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1、免疫組化抗原修復簡介免疫組化抗原修復簡介l為何要進展抗原修復l抗原修復的種類l抗原修復的原理l抗原修復的操作l抗原操作的運用為何要進展抗原修復為何要進展抗原修復l常規(guī)的石蠟切片的組織要經(jīng)過福爾馬林固定和石蠟包埋,雖然上述過程能良好的保管標本在光鏡下的形狀,但是會不同程度地破壞組織的抗原,降低組織的抗原與抗體的免疫反響率。抗原修復的種類抗原修復的種類l熱修復HIERl蛋白酶修復PIERl雙修復特殊抗原和雙染l不修復抗原修復的原理抗原修復的原理l抗原修復目前常用的有熱修復HIER,蛋白酶修復PIER和不修復。不同的修復的原理不同。l熱修復的原理l蛋白酶修復原理熱修復熱修復(HIER)的原理的原理l

2、“石說:固定經(jīng)過改動蛋白構造降低免疫反響性,AR逆轉(zhuǎn)大部分福爾馬林導致的蛋白修飾,冷卻后,會重建“近天然的構造,免疫反響的恢復是經(jīng)過蛋白表位的復性。熱修復的特點熱修復的特點l易于施行l(wèi)易于規(guī)范化蛋白酶修復蛋白酶修復(PIER)原理原理l蛋白酶的消化經(jīng)過破壞福爾馬林呵斥的蛋白交聯(lián),實現(xiàn)抗原的修復。l該方法的缺陷是:破壞組織的完好性,會破壞抗原,而且酶的濃度,反響時間,反響溫度呵斥很大的差別,規(guī)范化難度較大??乖迯偷牟僮骺乖迯偷牟僮鱨熱修復HIERl蛋白酶修復PIERl雙重修復熱修復熱修復HIERl高壓修復l煮沸法修復l微波修復l水浴加熱高壓修復高壓修復l切片先脫蠟水化l將修復液注入高壓鍋,將

3、液體煮沸l(wèi)放入切片甩開水分l蓋上蓋子,等噴氣,計時1.52分鐘800W1000Wl冷卻,沖洗玻片上的修復液 1.5-2min 10min高壓鍋直接修復高壓鍋隔水間接修復煮沸法修復煮沸法修復l將修復液注入不銹鋼鍋中l(wèi)煮沸后,參與切片甩干水分l用保溫檔,處置20分鐘左右l冷卻,沖洗玻片上的修復液蛋白酶修復蛋白酶修復PIERl切片脫蠟水化l切片上滴加酶,放入孵育盒,處置一定時間l時間到,取出切片,沖洗。雙重修復雙重修復l脫蠟水化后,對切片進展胰酶消化l然后,對切片進展熱修復抗原操作的運用抗原操作的運用l時間l溫度l冷卻l細節(jié)MOC31上皮糖蛋白上皮糖蛋白-2,EGP-2) EGFR(CLONE:EGFR.113)HBcAg(兔多抗兔多抗)C/HNO結論結論l正確的修復對抗體的表達非常重要l抗原修復是一個個性化

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