實驗室常用培養(yǎng)基的配制方法

1、實驗室常用培養(yǎng)基的配制方法Ampicillin(氨卡青霉素)(100 mg/ml)組份濃度 100 mg/ml Ampicillin配制量 50 ml配制方法 1.稱量5 g Ampicillin置于50 ml離心管中。 2.加入40 ml滅菌水，充分混合溶解后，定容至50 ml。 3.用0.22 µm過濾膜過濾除菌。 4.小份分裝(1 ml/份)后，-20保存。IPTG(異丙基-D-硫代半乳糖苷)(24 mg/ml)組份濃度 24 mg/mL IPTG配制量 50 mL配制方法 1.稱1.2 g IPTG置于50 ml離心管中。 2.加入40 ml滅菌水，充分混合溶解后，定容至50

2、 ml。 3.用0 22 µm過濾膜過濾除菌。 4小份分裝(1 ml，份)后，-20保存。X-Gal (20 mg/ml)組份濃度 20 mg/ml X-Gal配制量 50 ml配制方法 1.稱量l g X-Gal置于50 ml離心管中。 2.加入40 ml DMF(二甲基甲酰胺)，充分混合溶解后，定容至50 ml。 3.小份分裝(1 ml/份)后，-20避光保存。 LB培養(yǎng)基組份濃度 1%(W/V)Tryptone(胰蛋白胨)，0.5%(W/V)Yeast Extract(酵母提取物)，1%(W/V)NaCl配制量 1 L配制方法 1.稱取下列試劑，置于l L燒杯中。Trypton

3、e10 gYeast Extract5 gNaCl10 g 2.加入約800 ml的去離子水，充分攪拌溶解。 3.滴加5 N NaOH(約0.2 m1)，調(diào)節(jié)pH值至7.0。 4.加去離子水將培養(yǎng)基定容至1 L。 5高溫高壓滅菌后，4保存。1.2%(W/V)Tryptone2.4%(W/V)Yeast Extract0.4%(V/V)Glycerol17mMKH2PO472mMK2HPOaTB培養(yǎng)基 組份濃度配制量 1L配制方法 1.配制磷酸鹽緩；中液(0.17 M KH2PO4，0.72 M K2HPO4)100 ml。 溶解2.31 g KH2PO4和l2.54 g K2HPO4于90 m

4、l的去離子水中，攪拌溶解 后，加去離子水定容至100 ml，高溫高壓滅菌。 2.稱取下列試劑，置于l L燒杯中。Tryptone12 gYeast Extract24 gGlycerol4 m 3.加入約800 ml的去離子水，充分攪拌溶解。 4.加去離子水將培養(yǎng)基定容至1 L后，高溫高壓滅菌。 5.待溶液冷卻至60以下時，；加入100 ml的上述滅菌磷酸鹽緩沖液。 6.4保存。SOB培養(yǎng)基 組份濃度2%(W/V)Tryptone0.5%(W/V)Yeast Extract0.05%(W/V)NaCl2.5mMKCl10 mMMgCl2配制量 1 L配制方法 1.配制250 mM KCl溶液。

5、 在90 ml的去離子水中溶解l.86 g KCl后，定容至100 ml。 2.配制2 M MgCl2溶液。 在90 ml去離子水中溶解19 g MgCl2后，定容至100 ml，高溫高壓滅菌。 3.稱取下列試劑，置于l L燒杯中。Tryptone20 gYeast Extract5 gNaCl0.5 g 4.加入約800 ml的去離子水，充分攪拌溶解。 5.量取10 m1 250 mM KCl溶液，加入到燒杯中。 6.滴加5 N NaOH溶液(約0.2 m1)，調(diào)節(jié)pH值至7.0。 7.加入去離子水將培養(yǎng)基定容至l L。 8.高溫高壓滅菌后，4保存。 9.使用前加入5 ml滅菌的2 M Mg

6、Cl2溶液。SOC培養(yǎng)基 組份濃度2%(W/V)Tryptone0.5%(W/V)Yeast Extract0.05%(W/V)NaCl2.5 mMKCl10 mMMgCl220 mMGlucose配制量 100 mL配制方法 1.配制l M Glucose溶液。 將18 g Glucose溶于90 ml去離子水中，充分溶解后定容至100 ml。用0.22 µm濾膜過濾除菌。 2.向l 00 ml SOB培養(yǎng)基中加入除菌的1 M Glucose溶液2 ml，均勻混合。 3.4保存。RM培養(yǎng)基 組份濃度1%(W/V)Yeast Extract0.2%(W/V)KH2PO42%(W/V)

7、Glucose配制量 100 mL配制方法 1.配制50% Glucose溶液。 將200gGlucose溶于300 ml去離子水中，充分溶解后定容至400 ml。用0.22µm濾膜過濾除菌。 2.向96 ml RM培養(yǎng)基中加入除菌的50% Glucose溶液4ml，均勻混合。 3.4保存?？股氐馁A存溶液及其工作濃度抗生素 貯存液*1 工作濃度 濃度 保存條件 嚴緊型質(zhì)粒 松弛型質(zhì)粒 氨芐青霉素 羧芐青霉素 氯霉素 卡那霉素 鏈霉素 四環(huán)素*2 50 mg/ml(溶于水) -20 50 mg/mL(溶于水) -20 34 mg/mL(溶于乙醇) -20 10 mg/mL(溶于水)

8、-20 10 mg/mL(溶于水) -20 5 mg/mL(溶于乙醇) -20 20 µg/ml 60 µg/ml 20 µg/ml 60 µg/ml 25 µg/ml l70 µg/mL 10 µg/ml 50 µg/ml 10 µg/ml 50 µg/ml 10 µg/ml 50 µg/mL*1以水為溶劑的抗生素貯存液應(yīng)通過0.22 µm濾器過濾除菌。以乙醇為溶劑的抗生素溶液無須除菌處理。所有抗生素溶液均應(yīng)保存于不透光的容器中。*2鎂離子是四環(huán)素的拮抗劑，四環(huán)素

9、抗性菌的篩選應(yīng)使用不含鎂鹽的培養(yǎng)基(如LB培養(yǎng)基)。SDS-PAGE濃縮膠(5%Acrylamide)配方表 各種組份名稱各種凝膠體積所對應(yīng)的各種組份的取樣量 1 m1 2 m1 3 m1 4 ml 5 ml 6 m1 8 m1 10 mL H2O 30%Acrylamide 1.0M Tris-HCl(pH6.8) 10%SDS 10%過硫酸銨 TEMED. 0.68 1.4 2.1 2.7 3.4 4.1 5.5 6.8 0.17 0.33 0.5 0.67 0.83 1.0 1.3 17 0.13 0.25 0.38 0.5 0.63 0 75 1.0 l.25 0.01 0.02 0.

10、03 0.04 0.05 0 06 0.08 0.1 0.01 0.02 0.03 0.04 0.05 0.06 0.08 0.1 0.001 0.002 0.003 0.004 0.005 0.006 0.008 0.01SDS-PAGE分離膠配方表各種組份名稱各種凝膠體積所對應(yīng)的各種組份的取樣量5m1 10m1 15m1 20 ml 25m1 30m1 40m1 50 ml6%GelH2O30%Acrylamide1.5 M Tris-HCl(pH8.8)10%SDS10%過硫酸銨TEMED8%GelH2O30%Acrylamide1.5M Tris-HCl(pH8 8)10%SDS10%

11、過硫酸銨TEMED10%GeLH2O30%Acrylamide1.5 M Tris+HCl(pH8.8)10%SDS10%過硫酸銨TEMED12%GeLH2O30%Acrylamide1.5 M Tris-HCl(pH8.8)10%SDS10%過硫酸銨TEMED15%GelH2O30%Acrylamide1.5M Tris-HCl(pH8.8)10%SDS10%過硫酸銨TEMED 2.6 5.3 7.0 10.6 13.2 15.9 21.2 26.5 1.0 2.0 3 0 4.0 5.0 6.0 8.0 10.0 1.3 2.5 3.8 5.0 6.3 7.5 10.0 12.5 0.05

12、 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.50. 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.50.004 0.008 0.01 0.004 0.008 0.012 0.015 0.02 0.024 0.032 0.04 2.3 4.6 6.9 9.3 11.5 13.9 18.5 23.2 1.3 2.7 4.0 5.3 6.7 8.0 10.7 13.3 1.3 2.5 3.8 5.0 6.3 7.5 10.0 12.5 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5 0.0.05 0.1 0.15 0 2 0.25 0.3 0

13、4 0.5 0.003 0.006 0.009 0.0l2 0.015 0.018 0.024 0.03 1.9 4.0 5.9 7.9 9.9 14.9 15.9 19.8 1.7 3.3 5.0 6.7 8.3 10.0 13.3 16.7 1.3 2.5 3.8 5.0 6.3 7.5 10.0 12.5 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0 3 0.4 0.5 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5 0.002 0.004 0.006 0 008 0.01 0 .01 2 0.0l 6 0.02 1.6 3.3 4.9 6.6 8.2 9.9 13.2 16 5 2.0 4.0 6.0 8.0 10.0 l2.0 16.0 20.0 1.3 2.5 3.8 5.0 6.3 7.5 10.0 12.5 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5 0.05 0.1 0 15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5 0.002 0.004 0.006 0.008 0.01 0.012 0.016 0.02 1.1