基因工程在環(huán)境學(xué)中的應(yīng)用

1、基因工程在環(huán)境學(xué)中的應(yīng)用比夸為止，肯關(guān)舉出IT型的世義噴務(wù).表述不一"總就卓J®而言.子水平上對(duì)基國進(jìn)帝慄柞能技，求.LMltt,股認(rèn)為基因工SC(engineering)是指.運(yùn)用限制件的內(nèi)切核酸葩和連揍前等繭類將不同的DNA進(jìn)行體外切割后*連接構(gòu)碇審組的DNA刪申絹的DMA紆牛物介噴導(dǎo)人豉者頁接導(dǎo)入等轉(zhuǎn)樣方耘弓I人受體備胞進(jìn)tf克隆利丟達(dá)I從麗改變了生物的遺創(chuàng)壺出生物新品種.戴者通過尢量擴(kuò)増手段，為人襄提供有用產(chǎn)品的技152殖物金嵐檢怙白金硫彊白tMeialloihionaniJMIA'Iuh一類廣泛存在于生窗休中的寓含半0E氮覲且能祝霓金貝誘導(dǎo)的分子豐較低的金

2、屣紹舍疋訊早在】957年ValleeBL4卩吃研究重金H元鴛躡的生物學(xué)功能時(shí).曾次從烏的腎臟羯腫卩分昭褂到了動(dòng)物MT植物MT的研兜起步稍晚，19丁7年.0尿裁肚1_則住上.灶訊戛中游久發(fā)打TttftNrr.甜肓，第一個(gè)植卷IMT蛋白一小畫胚乳Ec鱉白魅威功分離出來隕L現(xiàn)后的實(shí)臉研乳陸續(xù)從水稻.養(yǎng)麥和玉栄零劣種植勒中發(fā)現(xiàn)并分薦岀了爹科植物MT僅刨呵.L5J.1植物金嵐碇僅臼的宦義HYinafcaK凹嚷接提出的程iL輒舉的XTHL薦以卜特電：分子最我卜一般只有幾十個(gè)軌些魅峨堆構(gòu)就金屬含it較高*-譙血每分子MT含有7到12個(gè)金扉離&并且，由金屬配儻擁焙合而村成i高，可達(dá)23囁到陽蚣而且*不

3、含MMKZt芳魯JHK基酸，其排列順序的輪持性和保守性較強(qiáng)；兵育獨(dú)特們金躬疏四面悴的離合結(jié)拘*因此.具宵捋斬吸收托熠線別卻Cd-MJ的啜收峰til&250im刪込MT的畋攻碑值在270miH近：含有為個(gè)高含猛華的族狀結(jié)溝，即含冇兩個(gè)結(jié)構(gòu)mt分了內(nèi)不含二硫鍛。1植物金屬硫彊白的功能自金屬碗蛋白（MT）被發(fā)現(xiàn)至今，對(duì)其功能的定論一fi郁存存看較多的爭(zhēng)議.就目前來講，對(duì)悄物MT功能的研究，維大第枝部是根抓其表達(dá)行為掛測(cè)而來.抵排測(cè)兀功能可能涉及以卜兒個(gè)方血：即能夠淸除1*1由基、解徐頑金屬離子的商啻和移與微M元素的運(yùn)輸和供給以雄持細(xì)胞內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)霑等.（1）淸除自由基1985年，Thomall

4、cyPJJVasakM15$,經(jīng)過研究發(fā)現(xiàn)，金屬戰(zhàn)雖口（MT）町以消除由于輻射而形成的務(wù)自曲基（OH）,并且,當(dāng)其與谷就甘!k（CSH）作用后,MT能御以再化n此，引領(lǐng)了人怕對(duì)mt與自in早關(guān)系這-新領(lǐng)袋的小斷硏究與探索.張艷曲的實(shí)驗(yàn)硏究花明，MT具燈扱具恃殊的化學(xué)結(jié)構(gòu)，正因如此.它是濡除體內(nèi)自由獲能力用強(qiáng)的-種蛋白質(zhì).其清除F0自山坯（OH）的維力約為SOD的1力倍左右.而潛除氧I由基（*O）的能力約是G5H的25倍用右.他41它fl冇毀強(qiáng)的抗負(fù)化活杵，可愎件為體內(nèi)補(bǔ)體抗氧化剤.解除朿金風(fēng)離子的會(huì)害金屬硫蛋門（MT）之所以能夠解除甫金屬離了的離吉作用，主更依擁是MT富含T旎氮酸，其含有的蔬裁

5、SH能鵜與E種仃需僉図爲(wèi)子進(jìn)廳強(qiáng)烈的紹合反應(yīng)例如.MT皚夠解除Pb=Hg2Cd-AgZn"和Cu"軒舲毒店并fL,能夠?qū)⑵鋽[出體外.植物MT的半就氨笊的柑何方式和所含的獨(dú)址巧動(dòng)物MT相比烙異痕尢閔此.二岀占審金屬的親和力以及仃曩令脫出了的結(jié)合腱力也有所不冋.狼多實(shí)驗(yàn)研究列表明植物MT歩因的&達(dá)邂小僉厲離了的購H作用較大.弟址推測(cè).梢物MT町能在絡(luò)合審金屬離子和解除亟金屬離孑的毒害警方血具有廣闊的應(yīng)用腦景.參與微晝?cè)氐倪\(yùn)輸和供給體內(nèi)的微呈元素多數(shù)是僉尿元素，rfnMT乂能夠結(jié)合多沖金屬離子.因此，MT在徹駅元索的運(yùn)輸和供給方曲會(huì)發(fā)揮頁娶的作用，許多探索性研究也衣明了

6、這一點(diǎn).RCFoky和ZMLiang通過花達(dá)余尋MTIa和MTIb的實(shí)驗(yàn)研究點(diǎn)明.在金屬肉予液度較低時(shí)，MT作為金屆離于的體，能夠較好地維持內(nèi)環(huán)境中金械離子的穩(wěn)定水平，于此同時(shí)能夠有效地將金佩離子運(yùn)輸和供給到所椎費(fèi)的細(xì)織。此外，LHYu和MLhneda尊他砒兗發(fā)現(xiàn).木種的2.尤其是荽社部分.nceMI0J表達(dá)賦丑常島.約足葉片中的】50倍A右，由此推測(cè)，MT可維參與了將特泄的金&離子，通過舛管束運(yùn)綸亜憾和小穗的活動(dòng)，向這-點(diǎn)與riceMT在小則屮的髙表達(dá)履相符合，研究人員還給岀了另外一種對(duì)能性，認(rèn)為riccMTnJ將金尿輔助因子運(yùn)輸?shù)矫撦o舉的特上，從而有效地激沾了的參與代謝反應(yīng).瘠金屬

7、娥缶白基因工程笛(pGEXZjMTB)該蔭是M彩厶、等.以從棗樹的cDU文咋中荻得的坯鄧puiJ-MT為鞭板.用PCR方濃擴(kuò)增出HT基因225bp特異片段，將只亞克隆入pBluescipll1ISK-T敬休用用制性內(nèi)切前Btnli和Hind川分別U切重組pBLuescip譏SK-T質(zhì)粒和原核表達(dá)載體FET28dCH,然后格MT基因片段和&達(dá)較體PET28a(卜)通過T4DNA連接櫥迸行定向連殘用阪制性內(nèi)切酚Badl丨和Hind山胡切和PCR力法雙巫鑒定璽組農(nóng)達(dá)殛粒.具體方法如下=<DMT片段的PCR擴(kuò)增、純化以克降質(zhì)料SpoiI為桂板，用PCR護(hù)増法擴(kuò):曾出MT的DNA片段,PC

8、R擴(kuò)增條件如下：94C5min預(yù)芟性94930$、52130$、7291min.35個(gè)循環(huán)再729址伸Smin.取0.5兩的PCR的產(chǎn)樹進(jìn)行刺倆漩膠電泳分析確認(rèn)片段后其余PCR產(chǎn)物用DNA純化試劑盒純化(槪照試刑說明操作)2(TC保存。(2) 中何克移載體trji>BluGscipiIISK-MT構(gòu)建誕燥械法捺取戎體pBhiesc諷IISK/m.訓(xùn)行瓊脂旅融膠M汰確認(rèn)6取1.5畑的傾杓用Snwll進(jìn)行厲醐切，少量電泳證明焰切完全JS,將闘切體系純化后進(jìn)行pBluesciptllSK-Ttt體的制備.塑片用DNA連接酶將制備好的pBluesciptllSKT找體與純化后的MTPCR片段進(jìn)行

9、連接，將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化入制備好的人腸桿菌DH3感受態(tài)細(xì)胞，轉(zhuǎn)化液在含賀節(jié)肖霉素3叩的LB區(qū)體培養(yǎng)壘上生長(zhǎng)，37U靜置培養(yǎng)過軋從培養(yǎng)板隨機(jī)挑選單克鑫鑿逬行PCR陽性履定，將簽定為陽性的轉(zhuǎn)化體用BamHI和Hindi進(jìn)行取爾切鑒定(3) 僦切、冋收MT片段取如gX可克陟雀體pBhjcsciptll'K-MT的質(zhì)鎖用BamHI利Hindi】進(jìn)行雙侶切，將酹切后的MT片段從瓊靦樋凝膠切割后采用柱式DNA離膠回收試劑盒回收.表達(dá)按體PET28a(+)匍切與純化戢2pg的PET2血質(zhì)粒用HamHI和HiMlll雙開切，純化購切體系"用CIAP進(jìn)行脫懾酸處理后"再次純化體系，備用.(5) PET28a<+)-MTt達(dá)我體的構(gòu)建用I4DNA連接悅將回收后的I的片用MT定向克:降至曲BamHI和Hind川酶切后的殺達(dá)