器官培養(yǎng) 器官培養(yǎng)

1、1第第3章章 器官培養(yǎng)器官培養(yǎng) 大大 家家 好好 ！植物組織培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)2第第3章章 器官培養(yǎng)器官培養(yǎng)本章主要內(nèi)容本章主要內(nèi)容根的培養(yǎng)根的培養(yǎng)莖尖的培養(yǎng)莖尖的培養(yǎng)葉的培養(yǎng)葉的培養(yǎng)第第3章章 器官培養(yǎng)器官培養(yǎng)3l(1)一般掌握離體根培養(yǎng)的取材部位和培養(yǎng)基的選一般掌握離體根培養(yǎng)的取材部位和培養(yǎng)基的選擇；擇；l(2)掌握莖尖培養(yǎng)的種類和操作步驟；掌握莖尖培養(yǎng)的種類和操作步驟；l(3)掌握莖段培養(yǎng)中材料的選擇、處理及培養(yǎng)基的掌握莖段培養(yǎng)中材料的選擇、處理及培養(yǎng)基的調(diào)整；調(diào)整；l(4)掌握離體葉片的培養(yǎng)步驟；掌握離體葉片的培養(yǎng)步驟；l(5)一般掌握胚胎培養(yǎng)的類型與各自的注意事項(xiàng)。一般掌握胚胎培養(yǎng)的類

2、型與各自的注意事項(xiàng)。第第3章章 器官培養(yǎng)器官培養(yǎng)本章教學(xué)目的與要求本章教學(xué)目的與要求4器官培養(yǎng)的定義：器官培養(yǎng)的定義：第第3章章 器官培養(yǎng)器官培養(yǎng)研究器官的功能、分化、形研究器官的功能、分化、形態(tài)建成；態(tài)建成；快速繁殖；快速繁殖；獲得脫毒苗獲得脫毒苗種質(zhì)保藏等種質(zhì)保藏等 指植物某一器官的全部或部分或器官指植物某一器官的全部或部分或器官原基的離體培養(yǎng)，包括根、莖、葉、花、原基的離體培養(yǎng)，包括根、莖、葉、花、果實(shí)、種子等果實(shí)、種子等5第一節(jié)第一節(jié) 根的培養(yǎng)根的培養(yǎng) 根培養(yǎng)的意義根培養(yǎng)的意義:1) 是進(jìn)行根系生理研究的最優(yōu)良實(shí)驗(yàn)體系是進(jìn)行根系生理研究的最優(yōu)良實(shí)驗(yàn)體系;2) 是研究器官分化、形態(tài)建成的

3、良好體系；是研究器官分化、形態(tài)建成的良好體系；3）可建立快速生長(zhǎng)的根無(wú)性系。）可建立快速生長(zhǎng)的根無(wú)性系。第第3章章 器官培養(yǎng)器官培養(yǎng)6一、離體根的培養(yǎng)方法：一、離體根的培養(yǎng)方法：1 1、培養(yǎng)無(wú)菌苗、培養(yǎng)無(wú)菌苗2 2、切取、切取1.01.0cmcm的根尖的根尖3 3、接種在、接種在WhiteWhite培養(yǎng)基或培養(yǎng)基或1/21/2MSMS培養(yǎng)基中暗培養(yǎng)培養(yǎng)基中暗培養(yǎng)4 4、一周后，取側(cè)根擴(kuò)大培養(yǎng)，可得到、一周后，取側(cè)根擴(kuò)大培養(yǎng)，可得到離體根的離體根的無(wú)性系無(wú)性系培養(yǎng)條件為暗光和培養(yǎng)條件為暗光和25-2725-27 第一節(jié)第一節(jié) 根的培養(yǎng)根的培養(yǎng)7l培養(yǎng)條件為暗光和培養(yǎng)條件為暗光和25-2725-2

4、7l植株再生植株再生 根段的離體培養(yǎng)也可以用來再生植株。第一根段的離體培養(yǎng)也可以用來再生植株。第一步誘導(dǎo)形成愈傷組織。第二步在再分化培養(yǎng)基步誘導(dǎo)形成愈傷組織。第二步在再分化培養(yǎng)基上誘導(dǎo)芽的分化、在愈傷組織上分化成小植株上誘導(dǎo)芽的分化、在愈傷組織上分化成小植株 一、離體根的培養(yǎng)方法：一、離體根的培養(yǎng)方法：8二、培養(yǎng)基：二、培養(yǎng)基：l無(wú)機(jī)離子較低的無(wú)機(jī)離子較低的White培養(yǎng)基培養(yǎng)基l或者或者2/3或或1/2的的MS、B5培養(yǎng)基培養(yǎng)基9三、影響離體根生長(zhǎng)的因素三、影響離體根生長(zhǎng)的因素第一節(jié)第一節(jié) 根的培養(yǎng)根的培養(yǎng)5 5、環(huán)境條件環(huán)境條件4 4、pHpH3 3、生長(zhǎng)物質(zhì)、生長(zhǎng)物質(zhì)2 2、培養(yǎng)基、培養(yǎng)

5、基1 1、基因型、基因型影響因素影響因素10第二節(jié)第二節(jié) 莖尖的培養(yǎng)莖尖的培養(yǎng)l一、含義及意義一、含義及意義1 1、類型、類型 莖尖分生組織培養(yǎng)莖尖分生組織培養(yǎng)：對(duì)長(zhǎng)度：對(duì)長(zhǎng)度0 0.1mm.1mm左右，含左右，含1-21-2個(gè)葉原基的莖尖個(gè)葉原基的莖尖進(jìn)行培養(yǎng)，目的是進(jìn)行培養(yǎng)，目的是獲得無(wú)病毒獲得無(wú)病毒植株植株 普通莖尖培養(yǎng)：普通莖尖培養(yǎng)：對(duì)對(duì)幾毫米至幾十毫米長(zhǎng)的莖尖、幾毫米至幾十毫米長(zhǎng)的莖尖、芽尖及側(cè)芽的芽尖及側(cè)芽的培養(yǎng)，目的是培養(yǎng)，目的是快速繁殖快速繁殖。第二節(jié)第二節(jié) 莖尖的培養(yǎng)莖尖的培養(yǎng)112、莖尖培養(yǎng)的意義、莖尖培養(yǎng)的意義l無(wú)性系快速繁殖；無(wú)性系快速繁殖；l培養(yǎng)無(wú)病毒苗，品種改良；培

6、養(yǎng)無(wú)病毒苗，品種改良；l理論基礎(chǔ)研究。理論基礎(chǔ)研究。第二節(jié)第二節(jié) 莖尖的培養(yǎng)莖尖的培養(yǎng)蝴蝶蘭腋芽萌發(fā)蝴蝶蘭腋芽萌發(fā)12l莖尖培養(yǎng)步驟l一般方法二、莖尖培養(yǎng)的一般方法二、莖尖培養(yǎng)的一般方法13莖尖培養(yǎng)步驟莖尖培養(yǎng)步驟 l(1)(1)取材取材 挑選雜菌污染少，生長(zhǎng)不久的莖尖。木本植物可在取材挑選雜菌污染少，生長(zhǎng)不久的莖尖。木本植物可在取材前對(duì)莖尖噴幾次滅菌藥劑。以保證材料不帶或少帶菌。用于普通前對(duì)莖尖噴幾次滅菌藥劑。以保證材料不帶或少帶菌。用于普通莖尖培養(yǎng)，可先從植物的莖、藤或匍匐枝上切取莖尖培養(yǎng)，可先從植物的莖、藤或匍匐枝上切取2cra2cra以上的頂梢。以上的頂梢。l(2)(2)消毒接種消毒接

7、種 將采集到的莖尖切成將采集到的莖尖切成0.5-1.0cm0.5-1.0cm長(zhǎng)，并將其大葉除長(zhǎng)，并將其大葉除去，休眠芽預(yù)先剝除鱗片。去，休眠芽預(yù)先剝除鱗片。 將莖尖置于流水沖洗將莖尖置于流水沖洗2-4h2-4h，再在，再在9595的酒精中處理的酒精中處理30s30s，然后在稀釋，然后在稀釋2020倍的次氯酸鈉中浸倍的次氯酸鈉中浸5-8min5-8min，最后用無(wú)菌水沖洗數(shù)次，準(zhǔn)備接種。最后用無(wú)菌水沖洗數(shù)次，準(zhǔn)備接種。l(3)(3)接種接種 為了減少污染，可在接種前再剝掉一些葉片，使莖尖為為了減少污染，可在接種前再剝掉一些葉片，使莖尖為0 05cm5cm左右大小。這樣取莖尖大小只能作為快速繁殖。

8、有些植物左右大小。這樣取莖尖大小只能作為快速繁殖。有些植物的莖尖由于多酚氧化酶的氧化作用而變褐。所以在接種時(shí)，不能的莖尖由于多酚氧化酶的氧化作用而變褐。所以在接種時(shí)，不能用生銹的解剖刀，動(dòng)作要敏捷，隨切隨接，減少傷口在空氣中暴用生銹的解剖刀，動(dòng)作要敏捷，隨切隨接，減少傷口在空氣中暴露的時(shí)間，也可配制露的時(shí)間，也可配制1 1-5-5VcVc液，將切下的莖尖材料浸入處理液，將切下的莖尖材料浸入處理一下。一下。 14二、莖尖培養(yǎng)的一般方法二、莖尖培養(yǎng)的一般方法l( (一一) ) 制備外植體制備外植體取取1-21-2cmcm的枝條頂梢，去小葉的枝條頂梢，去小葉-消毒消毒-解剖解剖鏡下用解剖刀除去幼葉和

9、葉原基，露出生長(zhǎng)點(diǎn)，鏡下用解剖刀除去幼葉和葉原基，露出生長(zhǎng)點(diǎn)，切下切下0.1-0.20.1-0.2mmmm長(zhǎng)的莖尖長(zhǎng)的莖尖( (含含1-21-2個(gè)葉原基個(gè)葉原基) )l( (二二) )培養(yǎng)基培養(yǎng)基l( (三三) )培養(yǎng)方法培養(yǎng)方法第二節(jié)第二節(jié) 莖尖的培養(yǎng)莖尖的培養(yǎng)15(二)培養(yǎng)基l多數(shù)采用MSl培養(yǎng)基中生長(zhǎng)素是必須的，如2,4-D，IAA， NAA等，但濃度不能太高，一般用01mgL左右，高于此濃度，往往產(chǎn)生畸變芽或形成愈傷組織l不同植物對(duì)生長(zhǎng)素的反應(yīng)是不同的。 16(三)培養(yǎng)方法l1 1、固體培養(yǎng)法、固體培養(yǎng)法：試管培養(yǎng)：試管培養(yǎng)l2 2、紙橋培養(yǎng)法、紙橋培養(yǎng)法172 2、紙橋培養(yǎng)法、紙橋培

10、養(yǎng)法含義含義：用酒杯狀的濾紙代替瓊脂，使杯底朝上塞：用酒杯狀的濾紙代替瓊脂，使杯底朝上塞入試管中，與液體培養(yǎng)基接觸，將離體莖尖置入試管中，與液體培養(yǎng)基接觸，將離體莖尖置于濾紙上方進(jìn)行培養(yǎng)。于濾紙上方進(jìn)行培養(yǎng)。優(yōu)點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)：培養(yǎng)基是液體培養(yǎng)基，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)培養(yǎng)基是液體培養(yǎng)基，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)能通過濾紙均衡而持久地供給外植體，能通過濾紙均衡而持久地供給外植體，有利于外植體的健康成長(zhǎng)有利于外植體的健康成長(zhǎng) ；缺點(diǎn)缺點(diǎn)：操作工藝復(fù)雜操作工藝復(fù)雜 。第二節(jié)第二節(jié) 莖尖的培養(yǎng)莖尖的培養(yǎng)18三、莖尖分生組織培養(yǎng)與脫毒三、莖尖分生組織培養(yǎng)與脫毒l見第八章見第八章 植物脫毒技術(shù)植物脫毒技術(shù)19四、普通莖尖培養(yǎng)與繁殖技術(shù)四、普通

11、莖尖培養(yǎng)與繁殖技術(shù)l概念概念：快速繁殖快速繁殖( (微繁殖微繁殖):):用組織培養(yǎng)的方法，用組織培養(yǎng)的方法，使植物的部分器官、組織迅速擴(kuò)大培養(yǎng)，并移植使植物的部分器官、組織迅速擴(kuò)大培養(yǎng)，并移植到溫室或農(nóng)田繁殖出大量幼苗的繁殖方法。到溫室或農(nóng)田繁殖出大量幼苗的繁殖方法。l特點(diǎn)特點(diǎn)：繁殖速度快；使用材料少，生產(chǎn)效率高，繁殖速度快；使用材料少，生產(chǎn)效率高，省時(shí)省工；節(jié)約空間有利于植物的工廠化生產(chǎn)；省時(shí)省工；節(jié)約空間有利于植物的工廠化生產(chǎn)；在無(wú)菌條件下進(jìn)行，不受病蟲害侵害。在無(wú)菌條件下進(jìn)行，不受病蟲害侵害。第二節(jié)第二節(jié) 莖尖的培養(yǎng)莖尖的培養(yǎng)20（一）莖尖微繁技術(shù)的過程：分（一）莖尖微繁技術(shù)的過程：分5

12、個(gè)階段個(gè)階段l 1、無(wú)菌培養(yǎng)體系的建立、無(wú)菌培養(yǎng)體系的建立、l 2、芽的增殖、芽的增殖l 3、中間繁殖體的增殖、中間繁殖體的增殖l 4、誘導(dǎo)生根、誘導(dǎo)生根l 5、試管苗的移植、試管苗的移植第二節(jié)第二節(jié) 莖尖的培養(yǎng)莖尖的培養(yǎng)211、無(wú)菌培養(yǎng)體系的建立、無(wú)菌培養(yǎng)體系的建立初代培養(yǎng)建立的無(wú)性繁殖系包括：初代培養(yǎng)建立的無(wú)性繁殖系包括： 莖梢、芽叢、胚狀體和原球莖莖梢、芽叢、胚狀體和原球莖等。等。外植體的制備外植體的制備培養(yǎng)基培養(yǎng)基培養(yǎng)條件培養(yǎng)條件第二節(jié)第二節(jié) 莖尖的培養(yǎng)莖尖的培養(yǎng)222、芽的增殖芽的增殖（1）頂芽和腋芽的發(fā)育）頂芽和腋芽的發(fā)育l頂芽、側(cè)芽生長(zhǎng)，形成一個(gè)微型的小灌木叢狀的頂芽、側(cè)芽生長(zhǎng)，

13、形成一個(gè)微型的小灌木叢狀的叢生苗結(jié)構(gòu)。叢生苗結(jié)構(gòu)。l叢生苗的每個(gè)枝條轉(zhuǎn)接繼代，可迅速獲得多數(shù)的叢生苗的每個(gè)枝條轉(zhuǎn)接繼代，可迅速獲得多數(shù)的嫩莖。這種繁殖方式稱作嫩莖。這種繁殖方式稱作微型扦插或無(wú)菌短枝扦微型扦插或無(wú)菌短枝扦插插l優(yōu)點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)：不經(jīng)愈傷組織，所以最能使無(wú)性系后代保：不經(jīng)愈傷組織，所以最能使無(wú)性系后代保持原品種的特性。持原品種的特性。第二節(jié)第二節(jié) 莖尖的培養(yǎng)莖尖的培養(yǎng)23（2）不定芽的發(fā)育）不定芽的發(fā)育 不定芽產(chǎn)生的途徑：不定芽產(chǎn)生的途徑：l外植體上直接產(chǎn)生外植體上直接產(chǎn)生l由外植體誘導(dǎo)的愈傷組織上產(chǎn)生。由外植體誘導(dǎo)的愈傷組織上產(chǎn)生。第二節(jié)第二節(jié) 莖尖的培養(yǎng)莖尖的培養(yǎng)外植體外植體脫分化脫

14、分化愈傷組織愈傷組織再分化再分化器官原基器官原基24第二節(jié)第二節(jié) 莖尖的培養(yǎng)莖尖的培養(yǎng)l由第二階段芽的增殖產(chǎn)生的數(shù)量有限的芽、苗、由第二階段芽的增殖產(chǎn)生的數(shù)量有限的芽、苗、原球莖稱為中間繁殖體。原球莖稱為中間繁殖體。l將之轉(zhuǎn)接到新鮮的相同培養(yǎng)基上進(jìn)行繼代培養(yǎng)，將之轉(zhuǎn)接到新鮮的相同培養(yǎng)基上進(jìn)行繼代培養(yǎng)，3-43-4周轉(zhuǎn)接一次，擴(kuò)大培養(yǎng)。周轉(zhuǎn)接一次，擴(kuò)大培養(yǎng)。3、中間繁殖體的增殖、中間繁殖體的增殖25莖的培養(yǎng)發(fā)育方向莖的培養(yǎng)發(fā)育方向v腋芽萌發(fā)腋芽萌發(fā)v脫分化后產(chǎn)生胚狀體（原球莖）脫分化后產(chǎn)生胚狀體（原球莖）v脫分化后直接產(chǎn)生不定器官脫分化后直接產(chǎn)生不定器官v脫分化后形成愈傷組織脫分化后形成愈傷組織

15、第二節(jié)第二節(jié) 莖尖的培養(yǎng)莖尖的培養(yǎng)264、壯苗和生根、壯苗和生根壯苗目的壯苗目的：使增殖的嫩枝生根產(chǎn)生小植：使增殖的嫩枝生根產(chǎn)生小植 株，以便移栽。株，以便移栽。第二節(jié)第二節(jié) 莖尖的培養(yǎng)莖尖的培養(yǎng)27l用用WhiteWhite、1 1/2/2或或1 1/3MS/3MS、B B5 5等生根等生根培養(yǎng)基培養(yǎng)基。l降低降低N N，P P，K K鹽的量。鹽的量。l適當(dāng)加大生長(zhǎng)素（如適當(dāng)加大生長(zhǎng)素（如NAANAA），不用或少用細(xì)胞分），不用或少用細(xì)胞分裂素，或在無(wú)裂素，或在無(wú)激素激素的培養(yǎng)基上生根。的培養(yǎng)基上生根。 l蔗糖蔗糖降低到降低到1.0-1.5%1.0-1.5%，以增強(qiáng)植株自養(yǎng)能力；，以增強(qiáng)植株

16、自養(yǎng)能力；l加入加入1%1%左右的左右的活性炭活性炭；l增加增加光強(qiáng)度光強(qiáng)度，以提高小植株的光合能力。，以提高小植株的光合能力。 第二節(jié)第二節(jié) 莖尖的培養(yǎng)莖尖的培養(yǎng)試管苗生根的措施試管苗生根的措施285、移栽、移栽l生根培養(yǎng)生根培養(yǎng)1 1個(gè)月左右。移植時(shí)可根據(jù)生根情況來進(jìn)行。個(gè)月左右。移植時(shí)可根據(jù)生根情況來進(jìn)行。若發(fā)現(xiàn)新梢基部生有較濃密的不定根，長(zhǎng)度在若發(fā)現(xiàn)新梢基部生有較濃密的不定根，長(zhǎng)度在lcmlcm以以內(nèi)，就可移栽人土。移栽時(shí)通過幾天的煉苗過程，栽內(nèi)，就可移栽人土。移栽時(shí)通過幾天的煉苗過程，栽入塑料營(yíng)養(yǎng)缽或育苗盤中，營(yíng)養(yǎng)缽盛經(jīng)燒烤或常壓滅入塑料營(yíng)養(yǎng)缽或育苗盤中，營(yíng)養(yǎng)缽盛經(jīng)燒烤或常壓滅菌的培

17、養(yǎng)土菌的培養(yǎng)土(1(1分腐殖土：分腐殖土：1 1分沙分沙) )。29l栽后給予較高的空氣濕度條件。培養(yǎng)土要澆透水，所栽后給予較高的空氣濕度條件。培養(yǎng)土要澆透水，所放置的床面也要澆濕，然后搭小拱棚，以減少水分的放置的床面也要澆濕，然后搭小拱棚，以減少水分的蒸騰，并且初期要常噴霧處理，保持拱棚薄膜上有水蒸騰，并且初期要常噴霧處理，保持拱棚薄膜上有水珠出現(xiàn)。當(dāng)發(fā)現(xiàn)小苗有生長(zhǎng)趨勢(shì)，可逐漸減少濕度，珠出現(xiàn)。當(dāng)發(fā)現(xiàn)小苗有生長(zhǎng)趨勢(shì)，可逐漸減少濕度，將拱棚兩端打開通風(fēng)，并且減少噴水次數(shù)。使小苗適將拱棚兩端打開通風(fēng)，并且減少噴水次數(shù)。使小苗適應(yīng)濕度較小的條件。以后揭去拱棚的薄膜，并給予水應(yīng)濕度較小的條件。以后揭

18、去拱棚的薄膜，并給予水分控制，少澆水或不澆水，促進(jìn)小苗長(zhǎng)得粗壯。溫度分控制，少澆水或不澆水，促進(jìn)小苗長(zhǎng)得粗壯。溫度管理上要掌握適宜的生根溫度，最適宜的溫度是管理上要掌握適宜的生根溫度，最適宜的溫度是16-16-2020。 光照管理上初期可用較弱的光照，在小拱棚光照管理上初期可用較弱的光照，在小拱棚上加蓋遮陽(yáng)網(wǎng)或報(bào)紙等，以防陽(yáng)光灼傷小苗和增加蒸上加蓋遮陽(yáng)網(wǎng)或報(bào)紙等，以防陽(yáng)光灼傷小苗和增加蒸騰作用，后期可直接利用自然光照。騰作用，后期可直接利用自然光照。5、移栽、移栽305、移栽、移栽l可用育苗盤進(jìn)行馴化生根、孔徑選擇可用育苗盤進(jìn)行馴化生根、孔徑選擇2cm2cm左右即可?？籽ㄑb入蛭石：珍珠巖：草左

19、右即可?？籽ㄑb入蛭石：珍珠巖：草炭土為炭土為1 1：1 1：0 05 5的基質(zhì)。當(dāng)小苗長(zhǎng)至的基質(zhì)。當(dāng)小苗長(zhǎng)至5cm5cm高左右再移人塑料營(yíng)養(yǎng)缽中。高左右再移人塑料營(yíng)養(yǎng)缽中。31( (二二) ) 影響莖尖培養(yǎng)微繁殖的因素影響莖尖培養(yǎng)微繁殖的因素l基因型基因型l外植體的大小外植體的大小l供試植株的生理狀態(tài)供試植株的生理狀態(tài)l芽在植株上的部位芽在植株上的部位l供試植株的年齡供試植株的年齡l培養(yǎng)基培養(yǎng)基l褐變褐變l玻璃化玻璃化32（三）莖段的培養(yǎng)（三）莖段的培養(yǎng) l莖段培養(yǎng)莖段培養(yǎng) 指不帶芽和帶指不帶芽和帶1個(gè)以上定芽或不定芽個(gè)以上定芽或不定芽的，包括塊莖、球莖在內(nèi)的幼莖切段的無(wú)菌培的，包括塊莖、球莖

20、在內(nèi)的幼莖切段的無(wú)菌培養(yǎng)。培養(yǎng)莖段的主要目的是快繁。養(yǎng)。培養(yǎng)莖段的主要目的是快繁。 l優(yōu)點(diǎn)優(yōu)點(diǎn) 培養(yǎng)技術(shù)簡(jiǎn)單易行，繁殖速度較快；芽培養(yǎng)技術(shù)簡(jiǎn)單易行，繁殖速度較快；芽生芽方式增殖的苗木質(zhì)量好，且無(wú)病，性狀均生芽方式增殖的苗木質(zhì)量好，且無(wú)病，性狀均一；解決不能用種子繁殖的無(wú)性繁殖植物的快一；解決不能用種子繁殖的無(wú)性繁殖植物的快速繁殖問題等。速繁殖問題等。 33圖示莖段培養(yǎng)過程圖示莖段培養(yǎng)過程健康植株上選健壯的枝梢健康植株上選健壯的枝梢植株再生植株再生培養(yǎng)培養(yǎng)75%酒精酒精1分鐘分鐘1%次氯酸鈉次氯酸鈉0.1%升汞升汞去葉片用水沖洗莖段去葉片用水沖洗莖段 34(1)材料的選擇和處理材料的選擇和處理

21、l取生長(zhǎng)健壯無(wú)病蟲的幼嫩枝條或鱗莖盤，若是木本，取生長(zhǎng)健壯無(wú)病蟲的幼嫩枝條或鱗莖盤，若是木本，取當(dāng)年生嫩枝或一年生枝條，剪去葉片，剪成取當(dāng)年生嫩枝或一年生枝條，剪去葉片，剪成3-4cm的小段。取材時(shí)注意莖的基部比頂部切段，側(cè)芽比頂?shù)男《?。取材時(shí)注意莖的基部比頂部切段，側(cè)芽比頂芽的成活率低，所以應(yīng)優(yōu)先利用頂部的外植體，但由芽的成活率低，所以應(yīng)優(yōu)先利用頂部的外植體，但由于每個(gè)新梢僅一個(gè)頂芽，也可利用腋芽，莖上部的腋于每個(gè)新梢僅一個(gè)頂芽，也可利用腋芽，莖上部的腋芽培養(yǎng)效果較好。還應(yīng)注意盡量在生長(zhǎng)期取芽，在休芽培養(yǎng)效果較好。還應(yīng)注意盡量在生長(zhǎng)期取芽，在休眠期取外植體，成活率降低。如蘋果在眠期取外植體，

22、成活率降低。如蘋果在3-6月取材的月取材的成活率為成活率為60，7-11月下降到月下降到10，12-2月都下降月都下降10以下。以下。 35(2)培養(yǎng)培養(yǎng)l最常用的基本培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基，加入3蔗糖，用07的瓊脂固化。培養(yǎng)條件保持25左右。經(jīng)培養(yǎng)后莖段的切口特別是基部切口上會(huì)長(zhǎng)出愈傷組織，呈現(xiàn)稍許增大，而芽開始生長(zhǎng)，有時(shí)會(huì)出現(xiàn)叢生芽，從而得到無(wú)菌苗。l在莖段培養(yǎng)中，促進(jìn)腋芽增殖用6-BA是最為有效的，依次為Kt和Zt等。生長(zhǎng)素雖不能促進(jìn)腋芽增殖，但可改善苗的生長(zhǎng)。GA對(duì)芽伸長(zhǎng)有促進(jìn)作用。36（3）繼代）繼代l兩種途徑：一是促進(jìn)腋芽的快速生長(zhǎng)，二是誘導(dǎo)形成大量不定芽。第一種途徑的好處是不會(huì)產(chǎn)生變

23、異，能保持品種優(yōu)良特性。且方法簡(jiǎn)便，可在各種植物上使用，每年從一個(gè)芽可增殖10萬(wàn)株以上。第二種途徑會(huì)產(chǎn)生變異。繼代增殖過程注意選用培養(yǎng)基和生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑。37（4）生根）生根l降低或除去細(xì)胞分裂素而加人生長(zhǎng)素。由于在苗增殖時(shí)施用了較降低或除去細(xì)胞分裂素而加人生長(zhǎng)素。由于在苗增殖時(shí)施用了較高濃度的細(xì)胞分裂素，并促使苗中保持著一定的量，因此，在生高濃度的細(xì)胞分裂素，并促使苗中保持著一定的量，因此，在生根培養(yǎng)中不需要加細(xì)胞分裂素。生長(zhǎng)素的濃度，根培養(yǎng)中不需要加細(xì)胞分裂素。生長(zhǎng)素的濃度，NAA一般一般01-10mgL，IBA和和IAA可稍高?？缮愿?。lMS，B5 White等培養(yǎng)基，都可用于誘導(dǎo)生根，但是

24、其含鹽濃度等培養(yǎng)基，都可用于誘導(dǎo)生根，但是其含鹽濃度要適當(dāng)加以稀釋。前面的幾種培養(yǎng)基中，除要適當(dāng)加以稀釋。前面的幾種培養(yǎng)基中，除White外，都富含外，都富含N，P，K鹽，它們都抑制根的發(fā)生。因此，應(yīng)將它們降低到鹽，它們都抑制根的發(fā)生。因此，應(yīng)將它們降低到12，13或或14，甚至更低的水平。，甚至更低的水平。l生根培養(yǎng)時(shí)增強(qiáng)光照有利于發(fā)根，且對(duì)成功地移栽到盆缽中有良生根培養(yǎng)時(shí)增強(qiáng)光照有利于發(fā)根，且對(duì)成功地移栽到盆缽中有良好作用。故在生根培養(yǎng)時(shí)應(yīng)增加光照時(shí)間和光照強(qiáng)度，但強(qiáng)光直好作用。故在生根培養(yǎng)時(shí)應(yīng)增加光照時(shí)間和光照強(qiáng)度，但強(qiáng)光直接照射根部，含抑制根的生長(zhǎng)，所以在生根培養(yǎng)時(shí)最好在培養(yǎng)基接照射根

25、部，含抑制根的生長(zhǎng)，所以在生根培養(yǎng)時(shí)最好在培養(yǎng)基中加中加03活性炭，以促進(jìn)生根?；钚蕴?，以促進(jìn)生根。38(5)移植移植l在馴化時(shí)要進(jìn)行煉苗。然后洗凈瓊脂，小心移栽，初期濕度要大，基質(zhì)通氣濕潤(rùn)，保濕保溫，更要精心管理等。 39一、定義一、定義： 離體葉的培養(yǎng)是指包括葉原基、葉柄、離體葉的培養(yǎng)是指包括葉原基、葉柄、葉鞘、葉片、子葉等葉組織的無(wú)菌培養(yǎng)。葉鞘、葉片、子葉等葉組織的無(wú)菌培養(yǎng)。第三節(jié)第三節(jié) 葉的培養(yǎng)葉的培養(yǎng)第第3章章 器官培養(yǎng)器官培養(yǎng)40葉培養(yǎng)的意義：葉培養(yǎng)的意義：l 1、是研究葉形態(tài)建成、光合作用、葉綠素形、是研究葉形態(tài)建成、光合作用、葉綠素形成的好方法成的好方法l 2、通過葉組織的脫分化與再分化以證實(shí)葉細(xì)、通過葉組織的脫分化與再分化以證實(shí)葉細(xì)胞的全能性胞的全能性l 3、通過葉組織培養(yǎng)，探索離體葉組織培養(yǎng)的、通過葉組織培養(yǎng)，探索離體葉組織培養(yǎng)的條件和影響因