流式基礎(chǔ)原理及應(yīng)用

1、流式基礎(chǔ)原理及臨流式基礎(chǔ)原理及臨床應(yīng)用床應(yīng)用流式基本概念流式基本概念BD BiosciencesImmune Function流式細(xì)胞術(shù)的基本概念流式細(xì)胞術(shù)的基本概念 流式細(xì)胞術(shù)流式細(xì)胞術(shù)（Flow Cytometry, Flow Cytometry, 簡(jiǎn)稱簡(jiǎn)稱FCMFCM）是一種可以快速、是一種可以快速、準(zhǔn)確、客觀，并且能夠同時(shí)檢測(cè)快速直線準(zhǔn)確、客觀，并且能夠同時(shí)檢測(cè)快速直線流動(dòng)狀態(tài)流動(dòng)狀態(tài)中的中的單單個(gè)細(xì)胞個(gè)細(xì)胞的多項(xiàng)物理及生物學(xué)特性，加以的多項(xiàng)物理及生物學(xué)特性，加以分析分析定量的技術(shù)，定量的技術(shù)，同時(shí)可以對(duì)特定群體加以同時(shí)可以對(duì)特定群體加以分選分選。 流式細(xì)胞儀流式細(xì)胞儀（Flow Cy

2、tometer）集激光技術(shù)、電子物理技）集激光技術(shù)、電子物理技術(shù)、光電測(cè)量技術(shù)、電子計(jì)算機(jī)技術(shù)、細(xì)胞熒光化學(xué)技術(shù)、術(shù)、光電測(cè)量技術(shù)、電子計(jì)算機(jī)技術(shù)、細(xì)胞熒光化學(xué)技術(shù)、單克隆抗體技術(shù)為一體的一種新型高科技儀器。單克隆抗體技術(shù)為一體的一種新型高科技儀器。BD BiosciencesImmune Function流式細(xì)胞術(shù)的特點(diǎn)流式細(xì)胞術(shù)的特點(diǎn) 檢測(cè)速度快，分析樣本量大：檢測(cè)速度快，分析樣本量大： 在極短時(shí)間內(nèi)可分析大量細(xì)胞，在極短時(shí)間內(nèi)可分析大量細(xì)胞，這是流式不同于其他細(xì)胞分這是流式不同于其他細(xì)胞分析儀器的主要特點(diǎn)，析儀器的主要特點(diǎn)，只要標(biāo)本中的細(xì)胞數(shù)量足夠，流式細(xì)胞只要標(biāo)本中的細(xì)胞數(shù)量足夠，流式

3、細(xì)胞儀可以每秒鐘成千上萬(wàn)個(gè)細(xì)胞的速率進(jìn)行測(cè)量，測(cè)量的細(xì)胞儀可以每秒鐘成千上萬(wàn)個(gè)細(xì)胞的速率進(jìn)行測(cè)量，測(cè)量的細(xì)胞總數(shù)可達(dá)數(shù)千、數(shù)萬(wàn)乃至數(shù)百萬(wàn)個(gè)總數(shù)可達(dá)數(shù)千、數(shù)萬(wàn)乃至數(shù)百萬(wàn)個(gè) 可同時(shí)分析單個(gè)細(xì)胞的多種特征：可同時(shí)分析單個(gè)細(xì)胞的多種特征： 使用不同熒光素標(biāo)記的單克隆抗體或熒光染料對(duì)細(xì)胞進(jìn)行多使用不同熒光素標(biāo)記的單克隆抗體或熒光染料對(duì)細(xì)胞進(jìn)行多色熒光染色，通過(guò)流式細(xì)胞分析，可獲得單細(xì)胞的多種信息，色熒光染色，通過(guò)流式細(xì)胞分析，可獲得單細(xì)胞的多種信息，使細(xì)胞亞群的識(shí)別、計(jì)數(shù)更為準(zhǔn)確使細(xì)胞亞群的識(shí)別、計(jì)數(shù)更為準(zhǔn)確 強(qiáng)大的分選功能：強(qiáng)大的分選功能： 在分析的同時(shí)可以對(duì)特定群體加以分選在分析的同時(shí)可以對(duì)特定群體

4、加以分選BD BiosciencesImmune Function流式檢測(cè)的樣本流式檢測(cè)的樣本 可檢測(cè)的樣本種類多樣：可檢測(cè)的樣本種類多樣：各種細(xì)胞（如外周血，骨髓，細(xì)針穿刺，灌洗液，實(shí)體各種細(xì)胞（如外周血，骨髓，細(xì)針穿刺，灌洗液，實(shí)體組織，懸浮或貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞），微生物，人工合成微組織，懸浮或貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞），微生物，人工合成微球等球等New!New!血清、血漿、培養(yǎng)上清、細(xì)胞裂解液血清、血漿、培養(yǎng)上清、細(xì)胞裂解液 樣本制備：樣本制備： 單細(xì)胞懸液（天然，機(jī)械研磨單細(xì)胞懸液（天然，機(jī)械研磨/ /消化）消化） 5 510105 51 110107 7cells/mlcells/ml，約，約0.

5、50.51ml1ml，300300目篩網(wǎng)過(guò)濾目篩網(wǎng)過(guò)濾BD BiosciencesImmune Function流式細(xì)胞儀的檢測(cè)范圍流式細(xì)胞儀的檢測(cè)范圍 細(xì)胞結(jié)構(gòu)細(xì)胞結(jié)構(gòu) 細(xì)胞大小細(xì)胞大小 細(xì)胞顆粒度細(xì)胞顆粒度 細(xì)胞表面積細(xì)胞表面積 核漿比例核漿比例 DNADNA含量與細(xì)胞周期含量與細(xì)胞周期 RNARNA含量含量 蛋白質(zhì)含量蛋白質(zhì)含量 細(xì)胞功能細(xì)胞功能 細(xì)胞表面細(xì)胞表面/ /胞漿胞漿/ /核的特異性抗原核的特異性抗原 細(xì)胞活性細(xì)胞活性 細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞內(nèi)/ /外的細(xì)胞因子外的細(xì)胞因子 激素結(jié)合位點(diǎn)、細(xì)胞受體激素結(jié)合位點(diǎn)、細(xì)胞受體 蛋白磷酸化蛋白磷酸化 pHpH值值 鈣離子濃度鈣離子濃度 細(xì)胞膜電位、

6、線粒體膜電位細(xì)胞膜電位、線粒體膜電位 流式細(xì)胞儀流式細(xì)胞儀的檢測(cè)信號(hào)的檢測(cè)信號(hào)BD BiosciencesImmune Function散射光信號(hào)散射光信號(hào) 當(dāng)細(xì)胞顆粒通過(guò)聚集的激光束時(shí)，激光向各個(gè)方向散射。與激光束當(dāng)細(xì)胞顆粒通過(guò)聚集的激光束時(shí)，激光向各個(gè)方向散射。與激光束 方向同軸的稱前向角散射光信號(hào)（方向同軸的稱前向角散射光信號(hào)（FSC）。與激光束垂直的稱為）。與激光束垂直的稱為 側(cè)向角散射光信號(hào)（側(cè)向角散射光信號(hào)（SSC）。）。BD BiosciencesImmune Function散射光信號(hào)散射光信號(hào)Right Angle Light Right Angle Light Detect

7、or Detector Cell Complexity Cell ComplexitySSCSSCForward Light Forward Light Detector Detector Cell Surface Area Cell Surface Area FSCFSCIncident Incident Light Light SourceSource= 前向角散射光（前向角散射光（FSC, Forward ScatterFSC, Forward Scatter）細(xì)胞相對(duì)大小及其表面積細(xì)胞相對(duì)大小及其表面積 = 側(cè)向角散射光（側(cè)向角散射光（SSC, Side ScatterSSC, Sid

8、e Scatter）細(xì)胞顆粒度及細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞器的相對(duì)復(fù)雜性細(xì)胞顆粒度及細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞器的相對(duì)復(fù)雜性BD BiosciencesImmune Function前向角散射光信號(hào)前向角散射光信號(hào)BD BiosciencesImmune Function側(cè)向角散射光信號(hào)側(cè)向角散射光信號(hào)BD BiosciencesImmune Function外周全血細(xì)胞散射光雙參數(shù)點(diǎn)圖外周全血細(xì)胞散射光雙參數(shù)點(diǎn)圖（紅細(xì)胞溶解后）（紅細(xì)胞溶解后） 顆粒雜質(zhì)、氣泡顆粒雜質(zhì)、氣泡對(duì)檢測(cè)的影響對(duì)檢測(cè)的影響B(tài)D BiosciencesImmune Function熒光信號(hào)熒光信號(hào) 使用不同熒光標(biāo)記的單克隆抗體染色，做多色分析使用不同

9、熒光標(biāo)記的單克隆抗體染色，做多色分析 熒光信號(hào)的強(qiáng)弱，反映了細(xì)胞抗原的表達(dá)含量熒光信號(hào)的強(qiáng)弱，反映了細(xì)胞抗原的表達(dá)含量BD BiosciencesImmune Function熒光樣本制備熒光樣本制備雙色直接染色雙色直接染色BD BiosciencesImmune FunctionFACSCalibur熒光檢測(cè)通道熒光檢測(cè)通道檢測(cè)器組檢測(cè)器組（激光器）（激光器）PMT位置位置帶通帶通/長(zhǎng)通透鏡長(zhǎng)通透鏡適用染料適用染料488nm藍(lán)色激光藍(lán)色激光FL1530/30FITCFL2585/42PE, PIFL3670 LPPerCP,PerCP-Cy5.5, PE-Cy7635nm紅色激光紅色激光FL

10、4661/16APCBD BiosciencesImmune Function雙色分析=CD19+CD3細(xì)胞(B淋巴細(xì)胞)=CD3+CD19+細(xì)胞=CD3CD19細(xì)胞=CD3+CD19細(xì)胞(T淋巴細(xì)胞)流式數(shù)據(jù)分析形式流式數(shù)據(jù)分析形式BD BiosciencesImmune Function數(shù)據(jù)存儲(chǔ)數(shù)據(jù)存儲(chǔ) FCS 2.0格式格式 常以列表模式（常以列表模式（LIST MODE)：將每個(gè)細(xì)胞的每個(gè)檢測(cè)參：將每個(gè)細(xì)胞的每個(gè)檢測(cè)參量依次排列順序存儲(chǔ)量依次排列順序存儲(chǔ)FSC SSC FL1 FL2Eventvent 210016024585Event 33006501607

11、20FITC/PE雙染樣本雙染樣本BD BiosciencesImmune FunctionBD BiosciencesImmune Function數(shù)據(jù)顯示數(shù)據(jù)顯示 直方圖（直方圖（Histogram） 二維點(diǎn)圖（二維點(diǎn)圖（Dot Plot） 等高線圖（等高線圖（Contour Plot） 密度圖（密度圖（Density） 三維圖（三維圖（3D Plot）等）等BD BiosciencesImmune Function單參數(shù)直方圖分析單參數(shù)直方圖分析l 熒光峰的高低即在縱軸對(duì)應(yīng)的高度反映了？熒光峰的高低即在縱軸對(duì)應(yīng)的高度反映了？l 熒光峰的高低即在縱軸對(duì)應(yīng)的高度反映了具熒光峰的高低即在縱軸對(duì)

12、應(yīng)的高度反映了具有此種熒光強(qiáng)度的細(xì)胞在樣本中所占比例的相有此種熒光強(qiáng)度的細(xì)胞在樣本中所占比例的相對(duì)多少，而非絕對(duì)數(shù)目對(duì)多少，而非絕對(duì)數(shù)目BD BiosciencesImmune Function雙參數(shù)散點(diǎn)圖分析雙參數(shù)散點(diǎn)圖分析BD BiosciencesImmune Function等高圖和密度圖等高圖和密度圖流式細(xì)胞儀的組成流式細(xì)胞儀的組成和工作原理和工作原理BD BiosciencesImmune FunctionBD BiosciencesImmune Function液流系統(tǒng)：鞘液包繞著單行排列的細(xì)胞依次高速通過(guò)流動(dòng)池，液流系統(tǒng)：鞘液包繞著單行排列的細(xì)胞依次高速通過(guò)流動(dòng)池，而激光聚焦于

13、流動(dòng)池中心的樣本流上，隨后經(jīng)檢測(cè)的樣本和而激光聚焦于流動(dòng)池中心的樣本流上，隨后經(jīng)檢測(cè)的樣本和鞘液流向廢液桶。鞘液流向廢液桶。BD BiosciencesImmune Function光學(xué)系統(tǒng)：經(jīng)熒光染色的細(xì)胞在激光的照射下產(chǎn)生散射光學(xué)系統(tǒng)：經(jīng)熒光染色的細(xì)胞在激光的照射下產(chǎn)生散射光和熒光信號(hào)，同時(shí)被前向光電二極管和一組光電倍增光和熒光信號(hào)，同時(shí)被前向光電二極管和一組光電倍增管（管（PMT）接收，熒光信號(hào)經(jīng)一系列雙色性反射鏡和帶）接收，熒光信號(hào)經(jīng)一系列雙色性反射鏡和帶通或長(zhǎng)通濾光片的分離，形成多個(gè)不同波長(zhǎng)的熒光信號(hào)通或長(zhǎng)通濾光片的分離，形成多個(gè)不同波長(zhǎng)的熒光信號(hào)BD BiosciencesImmu

14、ne Function電子系統(tǒng)：熒光信號(hào)和散射光信號(hào)經(jīng)二極管和電子系統(tǒng)：熒光信號(hào)和散射光信號(hào)經(jīng)二極管和PMT接收后接收后可轉(zhuǎn)換為電信號(hào)，再通過(guò)?？赊D(zhuǎn)換為電信號(hào)，再通過(guò)模/數(shù)轉(zhuǎn)換器轉(zhuǎn)換為可被計(jì)算機(jī)識(shí)數(shù)轉(zhuǎn)換器轉(zhuǎn)換為可被計(jì)算機(jī)識(shí)別的數(shù)字信號(hào)，以列表模式存儲(chǔ)，最終以圖形形式呈現(xiàn)別的數(shù)字信號(hào)，以列表模式存儲(chǔ)，最終以圖形形式呈現(xiàn)BD BiosciencesImmune FunctionBD BiosciencesImmune Function上機(jī)檢測(cè)上機(jī)檢測(cè) 單色單色/雙色雙色/多色樣本多色樣本 參數(shù)調(diào)節(jié)參數(shù)調(diào)節(jié)電壓電壓閾值閾值設(shè)門設(shè)門補(bǔ)償補(bǔ)償 BD BiosciencesImmune Function流

15、式細(xì)胞儀的應(yīng)用領(lǐng)域流式細(xì)胞儀的應(yīng)用領(lǐng)域 臨床研究臨床研究: :血液、腫瘤、藥理、免疫血液、腫瘤、藥理、免疫. 生物學(xué)研究：生物學(xué)研究：遺傳、生殖、微生物、細(xì)胞生物、毒理、分子生物遺傳、生殖、微生物、細(xì)胞生物、毒理、分子生物. 環(huán)境研究：環(huán)境研究：海洋生態(tài)研究海洋生態(tài)研究. 制藥工業(yè)制藥工業(yè) 食品工業(yè)食品工業(yè) 農(nóng)業(yè)畜牧業(yè)農(nóng)業(yè)畜牧業(yè)流式細(xì)胞儀的臨床應(yīng)用BD BiosciencesImmune FunctionHLA-B27 HLA-B27是是MHC I類抗原，在有核細(xì)胞上廣泛表達(dá)類抗原，在有核細(xì)胞上廣泛表達(dá) HLA-B27的表達(dá)與強(qiáng)直性脊柱炎高度相關(guān)，在其它血的表達(dá)與強(qiáng)直性脊柱炎高度相關(guān)，在其它血

16、清陰性骨關(guān)節(jié)病也有明顯表達(dá)，如清陰性骨關(guān)節(jié)病也有明顯表達(dá)，如Reiters綜和癥、銀綜和癥、銀屑病性關(guān)節(jié)炎、葡萄膜炎等屑病性關(guān)節(jié)炎、葡萄膜炎等 使用流式細(xì)胞儀，用血量少，可以快速、靈敏、準(zhǔn)確地使用流式細(xì)胞儀，用血量少，可以快速、靈敏、準(zhǔn)確地分析分析HLA-B27 BD HLA-B27 Kit檢測(cè)檢測(cè)HLA-B27，報(bào)告檢測(cè)的平均熒光，報(bào)告檢測(cè)的平均熒光強(qiáng)度，根據(jù)界值判定，得到陰性強(qiáng)度，根據(jù)界值判定，得到陰性/陽(yáng)性結(jié)果。實(shí)驗(yàn)的靈陽(yáng)性結(jié)果。實(shí)驗(yàn)的靈敏度為敏度為100%，特異性為，特異性為97.5%BD BiosciencesImmune FunctionHLA-B27HLA-B27陰性樣本HLA-

17、B27陽(yáng)性樣本BD BiosciencesImmune Function淋巴細(xì)胞及其亞群的分析淋巴細(xì)胞及其亞群的分析 SimulSET IMK MultiTEST IMK TriTEST 3-Color Reagent MultiTEST 4-Color ReagentBD BiosciencesImmune Function淋巴細(xì)胞亞群分析淋巴細(xì)胞亞群分析 使用特異的單克隆抗體，進(jìn)行多色分析，同時(shí)分析使用特異的單克隆抗體，進(jìn)行多色分析，同時(shí)分析淋巴細(xì)胞上多種抗原的表達(dá)，可以將淋巴細(xì)胞亞群淋巴細(xì)胞上多種抗原的表達(dá)，可以將淋巴細(xì)胞亞群區(qū)分開，進(jìn)行定量分析區(qū)分開，進(jìn)行定量分析 各淋巴細(xì)胞亞群的百分

18、含量各淋巴細(xì)胞亞群的百分含量 淋巴細(xì)胞亞群的絕對(duì)計(jì)數(shù)淋巴細(xì)胞亞群的絕對(duì)計(jì)數(shù)BD BiosciencesImmune Function淋巴細(xì)胞亞群分析淋巴細(xì)胞亞群分析 根據(jù)功能，淋巴細(xì)胞主要分為根據(jù)功能，淋巴細(xì)胞主要分為 B淋巴細(xì)胞（淋巴細(xì)胞（CD19+），與體液免疫有關(guān)），與體液免疫有關(guān) T淋巴細(xì)胞（淋巴細(xì)胞（CD3+），與細(xì)胞免疫有關(guān)），與細(xì)胞免疫有關(guān) NK細(xì)胞（細(xì)胞（CD3-CD16+56+），行駛免疫監(jiān)控功能），行駛免疫監(jiān)控功能 根據(jù)根據(jù)CD4、CD8表達(dá)，表達(dá)，T淋巴細(xì)胞又分為淋巴細(xì)胞又分為 T輔助輔助/誘導(dǎo)細(xì)胞（誘導(dǎo)細(xì)胞（CD3+CD4+） T抑制抑制/細(xì)胞毒性細(xì)胞（細(xì)胞毒性細(xì)胞（C

19、D3+CD8+）Th/Ts升高：自身免疫性疾?。愶L(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、升高：自身免疫性疾?。愶L(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、SLE） Th/Ts降低：病毒感染、惡性腫瘤、再生障礙性貧血降低：病毒感染、惡性腫瘤、再生障礙性貧血 活化活化T淋巴細(xì)胞：淋巴細(xì)胞：HLA-DR、CD38等等BD BiosciencesImmune Function淋巴細(xì)胞免疫分型原理淋巴細(xì)胞免疫分型原理 熒光染料標(biāo)記的熒光染料標(biāo)記的單克隆抗體與淋巴細(xì)胞表面的抗原單克隆抗體與淋巴細(xì)胞表面的抗原結(jié)合，結(jié)合，結(jié)合多色熒光分析，結(jié)合多色熒光分析，即可以把各種不同功能即可以把各種不同功能的淋巴亞群區(qū)分開來(lái)，進(jìn)而得到各亞群的相對(duì)比例。的淋巴亞群區(qū)分開來(lái)

20、，進(jìn)而得到各亞群的相對(duì)比例。 T淋巴細(xì)胞（淋巴細(xì)胞（CD3+）/B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞(CD19+)/NK淋巴淋巴細(xì)胞細(xì)胞(CD16+/CD56+)及亞群分析及亞群分析 CD4+ T淋巴細(xì)胞絕對(duì)計(jì)數(shù)淋巴細(xì)胞絕對(duì)計(jì)數(shù)BD BiosciencesImmune Function淋巴細(xì)胞免疫分型原理淋巴細(xì)胞免疫分型原理 淋巴細(xì)胞為淋巴細(xì)胞為CD45強(qiáng)陽(yáng)性，顆粒度較低的一群細(xì)胞強(qiáng)陽(yáng)性，顆粒度較低的一群細(xì)胞 主要有主要有T淋巴細(xì)胞（淋巴細(xì)胞（CD3+）、）、B淋巴細(xì)胞（淋巴細(xì)胞（CD19+）和）和 NK細(xì)胞（細(xì)胞（CD16+56+/CD3-） T淋巴細(xì)胞亞群：淋巴細(xì)胞亞群：CD3，反映細(xì)胞免疫功能，反映細(xì)胞免

21、疫功能 B淋巴細(xì)胞：淋巴細(xì)胞：CD19、CD20、CD22等，與體液免疫功能有等，與體液免疫功能有關(guān)。關(guān)。 NK細(xì)胞：執(zhí)行免疫監(jiān)視功能細(xì)胞：執(zhí)行免疫監(jiān)視功能BD BiosciencesImmune FunctionT淋巴細(xì)胞的免疫表型原理淋巴細(xì)胞的免疫表型原理 T淋巴細(xì)胞分類復(fù)雜，不同類型免疫表型的淋巴細(xì)胞分類復(fù)雜，不同類型免疫表型的T淋巴細(xì)胞的功淋巴細(xì)胞的功能不同能不同 根據(jù)根據(jù)CD4、CD8的表達(dá)，的表達(dá)，T淋巴細(xì)胞可分為淋巴細(xì)胞可分為T helper/T inducer（CD3+CD4+）、）、T suppressor/ T cytotoxic（CD3+CD8+） H/S比值升高：自身免

22、疫性疾病如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、比值升高：自身免疫性疾病如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、SLE等。等。 H/S比值降低：病毒感染、惡性腫瘤、再生障礙性貧血等。比值降低：病毒感染、惡性腫瘤、再生障礙性貧血等。 H/S比值是比值是HIV感染病人的重要監(jiān)測(cè)指標(biāo)感染病人的重要監(jiān)測(cè)指標(biāo) 活化活化T淋巴細(xì)胞：淋巴細(xì)胞：HLA-DR、CD38等等BD BiosciencesImmune FunctionSimulTEST IMK-Lymphocyte淋巴細(xì)胞雙色分析淋巴細(xì)胞雙色分析 使用雙色分析試劑使用雙色分析試劑 樣本使用樣本使用EDTA抗凝全血，用血量抗凝全血，用血量600uL 使用使用cellquest pro軟件，進(jìn)行

23、樣本的獲取和分析軟件，進(jìn)行樣本的獲取和分析 醫(yī)生報(bào)告醫(yī)生報(bào)告T、B、NK淋巴細(xì)胞及淋巴細(xì)胞及TH、TS百分含量和百分含量和H/S比比值，并報(bào)告參考值范圍值，并報(bào)告參考值范圍BD BiosciencesImmune FunctionSimulTEST IMK-Lymphocyte淋巴細(xì)胞雙色分析淋巴細(xì)胞雙色分析CD45/CD14，Leucogate：確定淋巴細(xì)胞門，評(píng)估門的有效性，并自：確定淋巴細(xì)胞門，評(píng)估門的有效性，并自動(dòng)計(jì)算淋巴細(xì)胞亞群占門內(nèi)淋巴細(xì)胞的比例，排除門內(nèi)雜細(xì)胞的干擾動(dòng)計(jì)算淋巴細(xì)胞亞群占門內(nèi)淋巴細(xì)胞的比例，排除門內(nèi)雜細(xì)胞的干擾 1/ 2a，陰性對(duì)照：確定淋巴細(xì)胞的陰性界值，評(píng)估實(shí)驗(yàn)

24、的非特異染色，陰性對(duì)照：確定淋巴細(xì)胞的陰性界值，評(píng)估實(shí)驗(yàn)的非特異染色CD3/CD19：分析：分析T淋巴細(xì)胞和淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞CD3/CD4：分析：分析T輔助輔助/誘導(dǎo)細(xì)胞誘導(dǎo)細(xì)胞CD3/CD8：分析：分析T抑制抑制/細(xì)胞毒性細(xì)胞細(xì)胞毒性細(xì)胞CD3/CD16+56：分析：分析T淋巴細(xì)胞和淋巴細(xì)胞和NK細(xì)胞細(xì)胞BD BiosciencesImmune FunctionMultiSET全自動(dòng)分析軟件全自動(dòng)分析軟件 FACS系列流式細(xì)胞分析儀使用的全自動(dòng)淋巴細(xì)胞免疫表型系列流式細(xì)胞分析儀使用的全自動(dòng)淋巴細(xì)胞免疫表型檢測(cè)軟件檢測(cè)軟件 外周血直接多色熒光分析，獲得關(guān)于外周血中淋巴細(xì)胞各外周血直

25、接多色熒光分析，獲得關(guān)于外周血中淋巴細(xì)胞各類亞型細(xì)胞的信息類亞型細(xì)胞的信息 進(jìn)行相對(duì)計(jì)數(shù)和絕對(duì)計(jì)數(shù)進(jìn)行相對(duì)計(jì)數(shù)和絕對(duì)計(jì)數(shù)TruCOUNT 免洗試劑設(shè)計(jì)，操作簡(jiǎn)便，減少細(xì)胞丟失免洗試劑設(shè)計(jì)，操作簡(jiǎn)便，減少細(xì)胞丟失 質(zhì)量控制保證質(zhì)量控制保證 用戶定義測(cè)定管組合用戶定義測(cè)定管組合 提高工作效率和計(jì)數(shù)的精確度提高工作效率和計(jì)數(shù)的精確度BD BiosciencesImmune FunctionMultiSET淋巴細(xì)胞亞群絕對(duì)計(jì)數(shù)MultiTEST CD3/CD8/CD45/CD4MultiTEST CD3/CD15+56/CD45/CD19BD BiosciencesImmune Function實(shí)驗(yàn)報(bào)

26、告實(shí)驗(yàn)報(bào)告ReporthLaboratory Report：實(shí)驗(yàn)室報(bào)告，報(bào)告每個(gè)標(biāo)本各實(shí)驗(yàn)管：實(shí)驗(yàn)室報(bào)告，報(bào)告每個(gè)標(biāo)本各實(shí)驗(yàn)管的分析點(diǎn)圖的分析點(diǎn)圖FSC-SSC、FL1-FL2，計(jì)算淋巴細(xì)胞及各亞型，計(jì)算淋巴細(xì)胞及各亞型相對(duì)含量相對(duì)含量/絕對(duì)含量，計(jì)算絕對(duì)含量，計(jì)算H/S比值比值hPhysician Report：醫(yī)生報(bào)告，報(bào)告每個(gè)標(biāo)本的各種淋巴：醫(yī)生報(bào)告，報(bào)告每個(gè)標(biāo)本的各種淋巴細(xì)胞占總淋巴細(xì)胞的百分含量細(xì)胞占總淋巴細(xì)胞的百分含量/絕對(duì)含量，并給出正常值范絕對(duì)含量，并給出正常值范圍圍hSummery Report：總結(jié)報(bào)告，總結(jié)當(dāng)日的：總結(jié)報(bào)告，總結(jié)當(dāng)日的SimulSET實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)結(jié)果結(jié)果BD

27、BiosciencesImmune Function正常參考值正常參考值 百分?jǐn)?shù)百分?jǐn)?shù) 絕對(duì)數(shù)絕對(duì)數(shù)CD3+T 50-84% 955-2860/ulCD3+CD4+Th 27-51% 550-1440/ulCD3+CD8+Tc 15-44% 320-1250/ulCD4/CD8 0.71-2.87 CD19 5-18% 90-560/ulCD16/56 7-40% 150-1100/ulCD3+HLA-DR+ 1.2-5.8%BD BiosciencesImmune Function臨床意義臨床意義 了解在不同情況下體內(nèi)免疫功能狀態(tài)了解在不同情況下體內(nèi)免疫功能狀態(tài) 輔助臨床疾病的診斷輔助臨床疾

28、病的診斷 探索疾病的發(fā)病機(jī)理、病程、預(yù)后探索疾病的發(fā)病機(jī)理、病程、預(yù)后 監(jiān)測(cè)、指導(dǎo)臨床治療方案監(jiān)測(cè)、指導(dǎo)臨床治療方案BD BiosciencesImmune Function臨床意義臨床意義 自身免疫性疾病：自身免疫性疾?。篠LE，類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎，類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎 免疫缺陷病，免疫缺陷病，AIDS 各種腫瘤：消化道腫瘤各種腫瘤：消化道腫瘤 腫瘤病人化療后免疫力監(jiān)測(cè)腫瘤病人化療后免疫力監(jiān)測(cè) 各種感染：帶狀皰疹、慢性肝病各種感染：帶狀皰疹、慢性肝病 移植病人排斥反應(yīng)或移植物抗宿主反應(yīng)的檢測(cè)移植病人排斥反應(yīng)或移植物抗宿主反應(yīng)的檢測(cè)BD BiosciencesImmune Function臨床意義臨床意義

29、急性心肌梗塞：急性心肌梗塞： 血液系統(tǒng)疾?。盒涸僬?，傳染性單核細(xì)胞增多血液系統(tǒng)疾?。盒涸僬希瑐魅拘詥魏思?xì)胞增多癥癥 皮膚病性?。浩ぱ?、梅毒皮膚病性病：皮炎、梅毒 婦產(chǎn)科疾?。毫?xí)慣性流產(chǎn)婦產(chǎn)科疾?。毫?xí)慣性流產(chǎn)BD BiosciencesImmune Function臨床意義臨床意義疾病疾病 T 細(xì)胞亞群細(xì)胞亞群 CD4+ CD8+ CD4+/CD8+ 類風(fēng)關(guān)類風(fēng)關(guān) （活動(dòng)期）（活動(dòng)期） SLE （活動(dòng)期）（活動(dòng)期） Sjogren綜合癥綜合癥 多發(fā)性硬化癥多發(fā)性硬化癥 重癥肌無(wú)力重癥肌無(wú)力 膜型腎小球腎炎膜型腎小球腎炎 胰島素依賴性糖尿病胰島素依賴性糖尿病 乙型肝炎乙型肝炎 自身溶血性貧血自

30、身溶血性貧血 BD BiosciencesImmune Function臨床意義臨床意義疾病疾病 T 細(xì)胞亞群細(xì)胞亞群 CD4+ CD8+ CD4+/CD8+ 上呼吸道感染上呼吸道感染 傳染性單核細(xì)胞增多癥傳染性單核細(xì)胞增多癥 （急性期）（急性期） 巨細(xì)胞病毒感染巨細(xì)胞病毒感染 乙肝乙肝 （急性期（急性期/慢性肝炎）慢性肝炎） 結(jié)核結(jié)核 （胸水（胸水/重癥外周血）重癥外周血）麻風(fēng)麻風(fēng) 瘧疾瘧疾 血吸蟲病血吸蟲病 AIDS BD BiosciencesImmune FunctionHIV感染感染=T淋巴細(xì)胞總數(shù)減少淋巴細(xì)胞總數(shù)減少=T細(xì)胞亞群比例倒置，細(xì)胞亞群比例倒置，Th/Ts1.0=Th細(xì)胞

31、細(xì)胞(CD4+細(xì)胞細(xì)胞)絕對(duì)計(jì)數(shù)絕對(duì)計(jì)數(shù)200個(gè)個(gè)/ml=Ts細(xì)胞增高細(xì)胞增高=NK細(xì)胞減少或活力下降細(xì)胞減少或活力下降=B細(xì)胞正常細(xì)胞正常BD BiosciencesImmune FunctionAIDS病人病人T亞群分析亞群分析BD BiosciencesImmune Function先天性無(wú)先天性無(wú) 球蛋白血癥球蛋白血癥BD BiosciencesImmune Function干祖細(xì)胞的分析和分選干祖細(xì)胞的分析和分選 造血干細(xì)胞是一群有一定增生能力，可以多造血干細(xì)胞是一群有一定增生能力，可以多向分化的造血細(xì)胞。向分化的造血細(xì)胞。 造血干細(xì)胞的特征是：造血干細(xì)胞的特征是：大?。ù笮。‵SC

32、FSC）和顆粒度（）和顆粒度（SSCSSC）介于成熟淋巴細(xì)胞、）介于成熟淋巴細(xì)胞、大淋巴細(xì)胞相似大淋巴細(xì)胞相似細(xì)胞內(nèi)含有較多核酸物質(zhì)細(xì)胞內(nèi)含有較多核酸物質(zhì)CD34CD34表達(dá)弱陽(yáng)性或強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)弱陽(yáng)性或強(qiáng)陽(yáng)性CD45CD45表達(dá)弱陽(yáng)性表達(dá)弱陽(yáng)性BD BiosciencesImmune Function干祖細(xì)胞的分析干祖細(xì)胞的分析細(xì)胞表型分析細(xì)胞表型分析CD34+造血干細(xì)胞：廣泛應(yīng)用于人造血干細(xì)胞：廣泛應(yīng)用于人/小鼠小鼠造血干細(xì)胞分析造血干細(xì)胞分析488nm激光做多色分析激光做多色分析Milan：CD34單色分析單色分析ISHAGE：CD45/CD34雙色分析雙色分析SIHON：CD14+66e

33、/CD34/ LSD751三色分析三色分析ProCOUNT：NA/CD34/CD45三色分析，加入三色分析，加入TruCOUNT標(biāo)準(zhǔn)微球，做造血干細(xì)胞絕對(duì)計(jì)數(shù)標(biāo)準(zhǔn)微球，做造血干細(xì)胞絕對(duì)計(jì)數(shù)BD BiosciencesImmune FunctionProCOUNT造血干細(xì)胞計(jì)數(shù)造血干細(xì)胞計(jì)數(shù) 造血干細(xì)胞是一群有一定增生能力，可以多向分化的造血干細(xì)胞是一群有一定增生能力，可以多向分化的造血細(xì)胞，在干細(xì)胞移植時(shí)需要做造血干細(xì)胞絕對(duì)計(jì)造血細(xì)胞，在干細(xì)胞移植時(shí)需要做造血干細(xì)胞絕對(duì)計(jì)數(shù)數(shù) 根據(jù)造血干細(xì)胞特征，進(jìn)行三色分析根據(jù)造血干細(xì)胞特征，進(jìn)行三色分析NA/CD34 PE/CD45 PerCP ，多重設(shè)門

34、，準(zhǔn)確、特異地圈定，多重設(shè)門，準(zhǔn)確、特異地圈定CD34+干細(xì)胞干細(xì)胞 使用使用TruCOUNT絕對(duì)計(jì)數(shù)管，準(zhǔn)確計(jì)算絕對(duì)計(jì)數(shù)管，準(zhǔn)確計(jì)算CD34+干細(xì)胞干細(xì)胞絕對(duì)含量絕對(duì)含量BD BiosciencesImmune Function造血干細(xì)胞計(jì)數(shù)造血干細(xì)胞計(jì)數(shù)=傳統(tǒng)方法（有核細(xì)胞計(jì)數(shù)、集落形成單位計(jì)數(shù)）：費(fèi)傳統(tǒng)方法（有核細(xì)胞計(jì)數(shù)、集落形成單位計(jì)數(shù)）：費(fèi)時(shí)費(fèi)力，與干細(xì)胞移植的數(shù)量關(guān)系不明確時(shí)費(fèi)力，與干細(xì)胞移植的數(shù)量關(guān)系不明確=流式細(xì)胞術(shù)：快速得到準(zhǔn)確的計(jì)數(shù)結(jié)果流式細(xì)胞術(shù)：快速得到準(zhǔn)確的計(jì)數(shù)結(jié)果=多色分析，多重設(shè)門，特異檢測(cè)多色分析，多重設(shè)門，特異檢測(cè)CD34+干細(xì)胞干細(xì)胞=利用利用TruCOUNT

35、絕對(duì)計(jì)數(shù)技術(shù)，準(zhǔn)確定量，確定干細(xì)胞移植絕對(duì)計(jì)數(shù)技術(shù)，準(zhǔn)確定量，確定干細(xì)胞移植數(shù)量數(shù)量=使用使用ProCOUNT自動(dòng)軟件，自動(dòng)做質(zhì)量檢查，報(bào)告結(jié)果，重自動(dòng)軟件，自動(dòng)做質(zhì)量檢查，報(bào)告結(jié)果，重復(fù)性好復(fù)性好=報(bào)告報(bào)告CD34+細(xì)胞百分含量和絕對(duì)含量，并根據(jù)收獲量和受者細(xì)胞百分含量和絕對(duì)含量，并根據(jù)收獲量和受者體重，自動(dòng)計(jì)算受者每公斤體重接受的干細(xì)胞數(shù)量，幫助判體重，自動(dòng)計(jì)算受者每公斤體重接受的干細(xì)胞數(shù)量，幫助判斷干細(xì)胞移植的最佳時(shí)間斷干細(xì)胞移植的最佳時(shí)間BD BiosciencesImmune FunctionProCOUNT造血干細(xì)胞計(jì)數(shù)造血干細(xì)胞計(jì)數(shù)BD BiosciencesImmune Fun

36、ction造血干細(xì)胞計(jì)數(shù)造血干細(xì)胞計(jì)數(shù)ProCOUNTBD BiosciencesImmune Function造血干細(xì)胞計(jì)數(shù)造血干細(xì)胞計(jì)數(shù)ProCOUNTBD BiosciencesImmune Function陣發(fā)性血紅蛋白尿陣發(fā)性血紅蛋白尿PNH=陣發(fā)性血紅蛋白尿是由于紅細(xì)胞膜的獲得性缺陷，對(duì)激活陣發(fā)性血紅蛋白尿是由于紅細(xì)胞膜的獲得性缺陷，對(duì)激活補(bǔ)體異常敏感的一種慢性血管內(nèi)溶血補(bǔ)體異常敏感的一種慢性血管內(nèi)溶血=患者體內(nèi)紅細(xì)胞呈不均一性患者體內(nèi)紅細(xì)胞呈不均一性=利用流式細(xì)胞術(shù)和利用流式細(xì)胞術(shù)和CD55和和CD59單克隆抗體，對(duì)單克隆抗體，對(duì)PNH患者患者紅細(xì)胞、粒細(xì)胞和血小板進(jìn)行分析，證實(shí)

37、存在膜蛋白表達(dá)紅細(xì)胞、粒細(xì)胞和血小板進(jìn)行分析，證實(shí)存在膜蛋白表達(dá)缺陷的血細(xì)胞，并計(jì)算缺陷細(xì)胞在全血中所占比例缺陷的血細(xì)胞，并計(jì)算缺陷細(xì)胞在全血中所占比例BD BiosciencesImmune Function陣發(fā)性血紅蛋白尿陣發(fā)性血紅蛋白尿PNH=正常人紅細(xì)胞、粒細(xì)胞和血小板正常人紅細(xì)胞、粒細(xì)胞和血小板CD59表達(dá)完全陽(yáng)性表達(dá)完全陽(yáng)性=PNH患者血細(xì)胞分為三型：患者血細(xì)胞分為三型：型：型：CD59表達(dá)完全陽(yáng)性，熒光強(qiáng)度與正常人陽(yáng)性峰熒光強(qiáng)度接近表達(dá)完全陽(yáng)性，熒光強(qiáng)度與正常人陽(yáng)性峰熒光強(qiáng)度接近型：型：CD59表達(dá)部分陽(yáng)性，熒光強(qiáng)度介于表達(dá)部分陽(yáng)性，熒光強(qiáng)度介于型與型與型之間型之間 型：型：CD59表達(dá)完全陰性表達(dá)完全陰性=分析分析PNH患者各型細(xì)胞所占百分比，評(píng)估疾病的嚴(yán)重程度患者各型細(xì)胞所占百分比，評(píng)估疾病的嚴(yán)重程度BD BiosciencesImmune Function紅細(xì)胞紅細(xì)胞 PNHPNH分析分析 A 正常人B D 病人BD BiosciencesImmune Function網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)Retic-COUNT= 操作快速、簡(jiǎn)便操作快速、簡(jiǎn)便= 計(jì)數(shù)精確計(jì)數(shù)精確= 低水平網(wǎng)織紅細(xì)胞檢測(cè)