第8章 熒光免疫試驗(yàn)

1、齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫教研室齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院免疫教研室第八章第八章 熒光免疫試驗(yàn)熒光免疫試驗(yàn) Fluoroimmunoassay 掌握：掌握：熒光的基本知識(shí)；熒光抗體染色熒光的基本知識(shí)；熒光抗體染色與結(jié)果判斷。與結(jié)果判斷。熟悉：熟悉：熒光物質(zhì)。熒光物質(zhì)。了解：了解：熒光抗體的制備；熒光顯微鏡的熒光抗體的制備；熒光顯微鏡的基本結(jié)構(gòu)；熒光免疫分析；熒光免疫基本結(jié)構(gòu)；熒光免疫分析；熒光免疫技術(shù)的應(yīng)用。技術(shù)的應(yīng)用。教學(xué)目的教學(xué)目的第一節(jié)第一節(jié) 熒光免疫試驗(yàn)的組成因素?zé)晒饷庖咴囼?yàn)的組成因素第二節(jié)第二節(jié) 間接免疫熒光試驗(yàn)間接免疫熒光試驗(yàn)第三節(jié)第三節(jié) 流式熒光免疫試驗(yàn)流式熒光免疫試驗(yàn)第四節(jié)第四節(jié) 其他與熒光檢測(cè)相

2、關(guān)的免疫試驗(yàn)其他與熒光檢測(cè)相關(guān)的免疫試驗(yàn)第五節(jié)第五節(jié) 熒光免疫試驗(yàn)的臨床應(yīng)用熒光免疫試驗(yàn)的臨床應(yīng)用第六節(jié)第六節(jié) 影響熒光免疫試驗(yàn)的主要因素影響熒光免疫試驗(yàn)的主要因素?zé)晒饷庖咴囼?yàn)（熒光免疫試驗(yàn)（fluoroimmunoassay):fluoroimmunoassay): 以熒光物質(zhì)標(biāo)記抗體和抗原，通過與以熒光物質(zhì)標(biāo)記抗體和抗原，通過與相應(yīng)抗原或抗體發(fā)生特異性結(jié)合反應(yīng)，以相應(yīng)抗原或抗體發(fā)生特異性結(jié)合反應(yīng)，以此對(duì)待測(cè)物進(jìn)行此對(duì)待測(cè)物進(jìn)行定位、定性和定量定位、定性和定量分析的分析的檢測(cè)技術(shù)，具有高度檢測(cè)技術(shù)，具有高度特異性、敏感性和直特異性、敏感性和直觀性觀性，是，是最早最早出現(xiàn)的免疫標(biāo)記技術(shù)。出現(xiàn)的

3、免疫標(biāo)記技術(shù)。 熒光物質(zhì)吸收激發(fā)光的能量后，熒光物質(zhì)吸收激發(fā)光的能量后，電子從電子從基態(tài)基態(tài)躍遷到躍遷到激發(fā)態(tài)激發(fā)態(tài)，當(dāng)其回，當(dāng)其回復(fù)至基態(tài)時(shí)，以發(fā)射光形式釋放出復(fù)至基態(tài)時(shí)，以發(fā)射光形式釋放出能量，稱為能量，稱為熒光熒光。 第一節(jié)第一節(jié) 熒光免疫試驗(yàn)的組成要素?zé)晒饷庖咴囼?yàn)的組成要素吸收能量吸收能量激發(fā)態(tài)激發(fā)態(tài) 基態(tài)基態(tài)熒光效率熒光效率熒光特點(diǎn)：熒光特點(diǎn)： 1 1 可產(chǎn)生熒光的分子或原子在接受可產(chǎn)生熒光的分子或原子在接受能量后即刻引起發(fā)光；能量后即刻引起發(fā)光； 2 2 一旦停止供能，熒光隨之瞬間消一旦停止供能，熒光隨之瞬間消失；失；( (一一) )熒光的基本知識(shí)熒光的基本知識(shí)1.1.發(fā)射光譜發(fā)射

4、光譜: :指固定激發(fā)光波長(zhǎng)，在不指固定激發(fā)光波長(zhǎng)，在不同波長(zhǎng)下記錄到的標(biāo)本發(fā)射熒光的譜圖。同波長(zhǎng)下記錄到的標(biāo)本發(fā)射熒光的譜圖。2.2.激發(fā)光譜激發(fā)光譜: :指固定檢測(cè)發(fā)射光波長(zhǎng)，指固定檢測(cè)發(fā)射光波長(zhǎng)，用不同波長(zhǎng)的激發(fā)光照射標(biāo)品得到的熒用不同波長(zhǎng)的激發(fā)光照射標(biāo)品得到的熒光的譜圖。光的譜圖。 一一 熒光及熒光物質(zhì)基礎(chǔ)知識(shí)熒光及熒光物質(zhì)基礎(chǔ)知識(shí)熒光效率熒光效率 吸收光的光量子數(shù)（激發(fā)光強(qiáng)度）吸收光的光量子數(shù)（激發(fā)光強(qiáng)度）發(fā)射熒光的光量子數(shù)（熒光強(qiáng)度）發(fā)射熒光的光量子數(shù)（熒光強(qiáng)度）熒光色素本身的物理特性熒光色素本身的物理特性激發(fā)光強(qiáng)度及激發(fā)光波長(zhǎng)激發(fā)光強(qiáng)度及激發(fā)光波長(zhǎng)決定于決定于決定于決定于3.熒光物

5、質(zhì)將吸收的光能轉(zhuǎn)變成熒光的百分率熒光物質(zhì)將吸收的光能轉(zhuǎn)變成熒光的百分率-熒光效率熒光效率定義定義: :熒光物質(zhì)被激發(fā)后所產(chǎn)生熒光物質(zhì)被激發(fā)后所產(chǎn)生的熒光衰減到一定程度時(shí)所用的的熒光衰減到一定程度時(shí)所用的時(shí)間。時(shí)間。各種熒光物質(zhì)的熒光壽命不同各種熒光物質(zhì)的熒光壽命不同。 4.4.熒光壽命熒光壽命5.5.熒光淬滅熒光淬滅: :熒光物質(zhì)在某些理化因素?zé)晒馕镔|(zhì)在某些理化因素作用下，發(fā)射熒光減弱甚至消退稱為作用下，發(fā)射熒光減弱甚至消退稱為熒光淬滅。熒光淬滅。如紫外線照射、高溫（如紫外線照射、高溫（2020）、苯）、苯胺、酚、硝基苯、胺、酚、硝基苯、I I- -等等 。如何避免：如何避免： 勿長(zhǎng)時(shí)間照射勿

6、長(zhǎng)時(shí)間照射 脈沖瞬間照射脈沖瞬間照射 避光保存避光保存猝滅劑：猝滅劑：具有熒光猝滅作用的物質(zhì)具有熒光猝滅作用的物質(zhì)熒光淬滅熒光淬滅 熒光物質(zhì)熒光物質(zhì)最大吸收最大吸收光譜光譜最大發(fā)射光譜最大發(fā)射光譜應(yīng)用應(yīng)用異硫氰酸熒光素異硫氰酸熒光素 (FITC)(FITC)490490495nm495nm520520530nm 530nm （黃綠色）（黃綠色）FATFAT、熒光偏振免、熒光偏振免疫測(cè)定疫測(cè)定四乙基羅丹明四乙基羅丹明 (RB200)(RB200)570570575nm575nm595595600nm600nm（橙紅色）（橙紅色）FITCFITC的襯比染色或的襯比染色或雙標(biāo)記雙標(biāo)記FATFAT藻紅

7、蛋白（藻紅蛋白（PEPE）490-490-560nm560nm595nm595nm（紅色）（紅色）雙標(biāo)記雙標(biāo)記FATFAT、流式、流式細(xì)胞術(shù)細(xì)胞術(shù)7-7-氨基氨基-4-4-甲基香豆素甲基香豆素354nm354nm430nm430nm（藍(lán)色）（藍(lán)色）雙標(biāo)記或多標(biāo)記雙標(biāo)記或多標(biāo)記FATFATEuEu3+3+螯合物螯合物340nm340nm613nm613nm時(shí)間分辨熒光免疫時(shí)間分辨熒光免疫測(cè)定測(cè)定（二）熒光物質(zhì)（二）熒光物質(zhì)熒光顯微鏡熒光顯微鏡 利用一定波長(zhǎng)的激發(fā)利用一定波長(zhǎng)的激發(fā)光對(duì)待測(cè)標(biāo)本進(jìn)行激發(fā)，光對(duì)待測(cè)標(biāo)本進(jìn)行激發(fā)，產(chǎn)生一定波長(zhǎng)的熒光，產(chǎn)生一定波長(zhǎng)的熒光，對(duì)組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)或其組對(duì)組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)

8、或其組分進(jìn)行定性、定位和半分進(jìn)行定性、定位和半定量分析檢測(cè)。定量分析檢測(cè)。 二、熒光顯微鏡二、熒光顯微鏡隔熱濾光片：隔熱濾光片： 位于位于燈室聚光器前，燈室聚光器前， 作用作用阻斷紅外線通過而隔熱。阻斷紅外線通過而隔熱。 激發(fā)濾光片：激發(fā)濾光片： 位于光源和物鏡之間，位于光源和物鏡之間， 作用能選擇性地透過紫外線可作用能選擇性地透過紫外線可 見波長(zhǎng)的光域，提供合適的激發(fā)光。見波長(zhǎng)的光域，提供合適的激發(fā)光。 吸收濾光片：吸收濾光片： 位于物鏡和目鏡之間，位于物鏡和目鏡之間， 作用阻斷激發(fā)光而使發(fā)射的熒作用阻斷激發(fā)光而使發(fā)射的熒 光透過，保護(hù)眼睛。光透過，保護(hù)眼睛。熒光顯微鏡熒光顯微鏡濾光片濾光片

9、透射光：透射光：照明光線從標(biāo)照明光線從標(biāo)本下經(jīng)聚光器透過標(biāo)本本下經(jīng)聚光器透過標(biāo)本進(jìn)入物鏡。進(jìn)入物鏡。落射光：落射光：照明光線從標(biāo)照明光線從標(biāo)本上經(jīng)垂直照明器落射本上經(jīng)垂直照明器落射到標(biāo)本，經(jīng)標(biāo)本反射進(jìn)到標(biāo)本，經(jīng)標(biāo)本反射進(jìn)入物鏡。入物鏡。透射熒光顯微鏡光路透射熒光顯微鏡光路(a)(a)落射熒光顯微鏡光路落射熒光顯微鏡光路(b(b) )熒光顯微鏡熒光顯微鏡光路光路1 1、抗體要求、抗體要求 高特異性高特異性 高親和力高親和力 經(jīng)純化提取經(jīng)純化提取IgGIgG 三、熒光素三、熒光素-抗體結(jié)合物抗體結(jié)合物v有能與蛋白質(zhì)形成共價(jià)健的化學(xué)基團(tuán)有能與蛋白質(zhì)形成共價(jià)健的化學(xué)基團(tuán)v熒光效率高，熒光效率高，v熒光

10、色澤與背景組織的色澤對(duì)比度高。熒光色澤與背景組織的色澤對(duì)比度高。v與蛋白質(zhì)結(jié)合后不影響蛋白質(zhì)原有性質(zhì)。與蛋白質(zhì)結(jié)合后不影響蛋白質(zhì)原有性質(zhì)。v標(biāo)記方法簡(jiǎn)單、安全無毒。標(biāo)記方法簡(jiǎn)單、安全無毒。v與蛋白質(zhì)的結(jié)合物穩(wěn)定，易于保存。與蛋白質(zhì)的結(jié)合物穩(wěn)定，易于保存。2 2 熒光素要求熒光素要求一、基本原理一、基本原理特異性抗體與相特異性抗體與相應(yīng)抗原反應(yīng)，熒應(yīng)抗原反應(yīng)，熒光素標(biāo)記的抗抗光素標(biāo)記的抗抗體再與第一抗體體再與第一抗體結(jié)合。結(jié)合。 間接熒光抗體染色法示意圖間接熒光抗體染色法示意圖 第二節(jié)第二節(jié) 間接免疫熒光試驗(yàn)間接免疫熒光試驗(yàn)間接免疫熒光法示意圖間接免疫熒光法示意圖間接法：間接法： 優(yōu)點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)：敏

11、感度高于直接法敏感度高于直接法 制備一種熒光抗體可檢測(cè)多種抗原制備一種熒光抗體可檢測(cè)多種抗原 既可用于檢測(cè)抗原，也可檢測(cè)抗體既可用于檢測(cè)抗原，也可檢測(cè)抗體 缺點(diǎn)：缺點(diǎn)：易出現(xiàn)非特異性熒光易出現(xiàn)非特異性熒光 方法較麻煩方法較麻煩 操作時(shí)間較長(zhǎng)操作時(shí)間較長(zhǎng) 應(yīng)用：應(yīng)用：自身抗體的檢測(cè)自身抗體的檢測(cè) 標(biāo)本片上滴加特異性抗體標(biāo)本片上滴加特異性抗體3730min PBS3730min PBS洗滌洗滌 滴加二抗滴加二抗 3730min PBS3730min PBS洗滌洗滌 鏡檢鏡檢二、實(shí)驗(yàn)方法二、實(shí)驗(yàn)方法三、注意事項(xiàng)三、注意事項(xiàng)1.1.熒光染色時(shí)間：一小時(shí)內(nèi)或熒光染色時(shí)間：一小時(shí)內(nèi)或2828保存保存4 4

12、小時(shí)，小時(shí)，2.2.三種對(duì)照：陽對(duì)：陽性血清三種對(duì)照：陽對(duì)：陽性血清+ +熒光標(biāo)記物熒光標(biāo)記物 陰對(duì)：陰性血清陰對(duì)：陰性血清+ +熒光標(biāo)記物熒光標(biāo)記物 熒光標(biāo)記物對(duì)照：熒光標(biāo)記物對(duì)照：PBS+PBS+熒光標(biāo)記物熒光標(biāo)記物3.3.標(biāo)本片需保持濕潤(rùn)，避免干燥標(biāo)本片需保持濕潤(rùn)，避免干燥4.4.滴加抗體或熒光標(biāo)記物滴加抗體或熒光標(biāo)記物, ,始終保持在未知抗原標(biāo)本始終保持在未知抗原標(biāo)本上上 - -：無或僅見極微弱熒光。無或僅見極微弱熒光。 + +：熒光較弱但清楚可見。熒光較弱但清楚可見。 + + ：熒光明亮。熒光明亮。 +：耀眼強(qiáng)熒光。耀眼強(qiáng)熒光。 特異熒光強(qiáng)度特異熒光強(qiáng)度+ +以上判定為陽性，對(duì)照光應(yīng)

13、呈以上判定為陽性，對(duì)照光應(yīng)呈- -或或。根據(jù)根據(jù)+ +的血清最高稀釋度判定特異性抗體效價(jià)。的血清最高稀釋度判定特異性抗體效價(jià)。 熒光抗體染色及結(jié)果判斷熒光抗體染色及結(jié)果判斷第三節(jié)第三節(jié) 流式熒光免疫試驗(yàn)流式熒光免疫試驗(yàn)流式熒光免疫試驗(yàn)流式熒光免疫試驗(yàn)(flow cytometry and fluorescence immunoassay):采用人工微球和流式檢測(cè)方式對(duì)可溶性物質(zhì)進(jìn)行采用人工微球和流式檢測(cè)方式對(duì)可溶性物質(zhì)進(jìn)行高通量分析的檢測(cè)方法。高通量分析的檢測(cè)方法。懸浮陣列；流式微球陣列懸浮陣列；流式微球陣列 第第四節(jié)四節(jié) 其他與熒光檢測(cè)相關(guān)的免疫試驗(yàn)其他與熒光檢測(cè)相關(guān)的免疫試驗(yàn)其他熒光免疫試

14、驗(yàn)其他熒光免疫試驗(yàn)時(shí)間分辨熒光免疫測(cè)定時(shí)間分辨熒光免疫測(cè)定熒光酶免疫測(cè)定熒光酶免疫測(cè)定熒光偏振免疫測(cè)定熒光偏振免疫測(cè)定自發(fā)熒光壽命短自發(fā)熒光壽命短:1ns:1ns10ns10ns鑭系元素壽命長(zhǎng)鑭系元素壽命長(zhǎng):10s:10s1000s1000s短壽命熒光完全衰變后再測(cè)定短壽命熒光完全衰變后再測(cè)定鑭系元素特異熒光鑭系元素特異熒光 （一）基本原理（一）基本原理時(shí)間分辨檢測(cè)原理示意圖時(shí)間分辨檢測(cè)原理示意圖1.1.時(shí)間分辨時(shí)間分辨一、時(shí)間分辨熒光免疫測(cè)定一、時(shí)間分辨熒光免疫測(cè)定2.stokes2.stokes位移位移: :激發(fā)光譜和發(fā)射光譜的激發(fā)光譜和發(fā)射光譜的波長(zhǎng)差波長(zhǎng)差。 stokesstokes位

15、移小，相互干擾，影響結(jié)果準(zhǔn)確位移小，相互干擾，影響結(jié)果準(zhǔn)確性。性。鑭系元素鑭系元素StokesStokes位移大位移大(273nm)(273nm)，激發(fā)，激發(fā)光譜和發(fā)射光譜不重疊光譜和發(fā)射光譜不重疊時(shí)間分辨熒光免疫測(cè)定時(shí)間分辨熒光免疫測(cè)定發(fā)射光譜帶較窄：發(fā)射光譜帶較窄：613nm613nm10nm10nm，干擾，干擾少少 激發(fā)光譜帶較寬：激發(fā)光譜帶較寬：300nm300nm350nm350nm，靈敏，靈敏度高度高3.3.發(fā)射光譜和激發(fā)光譜發(fā)射光譜和激發(fā)光譜時(shí)間分辨熒光免疫測(cè)定時(shí)間分辨熒光免疫測(cè)定4.4.熒光標(biāo)記物的相對(duì)比活性熒光標(biāo)記物的相對(duì)比活性比活性比活性 ：?jiǎn)挝粫r(shí)間內(nèi)每個(gè)標(biāo)記分子：?jiǎn)挝粫r(shí)間

16、內(nèi)每個(gè)標(biāo)記分子可被探測(cè)到的信號(hào)量?？杀惶綔y(cè)到的信號(hào)量。EuEu3+3+螯合物螯合物 反復(fù)激發(fā)反復(fù)激發(fā) 10001000次次/ /秒秒大大提高了熒光標(biāo)記物比活性大大提高了熒光標(biāo)記物比活性時(shí)間分辨熒光免疫測(cè)定時(shí)間分辨熒光免疫測(cè)定結(jié)合結(jié)合-二酮體二酮體EuEu3+3+解離解離酸性增強(qiáng)液酸性增強(qiáng)液熒光熒光增強(qiáng)增強(qiáng)EuEu3+3+標(biāo)記標(biāo)記抗原抗體抗原抗體復(fù)合物復(fù)合物5.5.信號(hào)增強(qiáng)信號(hào)增強(qiáng)時(shí)間分辨熒光免疫測(cè)定時(shí)間分辨熒光免疫測(cè)定（二）標(biāo)記物和（二）標(biāo)記物和標(biāo)記方法標(biāo)記方法時(shí)間分辨熒光免疫測(cè)定時(shí)間分辨熒光免疫測(cè)定（三）方法類型（三）方法類型 雙抗體夾心法雙抗體夾心法 固相抗體競(jìng)爭(zhēng)法固相抗體競(jìng)爭(zhēng)法 固相抗原

17、競(jìng)爭(zhēng)法固相抗原競(jìng)爭(zhēng)法時(shí)間分辨熒光免疫測(cè)定時(shí)間分辨熒光免疫測(cè)定（三）方法類型（三）方法類型時(shí)間分辨熒光免疫測(cè)定（雙抗體夾心法）示意時(shí)間分辨熒光免疫測(cè)定（雙抗體夾心法）示意圖圖靈敏度高靈敏度高：最小檢出量最小檢出量1010-18-18mol/Lmol/L分析范圍寬：分析范圍寬：4 45 5個(gè)數(shù)量級(jí)個(gè)數(shù)量級(jí)標(biāo)記物穩(wěn)定：有效使用期長(zhǎng)標(biāo)記物穩(wěn)定：有效使用期長(zhǎng)測(cè)量快速，易自動(dòng)化測(cè)量快速，易自動(dòng)化易受污染，本底增高易受污染，本底增高方法評(píng)價(jià)方法評(píng)價(jià)時(shí)間分辨熒光免疫測(cè)定時(shí)間分辨熒光免疫測(cè)定光線通過偏振濾光片后，形成光線通過偏振濾光片后，形成一個(gè)方向的平面光稱為一個(gè)方向的平面光稱為偏振光偏振光。偏振熒光偏振熒光

18、( (綠光綠光,525nm,525nm550nm)550nm)偏振光偏振光( (藍(lán)光藍(lán)光,485nm),485nm)熒光物質(zhì)熒光物質(zhì)二、熒光偏振免疫測(cè)定二、熒光偏振免疫測(cè)定 抗原抗體競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)抗原抗體競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)AgAgF F分子小，轉(zhuǎn)動(dòng)速度快，偏振熒光弱分子小，轉(zhuǎn)動(dòng)速度快，偏振熒光弱 AgAgF F-Ab-Ab分子大，轉(zhuǎn)動(dòng)速度慢，偏振熒光強(qiáng)分子大，轉(zhuǎn)動(dòng)速度慢，偏振熒光強(qiáng) 若待檢抗原多，則若待檢抗原多，則AgAgF F-Ab-Ab少，少，AgAgF F多，偏振熒光弱多，偏振熒光弱待檢抗原含量與偏振熒光強(qiáng)度成反比待檢抗原含量與偏振熒光強(qiáng)度成反比熒光偏振免疫測(cè)定原理示意圖熒光偏振免疫測(cè)定原理示意圖 基本

19、原理基本原理方法評(píng)價(jià)方法評(píng)價(jià) 樣品用量少樣品用量少 熒光素標(biāo)記試劑穩(wěn)定，使用壽命長(zhǎng)熒光素標(biāo)記試劑穩(wěn)定，使用壽命長(zhǎng) 重復(fù)性好重復(fù)性好 快速，易自動(dòng)化快速，易自動(dòng)化 適于小、中等分子物質(zhì)檢測(cè)適于小、中等分子物質(zhì)檢測(cè) 靈敏度較非均相熒光免疫測(cè)定法低靈敏度較非均相熒光免疫測(cè)定法低熒光偏振免疫測(cè)定熒光偏振免疫測(cè)定第第五節(jié)五節(jié) 熒光免疫試驗(yàn)的臨床應(yīng)用熒光免疫試驗(yàn)的臨床應(yīng)用1.1.血清中自身抗體檢測(cè)血清中自身抗體檢測(cè)抗核抗體抗核抗體( (均質(zhì)型均質(zhì)型) )抗核抗體抗核抗體( (核膜型核膜型) )抗核抗體抗核抗體( (斑點(diǎn)型斑點(diǎn)型) )一、間接免疫熒光試驗(yàn)一、間接免疫熒光試驗(yàn)2.2.各種微生物的快速檢查和鑒定

20、各種微生物的快速檢查和鑒定寄生蟲（猴胚腎細(xì)胞內(nèi)弓形蟲）寄生蟲（猴胚腎細(xì)胞內(nèi)弓形蟲）細(xì)菌（藤黃微球菌細(xì)菌（藤黃微球菌 ) )一、間接免疫熒光試驗(yàn)一、間接免疫熒光試驗(yàn)?zāi)[瘤（人肝癌細(xì)胞）腫瘤（人肝癌細(xì)胞）間接免疫熒光試驗(yàn)間接免疫熒光試驗(yàn)3 3、寄生蟲感染的診斷、寄生蟲感染的診斷4 4、白細(xì)胞分化抗原的檢測(cè)、白細(xì)胞分化抗原的檢測(cè)5 5、人類白細(xì)胞抗原的檢測(cè)、人類白細(xì)胞抗原的檢測(cè)6 6、腫瘤組織中腫瘤標(biāo)志物的檢測(cè)、腫瘤組織中腫瘤標(biāo)志物的檢測(cè)7 7、激素和酶的組織定位、激素和酶的組織定位（一）（一）時(shí)間分辨熒光免疫試驗(yàn)時(shí)間分辨熒光免疫試驗(yàn)二、其他熒光免疫試驗(yàn)二、其他熒光免疫試驗(yàn)1.1.內(nèi)分泌學(xué)中的應(yīng)用內(nèi)分

21、泌學(xué)中的應(yīng)用2.2.腫瘤學(xué)中的應(yīng)用腫瘤學(xué)中的應(yīng)用3.3.免疫學(xué)中的應(yīng)用免疫學(xué)中的應(yīng)用4.4.分子生物學(xué)的應(yīng)用分子生物學(xué)的應(yīng)用5.5.微生物學(xué)中的應(yīng)用微生物學(xué)中的應(yīng)用（二）熒光偏振免疫試驗(yàn)（二）熒光偏振免疫試驗(yàn)第六節(jié)、影響熒光免疫試驗(yàn)的主要因素第六節(jié)、影響熒光免疫試驗(yàn)的主要因素一、熒光素一、熒光素- -抗體結(jié)合物抗體結(jié)合物二、待檢標(biāo)本二、待檢標(biāo)本三、其他三、其他v熒光素?zé)晒馑? -抗體結(jié)合物的結(jié)合比率：抗體結(jié)合物的結(jié)合比率： F/P=F/P=nmnmAAA495280495nm35. 087. 2一、一、 熒光素?zé)晒馑?抗體結(jié)合物抗體結(jié)合物v抗體效價(jià)：抗體效價(jià)：雙向免疫擴(kuò)散試驗(yàn)雙向免疫擴(kuò)散試驗(yàn)v抗體純度：抗體純度：高親和力、單克隆抗體高親和力、單克隆抗體v抗體特異性：抗體特異性：吸收試驗(yàn)、