生物實驗報告-坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本制備

1、生物實驗報告姓名：班級：日期：同組者：實驗序號：實驗題目：坐骨神經(jīng)-腓腸肌標(biāo)本的制備實驗?zāi)康模?. 學(xué)習(xí)蛙類動物雙毀髓的實驗方法。2學(xué)習(xí)并掌握坐骨神經(jīng)-腓腸肌標(biāo)本的制備方法。實驗原理：兩棲類動物的離體組織所需要的生活條件比較簡單，易于控制和掌握。 因此在生理實驗中常用蟾蜍的坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本來觀察興奮性、興奮過程、刺激強度、刺激頻率與肌肉收縮反應(yīng)的一些規(guī)律以及骨骼肌的收縮特性等。實驗對象：蟾蜍實驗器材：常規(guī)手術(shù)器械（粗剪刀、手術(shù)剪、眼科剪、手術(shù)鑷、眼科鑷）蛙板、蛙釘、探針、鋅銅弓、玻璃分針、培養(yǎng)皿、任氏液、滴管、手術(shù)線等。實驗方法及步驟：1、破壞腦脊髓部位枕骨大孔。如果蟾蜍四肢松軟，呼吸消失，

2、表示腦脊髓已完全破壞，否則按上述方法再進(jìn)行搗毀。2、剪去軀干上部及內(nèi)臟在骶髂關(guān)節(jié)前1 cm處用金冠剪（粗剪）剪斷脊柱（可在下肢前端）。沿脊柱切口向下剪開兩側(cè)腹部皮膚至恥骨處，將頭、前肢、內(nèi)臟及腹部軟組織全部剪掉，放于污物盤，只保留下端脊柱和下肢。在腹側(cè)脊柱兩旁可看到腰骶神經(jīng)叢。注意切勿觸及或損傷坐骨神經(jīng)。3、剝后肢皮膚 左手持鑷子夾住脊髓斷端，右手捏住斷端邊緣，剝掉全部后肢皮膚。將標(biāo)本放于盛有任氏液的培養(yǎng)皿內(nèi)，將手和手術(shù)器械洗凈。4、分離兩腿 用金冠剪剪去尾骨桿（骶骨），沿脊椎中線將脊柱剪開，再沿恥骨聯(lián)合正中央剪開兩側(cè)大腿，使兩腿完全分離（切勿傷及神經(jīng)），將兩腿浸于任氏液中。5、游離坐骨神經(jīng)

3、取一后肢，腹面向上（背位），固定于蛙板上，沿脊柱側(cè)用玻璃分針輕輕勾起坐骨神經(jīng)，逐一剪去神經(jīng)分支至股端。用金冠剪剪斷脊柱，只保留一小段椎骨片與坐骨神經(jīng)相連。 將標(biāo)本改為背面向上（腹位）固定，用鑷子提起梨狀肌，剪斷，用玻璃分針將坐骨神經(jīng)小心勾至背部。再沿坐骨神經(jīng)溝（半膜肌和股二頭肌的肌間縫）分離坐骨神經(jīng)。用鑷子夾住與神經(jīng)相連的脊椎骨，提起神經(jīng)，用眼科剪將神經(jīng)分支及結(jié)締組織膜順序剪斷，將神經(jīng)一直游離到腘窩處。6、游離腓腸肌用鑷子夾住脊椎骨，將神經(jīng)搭在腓腸肌上，用剪刀將膝關(guān)節(jié)周圍的大腿肌肉完全剪除，用金冠剪將膝關(guān)節(jié)上方的股骨刮干凈，暴露骨股并在距膝關(guān)節(jié)上1 cm處剪斷，分離腓腸肌的跟腱，用線結(jié)扎，然后

4、自跟腱的附著點剪斷，提起跟腱，將腓腸肌分離至膝關(guān)節(jié)處，將小腿其余部分剪掉。這樣就制備了一個附著在股骨上的腓腸肌并帶有支配腓腸肌的坐骨神經(jīng)的完整標(biāo)本。 7、標(biāo)本檢驗左手用鑷子輕輕提起結(jié)扎神經(jīng)的線，右手用經(jīng)任氏液沾濕的鋅銅弓短暫輕觸坐骨神經(jīng)，如腓腸肌發(fā)生迅速的收縮反應(yīng)，則表明機能完好。將標(biāo)本置于任氏液中，穩(wěn)定其興奮性1520 min，即可進(jìn)行實驗。注意事項：在制備標(biāo)本時，避免過度牽拉神經(jīng)，不可用手或金屬器械觸碰神經(jīng)干。避免動物皮膚分泌物（蟾酥、血液等）污染神經(jīng)和肌肉，也不要用水沖洗，以免影響組織機能。制備標(biāo)本時，要隨時用任氏液潤濕神經(jīng)和肌肉，防止干燥。分離神經(jīng)時，一定要把周圍結(jié)締組織剝離干凈。實驗

5、要迅速，以免時間過長影響標(biāo)本活性（興奮性）。實驗結(jié)果：用經(jīng)任氏液沾濕的鋅銅弓短暫輕觸坐骨神經(jīng)，腓腸肌發(fā)生迅速的收縮反應(yīng)；用經(jīng)任氏液沾濕的鋅銅弓短暫輕觸腓腸肌，也發(fā)生迅速的收縮反應(yīng)。思考題：l 1剝?nèi)テつw的后肢，能用自來水沖洗嗎？為什么？答：不能。任氏液是等滲溶液，而且ph和一些基本離子也模擬了體內(nèi)的環(huán)境。用清水浸泡或沖洗的話細(xì)胞吸水過度會漲破。l 2金屬器械碰壓、觸及或損傷神經(jīng)及腓腸肌，可能引起哪些不良后果？金屬器械碰壓神經(jīng)與腓腸肌,會引起肌肉收縮,如果碰的較重,損傷部位及近端的神經(jīng)就死亡了,以后刺激只能從損傷處向肌肉處之間的部分.另外容易使標(biāo)本疲勞,失去活性。l 3如何保持標(biāo)本的機能正常？金屬器械不要碰及、損傷神經(jīng)或腓腸肌，保持濕潤，常加任氏液，最好先泡一會。l 4 鋅銅弓刺激檢測標(biāo)本活性的原理是什么？Zn的金屬電勢比銅低，形成一定的電勢差（就相當(dāng)于有電壓），鋅銅弓是把一根鋅棒和一根銅棒一端焊在一起，另一段分開，則接觸樣本（例如神經(jīng)干）時，會引起樣本局部去極化，引發(fā)動作電位。創(chuàng)新與探索：你認(rèn)為該標(biāo)本的制作方法有哪些需要改進(jìn)的地方？請說出你的想法。答：我