水體富營養(yǎng)化評(píng)價(jià)試驗(yàn)

1、1. 水污染生物學(xué)實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)?zāi)康牧私馑w富營養(yǎng)化評(píng)價(jià)方法，并通過對(duì)單一因子指標(biāo)的測(cè)定，對(duì)模擬水體的富營養(yǎng)化程度進(jìn)行評(píng)價(jià)。2. 回顧水體單一污染因子測(cè)定方法，包括透明度(SD)、總磷(TP)、總氮(TN)和高錠酸鹽指數(shù)(CODMn)。3. 掌握葉綠素Chla、TN、TP的測(cè)定方法，熟悉實(shí)驗(yàn)程序，了解各種儀器的工作原理和操作方法。1. 實(shí)驗(yàn)原理葉綠素a的測(cè)定原理葉綠素a存在于所有植物中，約占有機(jī)物干重的1%2%,是水體初級(jí)生產(chǎn)力和估算水體中浮游植物濃度的重要指標(biāo)，對(duì)葉綠素a進(jìn)行測(cè)定，可以了解水體的生產(chǎn)力和富營養(yǎng)化水平。葉綠素不溶于水，但溶于乙醇、丙酮、乙酬等有機(jī)溶劑。葉綠素a和b,分別在藍(lán)紫光區(qū)和紅

2、光區(qū)對(duì)光譜有兩個(gè)吸收峰。因此，可以應(yīng)用有機(jī)溶劑提取葉綠素，在特定波長下進(jìn)行比色測(cè)定。2. TN的測(cè)定原理-堿性過硫酸鉀消解紫外分光光度法總氮：指可溶性及懸浮顆粒中的含氮量。在60C以上水溶液中，過硫酸鉀可分解產(chǎn)生硫酸氫鉀和原子態(tài)氧，硫酸氫鉀在溶液中離解而產(chǎn)生氫離子，故在氫氧化鈉的堿性介質(zhì)中可促使分解過程趨于完全。分解出的原子態(tài)氧在120124C條件下，可使水樣中含氯化合物的氮元素轉(zhuǎn)化為硝酸鹽。并且在此過程中有機(jī)物同時(shí)被氧化分解?？捎米贤夥止夤舛确ㄓ诓ㄩL220和275nm處，分別測(cè)出吸光度A220及A275按公式求出校正吸光度A:A=A2202A275(1)按A的值查校準(zhǔn)曲線并計(jì)算總氮(以NO3

3、-N計(jì))含量。3.TP的測(cè)定原理總磷是指水體中各種形態(tài)的磷的總量，是反映水體所受污染程度和湖庫水體富營養(yǎng)化程度的重要指標(biāo)之一。本實(shí)驗(yàn)采用過硫酸鉀高溫高壓消解法進(jìn)行預(yù)處理，使其中的含磷有機(jī)物轉(zhuǎn)化成可溶的磷酸鹽，同時(shí)也使偏磷酸鹽和焦磷酸鹽都轉(zhuǎn)化成正磷酸鹽，然后于波長700nm處測(cè)定吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出含磷量。一. 實(shí)驗(yàn)儀器紫外分光光度計(jì)，高壓蒸汽消毒器，10ml、25ml、50ml具塞玻璃磨口比色管，抽濾器，離心機(jī)。二. 實(shí)驗(yàn)試劑1. 測(cè)定葉綠素a：碳酸鎂，90%乙醇。2. 測(cè)定TN:無氨水，20%NaOH溶液，堿性過硫酸鉀溶液，硝酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液，(1+9)鹽酸。3. 測(cè)定TP:(1+1)硫酸，

4、10%抗壞血酸溶液，鉗酸鹽溶液，磷酸鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液。1. 實(shí)驗(yàn)步驟葉綠素a的測(cè)定(1) 水樣采集后放在陰涼處，避免日光直射，最好立即進(jìn)行測(cè)定的預(yù)處理。如需經(jīng)過一段時(shí)間(448h)才能進(jìn)行預(yù)處理，則應(yīng)將水樣保存在低溫避光處，在每升水樣中加入1ml1%的碳酸鎂懸濁液，以防止酸化引起色素溶解。(2) 在抽濾器上裝好0.45vm醋酸纖維濾膜，倒入定量體積的水樣進(jìn)行抽濾，抽濾時(shí)負(fù)壓不能過大(約50kPa)。水樣抽完后，繼續(xù)抽12min,以減少濾膜上的水分。(3) 抽濾完畢后，將帶有浮游植物的濾膜直接放入10ml比色管中(即不干燥研磨)，加入少量的碳酸鎂粉末，再加入90%乙醇10ml,在常溫暗室中提取68h。

5、(4) 取出，充分搖勻比色管內(nèi)含物，用3500r/min離心10min,上清液再轉(zhuǎn)入比色管中，用90%的乙醇定容至10ml。(5) 用分光度度計(jì)在750nm663nm645nm、630nm波長處，分別測(cè)定其吸光度值，并以90%勺乙醇作空白吸光度測(cè)定。2. TN的測(cè)定 (1)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制分另U吸取0、0.50、1.00、2.00、3.00、5.00、7.00、8.00ml硝酸鉀標(biāo)準(zhǔn)使用溶液于25ml比色管中，用無氨水稀釋至10ml標(biāo)線。 加入5ml堿性過流酸價(jià)溶液，塞緊磨口塞，用紗布及紗繩裹緊管塞，以防迸濺出。將比色管至于壓力蒸汽消毒器中，加熱0.5h,放氣使壓力指針回零，然后升溫至120-1

6、24C開始計(jì)時(shí)，使比色管在過熱水蒸氣中加熱0.5h。 白然冷卻，開閥放氣，移去外蓋，取出比色管并冷卻至室溫。 加入(1+9)鹽酸1ml，用無氨水稀釋至25ml。 在紫外分光光度計(jì)上，以無氨水做參比，用10mm石英比色皿分別在波長220nm及275nm處測(cè)定吸光度。用校正的吸光度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。(2)樣品測(cè)定步驟取10ml水樣，按標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制步驟至操作。然后按校正吸光度，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出相應(yīng)的總氮量，在用下列公式計(jì)算總氮含量?？偟?mg/l)=m/V式中：m-從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查的含氮量(昭)；V-所取水樣體積(ml)。3. TP的測(cè)定 (1)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制取數(shù)支50ml具塞比色管，分別加入磷酸鹽標(biāo)準(zhǔn)使

7、用液0、0.50、1.00、3.00、5.00、10.00、15.00ml，加水至50ml。 消解：向比色管中加入4ml過硫酸鉀溶液，加塞后管口包一小塊紗布并用線扎緊，將具塞刻度管放在大燒杯中，至于高壓蒸汽消毒器，待鍋內(nèi)壓力達(dá)1.1kg/cm2時(shí)，保持此壓力30min后，停止加熱，待壓力標(biāo)指針降至零后，取出放冷。 顯色：向比色管中加入1ml10硫壞血酸溶液，混勻。30s后加2ml.鉗酸鹽溶液充分混勻，防止15min。 測(cè)量：用10m威30m咐匕色皿，于700nm波長處，以零濃度溶液做參比，測(cè)量吸光度。(2)樣品測(cè)定分別取適量經(jīng)消解的水樣50ml比色管中，用手稀釋至標(biāo)線。一下按繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線的步驟進(jìn)行顯色和測(cè)量。減去空白試驗(yàn)的吸光度，并從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出含磷量。數(shù)據(jù)處理1.原始數(shù)據(jù)(1)葉綠素a：750nm-0.011,-0.010,-0.009,平均：-0.01663nm:0.005,0.013,0.002平均：0.0067645nm:-0.001,0.002,0.001平均:0.00067630nm:-0.001,0.005,0.001平均：0.0017(2)TN:220nm:6.549;275nm:0.627(3)TP:700nm:0.170,0.172,0.1942.處理結(jié)果葉綠素a(mg