醋酸氯己定、葡萄糖酸氯己定、鹽酸氯己定測定方法

1、附錄 A（資料性附錄）醋酸氯己定、葡萄糖酸氯己定、鹽酸氯己定測定方法A.1 方法一：高效液相色譜法A.1.1適用范圍適用于含醋酸氯己定、葡萄糖酸氯己定、鹽酸氯己定的單方和復方消毒劑。A.1.2 原理樣品經(jīng)流動相（0.02 mol/L 磷酸二氫鉀溶液pH=2.5 +乙腈=65+35）超聲波提取，采用高效液相色譜-二極管陣列檢測器測定，峰面積外標法定量。A.1.3 儀器A.1.3.1高效液相色譜儀，具二極管陣列檢測器。A.1.3.2電子天平，感量為 0.1 mg。A.1.3.3超聲波清洗器。A.1.4 試劑除非另有說明，本方法所用試劑均為分析純，實驗用水為GB/T 6682規(guī)定的一級水。A.1.4

2、.1醋酸氯己定（C22H30Cl2Ni0?2C2H4O2，CASt： 56-95-1 ）標準品。A.1.4.2磷酸二氫鉀（KHPO4。A.1.4.385% 磷酸（HPO4。A.1.4.4 乙腈（CHCN :色譜純。A.1.5分析步驟A.1.5.1流動相、提取液的制備稱取2.7 g磷酸二氫鉀，放入1000 mL量筒中，加入約950 mL水溶解后，加入1.5 mL 85% 磷酸，然后用水定容至1000 mL,混勻，得到流動相 A相 （pH=2.5） , B相為乙腈。量取流動相A相650 mL,加乙腈350 mL,混合均勻，得到提取液。A.1.5.2 標準溶液的制備精密稱取醋酸氯己定標準品20 mg

3、，用流動相稀釋至50 mL,得到400 mg/L標準溶液。A.1.5.3 標準曲線的制備將標準溶液用流動相稀釋成10 mg/L、20 mg/L、40 mg/L、80 mg/L、100 mg/L、200 mg/L的標準系列，10卩L進樣測定。A.1.5.4色譜參考條件色譜柱：C18柱 （4.6 mnK 250 mm,5 卩 m）;流動相：A相 + B相相 = 65+35;流速：1.0 mL/min ; 進樣量:10卩L;柱溫：30 C；波長掃描200 nm400 nm；測定波長：260 nm ;以保留時間 和紫外光譜圖譜定性，以峰面積外標法定量。A.1.5.5樣品測定稱取或量取樣品適量于 50

4、mL容量瓶中，加提取液40 mL超聲波提取20 min，定容至50mL, 過0.45卩m濾膜后，進樣測定。色譜圖見圖A.1。A.1.6結果計算A.1 ）。（A.1 ）g/kg 或 g/L ）;單位為毫克每升（mg/L）;1.4352。0.9246。根據(jù)標準曲線，計算樣品中醋酸氯己定含量，計算公式見式（PxvXM 1000式中：X樣品中醋酸氯己定的含量，單位為克每千克或克每升（ P 由標準曲線得到樣品溶液的醋酸氯己定的質(zhì)量濃度，V定容體積，單位為毫升（mL ; M樣品量，克或毫升（g或mL。注：葡萄糖酸氯己定含量測定可以用醋酸氯己定做標準品，并將結果乘以 鹽酸氯己定含量測定可以用醋酸氯己定做標準

5、品，并將結果乘以A.1.7 精密度在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不得超過算術平均值的10%A.2 方法二：滴定法（本方法依據(jù)中華人民共和國藥典中醋酸氯己定的測定方法）A.2.1適用范圍適用于含醋酸氯己定的單方消毒劑。A.2.2 原理樣品用丙酮和冰醋酸溶解，加甲基橙飽和丙酮溶液，用高氯酸滴定液滴定，甲基橙指示液顯橙色時停止滴定，通過高氯酸滴定液使用量，計算醋酸氯己定含量。A.2.3 儀器A.2.3.1電子天平，感量為 0.1 mg。A.2.4 試劑除非另有說明，本方法所用試劑均為分析純，實驗用水為GB/T 6682規(guī)定的一級水。A.2.4.1 高氯酸（CIHQ）標準滴定溶液（0.

6、1mol/L ）。A.2.4.2 丙酮（CHCOCH。冰醋酸（CHCOOH。甲基橙（SHuNNaOS）。樣品測定精密稱取或量取樣品適量，加丙酮 30 mL與冰醋酸2 mL ,振搖使溶解后，加甲基橙的飽 和丙酮溶液0.5 mL1 mL,用高氯酸滴定液（0.1mol/L ）滴定至溶液顯橙色，并將滴定的結 果用空白試驗校正。每 1 mL高氯酸滴定液（0.1mol/L ）相當于 31.28mg的G2H0CI2NW 2C2HkQ。A.2.6結果計算樣品中醋酸氯己定含量，計算公式見式（A.2 ）。(A.2)C (V -V0) 31.28M式中：X樣品中醋酸氯己定的含量，單位為克每千克或克每升（ g/kg或

7、g/L ）； C標準滴定溶液的摩爾濃度，單位為摩爾每升（mol/L ）;V試樣測定所消耗的標準滴定溶液的體積，單位為毫升（mL）;V0相應的空白測定所消耗的標準滴定溶液的體積，單位為毫升（mL）；M樣品量，克或毫升（g或mL）。A.2.7 精密度在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不得超過算術平均值的10%。A.3 方法三：紫外分光光度法（本方法依據(jù)中華人民共和國藥典 中醋酸氯己定軟膏的測 定方法）A.3.1適用范圍適用于軟膏型或液體制劑型含氯己定類（包括醋酸氯己定、葡萄糖酸氯己定、 鹽酸氯己定）的單方消毒劑。A.3.2 原理樣品中的醋酸氯己定經(jīng)氯仿溶解基質(zhì)，再用1.5 mol/L的

8、醋酸溶液提取，在波長 260 nm處測定吸光度值定量。A.3.3 儀器A.3.3.1紫外分光光度計。A.3.3.2電子天平，感量為 0.1 mg。A.3.4 試劑除非另有說明，本方法所用試劑均為分析純，實驗用水為GB/T 6682規(guī)定的一級水。A.3.4.1醋酸氯己定(8HoCl2Nw?2GHO, CASt： 56-95-1 )標準品。氯仿（CHC3）。冰醋酸（HPO4。分析步驟標準溶液測定精密稱取醋酸氯己定標準品約 10 mg置100 ml容量瓶中，加1.5 mol/L醋酸溶液溶解并 稀釋至刻度，搖勻，精密量取 5 mL，置50 mL量瓶中，用乙醇稀釋至刻度，在 260 nm的波長 處測定吸

9、光度。A.3.5.2 樣品測定精密稱取樣品適量（約相當于醋酸氯己定10 mg），置分液漏斗中，加微溫氯仿30 mL,振搖使基質(zhì)溶解，用1.5 mol/L醋酸溶液提取5次（20 mL 20 mL 15 mL 15 mL、15 mL）， 合并酸液于100 m量瓶中，用1.5 mol/L醋酸溶液稀釋至刻度，搖勻，精密量取5 mL，置50m量瓶中，用乙醇稀釋至刻度，搖勻，在260 nm的波長處測定吸光度。液體劑型醋酸氯己定消毒液，直接用1.5 mol/L醋酸溶液稀釋后，再用乙醇稀釋，測定吸光度。A.3.6結果計算樣品中醋酸氯己定含量，計算公式見式（ A.3 ）。A2mA, M (A.3)式中：X樣品中醋酸氯己定的含量，單位為克每千克或克每升（g/kg或g/L）；m醋酸氯己定標準品的質(zhì)量，單位為毫克（mg）；A 醋酸氯己定標準溶液的吸收值；A樣品溶液的吸收值；M樣品量，克或毫升（g或mL）