等于規(guī)定的級別界限，即Ai級別界限。7.2 全部采樣點的粒子濃度平均值均值的95%置信上限必須低于或等于規(guī)定的級別界限，即UCL級別界限。            &

17、#160;  附 錄 A（標準的附錄）潔凈室（區(qū)）采樣點布置A1 潔凈室（區(qū)）采樣點布置力求均勻，避免采樣點在某局部區(qū)域過于稀疏。下列采樣點的圖示可作參考。 · ·· ·       注：·為采樣點。 圖A1A2 潔凈棚（層流罩），潔凈工作臺等局部空氣凈化設(shè)施的采樣點布置：A2.1 水平單向流  A2.2 垂直單向流 圖A2    圖A3采樣點數(shù)參見5.4.1.1，采樣點一般在工作臺面上0.2m高度的平面上均勻布置。 

18、0;     附 錄 B（提示的附錄）國內(nèi)外有關(guān)懸浮粒子的測定的標準  潔凈度級別中國衛(wèi)生部GMP（1992年修訂）美國聯(lián)邦標準FS-209E世界衛(wèi)生組織（WHO）及歐共體（EC）GMP塵粒數(shù)/m3等級限值/ m3塵粒的最大允許數(shù)/ m30.5m5m0.5m5m0.5m5m1003 50003 5303 50010 000350 0002 000353 0002 470350 0002 000100 0003500 00020 0003 530 00024 7003 500 00020 000  

19、0;                        GB/T 162931996  前 言本標準依照國內(nèi)外藥品生產(chǎn)管理規(guī)范（GMP）的要求，非等效采用美國國家航空及宇宙航行局NASA標準NHB5340-2關(guān)于潔凈室和潔凈室工作臺微生物的控制標準，并參考JGJ 7190潔凈室施工驗收規(guī)范制定的。懸浮粒子和微生物的測試是評價醫(yī)藥工業(yè)潔凈室和潔

20、凈區(qū)空氣潔凈度的主要指標。本標準用浮游菌評價潔凈室和潔凈區(qū)空氣中的微生物。醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）浮游菌的測試應(yīng)采用本標準的規(guī)定。本標準的附錄A、附錄B、附錄C都是標準的附錄。本標準的附錄D是提示的附錄。本標準由國家醫(yī)藥管理局提出并歸口。本標準起草單位：中美上海施貴寶制藥有限公司、上海醫(yī)藥局藥品測試所、上海四藥股份有限公司。本標準主要起草人：顧鋒、錢周、步伯蓀、唐小珍。             中華人民共和國國家標準GB/T162931996醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）浮游菌的

21、測 試 方 法Test method for airborne microbe in cleanroom(area) of the pharmaceutical industry 1 范圍本標準規(guī)定了醫(yī)藥工業(yè)潔凈室和潔凈區(qū)中浮游菌測試條件、測試方法。本標準適用于醫(yī)藥工業(yè)潔凈室和潔凈區(qū)，無菌室或無菌區(qū)域（包括潔凈工作臺）的浮游菌的測定和環(huán)境的驗證。2 引用標準下列標準包含的條文，通過在本標準中引用而構(gòu)成為本標準的條文。本標準出版時，所示版本均為有效。所有標準都會被修訂，使用本標準的各方應(yīng)探討使用下列標準最新版本的可能性。YY/T 0188.61995 藥品檢驗操作規(guī)程 第6部分：藥品生

22、物測定法3 定義本標準采用下列定義。3.1 潔凈室（區(qū)） clean room（area）對塵粒及微生物污染規(guī)定需進行環(huán)境控制的房間或區(qū)域。其建筑結(jié)構(gòu)、裝備及其使用均具有減少對該區(qū)域內(nèi)污染源的介入、產(chǎn)生和滯留的功能。3.2 潔凈工作臺 cleaning work station一種工作臺或者與之類似的一個封閉圍擋工作區(qū)。其特點是自身能夠供給經(jīng)過過濾的空氣或氣體，如垂直層流罩、水平層流罩、垂直層流潔凈工作臺、水平層流潔凈工作臺、自凈器等。3.3 菌落 colony forming units細菌培養(yǎng)后，由一個或幾個細菌繁殖而形成的一細菌集落，簡稱CFU。通常用個數(shù)表示。3.4 浮游菌 airbo

23、rne microbe用本標準提及的方法收集懸浮在空氣中的活微生物粒子，通過專門的培養(yǎng)基，在適宜的生長條件下繁殖到可見的菌落數(shù)。3.5 浮游菌濃度 airborne microbe concentration單位體積空氣中含浮游菌菌落數(shù)的多少，以計數(shù)濃度表示，單位是個/m3或個/L。3.6 懸浮粒子 airborne particles可懸浮在空氣中的尺寸一般在0.001m1000m之間的固體、液體或兩者的混合物質(zhì)，包括生物性粒子和非生物性粒子。3.7 潔凈度 cleanliness潔凈環(huán)境內(nèi)單位體積空氣中含大于或等于某一粒徑的懸浮粒子的允許統(tǒng)計數(shù)。3.8 單向流 unidirectional

24、 air flow（曾稱為層流laminar flow）沿著平行流線，以單一通路以一定流速向單一方向流動的氣流。3.9 非單向流 nonunidirectional air flow（曾稱為亂流turbulent flow）具有多個通路循環(huán)特性或氣流方向不平行的，不滿足單向流定義的氣流。3.10 靜態(tài)測試 at-rest test潔凈室（區(qū)）凈化空氣調(diào)節(jié)系統(tǒng)已處于正常運行狀態(tài)，工藝設(shè)備已安裝，潔凈室（區(qū)）內(nèi)沒有生產(chǎn)人員的情況下進行的測試。3.11 動態(tài)測試 operational test潔凈室（區(qū)）已處于正常生產(chǎn)狀態(tài)下進行的測試。4 測試方法4.1 方法提要本方法采用計數(shù)濃度法，即通過收集懸

25、游在空氣中的生物性粒子于專門的培養(yǎng)基，經(jīng)若干時間，在適宜的生長條件下讓其繁殖到可見的菌落進行計數(shù)，從而判定潔凈環(huán)境內(nèi)單位體積空氣中的活微生物數(shù)，以此來評定潔凈室（區(qū)）的潔凈度。4.2 所用的儀器、設(shè)備和培養(yǎng)基 a）浮游菌采樣器；b）真空抽氣泵；c）培養(yǎng)皿；d）培養(yǎng)基；e）恒溫培養(yǎng)箱。4.3 浮游菌采樣器浮游菌采樣器宜采用撞擊法機理的采樣器，一般采用狹縫式采樣器或離心式采樣器。4.3.1 采用的浮游菌采樣器必須要有流量計和定時器。4.3.2 狹縫式采樣器的原理狹縫式采樣器由附加的真空抽氣泵抽氣，通過采樣器的縫隙式平板，將采集的空氣噴射并撞擊到緩慢旋轉(zhuǎn)的平板培養(yǎng)基表面上，附著的活微生物粒子經(jīng)培養(yǎng)后

26、形成菌落，予以計數(shù)。4.3.3 離心式采樣器的原理離心式采樣器由于內(nèi)部風機的高速旋轉(zhuǎn)，氣流從采樣器前部吸入從后部流出，在離心力的作用下，空氣中的活微生物粒子有足夠的時間撞擊到專用的固形培養(yǎng)條上，經(jīng)培養(yǎng)后形成菌落，予以計數(shù)。4.3.4 狹縫式采樣器的使用要點應(yīng)嚴格按儀器說明書的要求進行操作。4.3.4.1 校驗采樣器必須按儀器的檢定周期，定期對儀器作檢定，以保證測試數(shù)據(jù)的可靠性。校驗的項目有：定時器、轉(zhuǎn)盤轉(zhuǎn)速、流量計。4.3.2 每次測試前應(yīng)按說明書上的規(guī)定，先接通電源，啟動真空抽氣泵，然后調(diào)節(jié)流量計及定時器。4.3.4.3 空氣采樣量根據(jù)需要選定。已知采樣器的流量（L/min），設(shè)定采樣時間（

27、min），兩者相乘即采樣量（L）。4.3.4.4 注意事項4.3.4.4.1 采樣口必須用便于消毒及化學性能穩(wěn)定的材料制造。4.3.4.4.2 采樣管嚴禁滲漏，內(nèi)壁應(yīng)光滑。4.3.4.4.3 采樣管的長度應(yīng)根據(jù)測點的高度定，盡量減少彎曲。4.4 真空抽氣泵4.4.1 真空抽氣泵的排氣量應(yīng)與采樣器匹配。4.4.2 宜采用無油真空抽氣泵，必要時可在非氣口安裝氣體過濾器。4.4.3 真空抽氣泵安裝的位置必須適當，一般裝在采樣器下面。4.5 培養(yǎng)皿4.5.1 狹縫式采樣器一般采用Æ 150mm×15mm、Æ 90mm×15mm、Æ 65mm×

28、15mm三種規(guī)格的硼硅酸玻璃培養(yǎng)皿?？筛鶕?jù)所選用采樣器選擇合適的培養(yǎng)皿。4.5.2 離心式采樣器采用專用的固形培養(yǎng)條。4.6 培養(yǎng)基普通肉湯瓊脂培養(yǎng)基或其他藥典認可的培養(yǎng)基。其配制方法見附錄A（標準的附錄）。4.7 恒溫培養(yǎng)箱必須定期對培養(yǎng)箱的溫度計進行檢定。4.8 測試步驟4.8.1 測試前儀器、培養(yǎng)皿表面必須嚴格消毒。4.8.1.1 采樣器進入被測房間前先用消毒房間的消毒劑滅菌，用于100級潔凈室的采樣器宜一直放在被測房間內(nèi)。4.8.1.2 用消毒劑擦凈培養(yǎng)皿的外表面。4.8.1.3 采樣前，先用消毒劑消毒采樣器的頂蓋、轉(zhuǎn)盤以及罩子的內(nèi)外面，采樣結(jié)束，再用消毒劑輕輕噴射罩子的內(nèi)壁和轉(zhuǎn)盤。4

29、.8.1.4 采樣口及采樣管，使用前必須高溫滅菌。如用消毒劑對采樣管的外壁及內(nèi)壁進行消毒時，應(yīng)將管中的殘留液倒掉并晾干。4.8.1.5 采樣者應(yīng)穿戴與被測潔凈區(qū)域相應(yīng)的工作服，在轉(zhuǎn)盤上放入或調(diào)換培養(yǎng)皿前，雙手用消毒劑消毒。4.8.2 狹縫式采樣器的采樣程序4.8.2.1 儀器經(jīng)消毒后先不放入培養(yǎng)皿，開動真空泵抽氣，使儀器中的殘余消毒劑蒸發(fā)，時間不少于5min，并調(diào)好流量、轉(zhuǎn)盤轉(zhuǎn)速。4.8.2.2 關(guān)閉真空泵，放入培養(yǎng)皿，蓋上蓋子后調(diào)節(jié)采樣器縫隙高度。4.8.2.3 置采樣口于采樣點后，依次開啟采樣器、真空泵，轉(zhuǎn)動定時器，根據(jù)采樣量設(shè)定采樣時間。4.8.3 培養(yǎng)4.8.3.1 全部采樣結(jié)束后，將

30、培養(yǎng)皿倒置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。4.8.3.2 在3035培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，時間不少于48h。4.8.3.3 每批培養(yǎng)基應(yīng)有對照試驗，檢驗培養(yǎng)基本身是否污染?？擅颗x定3只培養(yǎng)皿作對照培養(yǎng)。4.8.4 菌落計數(shù)4.8.4.1 用肉眼直接計數(shù)、標記或在菌落計數(shù)器上點計，然后用510倍放大鏡檢查，有否遺漏。4.8.4.2 若平板上有2個或2個以上的菌落重疊，可分辨時仍以2個或2個以上的菌落計數(shù)。4.8.5 注意事項4.8.5.1 使用前仔細檢查每個培養(yǎng)皿的質(zhì)量，培養(yǎng)基及培養(yǎng)皿有變質(zhì)、破損或污染的不能使用。4.8.5.2 采取一切措施防止采樣管的污染和其他人為對樣本的污染。4.8.5.3 對培養(yǎng)基、培養(yǎng)條

31、件及其他參數(shù)作詳細的記錄。4.8.5.4 由于細菌種類繁多，差別甚大，計數(shù)時一般用透射光于培養(yǎng)皿背面或正面仔細觀察，不要漏計培養(yǎng)皿邊緣生長的菌落，并須注意細菌菌落或培養(yǎng)基沉淀物的區(qū)別，必要時用顯微鏡鑒別。5 測試規(guī)則5.1 測試狀態(tài)5.1.1 浮游菌測試前，被測試潔凈室（或潔凈區(qū)）溫、濕度須達到規(guī)定的要求，靜壓差、換氣次數(shù)、空氣流速必須控制在規(guī)定值內(nèi)。5.1.2 浮游菌測試前，被測試潔凈室（或潔凈區(qū)）已經(jīng)過消毒。5.1.3 測試狀態(tài)有靜態(tài)和動態(tài)兩種，測試狀態(tài)的選擇必須符合生產(chǎn)的要求，并在報告中注明測試狀態(tài)。5.2 測試人員5.2.1 測試人員必須穿戴符合環(huán)境級別的工作服。5.2.2 靜態(tài)測試時

32、，室內(nèi)測試人員不得多于2人。5.3 測試時間5.3.1 對單向流，如100級凈化房間及層流工作臺，測試應(yīng)在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運行不少于10 min后開始。5.3.2 對非單向流，如10 000級，100 000級以上的凈化房間，測試應(yīng)在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運行不少于30 min后開始。5.4 浮游菌濃度計算5.4.1 采樣點數(shù)量及其布置5.4.1.1 最少采樣點數(shù)目浮游菌測試的最少采樣點數(shù)目分為日常監(jiān)測及環(huán)境驗證兩種情況，見表1。表1 最少采樣點數(shù)目面 積m2潔 凈 度 級 別10010 000100 000驗證監(jiān)測驗證監(jiān)測驗證監(jiān)測<1023121210<204221220<408

33、321240<100164412100<20040103200<400802064001604013注：1）表1中的面積，對于100級的單向流潔凈室（包括層流工作臺），指的是送風口表面積，對于10 000級，100 000級的非單向流潔凈室，指的是房間面積。 2）日常監(jiān)測的采樣點數(shù)目由生產(chǎn)工藝的關(guān)鍵操作點來確定。 a）對每個100級潔凈操作區(qū)域（如層流罩、層流工作臺），可在離藥物敞開口處30cm處設(shè)測點，每班一次。b）對每個10 000級潔凈工作區(qū)域（如藥物開口工作區(qū)）可在工作面處設(shè)測點，每班一次。5.4.1.2 采樣點的位置采樣點位置可以同懸浮粒子測試點。a）工作區(qū)測點位置

34、離地0.81.5m左右（略高于工作面）。b）送風口測點位置離開送風面30cm左右。c）可在關(guān)鍵設(shè)備或關(guān)鍵工作活動范圍處增加測點。采樣點布置的規(guī)則見附錄B（標準的附錄）。5.4.2 最小采樣量采樣量根據(jù)日常檢測及環(huán)境驗證定，每次最小采樣量見表2。表2 最小采樣量潔凈度級別采樣量，L/次日常監(jiān)測環(huán)境驗證100級6001 00010 000級400500100 000級01005.4.3 采樣次數(shù)每個采樣點一般采樣一次。5.4.4 采樣注意事項5.4.4.1 對于單向流或送風口，采樣器采樣管口朝向應(yīng)正對氣流方向；對于非單向流，采樣管口向上。5.4.4.2 布置采樣點時，至少應(yīng)離開塵粒較集中的回風口1

35、m以上。5.4.4.3 采樣時，測試人員應(yīng)站在采樣口的下風側(cè)。5.5 記錄測試報告中應(yīng)記錄房間溫度、相對濕度、壓差及測試狀態(tài)。測試報告的編寫見附錄C（標準的附錄）。5.6 結(jié)果計算5.6.1 用計數(shù)方法得出各個培養(yǎng)皿的菌落數(shù)。采樣量菌落數(shù)5.6.2 每個測點的浮游菌平均濃度的計算，見式（1）。平均濃度（個/m3）= ··············· （1）0.41例1：某測點采樣量為400L，菌落數(shù)為1，則： 平均濃度= =2.5個/m323例2：

36、某測點采樣量為2m3，菌落數(shù)為3，則： 平均濃度= =1.5個/m35.7 結(jié)果評定用浮游菌平均濃度判斷潔凈室（區(qū)）空氣中的微生物。5.7.1 每個測點的浮游菌平均濃度必須低于所選定的評定標準中關(guān)于細菌濃度的界限。5.7.2 若某測點的浮游菌平均濃度超過評定標準，則必須對此區(qū)域先行消毒，然后重新采樣兩次，兩次測試結(jié)果必須合格。                      

37、0;   附 錄 A（標準的附錄）培養(yǎng)基的準備及滅菌A1 培養(yǎng)基的準備培養(yǎng)基可以外購或自行配制。自行配制方法見YY/T0188.6第6章無菌檢查部分中關(guān)于此類培養(yǎng)基的配備和操作步驟。其他符合藥典靈敏度要求的培養(yǎng)基亦可以自行配制。A2 培養(yǎng)基平皿的制備A2.1 將培養(yǎng)皿置于121濕熱滅菌20min或180干熱滅菌2h。A2.2 將培養(yǎng)基加熱熔化，冷卻至45時，在無菌操作要求下將培養(yǎng)基注入培養(yǎng)皿。 注入量：j65mm培養(yǎng)皿 約10mL j90mm培養(yǎng)皿 約20mL j150mm培養(yǎng)皿 約60mLA3 細菌的培養(yǎng)待瓊脂凝固后，將培養(yǎng)基平皿倒置于3035的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)

38、48h，若培養(yǎng)基平皿上確無菌落生長，即可供采樣用。注：培養(yǎng)基平皿宜在28的環(huán)境中存放。           附 錄 B（標準的附錄）采樣點布置潔凈室和潔凈區(qū)采樣點的布置力求均勻，避免采樣點在某局部區(qū)域過于集中，某局部區(qū)域于稀疏。下列采樣點布置的圖示可作參考。· · · ·          注：·為采樣點   

39、0;             附 錄 C（標準的附錄）浮游菌測試報告 測試單位 測試日期 測試依據(jù) 生產(chǎn)批號 測試區(qū)域（房間或?qū)恿鞴ぷ髋_） 潔凈度級別 面積 m2測試狀態(tài) 溫度 相對濕度 %靜壓差 Pa采樣器名稱 型號 培養(yǎng)基名稱  送風口工作區(qū)采樣點編號No.        采樣速率，L/min       

40、; 采樣量，m3        開始時間        菌落數(shù)，CFU        平均濃度，CFU/m3        最高濃度 CFU/m3 最低濃度 CFU/m3評定標準 結(jié)論 測試人 日期 結(jié)果報告人 日期 批準人 日期    &

41、#160;  附 錄 D（提示的附錄）國內(nèi)外有關(guān)浮游菌測定的標準  表 D1潔凈度級別美國NASA標準NHB53402世界衛(wèi)生組織（WHO）GMP及歐洲共同體（EC）GMP中國衛(wèi)生部GMP（1992年修訂）生物性粒子最大允許數(shù)/m3微生物的最大允許數(shù)/m3活微生物數(shù)/m31003.55510 000176100100100 00088.4500500                GB/T 162

42、941996  前 言本標準依照國內(nèi)外藥品生產(chǎn)管理規(guī)范（GMP）的要求，非等效采用美國國家航空及宇宙航行局NASA標準NHB5340-2關(guān)于潔凈室和潔凈工作臺微生物的控制標準，并參考JGJ-90潔凈室施工驗收規(guī)范制定。懸浮粒子和微生物的測試是評價醫(yī)藥工業(yè)潔凈室和潔凈區(qū)空氣潔凈度的主要指標，本標準用沉降菌評價潔凈室和潔凈區(qū)空氣中的微生物。醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）沉降菌的測試應(yīng)采用本標準的規(guī)定。本標準的附錄A、附錄B、附錄C都是標準的附錄。本標準的附錄D是提示的附錄。本標準由國家醫(yī)藥管理局提出并歸口。本標準起草單位：上海市醫(yī)藥管理局藥品測試所。本標準主要起草人：錢周、步伯蓀、沈建華

43、、顧鋒、唐小珍。           中華人民共和國國家標準GB/T162941996醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）沉降菌的測 試 方 法Test method for settling microbe in cleanroom(area) of the pharmaceutical industry 1 范圍本標準規(guī)定了醫(yī)藥工業(yè)潔凈室和潔凈區(qū)中沉降菌的測試條件、測試方法。本標準適用于醫(yī)藥工業(yè)潔凈室和潔凈區(qū)，無菌室或無菌區(qū)域（包括潔凈工作臺）的沉降菌的測定和環(huán)境的驗證。2 引用標準下列

44、標準所包含的條文，通過在本標準中引用而構(gòu)成為本標準的條文。本標準出版時，所示版本均為有效。所有標準都會被修訂，使用本標準的各方應(yīng)探討使用下列標準最新版本的可能性。YY/T0188.61995藥品檢驗操作規(guī)程 第6部分：藥品生物測定法3 定義本標準采用下列定義3.1 潔凈室（區(qū)） clean room(area)對塵粒及微生物污染規(guī)定需進行環(huán)境控制的房間或區(qū)域。其建筑結(jié)構(gòu)、裝備及其使用均具有減少對該區(qū)域內(nèi)污染源的介入、產(chǎn)生和滯留的功能。3.2 潔凈工作臺 cleaning work station一種工作臺或者與之類似的一個封閉圍擋工作區(qū)其特點是自身能夠供給經(jīng)過過濾的空氣或氣體，如垂直層流置、水

45、平層流罩、垂直層流潔凈工作、水平層流潔凈工作臺、自凈器等。3.3 潔凈度 cleanliness潔凈環(huán)境內(nèi)單位體積空氣中含大于或等于某一粒徑的懸浮粒子的允許統(tǒng)計數(shù)。3.4 菌落 colony forming unist細菌培養(yǎng)后，由一個或幾個細菌繁殖而形成的一細菌集落，簡稱CFU。通常用個數(shù)表示。3.5 沉降菌 settling microbe用本標準提及的方法收集到的活微生物粒子，通過專用的培養(yǎng)基，在適宜的生長條件下繁殖到可見的菌落數(shù)。3.6 懸浮粒子 ailborne Paritical可懸浮在空氣中的尺寸一般在0.001m1 000m之間的固體、液體或兩者的混合物質(zhì)，包括生物性粒和非生物

46、性粒子。3.7 單向流unidirectional air flow（曾稱為層流laminar flow）沿著平行流線，以單一通路以一定流速向單一方向流動的氣流。3.8 非單向流nonunidirectional air flow（曾稱為亂流turbulent flow）具有多個通路循環(huán)特性或氣流方向不平行的，不滿足單向流定義的氣流。3.9 靜態(tài)測試 atrest test潔凈室（區(qū)）凈化空氣調(diào)節(jié)系統(tǒng)已處于正常運行狀態(tài)，工藝設(shè)備已安裝，潔凈室（區(qū)）內(nèi)沒有生產(chǎn)人員的情況下進行的測試。3.10 動態(tài)測試 operational test潔凈室（區(qū)）已處于正常生產(chǎn)狀態(tài)下進行的測試。4 測試方法4.1

47、 方法概述本測試方法采用沉降法，即通過自然沉降原理收集在空氣中的生物粒子于培養(yǎng)基平皿，經(jīng)若干時間，在適宜的條件下讓其繁殖到可見的菌落進行計數(shù)，以平板培養(yǎng)皿中的菌落數(shù)來判定潔凈環(huán)境內(nèi)的活微生物數(shù)，并以此來評定潔凈室（區(qū)）的潔凈度。4.2 所用的儀器和設(shè)備4.2.1 高壓消毒鍋使用時應(yīng)嚴格按照儀器說明書操作。4.2.2 恒溫培養(yǎng)箱必須定期對培養(yǎng)箱的溫度計進行檢定。4.2.3 培養(yǎng)皿一般采用Æ90mm×15mm的硼硅酸玻璃培養(yǎng)皿。4.2.4 培養(yǎng)基普通肉湯瓊脂培養(yǎng)基或其他藥典認可的培養(yǎng)基。其配制方法見附錄A（標準的附錄）。4.3 測試步驟4.3.1 采樣方法將已制備好的培養(yǎng)皿按5

48、.4.1.2的要求放置，打開培養(yǎng)皿蓋，使培養(yǎng)基表面暴露0.5h，再將培養(yǎng)皿蓋蓋上后倒置。4.3.2 培養(yǎng)4.3.2.1 全部采樣結(jié)束后，將培養(yǎng)倒置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。4.3.2.2 在3035培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，時間不少于48h。4.3.2.3 每批培養(yǎng)基應(yīng)有對照試驗，檢驗培養(yǎng)基本身是否污染?？擅颗x定3只培養(yǎng)皿作對照培養(yǎng)。4.3.3 菌落計數(shù)4.3.3.1 用肉眼直接計數(shù)，標記或在菌落計數(shù)器上點計，然后用510倍放大鏡檢查，不否遺漏。4.3.3.2 若培養(yǎng)皿上有2個或2個以上的菌落重疊，可分辨時仍以2 個或2個以上菌落計數(shù)。4.4 注意事項4.4.1 測試用具要作滅菌處理，以確保測試的可靠性、正確

49、性。4.4.2 采取一切措施防止人為對樣本的污染。4.4.3 對培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件及其他參數(shù)作詳細的記錄。4.4.4 由于細菌種類繁多，差別甚大，計數(shù)時一般用透射光于培養(yǎng)皿背面或正面仔細觀察，不要漏計培養(yǎng)皿邊緣生長的菌落，并須注意細菌菌落與培養(yǎng)基沉定物的區(qū)別，必要時用顯微鏡鑒別。4.4.5 采樣前應(yīng)仔細檢查每個培養(yǎng)皿的質(zhì)量，如發(fā)現(xiàn)變質(zhì)、破損或污染的應(yīng)剔除。5 測試規(guī)則5.1 測試狀態(tài)5.1.1 沉降菌測試前，被測試潔凈室（區(qū)）的溫濕度須達到規(guī)定的要求，靜壓差、換氣次數(shù)、空氣流速必須控制在規(guī)定值內(nèi)。5.1.2 沉降菌測試前，被測試潔凈室（區(qū)）已經(jīng)過消毒。5.1.3 測試狀態(tài)有靜態(tài)和動態(tài)兩種，測試狀

50、態(tài)的選擇必須符合生產(chǎn)的要求，并在報告中注明測試狀態(tài)。5.2 測試人員5.2.1 測試人員必須穿戴符合環(huán)境潔凈度級別的工作服。5.2.2 靜態(tài)測試時，室內(nèi)測試人員不得多于二人。5.3 測試時間5.3.1 對單向流，如100級凈化房間及層流工作臺，測試應(yīng)在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運行不少于10min后開始。5.3.2 對非單向流，如10 000級、100 000級以上的凈化房間，測試應(yīng)在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運行不少于30min后開始。5.4 沉降菌計數(shù)5.4.1 采樣點數(shù)目及其布置5.4.1.1 最少采樣點數(shù)目沉降法的最少采樣點數(shù)可按表1確定。表1 最少采樣點數(shù)目面 積m2潔 凈 度 級 別10010 000

51、100 000<102322<20422<4082240<1001642100<20040103200<40080206400<100016040131 000<2 00040010032200080020063注：表中的面積，對于單向流潔凈室，指的是送風面面積，對非單向流潔凈室是指的房間面積。在滿足最少測點數(shù)的同時，還宜滿足最少培養(yǎng)皿數(shù)，見表2。 表2 最少培養(yǎng)皿數(shù)潔凈度級別所需Æ90mm培養(yǎng)皿數(shù)（以沉降0.5h 計）100142210 000100 0005.4.1.2 采樣點的布置采樣點的位置可以同懸浮粒子測試點。a）工作區(qū)采樣點的位置離地0.8m1.5m左右（略高于工作面）。b）可在關(guān)鍵設(shè)備或關(guān)鍵工作活動范圍處增加采樣點。采樣點位置的詳