白花丹參葉水提物對(duì)糖尿病大鼠腦組織損傷的影響

1、白花丹參葉水提物對(duì)糖尿病大鼠腦組織損傷的影響              作者：李大偉 張玲 趙曉民 王欣農(nóng) 夏青 夏作理【摘要】  目的研究白花丹參葉水提物對(duì)糖尿病大鼠腦組織損傷的影響。方法高脂飼料誘導(dǎo)后尾靜脈注射鏈脲佐菌素（streptozotocin，STZ）建立Wistar大鼠糖尿病模型。給藥治療后測(cè)定腦組織內(nèi)超氧化物歧化酶（superoxide dismutase， SOD）的活性及丙二醛（malondialdehyde，MDA）、一氧化氮（nitric o

2、xide ，NO）的含量。結(jié)果白花丹參葉制劑能明顯降低糖尿病大鼠血糖，同時(shí)大鼠體重穩(wěn)定增加。模型組大鼠腦內(nèi)SOD活性顯著降低，MDA，NO含量明顯升高；白花丹參葉水提物治療后大鼠腦內(nèi)SOD活性明顯增高，MDA，NO含量顯著下降。結(jié)論白花丹參葉水提物能增加糖尿病大鼠腦內(nèi)抗氧化酶活性，抑制脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，調(diào)節(jié)NO生成，減輕過(guò)氧化損傷起到腦保護(hù)作用。 【關(guān)鍵詞】  白花丹參 水提物 糖尿病1  器材與方法1.1  儀器與試劑冷凍干燥機(jī)（FD-190北京博醫(yī)康技術(shù)公司），755B紫外分光光度計(jì)（上海精密科學(xué)儀器有限公司）， Sigma（3K30）高速冷凍離心機(jī)，血糖儀，電

3、子天平，STZ(Sigma 015K1279),鹽酸二甲雙胍（北京市京豐制藥有限公司），膽固醇（上海伯奧生物科技有限公司），丙基硫氧嘧啶（上海復(fù)星朝暉藥業(yè)有限公司），SOD，MDA，NO，雙縮脲檢測(cè)試劑盒（南京建成生物工程研究所）。1.2  動(dòng)物及分組清潔級(jí)成年健康雄性Wistar大鼠（山東魯抗醫(yī)藥公司實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，質(zhì)量合格證：SCXK 魯 20050017號(hào)）70只，體重210220 g，分籠飼養(yǎng)，標(biāo)準(zhǔn)飼料，自由飲水。動(dòng)物房適應(yīng)1周后，隨機(jī)分為正常對(duì)照組和模型組，模型組60只大鼠喂飼高脂飼料，高脂飼料配方：1膽固醇，10豬油，0.2丙基硫氧嘧啶，89基礎(chǔ)飼料3。由山東泰安米歇爾

4、生物制品研究所提供。4周后，大鼠尾靜脈注射pH 4.2檸檬酸檸檬酸鈉緩沖液溶解的STZ（40 mg/kg·bw），72 h后檢測(cè)隨機(jī)血糖13 mmol/L，即確定為糖尿病大鼠。經(jīng)檢測(cè)確立模型成立大鼠53只，將其中50只大鼠隨機(jī)分為模型對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組、白花丹參治療低、中、高劑量組，每組各10只大鼠。1.3  白花丹參葉水提物的制備及給藥白花丹參由山東萊蕪苗山中藥產(chǎn)業(yè)化科技示范基地提供，白花丹參葉晾干粉碎，過(guò)30目的網(wǎng)眼篩，將10 g白花丹參葉粉末在100水中浸泡5 min然后過(guò)濾，所得濾液進(jìn)行冷凍干燥，凍干粉置于干燥器中避光4保存待用4。白花丹參葉水提物凍干粉制備成濃度為

5、0.16，0.32，0.53 g/ml的雙蒸水溶液，每天新配制后以1 ml/100 g  bw的量給大鼠灌胃，對(duì)照組給予等量的容劑灌胃5。鹽酸二甲雙胍雙蒸水溶解按照濃度為0.83 mmol/kg6灌胃給藥。各治療組大鼠連續(xù)給藥4周。1.4  指標(biāo)檢測(cè)及方法實(shí)驗(yàn)過(guò)程中檢測(cè)大鼠血糖及體重，給藥4周后，心臟灌注冰PBS將血液沖凈后迅速在冰盤(pán)上斷頭取腦，濾紙吸干水分，精確稱重后與冰PBS混合制備成10勻漿，按照試劑盒要求紫外分光光度計(jì)檢測(cè)各項(xiàng)指標(biāo)。雙縮脲法檢測(cè)腦組織蛋白含量，硝酸還原酶法檢測(cè)NO，TBA法檢測(cè)MDA，黃嘌呤氧化酶法檢測(cè)腦組織總SOD。  

6、0;      1.5  統(tǒng)計(jì)方法實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以±s表示，采用SPSS12.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，Levene方差齊性檢驗(yàn)各組方差齊性（P0.05），應(yīng)用單因素方差分析， t檢驗(yàn)進(jìn)行均數(shù)兩兩比較。檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)0.05（陽(yáng)性對(duì)照組大鼠實(shí)驗(yàn)過(guò)程中死亡2只，將其數(shù)據(jù)舍棄不用）。2  結(jié)果2.1  實(shí)驗(yàn)過(guò)程中各組大鼠體重、血糖的變化情況見(jiàn)表12。與正常對(duì)照組相比較，模型組大鼠血糖顯著升高（P0.01）。丹參治療組（DS）與模型對(duì)照組(MC)相比體重顯著增加（P0.01），陽(yáng)性對(duì)照藥二甲雙胍組(MET)體重與模型對(duì)照組沒(méi)

7、有顯著性差異。各治療組均能顯著降低血糖，丹參高劑量組（DS-H）、二甲雙胍組與模型組相比均有顯著性差異（P0.01）。白花丹參葉制劑能明顯降低糖尿病大鼠血糖，同時(shí)大鼠體重穩(wěn)定增加。表1  實(shí)驗(yàn)過(guò)程中體重變化情況（略）表2  實(shí)驗(yàn)過(guò)程中血糖變化情況(略)2.2  實(shí)驗(yàn)過(guò)程中各組大鼠腦組織內(nèi)SOD活性及MDA，NO的含量見(jiàn)表3。與正常對(duì)照組（NC）相比，各模型組大鼠腦組織內(nèi)SOD活性顯著降低(P0.01)，MDA、NO的含量則明顯升高(P0.010.05)。與模型對(duì)照組（MC）相比，陽(yáng)性對(duì)照二甲雙胍組（MET）、丹參葉水提物各濃度組（DS）SOD活性顯著增高，MDA、

8、NO的含量則明顯降低(P0.010.05)。由此可見(jiàn)白花丹參葉水提物可以增加機(jī)體抗氧化酶的活性，減輕脂質(zhì)過(guò)氧化及減少NO產(chǎn)生。表3  大鼠腦組織中SOD，MDA，NO含量(略)3  討論   糖尿病對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的損害表現(xiàn)為增加中風(fēng)的危險(xiǎn)性并加重其損害，加重腦缺血缺氧所致的腦血管損害及神經(jīng)元壞死等7。糖尿病時(shí)由于糖代謝紊亂導(dǎo)致機(jī)體葡萄糖自身氧化，蛋白非酶糖化，代謝應(yīng)激等使機(jī)體產(chǎn)生大量活性氧8，氧自由基通過(guò)生物膜中不飽和脂肪酸過(guò)氧化，脂質(zhì)過(guò)氧化物及其分解產(chǎn)物引起細(xì)胞損傷。正常時(shí)機(jī)體內(nèi)抗氧化酶可以清除過(guò)剩的氧自由基，抑制脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)對(duì)機(jī)體起到保護(hù)作用。糖尿病時(shí)機(jī)體抗氧化酶發(fā)生糖化或氧化，導(dǎo)致機(jī)體抗氧化酶如SOD活性下降。而反映氧化應(yīng)激水平的物質(zhì)如脂質(zhì)過(guò)氧化終末產(chǎn)物MDA含量則明顯升高9。NO可作為自由基而損傷神經(jīng)元，NO與超氧陰離子自由基（O2·）形成過(guò)氧化亞硝基陰離子（ONOO）是其主要毒性作用途徑10。通過(guò)實(shí)驗(yàn)觀察發(fā)現(xiàn)，白花丹參葉水提物治療組大鼠與模型對(duì)照組大鼠相比腦組織內(nèi)SOD活性明顯增高，MDA，NO的含量則明顯降低。提示白花丹參葉水提物能增加糖尿病大鼠腦內(nèi)抗氧化酶活性，抑制脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，減少NO生成，從而減輕糖尿病腦組織過(guò)氧化損傷起到保護(hù)腦組織的作用。   糖尿病及代謝綜合征日益威脅著人