第22章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理

1、第第22章章 免疫學(xué)檢測(cè)原理免疫學(xué)檢測(cè)原理免疫學(xué)檢測(cè)是指借助免疫學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué)等理論或方法，對(duì)抗原、抗體、免疫細(xì)胞及細(xì)胞因子等進(jìn)行定性、定量檢測(cè)。臨床醫(yī)學(xué)中，免疫學(xué)檢測(cè)可用于免疫相關(guān)疾病的診斷、病情檢測(cè)和療效評(píng)價(jià)等。第一節(jié)第一節(jié) 基于抗原基于抗原- -抗體反應(yīng)的檢測(cè)方法抗體反應(yīng)的檢測(cè)方法第二節(jié)第二節(jié) 免疫細(xì)胞檢測(cè)免疫細(xì)胞檢測(cè)第三節(jié)第三節(jié) 分子生物學(xué)技術(shù)在免疫學(xué)上的應(yīng)用分子生物學(xué)技術(shù)在免疫學(xué)上的應(yīng)用本章內(nèi)容本章內(nèi)容第一節(jié)第一節(jié) 基于抗原基于抗原- -抗體反應(yīng)的檢測(cè)方法抗體反應(yīng)的檢測(cè)方法一、抗原抗體反應(yīng)概念一、抗原抗體反應(yīng)概念抗原與相應(yīng)抗體在體內(nèi)、外發(fā)生的高度特異性結(jié)合反應(yīng)?？乖c相應(yīng)

2、抗體在體內(nèi)、外發(fā)生的高度特異性結(jié)合反應(yīng)。在合適條件下所進(jìn)行的體外反應(yīng)中，抗原與相應(yīng)抗體特異在合適條件下所進(jìn)行的體外反應(yīng)中，抗原與相應(yīng)抗體特異性結(jié)合可呈現(xiàn)某種反應(yīng)現(xiàn)象（如凝集、沉淀）。由于實(shí)驗(yàn)性結(jié)合可呈現(xiàn)某種反應(yīng)現(xiàn)象（如凝集、沉淀）。由于實(shí)驗(yàn)所用抗體存在于血清中，故又稱血清學(xué)反應(yīng)。所用抗體存在于血清中，故又稱血清學(xué)反應(yīng)。二、抗原抗體反應(yīng)的特點(diǎn)二、抗原抗體反應(yīng)的特點(diǎn)高度特異性高度特異性 可精確區(qū)分物質(zhì)間極微細(xì)的差異。可精確區(qū)分物質(zhì)間極微細(xì)的差異。表示為表示為親和力親和力：一個(gè)抗原表位與相應(yīng)抗體單一抗原結(jié)合位點(diǎn)間：一個(gè)抗原表位與相應(yīng)抗體單一抗原結(jié)合位點(diǎn)間的結(jié)合能力。的結(jié)合能力。親合力親合力：指一個(gè)抗

3、體分子與整個(gè)抗原大分子間的結(jié)合強(qiáng)：指一個(gè)抗體分子與整個(gè)抗原大分子間的結(jié)合強(qiáng)度，與抗原表位數(shù)目有關(guān)。度，與抗原表位數(shù)目有關(guān)。2.抗原抗體結(jié)合的帶現(xiàn)象與可見(jiàn)性抗原抗體結(jié)合的帶現(xiàn)象與可見(jiàn)性 抗原抗體結(jié)合存在帶現(xiàn)象（前帶、等帶、后帶），適宜的抗原抗體濃度和比例抗原抗體結(jié)合存在帶現(xiàn)象（前帶、等帶、后帶），適宜的抗原抗體濃度和比例（等帶）決定抗原抗體結(jié)合后能否出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的反應(yīng)；（等帶）決定抗原抗體結(jié)合后能否出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的反應(yīng)；3. 表面化學(xué)基團(tuán)之間的可逆結(jié)合表面化學(xué)基團(tuán)之間的可逆結(jié)合 抗原抗體結(jié)合除了空間結(jié)構(gòu)互補(bǔ)外，主要以氫鍵、范德華抗原抗體結(jié)合除了空間結(jié)構(gòu)互補(bǔ)外，主要以氫鍵、范德華力和疏水鍵等非共價(jià)結(jié)

4、合。易受溫度、酸堿度和離子強(qiáng)力和疏水鍵等非共價(jià)結(jié)合。易受溫度、酸堿度和離子強(qiáng)度的影響而解離，解離后抗原抗體仍具有原有特性，可度的影響而解離，解離后抗原抗體仍具有原有特性，可借助親和層析法純化抗原或抗體。借助親和層析法純化抗原或抗體。抗原抗體反應(yīng)的抗原抗體反應(yīng)的2個(gè)階段個(gè)階段第第1階段是抗原抗體特異性結(jié)合，可在數(shù)秒鐘至幾分鐘內(nèi)階段是抗原抗體特異性結(jié)合，可在數(shù)秒鐘至幾分鐘內(nèi)完成；第完成；第2階段是小的抗原抗體復(fù)合物靠正負(fù)電荷吸引階段是小的抗原抗體復(fù)合物靠正負(fù)電荷吸引形成較大復(fù)合物，所需時(shí)間從數(shù)分鐘至數(shù)日不等。形成較大復(fù)合物，所需時(shí)間從數(shù)分鐘至數(shù)日不等。三、抗原抗體反應(yīng)的影響因素三、抗原抗體反應(yīng)的影

5、響因素電解質(zhì)電解質(zhì) 抗原抗體等電點(diǎn)分別為抗原抗體等電點(diǎn)分別為pH3-5和和pH5-6，在中性或，在中性或弱堿性條件下表面帶有較多負(fù)電荷，適當(dāng)濃度的電解質(zhì)會(huì)使弱堿性條件下表面帶有較多負(fù)電荷，適當(dāng)濃度的電解質(zhì)會(huì)使它們失去一部分負(fù)電荷而相互結(jié)合；它們失去一部分負(fù)電荷而相互結(jié)合；溫度溫度 通常為通常為37，適當(dāng)提高反應(yīng)溫度可增加抗原與抗體，適當(dāng)提高反應(yīng)溫度可增加抗原與抗體分子的碰撞機(jī)會(huì)，但分子的碰撞機(jī)會(huì)，但56以上可使抗原或抗體變性失活；以上可使抗原或抗體變性失活；1.酸堿度酸堿度 抗原抗體反應(yīng)的最適抗原抗體反應(yīng)的最適pH值在值在6-8之間，之間，pH值過(guò)高值過(guò)高或過(guò)低均可直接影響抗原抗體的理化性質(zhì)。

6、當(dāng)或過(guò)低均可直接影響抗原抗體的理化性質(zhì)。當(dāng)pH值接近等值接近等電點(diǎn)時(shí)，抗原抗體多帶正負(fù)電荷相等，由于自身吸引而出現(xiàn)電點(diǎn)時(shí)，抗原抗體多帶正負(fù)電荷相等，由于自身吸引而出現(xiàn)凝集，導(dǎo)致非特異性反應(yīng)。凝集，導(dǎo)致非特異性反應(yīng)。四、抗原抗體反應(yīng)檢測(cè)技術(shù)的應(yīng)用四、抗原抗體反應(yīng)檢測(cè)技術(shù)的應(yīng)用抗原與相應(yīng)抗體在體內(nèi)、外發(fā)生的高度特異性結(jié)合反應(yīng)?？乖c相應(yīng)抗體在體內(nèi)、外發(fā)生的高度特異性結(jié)合反應(yīng)。在合適條件下所進(jìn)行的體外反應(yīng)中，抗原與相應(yīng)抗體特異在合適條件下所進(jìn)行的體外反應(yīng)中，抗原與相應(yīng)抗體特異性結(jié)合可呈現(xiàn)某種反應(yīng)現(xiàn)象（如凝集、沉淀）。由于實(shí)驗(yàn)性結(jié)合可呈現(xiàn)某種反應(yīng)現(xiàn)象（如凝集、沉淀）。由于實(shí)驗(yàn)所用抗體存在于血清中，故又

7、稱血清學(xué)反應(yīng)。所用抗體存在于血清中，故又稱血清學(xué)反應(yīng)。五、抗原五、抗原-抗體反應(yīng)的基本檢測(cè)方法抗體反應(yīng)的基本檢測(cè)方法AbAg高親和力AbAg低親和力特異性特異性結(jié)合力的表示方法結(jié)合力的表示方法親和力和親合力親和力和親合力低親合力高親合力Ag-Ab反應(yīng)的原理反應(yīng)的原理Ab 過(guò)剩Ag 過(guò)剩比例適當(dāng)，交聯(lián)成網(wǎng)絡(luò)Ag-Ab反應(yīng)的可見(jiàn)性反應(yīng)的可見(jiàn)性1.凝集反應(yīng)凝集反應(yīng)直接凝集反應(yīng) 1:2稀釋待測(cè)血清 1:4 1:8 1:16 細(xì)菌、細(xì)胞等顆粒性Ag或表面包被抗原的顆粒狀物質(zhì)與相應(yīng)Ab在電解質(zhì)存在的情況下直接反應(yīng)，二者比例合適時(shí)，出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的凝集團(tuán)現(xiàn)象。玻片法試管法常用于菌種鑒定或ABO血型鑒定選擇最佳

8、稀釋濃度，常用于檢測(cè)抗體的滴度或效價(jià)，見(jiàn)于臨床診斷傷寒或副傷寒所用的肥達(dá)氏反應(yīng)和診斷布氏菌病所用的瑞特試驗(yàn)。間接凝集反應(yīng)間接凝集反應(yīng)將可溶性Ag/Ab先吸附在某些顆粒載體上，形成致敏顆粒，然后再與相應(yīng)Ab/Ag進(jìn)行反應(yīng)產(chǎn)生凝集，叫間接凝集反應(yīng)。如將溶血毒素O吸附于乳膠顆粒上的抗“O”試驗(yàn)、人IgG作為Ag吸附于乳膠顆粒上的類風(fēng)濕因子檢測(cè)。凝集反應(yīng)常用于溶血性疾病的診斷：+病人的病人的RBC體內(nèi)體內(nèi)anti-Rh由于抗體多屬于由于抗體多屬于IgG，分子，分子量較小，抗體與紅細(xì)胞間的量較小，抗體與紅細(xì)胞間的結(jié)合力不能克服細(xì)胞間的排結(jié)合力不能克服細(xì)胞間的排斥力，不出現(xiàn)凝集斥力，不出現(xiàn)凝集+體外加入體

9、外加入抗人抗人IgG出現(xiàn)凝集現(xiàn)象，出現(xiàn)凝集現(xiàn)象，叫叫直接庫(kù)姆試驗(yàn)直接庫(kù)姆試驗(yàn)正常人正常人O型血型血的的Rh+的的RBC+患者血清內(nèi)的患者血清內(nèi)的游離游離anti-Rh+體外加入體外加入抗人抗人IgG出現(xiàn)凝集現(xiàn)象，出現(xiàn)凝集現(xiàn)象，叫叫間接庫(kù)姆試驗(yàn)間接庫(kù)姆試驗(yàn)2.沉淀反應(yīng)沉淀反應(yīng)AgAgAgAgAb in gel單向免疫擴(kuò)散單向免疫擴(kuò)散Ag1AbAg2Ag3Ag4雙向免疫擴(kuò)散雙向免疫擴(kuò)散免疫比濁免疫比濁過(guò)量Ab Ab Ab Ab毒素、組織浸液及血清中的蛋白等可溶性抗原與相應(yīng)抗體反應(yīng)后，出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的沉淀物，稱為沉淀反應(yīng)。沉淀反應(yīng)可在液體中進(jìn)行，也可在半固體瓊脂凝膠中進(jìn)行。鑒定多種抗原是完全相同、鑒定

10、多種抗原是完全相同、部分相同或完全不同部分相同或完全不同用于確定用于確定抗原濃度抗原濃度沉淀反應(yīng)沉淀反應(yīng)免疫電泳免疫電泳存在于不同區(qū)域的抗原與抗存在于不同區(qū)域的抗原與抗體結(jié)合，在比例適宜處形成體結(jié)合，在比例適宜處形成沉淀弧。沉淀弧的數(shù)量、位沉淀弧。沉淀弧的數(shù)量、位置和形狀與標(biāo)準(zhǔn)品相對(duì)比，置和形狀與標(biāo)準(zhǔn)品相對(duì)比，可分析樣品的成分及其性質(zhì)。可分析樣品的成分及其性質(zhì)。3.免疫標(biāo)記技術(shù)免疫標(biāo)記技術(shù)免疫酶測(cè)定法免疫酶測(cè)定法免疫熒光技術(shù)免疫熒光技術(shù)放射免疫測(cè)定法放射免疫測(cè)定法免疫膠體金技術(shù)免疫膠體金技術(shù)免疫酶測(cè)定法免疫酶測(cè)定法夾心法夾心法ELISA間接間接ELISABASELISA 利用生物利用生物素和抗

11、生物素蛋白為橋梁素和抗生物素蛋白為橋梁微粒捕獲酶免疫分析技術(shù)微粒捕獲酶免疫分析技術(shù) 將已知特異性抗體致敏的將已知特異性抗體致敏的免疫微粒與生物素、親和免疫微粒與生物素、親和素、酶相結(jié)合，最后酶作素、酶相結(jié)合，最后酶作用于熒光底物發(fā)光，通過(guò)用于熒光底物發(fā)光，通過(guò)檢測(cè)熒光強(qiáng)度判斷未知抗檢測(cè)熒光強(qiáng)度判斷未知抗原的含量。原的含量。a）b） 免疫組化技術(shù)免疫組化技術(shù)定位、定性、定量檢測(cè)免疫熒光技術(shù)免疫熒光技術(shù)放射免疫測(cè)定放射免疫測(cè)定用放射性核素標(biāo)記抗原或抗體進(jìn)行的免疫測(cè)定。將同位素的敏感性與抗原抗體結(jié)合的特異性結(jié)合起來(lái)，具有重復(fù)性好、準(zhǔn)確性高等優(yōu)點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于激素、藥物等微量物質(zhì)的檢測(cè)。常用的有131I

12、、125I?；瘜W(xué)發(fā)光免疫技術(shù)化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)將化學(xué)發(fā)光分析和免疫反應(yīng)相結(jié)合而建立的一種新的免疫分析技術(shù)。最常用的發(fā)光物質(zhì)是魯米諾。靈敏度高、簡(jiǎn)便、可實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化分析。免疫膠體金技術(shù)免疫膠體金技術(shù)用膠體金顆粒標(biāo)記Ab/Ag，以檢測(cè)未知Ag/Ab的方法。氯金酸在還原劑作用下，可聚合成特定大小的金顆粒，形成帶負(fù)電的疏水膠溶液，因靜電作用而呈穩(wěn)定的膠體狀態(tài)。該技術(shù)可應(yīng)用于免疫組化(光鏡下檢查)和免疫層析快速診斷。免疫印跡法免疫印跡法-Western blotting4.4.蛋白質(zhì)芯片技術(shù)蛋白質(zhì)芯片技術(shù)又稱為蛋白質(zhì)微列陣，指固定于支持介質(zhì)上的大量蛋白質(zhì)構(gòu)成的微列陣。根據(jù)蛋白質(zhì)分子間特異性結(jié)合的原理，可實(shí)現(xiàn)

13、快速、準(zhǔn)確、高通量的檢測(cè)。第二節(jié)第二節(jié) 免疫細(xì)胞檢測(cè)免疫細(xì)胞檢測(cè)淋巴細(xì)胞及其淋巴細(xì)胞及其亞群的分離亞群的分離免疫細(xì)胞免疫細(xì)胞功能測(cè)定功能測(cè)定磁珠分磁珠分離法離法免疫吸附免疫吸附分離法分離法流式細(xì)流式細(xì)胞術(shù)胞術(shù)肽肽MHC四聚四聚體技術(shù)體技術(shù)T細(xì)胞功細(xì)胞功能測(cè)定能測(cè)定B細(xì)胞功細(xì)胞功能測(cè)定能測(cè)定細(xì)胞因細(xì)胞因子檢測(cè)子檢測(cè)T細(xì)胞增殖試驗(yàn)遲發(fā)型超敏反應(yīng)的檢測(cè)抗體含量測(cè)定溶血空斑試驗(yàn)巨噬細(xì)胞吞噬試驗(yàn)細(xì)胞毒細(xì)胞毒試驗(yàn)試驗(yàn)吞噬功吞噬功能測(cè)定能測(cè)定51Cr釋放法乳酸脫氫酶釋放法細(xì)胞染色法凋亡細(xì)胞檢測(cè)法硝基藍(lán)四氮唑試驗(yàn)生物活性檢測(cè)法免疫學(xué)檢測(cè)法一、免疫細(xì)胞及其亞類計(jì)數(shù)一、免疫細(xì)胞及其亞類計(jì)數(shù)稀釋血液淋巴細(xì)胞分離液(

14、葡聚糖-泛影葡胺r=1.078) 離心單 個(gè)核細(xì)胞(PBMC，包括淋巴細(xì)胞、DC和NK)紅細(xì)胞和粒細(xì)胞血漿外周血單個(gè)核細(xì)胞的分離外周血單個(gè)核細(xì)胞的分離外周血單個(gè)核細(xì)胞的分離外周血單個(gè)核細(xì)胞的分離稀釋血液淋巴細(xì)胞分離液(葡聚糖-泛影葡胺r=1.078) 離心單 個(gè)核細(xì)胞(PBMC，包括淋巴細(xì)胞、DC和NK)紅細(xì)胞和粒細(xì)胞血漿磁珠分離法磁珠分離法免疫吸附分離法免疫吸附分離法流式細(xì)胞術(shù)流式細(xì)胞術(shù)肽肽MHC四聚體技術(shù)四聚體技術(shù)淋巴細(xì)胞及其亞群的分離淋巴細(xì)胞及其亞群的分離免疫吸附分離法免疫吸附分離法加入淋巴細(xì)胞懸液anti-CD4anti-CD4anti-CD4棄上清磁珠分離法磁珠分離法流式細(xì)胞術(shù)流式細(xì)

15、胞術(shù)熒光抗體標(biāo)記混合細(xì)胞噴嘴單細(xì)胞懸液5000-10000個(gè)/秒細(xì)胞分選器熒光檢測(cè)器抗原肽抗原肽-MHC四聚體分離技術(shù)四聚體分離技術(shù)親和素親和素抗原肽抗原肽MHC I生物素生物素anti-CD8肽-四聚體肽特異性CD8TCD4T及B非肽特異性CD8T熒光素?zé)晒馑囟⒚庖呒?xì)胞功能的測(cè)定二、免疫細(xì)胞功能的測(cè)定T細(xì)胞功細(xì)胞功能測(cè)定能測(cè)定B細(xì)胞功細(xì)胞功能測(cè)定能測(cè)定細(xì)胞因細(xì)胞因子檢測(cè)子檢測(cè)T細(xì)胞增殖試驗(yàn)遲發(fā)型超敏反應(yīng)的檢測(cè)抗體含量測(cè)定溶血空斑試驗(yàn)巨噬細(xì)胞吞噬試驗(yàn)細(xì)胞毒細(xì)胞毒試驗(yàn)試驗(yàn)吞噬功吞噬功能測(cè)定能測(cè)定51Cr釋放法乳酸脫氫酶釋放法細(xì)胞染色法凋亡細(xì)胞檢測(cè)法硝基藍(lán)四氮唑試驗(yàn)生物活性檢測(cè)法免疫學(xué)檢測(cè)法T細(xì)

16、胞功細(xì)胞功能測(cè)定能測(cè)定T細(xì)胞增殖試驗(yàn)遲發(fā)型超敏反應(yīng)的檢測(cè)T細(xì)胞受到特異性抗原或有絲分裂原刺激后發(fā)生增殖，可通過(guò)以下三種方法檢測(cè)：形態(tài)計(jì)數(shù)法：活化細(xì)胞體積增大、形態(tài)不規(guī)則、胞質(zhì)增多、細(xì)胞核松散及出現(xiàn)較多核仁；3H-TdR或125I-UdR摻入法：3H-TdR能摻入到合成的DNA中，用液體閃爍儀檢測(cè)樣品的放射活性，特點(diǎn)是靈敏可靠，但須特殊儀器，易有放射性污染。1. MTT (四甲基偶氮唑鹽)比色法：外來(lái)抗原刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答后，再用相同的抗原作皮試，可導(dǎo)致遲發(fā)型超敏反應(yīng)，T細(xì)胞活化并釋放多種細(xì)胞因子，產(chǎn)生以單個(gè)核細(xì)胞浸潤(rùn)為主的炎癥，局部發(fā)生充血滲出，24-48h發(fā)生，72h到達(dá)高峰。陽(yáng)性反應(yīng)表現(xiàn)

17、為局部紅腫和硬結(jié)，反應(yīng)強(qiáng)烈的發(fā)生水腫甚至壞死。細(xì)胞免疫正常者出現(xiàn)陽(yáng)性反應(yīng)，細(xì)胞免疫低下者呈弱陽(yáng)性或陰性反應(yīng)。常用于檢測(cè)某些微生物感染。B細(xì)胞功細(xì)胞功能測(cè)定能測(cè)定抗體含量測(cè)定溶血空斑試驗(yàn)可通過(guò)單項(xiàng)瓊脂擴(kuò)散法、ELISA、速率比濁法等測(cè)定標(biāo)本中各類Ig的含量。綿羊紅細(xì)胞(SRB C)免疫動(dòng)物4天后取出動(dòng)物脾臟，在脾細(xì)胞懸液中含有抗SRBC的漿細(xì)胞脾細(xì)胞與SRBC在適量瓊脂糖液中混勻在抗體形成細(xì)胞周圍出現(xiàn)溶解的透明區(qū)，即溶血空斑。1個(gè)空斑區(qū)代表1個(gè)漿細(xì)胞通過(guò)記錄溶血空斑的數(shù)目可知抗原特異性B細(xì)胞的數(shù)目加入新鮮補(bǔ)體，倒入平皿中培養(yǎng)細(xì)胞毒細(xì)胞毒試驗(yàn)試驗(yàn)51Cr釋放法乳酸脫氫酶釋放法細(xì)胞染色法靶細(xì)胞被殺傷

18、后，向體系中加入臺(tái)盼蘭，可進(jìn)入膜破損的細(xì)胞內(nèi)，將細(xì)胞染成藍(lán)色。活細(xì)胞拒染而不著色。凋亡細(xì)胞檢測(cè)法瓊脂糖電泳法正常細(xì)胞基因組DNA凋亡細(xì)胞TUNEL法在細(xì)胞中加入末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶(TdT)和生物素標(biāo)記的核苷酸TdT能在游離的DNA3端缺口連接標(biāo)記的核苷酸加入親和素-酶復(fù)合物，在DNA斷裂處顯色流式細(xì)胞術(shù)Annexin VPI凋亡早期凋亡晚期壞死期巨噬細(xì)胞吞噬試驗(yàn)吞噬功吞噬功能測(cè)定能測(cè)定硝基藍(lán)四氮唑(NBT)試驗(yàn)NBT在殺菌過(guò)程中產(chǎn)生反應(yīng)性氧中間物，其中超氧陰離子能使被吞噬進(jìn)細(xì)胞內(nèi)的NBT還原成不溶性藍(lán)黑色甲臜顆粒，沉積于胞漿中。光鏡下計(jì)數(shù)NBT陽(yáng)性細(xì)胞可反映PMN的殺傷功能。將待測(cè)mf與雞紅

19、細(xì)胞混合溫育后，雞紅細(xì)胞被mf吞噬，根據(jù)吞噬百分率確定mf吞噬能力。吞噬百分率=吞有紅細(xì)胞的mf/mf總數(shù)細(xì)胞因細(xì)胞因子檢測(cè)子檢測(cè)生物活性檢測(cè)法免疫學(xué)檢測(cè)法夾心ELISA或ELISPOT熒光素標(biāo)記抗體染胞內(nèi)細(xì)胞因子，F(xiàn)ACS分析細(xì)胞增殖或增殖抑制法，如細(xì)胞因子依賴性或抑制性細(xì)胞株細(xì)胞病變抑制法，如感干擾素抑制病毒感染性細(xì)胞損傷檢測(cè)B細(xì)胞產(chǎn)生的抗體檢測(cè)T細(xì)胞產(chǎn)生的CK酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)- -ELISpot 對(duì)血細(xì)胞惡性變?nèi)绨籽?、淋巴瘤等的診斷，長(zhǎng)期以來(lái)多應(yīng)用細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查和免疫細(xì)胞表型分析。由于這些方法在特異性和敏感性上的限制，對(duì)于丟失了細(xì)胞表面標(biāo)志，或分化較好難以和正常細(xì)胞區(qū)別。也可能由于惡性細(xì)胞數(shù)量少，混在大量正常細(xì)胞中難以查出。 第三節(jié)第三節(jié) 分子生物學(xué)技術(shù)在免疫學(xué)上的應(yīng)用分子生物學(xué)技術(shù)在免