組織培養(yǎng)期末復(fù)習(xí)題

1、精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上復(fù)習(xí)題一、名詞解釋：1、植物組織培養(yǎng)：在無(wú)菌條件下利用人工培養(yǎng)基對(duì)植物的組織、器官、細(xì)胞以及原生 質(zhì)體進(jìn)行培養(yǎng)，使之產(chǎn)生再生的完整植株或其它具有經(jīng)濟(jì)價(jià)值的生物制品的技術(shù)。2、外植體：由活植物體上切取下來(lái)用以培養(yǎng)的那部分組織、器官等。3形態(tài)建成：外植體在適宜的培養(yǎng)條件下經(jīng)脫分化、再分化或直接發(fā)育成各種形態(tài)完整的植物體的過(guò)程。 4、器官發(fā)生：離體培養(yǎng)的組織、細(xì)胞在誘導(dǎo)條件下經(jīng)分裂和增殖再分化形成根和芽等器官的過(guò)程。5、體細(xì)胞胚胎發(fā)生：指由培養(yǎng)細(xì)胞誘導(dǎo)分化出的胚芽、胚根、胚軸的胚狀結(jié)構(gòu)，進(jìn)而長(zhǎng)成完整植株。6、人工種子：指通過(guò)植物組織培養(yǎng)的方法獲得的具有正常發(fā)育能力的材料，外

2、面還被有特定物質(zhì)，在適宜條件下可以發(fā)芽成苗的植物幼體。7、植物細(xì)胞培養(yǎng)：是指在離體條件下對(duì)植物單個(gè)細(xì)胞或小的細(xì)胞團(tuán)進(jìn)行培養(yǎng)使其增殖的技術(shù)。8、最低有效密度：在懸浮細(xì)胞培養(yǎng)中，使懸浮培養(yǎng)細(xì)胞能夠增殖的最少接種量稱為最低有效密度或者臨界的起始密度。9、有絲分裂指數(shù)：在一個(gè)細(xì)胞群體中，處于有絲分裂的細(xì)胞占總細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)稱為有絲分裂指數(shù)，指數(shù)越高，分裂進(jìn)行的速度越快。10、細(xì)胞同步化：是指同一懸浮培養(yǎng)體系的所有細(xì)胞都同時(shí)通過(guò)細(xì)胞周期的某一特定時(shí)期。11、細(xì)胞看護(hù)培養(yǎng)：用一塊愈傷組織或植物離體組織看護(hù)單細(xì)胞使其生長(zhǎng)增殖的一種單細(xì)胞培養(yǎng)方法。12、微室培養(yǎng)：人工制造一個(gè)小室，將單細(xì)胞培養(yǎng)在小室中的少量培養(yǎng)

3、基上，使其分裂增殖形成細(xì)胞團(tuán)的方法，稱微室培養(yǎng)。13、花藥培養(yǎng)：把發(fā)育到一定階段的花藥接種在人工培養(yǎng)基上,使其發(fā)育和分化成為植株的過(guò)程。14、花粉培養(yǎng)：是從花藥中分離出花粉粒,使之成為分散的或游離的狀態(tài),通過(guò)培養(yǎng)使花粉粒脫分化,進(jìn)而發(fā)育成完整植株的過(guò)程.15、胚胎培養(yǎng)：是指使胚或具胚器官在離體無(wú)菌條件下發(fā)育成幼苗的技術(shù)。16、胚培養(yǎng)：在無(wú)菌條件下將胚從胚珠或種子中分離出來(lái)，置于培養(yǎng)基上進(jìn)行離體培養(yǎng)的方法。17、體細(xì)胞雜交：是指兩個(gè)離體細(xì)胞通過(guò)一定誘導(dǎo)技術(shù)使質(zhì)膜接觸而融合在一起隨后導(dǎo)致兩個(gè)細(xì)胞核物質(zhì)融合的技術(shù)二、填空題、選擇題1、根據(jù)外植體種類的不同可將植物組織培養(yǎng)分為器官培養(yǎng)、組織培養(yǎng)、細(xì)胞培

4、養(yǎng)、等。2、被譽(yù)為植物組織培養(yǎng)的奠基人是：Gautheret，White，Nobecourt3、根據(jù)對(duì)培養(yǎng)基組成物質(zhì)的化學(xué)成分是否完全了解來(lái)區(qū)分，可以將培養(yǎng)基分為天然培養(yǎng)基、合成培養(yǎng)基和半合成培養(yǎng)基。根據(jù)培養(yǎng)基的物理狀態(tài)來(lái)區(qū)分，可以將培養(yǎng)基分為固體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基和半固體培養(yǎng)基。4、大量元素有氮、磷、鉀、鈣、鎂、硫等6種。微量元素有：鐵、錳、鋅、硼、銅、鉬等6種。大量元素和微量元素的分類是依據(jù)植物對(duì)元素需求濃度來(lái)劃分的，需求濃度大于0.5mmol/L的稱為大量元素，小于0.5mmol/L的則為微量元素。5、在植物組織培養(yǎng)中常用的生長(zhǎng)素有：IAA（吲哚乙酸）、NAA（萘乙酸）、2，4-D（二氯

5、苯氧乙酸）、2，4，5-T（二氯苯氧乙酸）和IBA（吲哚丁酸）。其中只有IAA是天然植物激素，其他幾種都是人工合成的生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)。6、細(xì)胞分裂素均為腺嘌呤的衍生物，在組織培養(yǎng)中常用的細(xì)胞分裂素有KT（激動(dòng)素）、6-BA（6-芐基嘌呤）、ZT（玉米素）和2iP（異戊烯腺嘌呤）。其中ZT和2iP為天然的植物激素。7、培養(yǎng)基的名稱，多數(shù)以發(fā)明人的名字來(lái)命名。8、植物的再分化有器官發(fā)生和胚胎發(fā)生兩種類型。9、愈傷組織形成過(guò)程可劃分為誘導(dǎo)期、分裂期、形成期三個(gè)時(shí)期10、器官發(fā)生有直接發(fā)生和間接發(fā)生兩種發(fā)生方式。11、根據(jù)在培養(yǎng)中所取的外植體的部位不同，植物胚胎培養(yǎng)包括胚培養(yǎng)、胚乳培養(yǎng)、胚珠培養(yǎng)、子房培養(yǎng)

6、。12、根據(jù)融合時(shí)細(xì)胞的完整程度，原生質(zhì)體融合可分為兩大類：對(duì)稱融合和非對(duì)稱融合。三、簡(jiǎn)答題 1、簡(jiǎn)述植物組織培養(yǎng)的整個(gè)過(guò)程。（1）完整植株（2）器官消毒（3）外植體（4）誘導(dǎo)愈傷組織或直接分不定芽（5）繼代增殖（6）生根成苗（7）練苗（8）移栽2、母液的配制應(yīng)注意哪些事項(xiàng)？藥品稱量應(yīng)準(zhǔn)確，尤其微量元素化合物應(yīng)精確到0.0001克，大量元素可精確到0.01克。 配制母液的濃度適當(dāng)，一是濃度大長(zhǎng)時(shí)間保存后易沉淀，二是濃度小，用量少，在配制培養(yǎng)基時(shí)易影響精確度。 母液貯藏不宜過(guò)長(zhǎng)，一般幾個(gè)月左右，要定期檢查，如出現(xiàn)渾濁、沉淀及霉菌等現(xiàn)象，就不能使用。 母液應(yīng)放在24的冰箱中保存。 3、量取母液時(shí)應(yīng)

7、注意哪些問(wèn)題？在使用提前配制的母液時(shí)，應(yīng)在量取各種母液之前，輕輕搖動(dòng)盛放母液的瓶子，如果發(fā)現(xiàn)瓶中有沉淀、懸浮物或被微生物污染，應(yīng)立即淘汰這種母液，重新進(jìn)行配制；用量筒或移液管量取培養(yǎng)基母液之前，必須用所量取的母液將量筒或移液管潤(rùn)洗2次；量取母液時(shí)，最好將各種母液按將要量取的順序?qū)懺诩埳?，量?種，劃掉1種，以免出錯(cuò)。 4、簡(jiǎn)述愈傷組織形成的條件外植體需脫離母本；合適的培養(yǎng)條件；外植體的類型；外植體內(nèi)源激素水平5、優(yōu)良的愈傷組織應(yīng)具備哪些特性？旺盛的自我增殖能力，以便用這些愈傷組織建立大規(guī)模的愈傷組織無(wú)性系。高度的胚性或再分化能力，以便從這些愈傷組織得到再生植物。容易散碎，以便用這些愈傷組織建立

8、優(yōu)良的懸浮系，并且在需要時(shí)能從中分離出全能性的原生質(zhì)體。經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期繼代保存而不喪失胚性，方便對(duì)它們進(jìn)行各種遺傳操作。6、簡(jiǎn)述器官發(fā)生途徑產(chǎn)生再生植株的三種基本方式。（1）先形成芽，再在芽伸長(zhǎng)后，在其莖的基部長(zhǎng)出根而形成小植株，多數(shù)植物屬這種情況；（2）先產(chǎn)生根，再?gòu)母幕糠只鲅慷纬尚≈仓?。這種情況較難誘導(dǎo)芽的形成，尤其對(duì)于單子葉植物；（3）先在愈傷組織的鄰近不同部位分別形成芽和根，然后兩者結(jié)合起來(lái)形成一株小植株。7、簡(jiǎn)述人工種子制作程序高質(zhì)量體細(xì)胞胚胎發(fā)生系統(tǒng)的建立體細(xì)胞胚胎發(fā)生的同步化控制人造種皮及人造胚乳研制與包埋人工種子的轉(zhuǎn)換8、簡(jiǎn)述醋酸酯熒光素（FDA）染色法測(cè)定活細(xì)胞的原理 FD

9、A本身無(wú)熒光，無(wú)極性，可自由通過(guò)原生質(zhì)體膜進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部，進(jìn)入后由于受到活細(xì)胞內(nèi)脂酶分解，而產(chǎn)生有熒光的極性物質(zhì)熒光素，不能自由出入原生質(zhì)體膜，在熒光顯微鏡下觀察到的熒光是有活力的，反之無(wú)活力。9、簡(jiǎn)述懸浮培養(yǎng)細(xì)胞懸浮培養(yǎng)細(xì)胞滯后期（延遲期）：細(xì)胞很少分裂，其長(zhǎng)短與接種量小和繼代時(shí)原種細(xì)胞所處的生長(zhǎng)期有關(guān)；對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期：細(xì)胞分裂活躍，細(xì)胞數(shù)目增加，增長(zhǎng)速率保持不變；直線生長(zhǎng)期：細(xì)胞生長(zhǎng)和發(fā)育最明顯的時(shí)期；緩慢期：生長(zhǎng)逐漸緩慢,培養(yǎng)液消耗將盡，有毒代謝物質(zhì)增多，氧氣減少靜止期：生長(zhǎng)幾乎處于停止?fàn)顟B(tài)，細(xì)胞數(shù)目增加極少，甚至開始死亡。9、簡(jiǎn)述影響花藥培養(yǎng)的因素基因型發(fā)育時(shí)期植株的生理狀態(tài)預(yù)處理培養(yǎng)基和培

10、養(yǎng)條件花藥的接種密度（密度效應(yīng)）培養(yǎng)的方法與方式，如固體培養(yǎng)、液體培養(yǎng)（Ficoll）、雙層培養(yǎng)分步培養(yǎng)、條件培養(yǎng)等。10、簡(jiǎn)述花藥培養(yǎng)的意義（1）縮短育種年限。（2）提高選擇效率。（3）節(jié)省田間試驗(yàn)的土地和勞力。（4）克服遠(yuǎn)緣雜種不育性與分離的困難。（5）單倍體的應(yīng)用潛力。（6）與細(xì)胞融合相結(jié)合。（7）作為遺傳工程受體更為有效。11、花粉培養(yǎng)與花藥培養(yǎng)比相比有哪些優(yōu)點(diǎn)？（1）花藥培養(yǎng)容易受藥壁、花絲、藥隔等體細(xì)胞組織的影響，再生植株會(huì)出現(xiàn)不同倍性的個(gè)體，而分離的花粉培養(yǎng)可以克服這一不足。（2）能更好調(diào)節(jié)控制核發(fā)育的各種因子，而且可以直接從單細(xì)胞開始觀察整個(gè)雄核發(fā)育的過(guò)程，為研究雄核的生理生化

11、等問(wèn)題提供方便。（3）原則上，從花粉培養(yǎng)能得到更多的花粉植株。12、簡(jiǎn)述幼胚離體培養(yǎng)的生長(zhǎng)發(fā)育方式 。胚性發(fā)育。幼胚接種到培養(yǎng)基上以后，仍然按照在活體內(nèi)的發(fā)育方式發(fā)育，最后形成成熟胚(有時(shí)甚至可能類似種子)，然后再按種子萌發(fā)途徑出苗形成完整植株，這種途徑發(fā)育的幼胚一般一個(gè)幼胚將來(lái)就是一個(gè)植株。早熟萌發(fā)。幼胚接種后，離體胚不繼續(xù)胚性生長(zhǎng)，而是在培養(yǎng)基上迅速萌發(fā)成幼苗，通常稱之為早熟萌發(fā)（未經(jīng)完成正常的胚胎發(fā)育過(guò)程而形成幼苗的現(xiàn)象叫早熟萌發(fā)）。在大多數(shù)情況下，一個(gè)幼胚萌發(fā)成一個(gè)植株，但有時(shí)會(huì)由于細(xì)胞分裂產(chǎn)生大量的胚性細(xì)胞，以后形成許多胚狀體，從而可以形成許多植株，這種現(xiàn)象就是所謂的叢生胚現(xiàn)象。愈傷

12、組織。在許多情況下，幼胚在離體培養(yǎng)中首先發(fā)生細(xì)胞增殖，形成愈傷組織。一般來(lái)講由胚形成的愈傷組織大多為胚性愈傷組織，這種胚性愈傷組織很容易分化形成植株13、何謂離體受精，簡(jiǎn)述其意義。從花粉萌發(fā)到受精形成種子，從種子萌發(fā)到幼苗形成的整個(gè)過(guò)程，均在試管內(nèi)完成，稱為離體受精，或試管受精。 離體受精技術(shù)在克服自交不親和性和遠(yuǎn)緣雜交障礙，特別是克服花粉在柱頭上不萌發(fā)或萌發(fā)后不能進(jìn)入花柱，或在花柱中生長(zhǎng)緩慢，使配子不能如期融合方面有著極其重要的意義。另外，試管受精技術(shù)也為外源特異基因的有性轉(zhuǎn)移，有誘導(dǎo)遺傳變異開辟了一條新途徑。14、簡(jiǎn)述聚乙二醇（PEG）誘導(dǎo)細(xì)胞融合的原理。由于PEG分子具有輕微的負(fù)極性，故

13、可以與具有正極性基團(tuán)的水、蛋白質(zhì)和碳水化合物等形成H鍵，當(dāng)PEG分子鏈足夠長(zhǎng)時(shí)，在相鄰原生質(zhì)體之間形成分子橋，其結(jié)果是使原生質(zhì)體發(fā)生粘連。與膜相連的PEG分子被洗掉后，膜上電荷發(fā)生紊亂而重新分配。當(dāng)兩層膜緊密接觸的區(qū)域電荷重新分配時(shí)，可能使一種原生質(zhì)體上的帶正電荷的基團(tuán)連接到另一種原生質(zhì)體的帶負(fù)電荷的基團(tuán)上，進(jìn)而促使原生質(zhì)體的融合；另外，PEG能增加類脂膜的流動(dòng)性，也使原生質(zhì)體的核、細(xì)胞器發(fā)生融合成為可能。 15簡(jiǎn)述原生質(zhì)體融合的過(guò)程（1）凝聚作用階段，其間兩個(gè)或兩個(gè)以上的原生質(zhì)體的質(zhì)膜彼此靠近； （2）在很小的局部區(qū)域質(zhì)膜緊密粘連，彼此融合，在兩個(gè)原生質(zhì)體之間細(xì)胞質(zhì)呈現(xiàn)連續(xù)狀態(tài)，或是出現(xiàn)橋；

14、（3）由于細(xì)胞質(zhì)橋的擴(kuò)展，融合完成，形成球形的異核體或同核體。16、體細(xì)胞雜種鑒定的方法有哪些？（1）形態(tài)鑒定：根據(jù)雙親的形態(tài)學(xué)性狀觀察進(jìn)行鑒定。（2）細(xì)胞學(xué)鑒定：細(xì)胞器鑒定、染色體鑒定。（3）生化鑒定：如同功酶鑒定（4）分子鑒定：如RFLP鑒定、RAPD標(biāo)記鑒定17、簡(jiǎn)述熱處理脫毒原理。（1）病毒是DNA大分子，病毒進(jìn)入植物細(xì)胞后，隨植物細(xì)胞DNA一起復(fù)制。熱處理并不能殺死細(xì)胞，只是鈍化病毒的活性，使病毒在植物體內(nèi)增殖減緩或增殖停止，而失去病毒的侵染能力。（2）熱處理是一種物理效應(yīng)，可加速植物細(xì)胞分裂，在激烈分裂的細(xì)胞中正常核蛋白合成占優(yōu)勢(shì)，使植物細(xì)胞在與病毒繁殖的競(jìng)爭(zhēng)中取勝。因此加速分生組

15、織細(xì)胞的分裂，能夠獲得無(wú)病毒植株。（3）依據(jù)病毒對(duì)高溫的敏感，寄主耐高溫。利用這一差異，選擇適當(dāng)?shù)臏囟群吞幚頃r(shí)間，進(jìn)行高溫處理，就能使寄主體內(nèi)病毒濃度降低，傳遞速度減慢或失去活性，而寄主細(xì)胞仍然存活，并加快分裂和生長(zhǎng)。四、論述題1解釋長(zhǎng)期培養(yǎng)物形態(tài)發(fā)生潛力喪失的原因愈傷組織或懸浮培養(yǎng)物起初具有器官發(fā)生或胚胎發(fā)生的潛力，但經(jīng)過(guò)反復(fù)繼代保存之后，這種形態(tài)發(fā)生能力常常逐漸下降，有些甚至完全損失。為了解釋這種現(xiàn)象，現(xiàn)在有三種假說(shuō)：（1）遺傳說(shuō)。該假說(shuō)認(rèn)為，形態(tài)發(fā)生潛力的喪失是由于在培養(yǎng)細(xì)胞中的核的特性發(fā)生了改變，即細(xì)胞核內(nèi)的遺傳物質(zhì)在培養(yǎng)繼代過(guò)程中由于變異等原因而發(fā)生了改變或是突變。因此，由這種原因所

16、造成的形態(tài)發(fā)生潛力的喪失是不可逆的。（2）生理說(shuō)。該假說(shuō)認(rèn)為，隨著不斷的培養(yǎng)繼代的進(jìn)行，培養(yǎng)組織或細(xì)胞中的內(nèi)源激素平衡關(guān)系可能會(huì)發(fā)生改變或是由于對(duì)外源生長(zhǎng)物質(zhì)的敏感性發(fā)生改變，從而導(dǎo)致不能形態(tài)發(fā)生。在這種情況下，細(xì)胞雖然停止了器官和胚胎的分化，但并不一定就喪失了這種分化能力。因而，在這種情況下，如果改變外部處理?xiàng)l件，應(yīng)該有可能使細(xì)胞的這種內(nèi)在潛力得到恢復(fù)。（3）競(jìng)爭(zhēng)說(shuō)。該假說(shuō)認(rèn)為，在復(fù)雜的多細(xì)胞外植體中，存在胚性的細(xì)胞和非胚性兩種細(xì)胞類型，如果非胚性的細(xì)胞類型在所用的培養(yǎng)基中具有生長(zhǎng)上的選擇優(yōu)勢(shì)，在反復(fù)的繼代培養(yǎng)中，非胚性細(xì)胞的群體將會(huì)逐步增加，而胚性成分則逐漸減少。到了一定時(shí)期之后，在培養(yǎng)物

17、中已不再含有任何胚性細(xì)胞，這時(shí)若想再恢復(fù)它們的胚胎發(fā)生能力就不可能了。然而，如果在培養(yǎng)物中存在少量胚性細(xì)胞，只是由于處在支配地位的非胚性細(xì)胞的抑制作用，這些胚性細(xì)胞的全能性無(wú)法表達(dá)，在這種情況下，通過(guò)改變培養(yǎng)基成分，使之有選擇地促進(jìn)全能細(xì)胞的增殖，就應(yīng)當(dāng)有可能恢復(fù)該培養(yǎng)物的形態(tài)發(fā)生潛力2、討論構(gòu)建成功的懸浮細(xì)胞培養(yǎng)體系的條件（1）懸浮培養(yǎng)物分散性良好，細(xì)胞團(tuán)較小，一般在3050個(gè)細(xì)胞以下，在實(shí)際培養(yǎng)中很少有完全由單細(xì)胞組成的植物細(xì)胞懸浮系；（2）均一性好，細(xì)胞形狀和細(xì)胞團(tuán)大小大致相同。懸浮系外觀為大小均一的小顆粒，培養(yǎng)基清澈透亮，細(xì)胞色澤呈鮮艷的乳白或淡黃色；（3）細(xì)胞生長(zhǎng)迅速，懸浮細(xì)胞的生長(zhǎng)

18、量一般23天甚至更短時(shí)間便可增加一倍。3、討論花藥培養(yǎng)中單倍體形成的四種途徑（1）第一種途徑：?jiǎn)魏诵℃咦舆M(jìn)行一次均等分裂，形成兩個(gè)等同的子細(xì)胞，而不是形成 相互有別的營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞和生殖細(xì)胞。兩個(gè)等同的子細(xì)胞都參與孢子體的發(fā)育。（2）第二種途徑：?jiǎn)魏诵℃咦酉冗M(jìn)行一次正常的非均等分裂，然后通過(guò)營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞的進(jìn)一步分裂形成孢子體。生殖細(xì)胞或者完全不再分裂，或者分裂1-2次后即行退化。這種發(fā)育途徑在煙草、大麥、光葉曼陀羅、辣椒中都普遍存在。（3）第三種途徑： 在天仙子中，花粉胚主要是由生殖細(xì)胞單獨(dú)形成的，營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞或是完全不再分裂，或只分裂有限幾次即停止。無(wú)論在哪種情況下，營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞最終都變成一個(gè)類似胚柄的結(jié)構(gòu)，附著在由生殖細(xì)胞起源的胚的胚根一端。（4）第四種途徑：如在第2種途徑中一樣，形成一個(gè)營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞和生殖細(xì)胞。但在這種情況下，兩個(gè)細(xì)胞都進(jìn)一步參與孢子體的形成。這種雄核發(fā)育途徑迄今還只見于南洋金花。4、解釋莖尖培養(yǎng)脫毒的原理:病毒在植物體內(nèi)分布不均勻，其數(shù)量隨植株部位及年齡而異，越靠近莖頂端區(qū)域，病毒感染的程度越低，生長(zhǎng)點(diǎn)