有機合成中展開劑的選擇

1、（一）有機合成中展開劑的選擇做有機合成時走板子是常有的事，展開劑的選擇就至關重要了。選擇適當?shù)恼归_劑是首要任務.一般常用溶劑按照極性從小到大的順序排列大概為：石油迷己烷苯乙醛THFZ 酸乙酯丙酮乙醇甲醇使用單一溶劑，往往不能達到很好的分離效果，往往使用混合溶劑通常使用一個高極性和低級性溶劑組成的混合溶劑，高極性的溶劑還有增加區(qū)分度的作用，展開劑的比例要靠嘗試.一般根據(jù)文獻中報道的該類化合物用什么樣的展開劑，就首先嘗試使用該類展開劑，然后不斷嘗試比例，直到找到一個分離效果好的展開劑。展開劑的選擇條件：對的所需成分有良好的溶解性；可使成分間分開；待測組分的Rf 在 0.20.8 之間， 定量測定在

2、 0.30.5 之間；不與待測組分或吸附劑發(fā)生化學反應； 沸點適中，黏度較??；展開后組分斑點圓且集中；混合溶劑最好用新鮮配制。一般來說，弱極性溶劑體系的基本兩相由正己烷和水組成，再根據(jù)需要加入甲醇、乙醇，乙酸乙酯來調節(jié)溶劑系統(tǒng)的極性，以達到好的分離效果，適合于生物堿、黃酮、菇類等的分離；中等極性的溶劑體系由氯仿和水基本兩相組成，由甲醇、乙醇，乙酸乙酯等來調節(jié)，適合于慈醍、香豆素，以及一些極性較大的木脂素和菇類的分離；強極性溶劑，由正丁醇和水組成，也靠甲醇、乙醇，乙酸乙酯等來調節(jié)，適合于極性很大的生物堿類化合物的分離。很多時候，展開劑的選擇要靠自己不斷變換展開劑的組成來達到最佳效果。我們在實驗中

3、，為了實現(xiàn)一個配體與其他雜質有效分離，曾經(jīng)嘗試了很多種的溶劑組合，最后才找到石油醒一 EtOALHCOOH（5.5:3.5:0.1）混合溶劑。一般把兩種溶劑混合時，采用高極性/低極性的體積比為1/3 的混合溶劑，如果有分開的跡象，再調整比例（或者加入第三種溶劑），達到最佳效果；如果沒有分開的跡象（斑點較“拖”），最好是換溶劑。對于在硅膠中這種酸性物質上易分解的物質，在展開劑里往往加一點點三乙胺，氨水，口比咤等堿性物質來中和硅膠的酸性。（選擇所添加的堿性物質，還必須考慮容易從產(chǎn)品中除去，氨水無疑是較好的選擇。）分離效果的好壞和所用硅膠和溶劑的質量很有關系：不同廠家生產(chǎn)的硅膠可能含水量以及顆粒的粗

4、細程度，酸性強弱不同，從而導致產(chǎn)品在某個廠家的硅膠中分離效果很好，但在另一個廠家的就不行。溶劑的含水量和雜質含量對分離效果都有明顯的影響。溫度，濕度對分離效果影響也很明顯，在實驗中我們發(fā)現(xiàn)有時同一展開條件，上下午的 Rf 截然不同。展開劑的選擇主要根據(jù)樣品的極性、溶解度和吸附劑的活性等因素來考慮，在進行薄層層析時，首先應該知道未知化學成分的類型，其極性的大致歸屬，從提取液或從色譜柱的流動相極性可知，另外某樣品里含多種化學成分先按極性不同大致分，然后細分，對于分離未知的化學物質，展開劑的選擇也是一個摸索的過程，不應該僅僅從展開劑考慮，多因素綜合衡量！溶劑：層析過程中溶劑的選擇，對組分分離關系極大

5、。在柱層析時所用的溶劑（單一劑或混合溶劑）習慣上稱洗脫劑，用于薄層或紙層析時常稱展開劑。洗脫劑的選擇，須根據(jù)被分離物質與所選用的吸附劑性質這兩者結合起來加以考慮在用極性吸附劑進行層析時，當被分離物質為弱極性物質，一般選用弱極性溶劑為洗脫劑；被分離物質為強極性成分，則須選用極性溶劑為洗脫劑。如果對某一極性物質用吸附性較弱的吸附劑（如以硅藻土或滑石粉代替硅膠），則洗脫劑的極性亦須相應降低。在柱層操作時，被分離樣品在加樣時可采用于法，亦可選一適宜的溶劑將樣品溶解后加入。溶解樣品的溶劑應選擇極性較小的，以便被分離的成分可以被吸附。然后漸增大溶劑的極性。這種極性的增大是一個十分緩慢的過程，稱為“梯度洗脫

6、”，使吸附在層析柱上的各個成分逐個被洗脫。如果極性增大過訣（梯度太大），就不能獲得滿意的分離。溶劑的洗脫能力，有時可以用溶劑的介電常數(shù)（）來表示。介電常數(shù)高，洗脫能力就大。以上的洗脫順序僅適用于極性吸附劑，如硅膠、氧化鋁。對非極性吸附劑，如活性炭，則正好與上述順序相反，在水或親水住溶劑中所形成的吸附作用，較在脂溶性溶劑中為強。被分離物質的性質被分離的物質與吸附劑，洗脫劑共同構成吸附層析中的三個要素，彼此緊密相連。在指定的吸附劑與洗脫劑的條件下，各個成分的分離情況，直接與被分離物質的結構與性質有關。對極性吸附劑而言，成分的極性大，吸附住強。當然，中草藥成分的整體分子觀是重要的，例如極性基團的數(shù)目

7、愈多，被吸附的住能就會更大些，在同系物中碳原子數(shù)目少些，被吸附也會強些?？傊?，只要兩個成分在結構上存在差別，就有可能分離，關鍵在于條件的選擇。要根據(jù)被分離物質的性質，吸附劑的吸附強度，與溶劑的性質這三者的相互關系來考慮。首先要考慮被分離物質的極性。如被分離物質極性很小為不含氧的菇烯，或雖含氧但非極性基團，則需選用吸附性較強的吸附劑，并用弱極性溶劑如石油醛或苯進行洗脫。但多數(shù)中藥成分的極性較大，則需要選擇吸附性能較弱的吸附劑（一般出IV 級）。采用的洗脫劑極性應由小到大按某一梯度遞增，或可應用薄層層析以判斷被分離物在某種溶劑系統(tǒng)中的分離情況。此外，能否獲得滿意的分離，還與選擇的溶劑梯度有很大關系

8、?，F(xiàn)以實例說明吸附層析中吸附劑、洗脫劑與樣品極性之間的關系。如有多組分的混合物,象植物油脂系由烷。、烯二 I煌、舀醇酯類、甘油三酸醋和脂肪酸等組份。如對于 C-27 管體皂 4 元類成分，能因其分字中羥基數(shù)目的多少而獲得分離：將混合皂 4 元溶于含有 5%氯仿的苯中，加于氧化鋁的吸附柱上，采用以下的溶劑進行梯度洗脫。如改用吸附性較弱的硅酸鎂以替代氧化鋁，由于硅酸鎂的吸附性較弱，洗脫劑的極牲需相應降低，亦即采用苯或含 5%氯仿的苯，即可將一元羥基皂 4 元從吸附劑上洗脫下來。這一例子說明，同樣的中草藥成分在不同的吸附劑中層析時，需用不同的溶劑才能達到相同的分離效果，從而說明吸附劑、溶劑和欲分離成

9、分三者的相互關系。（二）簿層層析：薄層層析是一種簡便、快速、微量的層析方法。一般將柱層析用的吸附劑撒布到平面如玻璃片上，形成一薄層進行層析時一即稱薄層層析。其原理與柱層析基本相似。1 .薄層層析的特點：薄層層析在應用與操作方面的特點與柱層析的比較。2 .吸附劑的選擇：薄層層析用的吸附劑與其選擇原則和柱層析相同。主要區(qū)別在于薄層層析要求吸附劑（支持劑）的粒度更細，一般應小于 250 目，并要求粒度均勻。用于薄層層析的吸附劑或預制薄層一般活度不宜過高，以 n出級為宜。而展開距離則隨薄層的粒度粗細而定，薄層粒度越細，展開距離相應縮短，一般不超過 10 厘米，否則可引起色譜擴散影響分離效果。3 .展開

10、劑的選擇：薄層層析，當吸附劑活度為一定值時（如 n 或出級），對多組分的樣品能否獲得滿意的分離，決定于展開劑的選擇。中草藥化學成分在脂溶性成分中，大致可按其極性不同而分為無極性、弱極性、中極性與強極性。但在實際工作中，經(jīng)常需要利用溶劑的極性大小，對展開劑的極性予以調整。薄層色譜小知識1、怎樣提高點樣效率？點樣是造成 TLC 定量誤差的主要來源。實驗證明：定量毛細管更適合較小體積的點樣；微量注射器更適合較大體積的點樣。這主要是因為微量注射器受小氣泡、溶液回爬現(xiàn)象的影響較大。為避免不同定量毛細管理體制的占樣誤差，建議一塊薄層板上最好用同一只定量毛細管。但應注意更換樣品時，應將毛細管用超聲波或不同極

11、性溶課劑清洗干凈。在制備樣品時，溶樣溶劑黏度不能過高，以便于點樣；溶劑沸點過低則進樣體積易變，過高則會改變展開劑組成；對樣品溶解度過高會使樣點發(fā)生空心現(xiàn)象，常用的溶劑為甲醇、乙醇、丙酮。經(jīng)典 TLC 樣點原點一般為直徑 3mm 點間距離1-2cm 底邊距離 1.5cm;HPLC 樣點原點一般為直徑 1mm 點間距 5mm 底邊距 1cm.2、展開劑的選擇TLC 與 HPLC 相比，一個突出的優(yōu)點就是流動相的選擇具有更大的靈活性，流動相的選擇的目的是使絕大部分樣品的 Rf 值位于 0.10.7 之間并達到較好的分離，與此對應的是流動相要有適當?shù)膹姸群徒M成。流動相強度越大，溶質 Rf 值越大，但很

12、可能降低分離能力；另外單一溶劑很難分離較復雜的混合物、根據(jù)相似相溶原理，要使用多元溶劑體系。一般展開劑體系選擇如下：根據(jù)分離樣品性質、薄層色譜板性質選擇一個二元溶劑體系，通過調節(jié)溶劑比例以尋求適合 Rf 值，適合的 Rf 值找到后，再尋求極性參數(shù)相同的二元溶劑體系兩個，以這三個組成為三點組成一個三角形，則可看到：三角形頂點是二元體系，邊是三元體系，三角形內(nèi)是四元體系，并且極性一致，可根據(jù)幾何原理得出任一點組成，這種方法較為直觀，也較簡單。3、TLC 的通用顯色方法理想的顯色希望靈敏度高，斑點顏色穩(wěn)定、斑點與背景間的對比度好，斑點的大小及顏色的深度與物質的量成正比，在樣品組成并不完全已知的情況下

13、，通用顯色方法顯得尤為重要,通用顯色方法主要有：1、紫外照射法：方便、不破壞樣品；2、碘蒸氣法：通用性強，與紫外法結合靈敏度高于該兩法單獨使用；|3、熒光試劑：制造熒光背景，使原來紫外下無熒光物質被鑒別，有熒光物質更明顯；4、硫酸溶劑：對絕大多數(shù)有機物有效，但有破壞性。中藥材薄層色譜展開系統(tǒng)之淺見工作幾年以來，主要運用薄層色譜分離方法對中藥材成分進行分析。薄層色譜直觀的色彩圖像表達方式是一大特點，通過各種展開劑的靈活運用可將中藥材分成不同極性組分進行分離，充分展現(xiàn)出層析分離的意義。根據(jù)這幾年的摸爬滾打，反復實踐，總結出一點展開系統(tǒng)的經(jīng)驗。由于接觸的藥材有限，有些仍不夠深入，因此觀點可能有些片面

14、，鄙薄之處望多多包涵！說明：以下使用的板為硅膠正相薄層板1 黃酮類經(jīng)典展開劑：甲苯-乙酸乙酯-甲酸（5:4:1）,該系統(tǒng)還可用于香豆素類，三菇類成分分離，比例應作適當調整。2 正己烷-乙酸乙酯或環(huán)己烷-乙酸乙酯系統(tǒng)，可分離極性相對較小的系統(tǒng)，如單菇類，木脂素類成分?？蛇m當加甲酸，因己烷系統(tǒng)易使斑點擴散，甲酸對酸性成分分離有幫助。3 乙酸乙酯-甲酸冰醋酸-水（15:1:1:2）是甘草的展開系統(tǒng)，但其適用性很廣，可用于中等極性的成分如綠原酸，DCQ 黃苓昔等。人參系統(tǒng)氯仿-乙酸乙酯-甲醇-水（15:40:22:10）（冰箱分層取上層溶液）也是一個不錯的分離中等極性的展開劑。4 若改變展開系統(tǒng)對分離

15、幫助不大時，可考慮用變性板，如 0.5%或 1%NaOH 溶液，0.1MNaH2PO4,0.1MNa2HPO4 等。變性板還可調整斑點的 Rf 值，可將其減低。5 氯仿是藥典和文獻廣泛使用的展開溶劑，由于毒性較大，現(xiàn)在正逐漸用其他溶劑替代。有氯仿的兩相系統(tǒng)易產(chǎn)生邊緣效應，這與其沸點較低易揮發(fā)有關，若在其中加入些許酸或堿對分離可能產(chǎn)生意想不到的結果，特別是中藥復方制劑時排除陰性干擾時，用量視情況而定?？傊归_系統(tǒng)的千變?nèi)f化使薄層色譜有了更多可操作可摸索的空間，因此有了更為豐富多彩的色譜圖像，若能結合其它色譜得知化學成分的一一歸屬關系就更加深刻了。柱層析和 TLC 操作關鍵柱層析和 TLC 是有

16、機化學工作者必須下苦功夫的兩項實驗技術。這兩項技術掌握與否，對于提高實驗的效率至關重要。常見的例子是：在柱層析時，由于層析柱中的硅膠填料裝得不均勻（沒有填嚴實），使得柱子在淋洗過程中就因為出現(xiàn)太多氣泡變花，導致分離效果不好。更常見的例子是：層析柱雖然裝得不錯，但是由于淋洗劑選擇不恰當，結果導致幾十毫克產(chǎn)品，用了幾百毫升淋洗劑都還沒有完全分離。分離同樣的東西，熟手可能只需要半個小時，而一個層析技術不過關的人可能半天都不能得到純品。由此可見，這兩項技術掌握與否，對于提高工作效率，減輕工作量，減少有機溶劑的使用，從而對身心健康和環(huán)境保護都有明顯的作用。二柱層析關鍵在于柱子是否裝好和淋洗劑是否選擇恰當

17、。而淋洗劑的選擇則是通過一 TLC 確定。這里要指出的一點是：TLC 的作用除了跟蹤反應進程，檢測試劑和原料純度外，一個重要的用途就是為柱層析選擇適當?shù)牧芟磩?。首先談柱層析：裝柱子（添硅膠）時，有兩種方法：即濕法裝柱和干法裝柱，二者各有優(yōu)劣。不論干法還是濕法，硅膠（固定相）的上表面一定要平整，并且硅膠（固定相）的高度一般為 15cm左右，太短了可能分離效果不好，太長了也會由于擴散或拖尾導致分離效果不好。濕法裝柱是先把硅膠用適當?shù)娜軇┌鑴蚝?，再填入柱子中，然后再加壓用淋洗劑“走柱子”，本法最大的?yōu)點是一般柱子裝的比較結實，沒有氣泡。干法裝柱則是直接往柱子里填入硅膠，然后再輕輕敲打柱子兩側，至硅膠

18、界面不再下降為止，然后再填入硅膠至合適高度，最后再用油泵直接抽，這樣就會使得柱子裝的很結實。接著是用淋洗劑“走柱子”，一般淋洗劑是采用 TLC 分析得到的展開劑的比例再稀釋一倍后的溶劑。通常上面加壓，下面再用油泵抽，這樣可以加快速度。干法裝柱較方便，但最大的缺陷在于“走柱子”時，由于溶劑和硅膠之間的吸附放熱（可以用手摸柱子明顯感覺到），容易產(chǎn)生氣泡，這一點在使用低沸點的淋洗劑時如乙醍，二氯甲烷更為明顯。雖然產(chǎn)生的氣泡在加壓的情況下不易察覺，但是，一旦撤去壓力，如在上樣、加溶劑等操作的時候，氣泡就會釋放出來，嚴重時，整個柱子變花，樣品不可能平整地通過，當然也就談不上分離了。解決的辦法是：第一、硅

19、膠一定要天結實；第二、一定要用較多的溶劑“走柱子”，一定要到柱子的下端不再發(fā)燙，恢復到室溫后再撤去壓力。也有介紹在硅膠的最上層填上一小層石英砂，防止添加溶劑的時候，使得樣品層不再整齊。但我的感覺是如果小心上樣，添加溶劑，則沒有這個必要。上樣也有干法和濕法之分：干法就是把待分離的樣品用少量溶劑溶解后，在加入少量硅膠，拌勻后再旋去溶劑。如此得到的粉末再小心加到柱子的頂層。干法上樣較麻煩，但可以保證樣品層很平整。濕法上樣就是用少量溶劑（最好就是展開劑，如果展開劑的溶解度不好，則可以用一極性較大的溶劑，但必須少量）將樣品溶解后，再用膠頭滴管轉移得到的溶液，沿著層析柱內(nèi)壁均勻加入。然后用少量溶劑洗滌后，

20、再加入。濕法較方便，熟手一般采用此法。上樣完畢后，接著即用淋洗劑淋洗。淋洗劑一般采用 TLC 分析得到的展開劑的比例再稀釋一倍后的溶劑。由于層析柱和薄板的不同，即使兩者使用的硅膠都相同，但是在把 TLC 分析得到的展開劑用在柱層析時，也顯得極性偏大，所以要稀釋一倍，但又不能稀釋太多，否則成了靠擴散作用來分離，效果也不會好。接下來談 TLC,需要切記的是：第一、某種樣品在這種展開劑中只顯示一個點，并不等于在別的展開劑中也只顯示一個點。因此在尋找展開劑時，多嘗試幾種比例不同，成分不同的展開劑。展開劑的極性太小，點分不開，極性太大，也分不開.一般以目標產(chǎn)物的 Rf 值在 0.3 左右為最佳。第二、點

21、不能點得太濃，否則容易重疊，不易判斷，因為如果兩個點相近的話，一濃就變成一個點了。第三、板上點的展開的清晰程度和溶劑的極性和物質在該溶劑中的溶解性有關，只有兩者比較合適了，才能有一個交好的分離效果。選擇適當?shù)恼归_劑是首要任務.一般常用溶劑按照極性從小到大的順序排列大概為：石油迷己烷苯乙醛THFZ 酸乙酯丙酮乙醇甲醇使用單一溶劑，往往不能達到很好的分離效果，往往使用混合溶劑通常使用一個高極性和低級性溶劑組成的混合溶劑，高極性的溶劑還有增加區(qū)分度的作用，常用的溶劑組合有：Petroleumether/Ethylacetate,Petroleumether/Acetone,Petroleumethe

22、r/Ether,Petroleumether/CH2Cl2,CH2Cl2ethylacetate,ethylacetate/MeOH,CHCl3/ethylacetate展開劑的比例要靠嘗試.一般根據(jù)文獻中報道的該類化合物用什么樣的展開劑，就首先嘗試使用該類展開劑，然后不斷嘗試比例，直到找到一個分離效果好的展開劑。很多時候，展開劑的選擇要靠自己不斷變換展開劑的組成來達到最佳效果。我在實驗中，為了實現(xiàn)一個配體與其他雜質有效分離，曾經(jīng)嘗試了所有的溶劑用來兩兩組合后，最后才找到 petroleumether/THF 這類不常見的混合溶劑。一般把兩種溶劑混合時，采用高極性/低極性的體積比為 1/3 的

23、混合溶劑，如果有分開的跡象再調整比例，達到最佳效果，如果沒有分開的跡象，最好是換溶劑。對于在硅膠中這種酸性物質上易分解的物質，在展開劑里往往加一點點三乙胺，氨水，口比咤等堿性物質來中和硅膠的酸性。當然，選擇所添加的堿性物質，還必須考慮容易從產(chǎn)品中除去，氨水無疑是較好的選擇。這里要特別強調的一點是：分離效果的好壞和所用硅膠和溶劑的質量很有關系。不同廠家生產(chǎn)的硅膠可能含水量以及顆粒的粗細程度，酸性強弱不同，從而導致產(chǎn)品在某個廠家的硅膠中分離效果很好， 但在另一個廠家的就不行。 溶劑的含水量和雜質含量對分離效果都有明顯的影響。溫度對分離效果影響也很明顯。我們實驗室沒有空調，我在實驗過程發(fā)現(xiàn)，在夏天分

24、離相同的產(chǎn)品，所需的淋洗劑極性要比在冬天小很多，這一點大家也是可以理解的。鑒于此，使用的硅膠，不用時一定要密封，防止吸潮。TLC 所用的硅膠板一定要保存在干燥器里面，或使用前在紅外烘箱里干燥一段時間。在利用 TLC 跟蹤反應時，在點板的時候往往是反應體系的混和溶液點一個點 A,每種難揮發(fā)的原料各點一個點 B,C,D 等等，然后所有的原料和反應體系的混合溶劑再共同點一個混合點 X,這些點在板上的位置如圖所示：AXBCD這樣的好處是展開后可以清楚地看見每個點的位置，把 A 這個點展開后的各個層份的點與B,C 等原料比較，從而判斷原料消失沒有，點混合點 X 的目的在于，方便觀察，因為有時候，板展開后

25、，各點的位置有些變形，或者由于邊緣效應等等，使得判斷不易。利用 TLC 判斷物質的純度時，往往要和 NMR 相結合，因為某種樣品在這種展開劑中只顯示一個點，并不等于在別的展開劑中也只顯示一個點。但有趣的是，由于 HNMR 可鑒別的純度也就在 95%左右，有時候 HNMR 現(xiàn)示較純的東西，一點板就會發(fā)現(xiàn)有幾個點。所以，兩者要結合使用。但是自己以前的樣品，則可以只通過點板來判斷純度。補充一下層析柱硅膠的用量一般是每分離 1g 產(chǎn)品使用 30-100g 硅膠柱子的形狀比例一般是內(nèi)徑：高度=1:810 展開劑盡量使用能夠分開的極性最低的溶劑還有， 濕法裝柱子的時候本人認為最好是先在底部裝有石英砂的柱子

26、中預加溶劑再按濕法加料這樣能保證一開始加入的填料處于全濕態(tài)，杜絕氣泡剛裝的柱子在一段時間內(nèi)可能會有長度變短的現(xiàn)象所以可以給它一個穩(wěn)定時間后再投入使用在作中藥材薄層層析時，很多藥材因為含有竣基或者氨基會造成跑板拖尾現(xiàn)象或者重疊，這將難以和標準品比對。建議大家漢竣基的藥可在展開劑里面加少量竣酸，含氨基的藥可以在展開劑里面加少量三乙胺。中藥做薄層鑒別時，需要檢測的主要成分，其性質應該與提取方法、展開劑極性、顯色條件相適應。比如生物堿類成分，多顯堿性，因此提取方法多為堿性氯仿回流，展開劑中肯定有濃氨或二乙胺，顯色用碘化鈾鉀試液。再如黃酮類，不論是黃酮昔還是昔元，分子結構中都有酚羥基而顯酸性，所以提取方

27、法多為用乙酸乙酯在酸水中萃取，展開劑多用甲苯-乙酸乙酯-甲酸系列，顯色劑 5%三氯化鋁乙醇溶液或 1%三氯化鐵乙醇溶液。另外，做薄層時，建議用甲醇處理一份供試品溶液備用，他的內(nèi)容囊括了你需要檢驗的所有成分，如果某個薄層你做不出來，就可以用這份供試品溶液復核，如果有斑點，改進一下你的制備方法就可以了；如果還沒有，就考慮是你樣品的問題了。作中藥檳榔的薄層鑒別時，用濃氨試液調 PH 一定要準確，否則無斑點出現(xiàn).薄層色譜小知識1、怎樣提高點樣效率？點樣是造成 TLC 定量誤差的主要來源。實驗證明：定量毛細管更適合較小體積的點樣；微量注射器更適合較大體積的點樣。這主要是因為微量注射器受小氣泡、溶液回爬現(xiàn)

28、象的影響較大。為避免不同定量毛細管理體制的占樣誤差，建議一塊薄層板上最好用同一只定量毛細管。但應注意更換樣品時，應將毛細管用超聲波或不同極性溶課劑清洗干凈。在制備樣品時，溶樣溶劑黏度不能過高，以便于點樣；溶劑沸點過低則進樣體積易變，過高則會改變展開劑組成；對樣品溶解度過高會使樣點發(fā)生空心現(xiàn)象，常用的溶劑為甲醇、乙醇、丙酮。經(jīng)典 TLC 樣點原點一般為直徑 3mm 點間距離1-2cm 底邊距離 1.5cm;HPLC 樣點原點一般為直徑 1mm 點間距 5mm 底邊距 1cm.2、展開劑的選擇TLC 與 HPLC 相比，一個突出的優(yōu)點就是流動相的選擇具有更大的靈活性，流動相的選擇的目的是使絕大部分

29、樣品的 Rf 值位于 0.10.7 之間并達到較好的分離，與此對應的是流動相要有適當?shù)膹姸群徒M成。流動相強度越大，溶質 Rf 值越大，但很可能降低分離能力；另外單一溶劑很難分離較復雜的混合物、根據(jù)相似相溶原理，要使用多元溶劑體系。一般展開劑體系選擇如下：根據(jù)分離樣品性質、薄層色譜板性質選擇一個二元溶劑體系，通過調節(jié)溶劑比例以尋求適合 Rf 值，適合的 Rf 值找到后，再尋求極性參數(shù)相同的二元溶劑體系兩個，以這三個組成為三點組成一個三角形，則可看到：三角形頂點是二元體系，邊是三元體系，三角形內(nèi)是四元體系，并且極性一致，可根據(jù)幾何原理得出任一點組成，這種方法較為直觀，也較簡單。3、TLC 的通用顯

30、色方法理想的顯色希望靈敏度高，斑點顏色穩(wěn)定、斑點與背景間的對比度好，斑點的大小及顏色的深度與物質的量成正比，在樣品組成并不完全已知的情況下，通用顯色方法顯得尤為重要，通用顯色方法主要有：1、紫外照射法：方便、不破壞樣品；2、碘蒸氣法：通用性強，與紫外法結合靈敏度高于該兩法單獨使用；3、熒光試劑：制造熒光背景，使原來紫外下無熒光物質被鑒別，有熒光物質更明顯；4、硫酸溶劑：對絕大多數(shù)有機物有效，但有破壞性。選擇適當?shù)恼归_劑是首要任務.一般常用溶劑按照極性從小到大的順序排列大概為：石油迷<己烷<苯<乙醛<THF<乙酸乙酯&

31、lt;丙酮<乙醇<甲醇使用單一溶劑，往往不能達到很好的分離效果，往往使用混合溶劑通常使用一個高極性和低級性溶劑組成的混合溶劑，高極性的溶劑還有增加區(qū)分度的作用，常用的溶劑組合有：Petroleumether/Ethylacetate,petroleumether/Acetone,Petroleumether/Ether,Petroleumether/CH2cl2,ethylacetate/MeOH,CHCl3/ethylacetate展開劑的比例要靠嘗試.一般根據(jù)文獻中報道的該類化合物用什么樣的展開劑，就首先嘗試使用該類展開劑，然后不斷嘗試比例，直到找到一個分離效果

32、好的展開劑。展開劑的選擇條件：對的所需成分有良好的溶解性；可使成分間分開；待測組分的 Rf 在 0.20.8之間，定量測定在 0.30.5 之間；不與待測組分或吸附劑發(fā)生化學反應；沸點適中，黏度較??；展開后組分斑點圓且集中；混合溶劑最好用新鮮配制。一般來說，弱極性溶劑體系的基本兩相由正己烷和水組成，再根據(jù)需要加入甲醇、乙醇，乙酸乙酯來調節(jié)溶劑系統(tǒng)的極性，以達到好的分離效果,適合于生物堿、黃酮;菇類等的分離；中等極性的溶劑體系由氯仿和水基本兩相組成，由甲醇、乙醇，乙酸乙酯等來調節(jié)，適合于慈醍、香豆素，以及一些極性較大的木脂素和菇類的分離；強極性溶劑，由正丁醇和水組成，也靠甲醇、乙醇，乙酸乙酯等來

33、調節(jié)，適合于極性很大的生物堿類化合物的分離。很多時候展開劑的選擇要靠自己不斷變換展開劑的組成來達到最佳效果。我們在實驗中，為了實現(xiàn)一個配體與其他雜質有效分離，曾經(jīng)嘗試了很多種的溶劑組合，最后才找到石油醒一 EtOAc-HCOOH（5.5:3.5:0.1）混合溶劑。一般把兩種溶劑混合時，采用高極性/低極性的體積比為 1/3 的混合溶劑，如果有分開的跡象，再調整比例（或者加入第三種溶劑） ，達到最佳效果；如果沒有分開的跡象（斑點較“拖”），最好是換溶劑。對于在硅膠中這種酸性物質上易分解的物質，在展開劑里往往加一點點三乙胺，氨水，口比咤等堿性物質來中和硅膠的酸性。（選擇所添加的堿性物質，還必須考慮容

34、易從產(chǎn)品中除去，氨水無疑是較好的選擇。）分離效果的好壞和所用硅膠和溶劑的質量很有關系：不同廠家生產(chǎn)的硅膠可能含水量以及顆粒的粗細程度，酸性強弱不同，從而導致產(chǎn)品在某個廠家的硅膠中分離效果很好，但在另一個廠家的就不行。溶劑的含水量和雜質含量對分離效果都有明顯的影響。溫度，濕度對分離效果影響也很明顯，在實驗中我們發(fā)現(xiàn)有時同一展開條件，上下午的 Rf截然不同展開劑的選擇主要根據(jù)樣品的極性、溶解度和吸附劑的活性等因素來考慮在進行薄層層析時，首先應該知道未知化學成分的類型，其極性的大致歸屬，從提取液或從色譜柱的流動相極性可知，另外某樣品里含多種化學成分先按極性不同大致分，然后細分，對于分離未知的化學物質

35、，展開劑的選擇也是一個摸索的過程，不應該僅僅從展開劑考慮，多因素綜合衡量！溶劑：層析過程中溶劑的選擇，對組分分離關系極大。在柱層析時所用的溶劑（單一劑或混合溶劑）習慣上稱洗脫劑，用于薄層或紙層析時常稱展開劑。洗脫劑的選擇，須根據(jù)被分離物質與所選用的吸附劑性質這兩者結合起來加以考慮在用極性吸附劑進行層析時，當被分離物質為弱極性物質，一般選用弱極性溶劑為洗脫劑；被分離物質為強極性成分，則須選用極性溶劑為洗脫劑。如果對某一極性物質用吸附性較弱的吸附劑（如以硅藻土或滑石粉代替硅膠），則洗脫劑的極性亦須相應降低。在柱層操作時，被分離樣品在加樣時可采用于法，亦可選一適宜的溶劑將樣品溶解后加入。溶解樣品的溶

36、劑應選擇極性較小的，以便被分離的成分可以被吸附。然后漸增大溶劑的極性。這種極性的增大是一個十分緩慢的過程，稱為“梯度洗脫”，使吸附在層析柱上的各個成分逐個被洗脫。如果極性增大過訣（梯度太大），就不能獲得滿意的分離。溶劑的洗脫能力，有時可以用溶劑的介電常數(shù)（e）來表示。介電常數(shù)高，洗脫能力就大。以上的洗脫順序僅適用于極性吸附劑，如硅膠、氧化鋁。對非極性吸附劑，如活性炭，則正好與上述順序相反，在水或親水住溶劑中所形成的吸附作用，較在脂溶性溶劑中為強。3.被分離物質的性質：被分離的物質與吸附劑，洗脫劑共同構成吸附層析中的三個要素，彼此緊密相連。在指定的吸附劑與洗脫劑的條件下，各個成分的分離情況，直接

37、與被分離物質的結構與性質有關。對極性吸附劑而言，成分的極性大，吸附住強。當然，中草藥成分的整體分子觀是重要的，例如極性基團的數(shù)目愈多，被吸附的住能就會更大些，在同系物中碳原子數(shù)目少些，被吸附也會強些?？傊?，只要兩個成分在結構上存在差別，就有可能分離，關鍵在于條件的選擇。要根據(jù)被分離物質的性質，吸附劑的吸附強度，與溶劑的性質這三者的相互關系來考慮。首先要考慮被分離物質的極性。如被分離物質極性很小為不含氧的菇烯，或雖含氧但非極性基團，則需選用吸附性較強的吸附劑，并用弱極性溶劑如石油醛或苯進行洗脫。但多數(shù)中藥成分的極性較大，則需要選擇吸附性能較弱的吸附劑（一般出IV 級）。采用的洗脫劑極性應由小到大

38、按某一梯度遞增，或可應用薄層層析以判斷被分離物在某種溶劑系統(tǒng)中的分離情況。此外，能否獲得滿意的分離，還與選擇的溶劑梯度有很大關系。現(xiàn)以實例說明吸附層析中吸附劑、洗脫劑與樣品極性之間的關系。如有多組分的混合物，象植物油脂系由烷燒、烯煌、舀醇酯類、甘油三酸醋和脂肪酸等組份。當以硅膠為吸附劑時，使油脂被吸附后選用一系列混合溶劑進行洗脫，油脂中各單一成分即可按其極性大小的不同依次被洗脫。又如對于 C-27 管體皂 4 元類成分，能因其分字中羥基數(shù)目的多少而獲得分離：將混合皂 4 元溶于含有 5%氯仿的苯中，加于氧化鋁的吸附柱上，采用以下的溶劑進行梯度洗脫。如改用吸附性較弱的硅酸鎂以替代氧化鋁，由于硅酸鎂的吸附性較弱，洗脫劑的極牲需相應