細胞電泳實驗

1、實驗十二 細胞電泳 制作人：單成彬Review about basic theory and experimental methods of a niubility method目錄CONTENTS一、實驗目的Research Background01二、實驗原理Basic Conception02五、作業(yè)Practical Application05三、實驗用品 Theoretical Research03四、實驗方法Experimental Method04PARTONE實驗目的實驗目的4了解細胞電泳的原理及意義學習細胞(包括細胞器)電泳速度及其電位的測定方法。PART ONEPART T

2、WOPART TwoPARTTWO實驗原理二、實驗原理6 所謂細胞電泳，就是將細胞制成懸浮溶液使其單個游離的細胞分散于等滲的介質中。在外電場的作用下，細胞在特殊的裝置內(nèi)發(fā)生運動這種現(xiàn)象稱作細胞電泳。 細胞表面具有一定的電荷細胞表面具有一定的電荷( (通常為負電荷通常為負電荷) )，它能象無機離子一，它能象無機離子一樣均勻地分布在介質中。細胞表面吸附了一層極薄的水膜，它與介樣均勻地分布在介質中。細胞表面吸附了一層極薄的水膜，它與介質間存在著電位差，此電位差稱為質間存在著電位差，此電位差稱為電位。每種細胞在恒定的條件電位。每種細胞在恒定的條件下下( (如溫度、電壓、電流，介質濃度，溶液的如溫度、電

3、壓、電流，介質濃度，溶液的PHPH值等值等) )其電泳速度和其電泳速度和電位十分穩(wěn)定，但在各種有害因子病理狀態(tài)的影響下，可降低其電位十分穩(wěn)定，但在各種有害因子病理狀態(tài)的影響下，可降低其表面電荷，所以電泳速度和表面電荷，所以電泳速度和電位值也發(fā)生改變電位值也發(fā)生改變( (降低降低) )。因此，利。因此，利用細胞電泳對研究生命結構的表面性質，鑒定細胞或單細胞有機體用細胞電泳對研究生命結構的表面性質，鑒定細胞或單細胞有機體的機能和病理狀態(tài)，具有重要的意義，是一種十分有用的方法。的機能和病理狀態(tài)，具有重要的意義，是一種十分有用的方法。PARTTHREE實驗用品實驗用品8鼠全血細胞，菠菜葉綠體。細胞電泳

4、儀，光學顯微鏡，電子表，臺微尺，目微尺，細胞電泳架， 電泳毛細管，吸血量管，洗耳球，鹽橋等。 1生理鹽水甘油溶液：O.9NaCl，0.32M甘油溶液，每毫升加入4-5V (國際單位)的肝素?；靹騻溆?。 28蔗糖甘油溶液：8的蔗糖，O.32M甘油溶液，每毫升加入4-5V(國際單位)的肝素，混勻后備用。材料用具試劑PARTFOUR試驗方法試驗方法1001 (一) 細胞電泳前的準備工作02(二)細胞(或細胞器)電泳速度及電位的測定：某種試驗方法的名稱這種方法的特點 (一) 細胞電泳前的準備工作11。 1目微尺校正：與實驗二“臺微尺與目微尺的校對”相同的操作。第一步第二步第三步第四步毛細管d10層的測

5、定細胞(或細胞器)懸液調制，用血球計數(shù)板對懸液計數(shù)，然后調制細胞(或細 胞器)濃度，全血細胞約2000個mm3，葉綠體為5000一10000個mm3。顯微鏡固定及毛細管和銀電極的清潔顯微鏡固定及毛細管和銀電極的清潔12010203第一要點第二要點第三要點選可翻轉的顯微鏡以免細胞在電泳時迅速下沉，脫離觀察面。用肥皂水(最好用十二烷基磺酸鈉)沖洗毛細管電泳室，然后用清水沖洗數(shù) 次。用普通紗布將電泳架兩端的銀電極擦干凈，以免正反兩方向的電泳速度顯著不一樣。(二)細胞(或細胞器)電泳速度及電位的測定：1301根據(jù)所使用的輸入電源，將儀器背面的電源選擇鈕“交流一直流”，調至所要求的位置。 02接通電源，

6、打開電源開關，指示燈亮。03插入直流輸出引線，并注意電極夾的正負極短路，以免損壞儀器。1404將調整開關至“工作”檔，換向開關至“正”檔，然后調節(jié)“電壓調節(jié)及“電流調節(jié)”二旋鈕，動物細胞電泳時，電壓調至40伏，電流調至lmA；葉綠體電泳時，電壓調至55伏，電流以調至lmA。調好后再將開關推到“停止”檔。05將制備的樣品灌注毛細管電泳室，其灌注方法是： (1) 將毛細管斜插入被測樣品中，由于毛吸管吸引作用，則整個管腔內(nèi)充滿了被測樣液。 (2) 也可用橡皮膠頭的吸吮作用將樣品灌滿電泳室。將注灌樣品的毛細管水平移至電泳架上，并夾緊，然后利用鹽橋將細管與銀極接通。06將電泳架移至顯微鏡載物臺上，調整焦

7、距，使焦面落在將電泳架移至顯微鏡載物臺上，調整焦距，使焦面落在管腔的管腔的d dlOlOd d1515處。為了對照可測處。為了對照可測d d2 2處的電泳速處的電泳速度。度。07通過直流輸出引線夾，分別與兩極接通。08測量測量 (1) (1) 將開關調至將開關調至“工作工作”檔，再調節(jié)電壓使其達到原檔，再調節(jié)電壓使其達到原來來( (即操作即操作4 4中所調中所調) )的水平，由于電場作用，在視野內(nèi)可的水平，由于電場作用，在視野內(nèi)可觀察到管腔內(nèi)細胞的移動。記錄某個細胞通過目微尺觀察到管腔內(nèi)細胞的移動。記錄某個細胞通過目微尺2 2格格的時間。的時間。 (2) (2) 將開關調至將開關調至“停止停止”檔，細胞即停止移動。檔，細胞即停止移動。 (3) (3) 將換向開關調至將換向開關調至“負負”處，調整高速開關調至處，調整高速開關調至“工作工作”檔，由于電流方向變更，則細胞向相反方向移動，檔，由于電流方向變更，則細胞向相反方向移動，此時再選擇一細胞按上述方法，記錄下電泳時間。此時再選擇一細胞按上述方法，記錄下電泳時間。 (4) (4) 如此反復測量多次，分別記錄實驗數(shù)據(jù)。如此反復測量多次，分別記錄實驗數(shù)據(jù)。 (5) 實驗結束后，將電壓及電流二鈕調回到“0”處，調整開關至“停止”處，并斷開電源；將毛細管洗干凈，同時將電極擦凈，放回原處，顯微鏡恢復到直立狀態(tài)。 9電泳