糞便核酸提取試劑盒說明書

1、磁珠法糞便核酸提取試劑盒（常規(guī)版）Faeces DNA Extraction Kit (Regular Version)【目 錄 號(hào)】FDE-5005、FDE-5030【運(yùn)輸條件】225；【保存條件】磁珠分散液、裂解液 28，其它組分室溫；【試劑盒組成】Kit Component試劑盒組成FDE-5005（50T）FDE-5030（300T） FDE Buffer裂解液20mL60mL FDE Buffer 裂解液20mL60mL FDEMagnetic Beads磁珠懸浮液5mL15mL Wash Buffer清洗液60mL180mL Elute Buffer洗脫液10mL30mL【注意事項(xiàng)

2、】1. 在使用本試劑盒錢，請(qǐng)用戶自備80%乙醇；2. 使用前請(qǐng)檢查裂解液、是否出現(xiàn)結(jié)晶或者沉淀，如有結(jié)晶或者沉淀，請(qǐng)將裂解液置于378水浴重新溶解；3. 本操作指南經(jīng)本公司反復(fù)驗(yàn)證，使用前請(qǐng)仔細(xì)閱讀，并且按照操作指南的建議操作。【產(chǎn)品簡介】本試劑盒采用具有獨(dú)特分離作用的磁珠和獨(dú)特的緩沖液系統(tǒng)，從各種固態(tài)或液態(tài)糞便樣品中分離純化高質(zhì)量基因組DNA。特殊技術(shù)包埋的磁珠在特定條件下對(duì)核酸具有極強(qiáng)的親和力，而當(dāng)條件改變時(shí)，磁珠會(huì)釋放吸附的核酸，從而達(dá)到快速分離純化核酸的目的。提取的基因組DNA片段打，純度高，質(zhì)量穩(wěn)定可靠，尤其適合高通量工作站的自動(dòng)化提取，特別是本公司各型號(hào)的自動(dòng)化核酸提取儀。本試劑盒

3、純化的DNA可適用于各種常規(guī)操作，包括酶切、PCR、熒光定量PCR、文庫構(gòu)建、Sputhem雜交、芯片檢測和高通量測序等實(shí)驗(yàn)。【試劑盒說明】1. 磁珠分散液嚴(yán)禁反復(fù)凍融和離心，磁珠使用前務(wù)必充分混勻，可渦旋振蕩10秒左右；2. 實(shí)驗(yàn)中使用我先混合儀的目的是為使磁珠能夠充分吸附核酸、將磁珠表面的雜質(zhì)充分去除或核酸從磁珠表面充分洗脫；3. 使用前檢查裂解液、是否出現(xiàn)結(jié)晶或者沉淀，如有結(jié)晶或者沉淀，請(qǐng)將裂解、于37水浴重新溶解?！驹噭┖姓f明】樣本類型樣本量DNA提取范圍固態(tài)200mg540g液態(tài)200L120g【自備儀器、耗材和試劑】儀器自動(dòng)版渦旋混合儀、高速離心機(jī)、水浴鍋或金屬浴、96孔方孔圓底板

4、、無水乙醇、異丙醇、英芮誠ETP-300核酸提取儀。手動(dòng)版渦旋混合儀、高速離心機(jī)、金屬浴或水浴鍋；EP管、EP管用磁力架、無水乙醇、異丙醇?！緝x器自動(dòng)版操作步驟】以英芮誠ETP-300型全自動(dòng)核酸提取儀為例，可同步完成32個(gè)樣本的提取工作。1 上樣準(zhǔn)備樣品位1、72、83、94、105、116、12試劑磁珠懸浮液 75L異丙醇400L清洗液600L80%乙醇600L80%乙醇600L洗脫液100L參照下表用量向96孔板中分別加入相應(yīng)試劑。注：1）每次吸取磁珠懸浮液前盡量搖晃均勻；2）為提高效率建議使用排槍。2 上機(jī)樣品的獲得A. 固體樣品：稱取200mg左右的糞便只EP管中，分別加入1mL的裂

5、解液、20L蛋白酶K，渦旋振蕩1min（須將管底的糞便振蕩起來）后，58溫浴30min（每隔5min顛倒混勻一次）。B. 液態(tài)樣品：吸取200L左右的糞便至EP管中，分別加入200L裂解液、20L蛋白酶K，渦旋振蕩1min（須將管底的糞便振蕩起來）后，58溫浴15min（每隔5min顛倒混勻一次）。注：如需去除RNA，請(qǐng)額外加入RNase A（100mg/mL）5L。1）裂解完畢的樣本，室溫12000rpm，離心5min，轉(zhuǎn)移400L上清至新的EP管內(nèi)。2）向裝有上清的EP管內(nèi)加入250L裂解液，上下顛倒5次，混合均勻，12000rpm，離心5min，保留上清，待用。3 上機(jī)提取1）從第2步裂

6、解完畢的樣本中吸取450L上清至準(zhǔn)備好的96孔板的第2/8列；2）將96孔版樣品板放入ETP-300型核酸提取儀中，并插入磁棒套；3）打開儀器操作程序，調(diào)用“糞便核酸提取”程序，單擊“運(yùn)行”執(zhí)行提取程序。“糞便核酸提取”程序參數(shù)設(shè)置如下，如儀器程序參數(shù)與說明書不一致，請(qǐng)以說明書為準(zhǔn)：步驟編號(hào)孔位運(yùn)行類型振蕩時(shí)間(秒)分離時(shí)間(秒)揮發(fā)時(shí)間(秒)振蕩幅度振蕩強(qiáng)度一組溫度()二組溫度()三組溫度()四組溫度()11磁珠轉(zhuǎn)移11002弱000022DNA結(jié)合120004強(qiáng)000032DNA結(jié)合4001504弱000043清洗12501005強(qiáng)000054清洗22801005強(qiáng)000065清洗2240

7、103005強(qiáng)000076洗脫5002002強(qiáng)6060606083棄磁珠15005強(qiáng)00004 核酸轉(zhuǎn)移程序運(yùn)行完畢，取下96孔板，將洗脫液轉(zhuǎn)移至干凈的EP管或者PCR板中，做好標(biāo)記，提取過程完成，此時(shí)可以棄去96孔板。【手動(dòng)版操作步驟】1 準(zhǔn)備真空干燥箱穩(wěn)定到45；2 樣本的裂解參考儀器操作步驟2進(jìn)行。3 結(jié)合向裝有上清的EP管內(nèi)加入分別加入等體積的異丙醇和75L磁珠懸浮液，顛倒混勻；將EP管置于渦旋混合儀上高速振蕩10min，使磁珠與溶液充分混勻，確保磁珠與核酸完全結(jié)合，之后靜止2min。4 磁性分離將EP管置于磁力架上，靜止1min，待磁珠吸附完畢后，棄凈澄清液，下同。5 清洗將EP管從

8、磁力架上取下，加入600L清洗液1，置渦旋混合儀高速振蕩1min，使磁珠分散均勻，取下EP管并置于磁力架上靜止30s，棄凈澄清液。使用700L80%乙醇，參照上述步驟操作2次。6 除醇將除盡上清液后的EP管置于磁力架上，連同磁力架一起放入45真空干燥箱中，干燥約8min至無明顯乙醇味。注：若無真空干燥箱，亦可在保持通風(fēng)櫥通風(fēng)或電風(fēng)扇的狀態(tài)下靜置約10min，具體時(shí)間根據(jù)氣溫變化可能需要適當(dāng)調(diào)整，以磁珠干燥完全為原則。7 洗脫取出EP管，加入100L洗脫液（或去離子水），移液槍吹打使磁珠與洗脫液充分混勻，將EP管于65加熱洗脫5min，然后渦旋洗脫2min，確保磁珠與核酸洗脫完全。注：洗脫液要求50L，100200L較好，吸入也較少時(shí)會(huì)影響回收率。