-腫瘤免疫治療臨床應(yīng)用及進(jìn)展ppt課件

1、 腫瘤免疫治療臨床應(yīng)用及進(jìn)展腫瘤免疫治療臨床應(yīng)用及進(jìn)展 - -腫瘤生物治療學(xué)基礎(chǔ)與臨床腫瘤生物治療學(xué)基礎(chǔ)與臨床1教學(xué)目的與要求教學(xué)目的與要求熟悉腫瘤免疫治療的策略和方法熟悉腫瘤免疫治療的策略和方法認(rèn)識(shí)免疫治療在腫瘤綜合治療中的認(rèn)識(shí)免疫治療在腫瘤綜合治療中的地位和作用地位和作用了解腫瘤免疫治療的最新進(jìn)展了解腫瘤免疫治療的最新進(jìn)展2一、腫瘤的免疫治療一、腫瘤的免疫治療 基本原理基本原理： 提高腫瘤抗原免疫原性，激發(fā)和增強(qiáng)機(jī)體抗腫瘤免疫應(yīng)答，提高腫瘤對(duì)抗瘤免疫效應(yīng)的敏感性，在體內(nèi)外誘生腫瘤特異性效應(yīng)細(xì)胞和分子等。 抗腫瘤免疫治療包括主動(dòng)免疫治療、被動(dòng)免疫治療。31 1、干擾素、干擾素1）I型干擾素：

2、由單核巨噬細(xì)胞、病毒誘導(dǎo)的成纖維細(xì)胞、轉(zhuǎn)化的B細(xì)胞產(chǎn)生 種類：IFN-、IFN-、IFN-、IFN-等 作用：抑制腫瘤細(xì)胞周期、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡 調(diào)節(jié)免疫反應(yīng) 感染腫瘤血管生成 其它作用：抗病毒2）II型干擾素：由活化的T細(xì)胞、原始的Th0細(xì)胞和NK細(xì)胞產(chǎn)生 種類：IFN- 作用: 激活巨噬細(xì)胞、NK細(xì)胞等直接殺傷癌細(xì)胞 延長細(xì)胞周期、抑制腫瘤細(xì)胞的生長和增殖 促進(jìn)MHC-I、II類分子和抗原遞呈細(xì)胞尚共刺激分子的表達(dá) 在干擾素的調(diào)節(jié)下，IFN-可誘導(dǎo)Th0向Th1分化，抑制向Th2分化，增強(qiáng)細(xì)胞免疫和CTL的殺傷活性臨床藥物：基因工程產(chǎn)品，已國產(chǎn)化。 干擾靈、賽若金 、因特芬、派羅欣。 （一）細(xì)

3、胞因子治療（一）細(xì)胞因子治療4適應(yīng)癥適應(yīng)癥：干擾素主要用于治療晚期毛細(xì)胞白血病、腎癌、黑色素瘤、kaposi肉瘤、慢性粒細(xì)胞性白血病和中低度惡性非霍奇金淋巴瘤，其他曾用于骨肉瘤、乳腺癌、多發(fā)性骨髓瘤、頭頸部癌和膀胱癌等。對(duì)慢性乙、丙型肝炎也有效。用法用法：第1周300萬單位，皮下注射，每周23次， 第2周每次加到500600萬單位，第3周加到9001000萬單位連續(xù)6周，共8周為1療程。 干擾素亦可局部注射（瘤周浸潤）、腔內(nèi)注射（癌性胸腹腔積液）或膀胱內(nèi)灌注。毒副作用毒副作用：高劑量干擾素具有一般生物制劑的反應(yīng)即發(fā)熱、流感樣癥狀，肌肉酸痛等，其次是輕度骨髓抑制。一般對(duì)肝腎功能無影響，少數(shù)有轉(zhuǎn)氨

4、酶、血肌酐升高。52 2、白細(xì)胞介素、白細(xì)胞介素-2 -2 （IL-2)IL-2)來源：主要由激活的T淋巴細(xì)胞分泌和表達(dá)，此外NK、轉(zhuǎn)化的B細(xì)胞和LAK細(xì)胞也可產(chǎn)生 作用：促進(jìn)T細(xì)胞增殖及相應(yīng)的細(xì)胞因子分泌 刺激NK生長并增強(qiáng)其殺細(xì)胞活性 誘導(dǎo)LAK、NK、TIL擴(kuò)增及細(xì)胞因子的分泌 促進(jìn)B細(xì)胞分化、增殖和產(chǎn)生抗體 參與機(jī)體的炎癥反應(yīng)、抗腫瘤免疫反應(yīng)和移植排斥反應(yīng)臨床藥物：基因工程IL-2 欣吉爾、德路生 、遠(yuǎn)策欣 。6適應(yīng)癥適應(yīng)癥：用于腎細(xì)胞癌、黑色素瘤、乳腺癌、膀胱癌、肝癌、直腸癌、淋巴瘤、肺癌等惡性腫瘤的治療。用于癌性胸腹水的控制。用于手術(shù)后、放療及化療后的腫瘤治療，可增強(qiáng)機(jī)體免疫功能。

5、也用于自身免疫性疾病和病毒性、細(xì)菌性疾病的治療，如乙肝、結(jié)核病。用法用法：1）胸腹腔注射 100-200萬IU/次，每周1-2次，2-4周為一療程。 2）局部注射 根據(jù)癌灶大小決定劑量，每次每個(gè)病灶不少于610萬IU，隔日1次，4周為一療程。 3）皮下注射 60-100萬IU/m3，每日1次，每周5次，4周為一療程。 4）靜脈滴注 40-80萬IUIU/m3，每日1次，緩慢滴注，每周5次，4周為一療程。7毒副作用毒副作用：治療中常見副反應(yīng)為發(fā)熱、寒戰(zhàn)、乏力、惡心、輕度食欲下降等。其他少見的副反應(yīng)包括局部反應(yīng)、皮疹、血壓下降、水潴留、轉(zhuǎn)氨酶升高等。 這些副反應(yīng)多為輕度、易耐受，停藥后可自行緩解。

6、必要時(shí)可給與消炎痛或給予升壓等措施對(duì)癥處理。83 3、ILIL- -1212 主要是由抗原呈遞細(xì)胞（如單核巨噬細(xì)胞、樹突細(xì)胞及主要是由抗原呈遞細(xì)胞（如單核巨噬細(xì)胞、樹突細(xì)胞及B B淋淋巴細(xì)胞產(chǎn)生）巴細(xì)胞產(chǎn)生） 作用：誘導(dǎo)作用：誘導(dǎo)Th0Th0分化為分化為Th1Th1，增強(qiáng)細(xì)胞免疫應(yīng)答，增強(qiáng)細(xì)胞免疫應(yīng)答 促進(jìn)促進(jìn)NKNK、T T細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)LAKLAK、TILTIL產(chǎn)生，產(chǎn)生， 并增強(qiáng)上述細(xì)胞的殺傷功能并增強(qiáng)上述細(xì)胞的殺傷功能 誘導(dǎo)誘導(dǎo)Th1Th1、NKNK分泌分泌IFN-IFN- 促進(jìn)巨噬細(xì)胞分泌一氧化氮，殺傷腫瘤細(xì)胞促進(jìn)巨噬細(xì)胞分泌一氧化氮，殺傷腫瘤細(xì)胞 抑制腫瘤血管的生成抑

7、制腫瘤血管的生成 增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞表達(dá)增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞表達(dá)MHC-I IIMHC-I II類分子，提高腫類分子，提高腫 瘤細(xì)胞對(duì)免疫效應(yīng)細(xì)胞的易感性瘤細(xì)胞對(duì)免疫效應(yīng)細(xì)胞的易感性 增加抗原遞呈細(xì)胞對(duì)腫瘤抗原的遞呈功能增加抗原遞呈細(xì)胞對(duì)腫瘤抗原的遞呈功能9動(dòng)物試驗(yàn)動(dòng)物試驗(yàn)： 應(yīng)用基因工程技術(shù)，將IL-12基因?qū)肽[瘤細(xì)胞、樹突細(xì)胞、成纖維細(xì)胞等，制成腫瘤疫苗，使IL-12在局部分泌，誘發(fā)機(jī)體的抗腫瘤免疫。臨床試驗(yàn)臨床試驗(yàn)： 重組人(rHu)IL-12治療慢性乙型肝炎，效應(yīng)與劑量相關(guān)，但較大劑量較易有不良反應(yīng)， IL-12能恢復(fù)由實(shí)體瘤轉(zhuǎn)移患者PBMC獲得的NK細(xì)胞活性， IL12還能增強(qiáng)毛細(xì)胞白血病患者N

8、K細(xì)胞活性， IL-12抗腫瘤作用104 4、IL-4IL-4主要由活化的T淋巴細(xì)胞（特別是Th2細(xì)胞）產(chǎn)生。作用作用：促進(jìn)休止期的B細(xì)胞活化，促進(jìn)B細(xì)胞分泌IgE，增加B細(xì)胞的抗原遞呈功能，促進(jìn)體液免疫應(yīng)答。 維持胸腺細(xì)胞和活化T細(xì)胞的生長，誘導(dǎo)Th2產(chǎn)生，抑 制Th1分泌細(xì)胞因子。 誘導(dǎo)NK細(xì)胞增殖。 激活巨噬細(xì)胞，促進(jìn)其抗原遞呈和殺傷腫瘤細(xì)胞的作用。 誘導(dǎo)外周血單個(gè)核細(xì)胞分泌M-CSF和G-CSF，增強(qiáng)中性粒細(xì)胞介導(dǎo)的吞噬、殺傷功能和抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒效應(yīng)（ADCC）應(yīng)用應(yīng)用：主要用于DC細(xì)胞的誘導(dǎo)、擴(kuò)增。 115 5、腫瘤壞死因子、腫瘤壞死因子TNFTNF1 1）TNF-TNF

9、-：主要來源于LPS、細(xì)菌DNA等抗原分子激活的單核巨噬細(xì)胞、其它細(xì)胞如T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞等產(chǎn)生的。 作用： 影響免疫反應(yīng)過程 影響非免疫細(xì)胞 促進(jìn)細(xì)胞因子分泌 調(diào)控細(xì)胞凋亡 全身反應(yīng)2 2）TNF-TNF-：主要由Th1、CD8T細(xì)胞和早期的B細(xì)胞產(chǎn)生作用作用：是炎癥過程的重要組成成分126 6、集落刺激因子、集落刺激因子 是一種低分子量糖蛋白，能夠在體內(nèi)外選擇性刺激造血干細(xì)胞增生、分化成某一譜系的細(xì)胞分類：G-CSF,M-CSF, GM-CSF, IL-3, EPO, SCF137 7、胸腺素、胸腺素 分為兩族 作用：1）具有免疫增強(qiáng)作用，可促進(jìn)T細(xì) 胞、NK、LAK等細(xì)胞的增殖及殺傷

10、 活性 2）參與細(xì)胞骨架的形成，通過對(duì) 肌動(dòng)蛋白的調(diào)節(jié)，參與某些腫瘤的 轉(zhuǎn)移14（二）腫瘤的主動(dòng)免疫治療（二）腫瘤的主動(dòng)免疫治療 應(yīng)用腫瘤抗原或模擬腫瘤抗原的疫苗刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)，激發(fā)或增強(qiáng)機(jī)體的抗腫瘤特異性免疫應(yīng)答，阻止腫瘤生長、擴(kuò)散和復(fù)發(fā)。15腫瘤疫苗腫瘤疫苗 腫瘤疫苗與傳統(tǒng)疫苗在概念上不同，它主要不是用于腫瘤的預(yù)防，而是通過瘤苗的接種來刺激機(jī)體對(duì)腫瘤的免疫應(yīng)答來治療腫瘤。 該法應(yīng)用的前提是腫瘤抗原能刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫反應(yīng)。 對(duì)手術(shù)后清除微小轉(zhuǎn)移瘤灶和隱匿瘤、預(yù)防腫瘤轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)有較好的效果。 161、腫瘤細(xì)胞疫苗 即通過自體腫瘤細(xì)胞粗提取物，經(jīng)物理化學(xué)或即通過自體腫瘤細(xì)胞粗提取物，經(jīng)物理化學(xué)

11、或生物手段處理后抑制其生長能力，保持其免疫原性，生物手段處理后抑制其生長能力，保持其免疫原性，需加入佐劑如卡介苗等以增強(qiáng)免疫原性。需加入佐劑如卡介苗等以增強(qiáng)免疫原性。172、腫瘤基因工程疫苗 腫瘤基因工程疫苗通過基因重組技術(shù)，將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞而制備的疫苗。 2 2、腫瘤基因工程疫苗、腫瘤基因工程疫苗181)1)、提高機(jī)體抗腫瘤能力、提高機(jī)體抗腫瘤能力 將外源基因?qū)朊庖呒?xì)胞，其表達(dá)產(chǎn)物作用于免疫細(xì)胞，促進(jìn)免疫細(xì)胞生長、分化，從而提高機(jī)體的抗腫瘤能力。 目前研究較多的是細(xì)胞因子基因的轉(zhuǎn)導(dǎo)，如IL-2、IL-4、IL-6、IL-12、IL-15、IL-18、IFN-以及GM-CSF等。 實(shí)驗(yàn)

12、顯示，在各種細(xì)胞因子中，以GMCSF基因修飾的腫瘤細(xì)胞疫苗效果最好，這與其誘導(dǎo)DC成熟有關(guān)。 192)2)、增強(qiáng)腫瘤免疫原性、增強(qiáng)腫瘤免疫原性 通過表達(dá)腫瘤所缺乏的某些分子，以增強(qiáng)其免疫原性。如將B7基因?qū)刖哂心[瘤抗原的腫瘤細(xì)胞，不僅能恢復(fù)腫瘤特異性免疫反應(yīng)，也可增強(qiáng)IL-2的抗瘤活性。一些腫瘤相關(guān)抗原（TAA）基因的轉(zhuǎn)導(dǎo)研究，顯示也可以增強(qiáng)其免疫原性，如CEA、AFP、gp100、MART-1。203)3)、基因產(chǎn)物直接殺傷瘤細(xì)胞、基因產(chǎn)物直接殺傷瘤細(xì)胞 如TNF基因?qū)肽[瘤細(xì)胞可使局部持續(xù)分泌TNF、從而直接殺傷腫瘤細(xì)胞。213、肽疫苗8-108-10個(gè)氨基酸的多肽是個(gè)氨基酸的多肽是T

13、T細(xì)胞識(shí)別的基礎(chǔ)細(xì)胞識(shí)別的基礎(chǔ)肽疫苗主要包括以下二種：1）、癌基因、抑癌基因突變肽疫苗 目前已合成的p21-K-Ras-125突變肽、EGFRvIII突變肽和Her2/neu肽等。2）、病毒相關(guān)疫苗 如EB病毒與鼻咽癌、Burkitt淋巴瘤，HBV與肝癌，人類T細(xì)胞白血病病毒與成人T細(xì)胞白血病。22OncophageOncophage (Vitespen) (Vitespen)通過加工、純化自體腫瘤細(xì)胞的gp96等熱休克蛋白HSP，獲得大量腫瘤抗原。一項(xiàng)III 期臨床研究中728 腎癌術(shù)后隨機(jī)分為觀察組和治療組結(jié)果： 復(fù)發(fā)率 觀察組 治療組 P值 全部 27.3% 25.0% 0.384 I+

14、 II期 27.0% 15.2% 0.056 III +IV 27.5% 32.0% 0.686 中?；颊? 30.9% 16.3% 0.004 中?；颊?:I/II期低分化/III期高分化 俄羅斯2008-4-9批準(zhǔn)Oncophage 用于中危腎癌的輔助治療。 Lancet. 2008 (9633):145234 4、核酸疫苗 核酸疫苗是由能引起保護(hù)性免疫反應(yīng)的抗原基因片段及其載體構(gòu)建而成。 包括DNA疫苗和RNA疫苗。4、核酸疫苗245、抗獨(dú)特型抗體疫苗 腫瘤抗原可誘導(dǎo)抗體(Ab1)產(chǎn)生，該抗體可變區(qū)的獨(dú)特型決定簇具有免疫源性，可誘導(dǎo)抗體Ab2產(chǎn)生，稱為抗獨(dú)特性抗體。也是一種抗抗體。 在這

15、些Ab2中，有的可模擬原來的抗原結(jié)構(gòu)誘導(dǎo)抗原的特異性免疫反應(yīng)，可作為腫瘤疫苗應(yīng)用。 這種疫苗的特點(diǎn)是，它既不這種疫苗的特點(diǎn)是，它既不是天然抗原的本身，也不是是天然抗原的本身，也不是人工合成的抗原自身，而是人工合成的抗原自身，而是抗原本身的抗原本身的“摸擬物摸擬物”，當(dāng)，當(dāng)用這種疫苗接種時(shí)，機(jī)體雖用這種疫苗接種時(shí)，機(jī)體雖然沒有直接接觸抗原，卻能然沒有直接接觸抗原，卻能產(chǎn)生對(duì)相應(yīng)抗原的免疫應(yīng)答產(chǎn)生對(duì)相應(yīng)抗原的免疫應(yīng)答 具有抗原放大效應(yīng)具有抗原放大效應(yīng)25已進(jìn)入已進(jìn)入、期臨床期臨床的的抗獨(dú)特型抗體抗獨(dú)特型抗體：卵巢癌相關(guān)抗原CA125的獨(dú)特型疫苗：AcA125黑色素瘤的獨(dú)特性疫苗：BEC2、TriG

16、em等淋巴瘤的獨(dú)特性疫苗：Id-KLH乳腺癌的獨(dú)特性疫苗：1E10結(jié)直腸癌的獨(dú)特性疫苗：105AD7266 6、樹突狀細(xì)胞（、樹突狀細(xì)胞（DCDC）疫苗）疫苗 腫瘤抗原屬于內(nèi)源性抗原，機(jī)體主要依靠CTL免疫應(yīng)答殺傷腫瘤細(xì)胞。但腫瘤細(xì)胞表面的MHC-抗原肽段復(fù)合物表達(dá)水平低，需要經(jīng)體內(nèi)抗原提呈細(xì)胞加工、處理，提供誘導(dǎo)T細(xì)胞活化的第二信號(hào)，才能激發(fā)腫瘤特異性CTL的產(chǎn)生。由于DC在誘導(dǎo)體液免疫應(yīng)答和細(xì)胞免疫應(yīng)答中的重要功能，目前認(rèn)為，DC在啟動(dòng)抗腫瘤免疫的抗原呈遞中發(fā)揮重要作用。27Dendritic cells connect innate immunity and adaptive immun

17、ity人DC至少有三條來自于不同前體細(xì)胞的發(fā)育途徑：1）CD34+細(xì)胞分化為DC2）外周血單核細(xì)胞分化為DC3）淋巴樣DC前體細(xì)胞分化途徑28臨床應(yīng)用臨床應(yīng)用治療惡性淋巴瘤治療惡性淋巴瘤 腫瘤抗原可以基因、多肽、蛋白、甚至完整細(xì)胞的形式負(fù)荷給DC，因此DC疫苗的制備明顯比基因修飾的腫瘤細(xì)胞疫苗容易，因而促進(jìn)了DC疫苗進(jìn)入臨床試驗(yàn)。 1996美國斯坦福大學(xué)的Hsu等首先采用抗獨(dú)特型抗體負(fù)荷的DC疫苗治療了4例B細(xì)胞型淋巴瘤，3例獲部分緩解。 29抗原沖擊抗原沖擊DCDC治療乳腺癌（治療乳腺癌（I/III/II期臨床）期臨床）病人：病人： 高表達(dá)高表達(dá)HER2的轉(zhuǎn)移性乳腺癌病人的轉(zhuǎn)移性乳腺癌病人1

18、6例例方法：方法： HER500沖擊的自體沖擊的自體APC 2108 to 5109 ， 二周一次，共三次。二周一次，共三次。 副作用：主要為寒戰(zhàn)和發(fā)熱，沒有副作用：主要為寒戰(zhàn)和發(fā)熱，沒有3-4級(jí)的毒副反應(yīng)級(jí)的毒副反應(yīng)結(jié)果：結(jié)果： 12個(gè)可評(píng)價(jià)的病人，個(gè)可評(píng)價(jià)的病人，1例例PR 結(jié)論：結(jié)論： HER500沖擊的自體沖擊的自體DC使用安全，有一定使用安全，有一定 療效，但效率仍不夠高。療效，但效率仍不夠高。 J. W. Kylstra, et al. ASCO 200330治療轉(zhuǎn)移性腎癌（治療轉(zhuǎn)移性腎癌（I/III/II期臨床）期臨床）病人：病人：轉(zhuǎn)移性腎癌轉(zhuǎn)移性腎癌 15例例方法：方法：腫瘤細(xì)

19、胞溶解物沖擊的腫瘤細(xì)胞溶解物沖擊的DC 3.95106 淋巴結(jié)內(nèi)注射淋巴結(jié)內(nèi)注射副作用：副作用：無明顯的毒副作用無明顯的毒副作用結(jié)果：結(jié)果：7例進(jìn)展，例進(jìn)展，7例穩(wěn)定，例穩(wěn)定，1例部分退縮例部分退縮 (14.4106細(xì)胞細(xì)胞 )結(jié)論：結(jié)論：腫瘤細(xì)胞溶解物沖擊的腫瘤細(xì)胞溶解物沖擊的DC，即使在有大，即使在有大負(fù)荷腫瘤時(shí)也有效，在大劑量使用時(shí)更有效，負(fù)荷腫瘤時(shí)也有效，在大劑量使用時(shí)更有效，無毒副作用。無毒副作用。 Marten A, et al. Cancer Immunol Immunother. 2002Marten A, et al. Cancer Immunol Immunother. 2

20、002 31PROVENGE (sipuleucel-T) ProvengeProvenge是是PA2024 (GM-CSFPA2024 (GM-CSF和和PAPPAP的融合蛋白的融合蛋白) )與自身樹突狀細(xì)胞與自身樹突狀細(xì)胞孵孵育后獲得的自體育后獲得的自體DCDC細(xì)胞疫苗細(xì)胞疫苗。 III期研究設(shè)計(jì)期研究設(shè)計(jì):127例無癥狀激素治療無效的轉(zhuǎn)移性前列腺癌患者例無癥狀激素治療無效的轉(zhuǎn)移性前列腺癌患者，以以2:1比例比例接受接受sipuleucel-T (2周周1次，連續(xù)次，連續(xù)3次次) 或安慰劑治療，或安慰劑治療，3 3月后曲線月后曲線分離。分離。 J Clin Oncol.2006:30893

21、2DC Vax-Brain患者DC細(xì)胞經(jīng)自體腫瘤細(xì)胞刺激后獲得。膠質(zhì)瘤手術(shù)聯(lián)合放化療的MS為14.6個(gè)月，TTP為6.9個(gè)月。 N Engl J Med, 2005:987I期和I/II期研究中發(fā)現(xiàn)膠質(zhì)瘤經(jīng)DCVax-Brain治療后（皮下注射）后，3年存活率為53%，95%的患者M(jìn)S超過14.6個(gè)月，TTP超過6.9個(gè)月。http:/ 由于大多數(shù)腫瘤抗原 未被識(shí)別，因此腫瘤細(xì)胞溶解物負(fù)荷的DC疫苗可使更多的患者接受此種方法治療。 直接攜帶腫瘤抗原的DC作用更為直接，可以活化靜息的T細(xì)胞，誘導(dǎo)強(qiáng)烈的抗腫瘤免疫反應(yīng)。 34（三）腫瘤的被動(dòng)免疫治療（三）腫瘤的被動(dòng)免疫治療1 1、單克隆抗體靶向治療

22、、單克隆抗體靶向治療 又稱之為生物導(dǎo)彈技術(shù)，通過補(bǔ)體系統(tǒng)和自然殺傷細(xì)胞起抗腫瘤作用。 嵌合型單抗達(dá)到95以上人源化,減少了異種免疫原性。351） 抗腫瘤單克隆抗體直接體內(nèi)應(yīng)用 很多進(jìn)入臨床治療試驗(yàn)，包括抗白細(xì)胞 分化抗原CD19、CD20、CD22、CD33，表皮生長因子受體（EGFR），MU C1，前列腺特異性抗原（PSA），前列腺特異性膜抗原（PSMA），癌基因cerbB2產(chǎn)物，神經(jīng)節(jié)苷酯GD3、GM2等抗原的單抗。 362） 抗腫瘤單克隆抗體與抗腫瘤藥物、生物毒素、細(xì)胞因子或放射性核素偶聯(lián)： 生物毒素，如假單胞菌毒素或蓖麻毒素； 放射線同位素，如131I 、186Re、177Lu、90Y

23、、212Bi、67Cu、等 單抗作為導(dǎo)向物可增加毒素、放射性同位素等在腫瘤局部 的濃度，增加對(duì)腫瘤的殺傷力或誘導(dǎo)腫瘤局部的免疫反應(yīng)。37 3）基因工程抗體-毒素（或酶）融合蛋白直接殺瘤 4）抗腫瘤單克隆抗體和抗效應(yīng)細(xì)胞表面分子的抗體組成雙特異性抗體，可引導(dǎo)殺瘤效應(yīng)細(xì)胞向腫瘤灶集中 5)胞內(nèi)抗體在腫瘤細(xì)胞內(nèi)表達(dá)，特異性作用于致瘤的癌基因產(chǎn)物或端粒酶38 2 2、腫瘤過繼性免疫治療、腫瘤過繼性免疫治療 向腫瘤患者體內(nèi)輸注具有抗瘤活性的免疫細(xì)胞，直接殺傷腫瘤細(xì)胞或激發(fā)機(jī)體抗腫瘤免疫效應(yīng)。 回輸?shù)男?yīng)細(xì)胞包括：在體外用腫瘤抗原或淋巴因子激活的淋巴細(xì)胞（CIK、TIL等）、導(dǎo)入外援細(xì)胞因子基因并表達(dá)相應(yīng)

24、產(chǎn)物的淋巴細(xì)胞等。391 11)1)LAKLAK細(xì)胞細(xì)胞 LAK細(xì)胞是在1980年由美國國立癌癥研究所Rosenberg發(fā)現(xiàn)，并在1982年由Grimm等命名的。這是一類由IL-2激活的能夠殺傷NK抵抗的新型免疫細(xì)胞，是一種強(qiáng)烈的，廣譜的，具有殺瘤活性的細(xì)胞。隨后臨床上廣泛應(yīng)用于腫瘤等疾病治療。但由于LAK細(xì)胞活性的維持需要IL-2，而IL-2副作用大，而且在以后的臨床總結(jié)中發(fā)現(xiàn)LAK細(xì)胞療效較低，現(xiàn)已基本不用。402 2) )CD3AKCD3AK細(xì)胞細(xì)胞 是在LAK細(xì)胞基礎(chǔ)上，用抗CD3單抗和IL-2聯(lián)合誘導(dǎo)的殺瘤細(xì)胞。由于使用了抗CD3單抗刺激，減少了IL-2的用量，降低LAK治療的毒副作

25、用，且CD3AK的抗腫瘤活性大大高于LAK細(xì)胞。 對(duì)晚期惡性腫瘤患者輸注自體 CD3AK 細(xì)胞 1個(gè)療程后 ,實(shí)體瘤組治療有效率為 25. 45%,臨床獲益率為 74. 54%;淋巴瘤組有效率為 83. 33%,臨床獲益率為 91. 67%。41 在利用外周血淋巴細(xì)胞制備免疫效應(yīng)細(xì)胞的研究中，為增加效應(yīng)細(xì)胞的數(shù)量和殺瘤活性，常添加一些激活劑如抗CD3單抗，植物血凝素PHA等，以提高免疫治療療效。 實(shí)驗(yàn)顯示PHA預(yù)刺激雖能促進(jìn)IL-2激活的殺傷細(xì)胞的增殖，但對(duì)殺傷活性并無明顯改善，而培養(yǎng)15天以上，經(jīng)PHA預(yù)刺激的P-LAK和P-CD3AK細(xì)胞殺傷活性顯著提高，且PHA與抗CD3單抗有協(xié)同效應(yīng)。

26、423 3) )TILTIL細(xì)胞細(xì)胞（腫瘤浸潤的淋巴細(xì)胞）腫瘤浸潤的淋巴細(xì)胞） 腫瘤浸潤的淋巴細(xì)胞，是從新鮮的腫瘤組織中分離出來，體外經(jīng)IL-2，抗CD3單抗，TNF等刺激，經(jīng)20-45天培養(yǎng)，獲得的具有一定特異性的抗腫瘤細(xì)胞。其局限在于分離困難，體外培養(yǎng)時(shí)間過長。43 我們于1997-1998年選擇21例癌性胸腹水患者，其中肺癌4例，乳腺癌5例，腸癌4例，骨癌7例，胰腺癌1例。所有病例均經(jīng)病理學(xué)和細(xì)胞學(xué)診斷。共抽取33次胸腹水做TIL細(xì)胞培養(yǎng)，抽取胸水2502200ml，腹水量12004400ml。21例患者中14例經(jīng)16次的TIL胸腹腔回輸治療?；剌斊陂g隔天皮下注射IL-2 50萬單位。1

27、4例患者回輸治療結(jié)果顯示總有效率為78.57%，其中3例胸腹水消失，并觀察1個(gè)月無復(fù)發(fā)，1個(gè)月后檢查胸腹水無瘤細(xì)胞；8例胸腹水有明顯減少，并控制1個(gè)月以上；3例僅控制12周。444 4) )TAKTAK細(xì)胞細(xì)胞 TAK是由可溶性腫瘤抗原，抗CD3單抗和IL-2共同誘導(dǎo)的殺瘤細(xì)胞。用可溶性腫瘤抗原誘導(dǎo)細(xì)胞識(shí)別腫瘤，以提高殺瘤親和性；用抗CD3單抗誘導(dǎo)所有T細(xì)胞活化，培養(yǎng)出以CD8+T細(xì)胞為主的殺瘤細(xì)胞。TAK細(xì)胞不僅增加了殺瘤的特異性，且體外增殖快，IL-2用量低。 用胃癌可溶性抗原（TSA），聯(lián)合抗CD3單抗和IL-2共同刺激正常人的外周血單核細(xì)胞，培養(yǎng)10天后，經(jīng)流式細(xì)胞儀表型分析，表明其免

28、疫效應(yīng)細(xì)胞以CD8+T細(xì)胞為主，其細(xì)胞增殖速度，增殖水平與CD3AK和LAK相比明顯升高，且對(duì)抗原來源的胃癌細(xì)胞具有極強(qiáng)的殺傷活性（98.5%），高于CD3AK（82.1%）和LAK（62.05%）。45 我們于1996-1998年，采用靜脈或口服化療和免疫效應(yīng)細(xì)胞輸注為主體的化學(xué)免疫療法，治療晚期原發(fā)性肝癌18例。 收治的38例晚期原發(fā)性肝癌病人中，18例采用化學(xué)免疫療法（甲組），同期收治的晚期肝癌患者，除對(duì)癥處理外，單用靜脈化療或肝動(dòng)脈插管化療20例，列為對(duì)照組（乙組）。 總緩解率（總緩解率（CR+PRCR+PR）：）： 甲組22.22%（4/18） 乙組0% 無1例緩解 465 5) )

29、CIKCIK細(xì)胞細(xì)胞 是將人外周血單個(gè)核細(xì)胞經(jīng)體外用各種細(xì)胞因子共同刺激培養(yǎng)所獲得的免疫細(xì)胞。由于同時(shí)表達(dá)CD3和CD56分子，故又稱為NK樣T細(xì)胞，CIK細(xì)胞兼具有T淋巴細(xì)胞強(qiáng)大的抗瘤活性和NK細(xì)胞的非MHC限制性殺瘤特點(diǎn)，其抗腫瘤活性遠(yuǎn)大于LAK和TIL。因此被認(rèn)為是新一代腫瘤過繼細(xì)胞免疫治療的首選方案。 刺激因子除了抗CD3單抗、IL-2外，還需用IFN-和IL-1等細(xì)胞因子。 47CIKCIK細(xì)胞殺傷機(jī)制細(xì)胞殺傷機(jī)制 、識(shí)別、識(shí)別 由于CIK的細(xì)胞殺傷作用是非MHC限制性的，故CD4、CD8在其識(shí)別腫瘤細(xì)胞或病毒感染的細(xì)胞過程中并非必不可少。細(xì)胞表面粘附分子LFA-1 ICAM-1在C

30、IK細(xì)胞識(shí)別過程中起關(guān)鍵作用。對(duì)正常細(xì)胞無毒性作用。48、殺傷殺傷 細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞或感染細(xì)胞的直接殺傷： CIK細(xì)胞在受到外源性抗原或敏感靶細(xì)胞刺激時(shí)會(huì)釋放具有細(xì)胞毒性的胞漿顆粒物到膜外空間，其中細(xì)胞可產(chǎn)生最大的顆粒釋放量。這些胞漿顆粒物對(duì)靶細(xì)胞具有直接殺傷作用。 炎性細(xì)胞因子的殺傷活性：培養(yǎng)的細(xì)胞可以分泌多種細(xì)胞因子，如、（腫瘤壞死因子）、等，不僅對(duì)靶細(xì)胞有直接抑制作用，還可通過調(diào)節(jié)機(jī)體免疫 系 統(tǒng) 反 應(yīng) 性 間 接 殺 傷 靶 細(xì) 胞 。 誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡：細(xì)胞在培養(yǎng)過程中表達(dá)（型跨膜糖蛋白），一方面增強(qiáng)了其對(duì)腫瘤細(xì)胞引發(fā)的凋亡的抵抗性，還可通過對(duì)（型跨膜糖蛋白）腫瘤細(xì)胞誘導(dǎo)凋亡行使其對(duì)

31、腫瘤細(xì)胞的慢性殺傷作用，保證抗瘤活性的長期持久。49CIKCIK細(xì)胞的殺瘤特點(diǎn)細(xì)胞的殺瘤特點(diǎn) 1、增殖速度快 CIK細(xì)胞中的效應(yīng)細(xì)胞CD3+CD56+細(xì)胞在正常人外周血中極其罕見，僅1%5%，在體外經(jīng)多因子培養(yǎng)2830天，CD3+CD56+細(xì)胞迅速增多，較培養(yǎng)前升幅可達(dá)1000倍以上。且所占百分比也大幅上升，細(xì)胞毒活性亦達(dá)峰值。 2、殺傷活性高、殺瘤譜廣 CIK細(xì)胞的總殺傷單位（TLU）為LAK 細(xì)胞的73倍甚至更高，CIK細(xì)胞的瘤細(xì)胞抑制Log指數(shù)為2.53.5，較LAK細(xì)胞的瘤細(xì)胞抑制指數(shù)高2 個(gè)Log。其抗病毒活性大大增強(qiáng)。 因沒有T 淋巴細(xì)胞殺傷時(shí)的MHC 限制性，故對(duì)于多種腫瘤細(xì)胞

32、系 和 新 鮮 腫 瘤 組 織 均 表 現(xiàn) 出 強(qiáng) 大 的 殺 傷 活 性 。 3、對(duì)多重耐藥腫瘤細(xì)胞同樣敏感 CIK細(xì)胞對(duì)化療藥物敏感的親本細(xì)胞和不敏感的轉(zhuǎn)化細(xì)胞均具有強(qiáng)大的殺傷活性，兩者比較無差別。 4 、 殺 瘤 活 性 不 受 C s A 、 F K 5 0 6 等 免 疫 抑 制 劑 的 影 響 免疫抑制劑CsA（環(huán)孢霉素A）和FK506（普樂可復(fù)）不影響靶細(xì)胞誘導(dǎo)的CIK細(xì) 胞 脫 顆 粒 ， 并 且 C I K 細(xì) 胞 對(duì) 靶 細(xì) 胞 的 殺 傷 活 性 不 會(huì) 因 此 降 低 。 5、對(duì)正常骨髓造血前體細(xì)胞毒性很小 CIK細(xì)胞對(duì)正常髓系克隆生成幾乎沒有影響，對(duì)GM-CFU（粒細(xì)

33、胞巨噬細(xì)胞集落形成單位）僅有不足1級(jí)的抑制。 6 、 能 抵 抗 腫 瘤 細(xì) 胞 引 發(fā) 的 效 應(yīng) 細(xì) 胞 F a s - F a s L 凋 亡 CIK細(xì)胞內(nèi)有抗凋亡基因表達(dá)，并檢出多種保護(hù)基因，如Bcl-2等和survivin的轉(zhuǎn)錄水平上調(diào)。CIK細(xì)胞具備合成FasL的能力， CIK細(xì)胞可以對(duì)抗體內(nèi)FasL陽性腫瘤所引發(fā)的效應(yīng)細(xì)胞活性下降。 50CIKCIK制備制備采集：外周血單個(gè)核細(xì)胞。分離：PBMNC經(jīng)淋巴細(xì)胞分離液分離、洗滌后懸浮于含10%AB血清的RPMI 1640中。培養(yǎng)：第一天培養(yǎng)加入-IFN 1000U/ml，24小時(shí)后加入IL-2 1000U/ml，在37，5% CO2孵

34、箱中培養(yǎng)。以后每3天更換培養(yǎng)液補(bǔ)加IL-2 1000U/ml；培養(yǎng)710天。無菌檢測(cè)：細(xì)菌霉菌培養(yǎng)陰性；熱源檢測(cè)陰性。收獲：收集細(xì)胞，加入含1%白蛋白的生理鹽水洗滌?；剌敚合礈旌蟮募?xì)胞懸浮于1%白蛋白生理鹽水中，將CIK細(xì)胞通過輸血器經(jīng)靜脈輸給患者。療程：培養(yǎng)的第8-10天開始，分八袋回輸，每次間隔1-2天。自回輸CIK細(xì)胞前一天起, 可每日靜脈輸注IL-2，每日劑量為100萬單位直到回輸結(jié)束。51525354臨床應(yīng)用臨床應(yīng)用 體內(nèi)回輸CIK細(xì)胞, 可以在沒有損傷機(jī)體免疫系統(tǒng)結(jié)構(gòu)和功能的前提下,直接殺傷腫瘤細(xì)胞, 并可調(diào)節(jié)和增強(qiáng)機(jī)體的免疫功能。 特別適應(yīng)于那些對(duì)手術(shù)、放療、化療已無適應(yīng)證的晚期

35、腫瘤患者,因而成為治療腫瘤的重要輔助治療方法,為預(yù)防腫瘤復(fù)發(fā)、改善生存質(zhì)量提供了新途徑。 一般在放療、化療后間隔24周,機(jī)體免疫力有所恢復(fù)時(shí),輸入CIK細(xì)胞,可提高腫瘤患者的緩解率并在清除微小殘留病灶方面發(fā)揮重要作用。556 6) )DC-CIKDC-CIK 將外周血來源的CIK 細(xì)胞和同源DC 細(xì)胞共培養(yǎng)一段時(shí)間后發(fā)現(xiàn),DC 和CIK 細(xì)胞的增殖能力明顯增強(qiáng),共培養(yǎng)14 d 后CIK細(xì)胞的增殖倍數(shù)比共培養(yǎng)7d 時(shí)高出2 倍左右。共培養(yǎng)24 h 后,DC 細(xì)胞白細(xì)胞介素12 的分泌量為單獨(dú)培養(yǎng)時(shí)的6.93 倍,與DC 細(xì)胞共培養(yǎng)的CIK 細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷活性顯著提高。CDCD8 8+ +

36、T T 細(xì)胞細(xì)胞CIKCIK細(xì)胞細(xì)胞NK NK 細(xì)胞細(xì)胞 樹突狀細(xì)胞樹突狀細(xì)胞（DCDC）長期控制和清除對(duì)疾病的早期防御56DC-CIKDC-CIK制備流程制備流程57587) NK7) NK細(xì)胞細(xì)胞自然殺傷細(xì)胞(natural killer cell,NK )細(xì)胞不經(jīng)致敏可直接殺傷敏感的腫瘤細(xì)胞,是宿主抗腫瘤的第一道防線。自然殺傷細(xì)胞(黃色)在它們嚴(yán)重破壞機(jī)體之前識(shí)別并殺死癌細(xì)胞(粉紅色)或病毒感染的細(xì)胞NK細(xì)胞受體和配體細(xì)胞受體和配體5960中國腫瘤臨床 2013,40卷9090例食管癌中晚期患者（例食管癌中晚期患者（TNM III-IVTNM III-IV期）接期）接受枯息性手術(shù)后，分為

37、單純化療組受枯息性手術(shù)后，分為單純化療組4040例、化例、化療聯(lián)合療聯(lián)合NKNK細(xì)胞治療細(xì)胞治療MCIAMCIA陰性組（簡稱聯(lián)合陰性組（簡稱聯(lián)合MICA-MICA-組）組）2525例及化療聯(lián)合例及化療聯(lián)合NKNK細(xì)胞治療細(xì)胞治療MCIAMCIA陽性組（簡稱聯(lián)合陽性組（簡稱聯(lián)合MICA+MICA+組）組）2525例。例。 中國腫瘤生物治療雜志 2013,20卷61體細(xì)胞免疫治療聯(lián)合腫瘤常規(guī)治療的基本方案體細(xì)胞免疫治療聯(lián)合腫瘤常規(guī)治療的基本方案惡性腫瘤惡性腫瘤手術(shù)治療手術(shù)治療可手術(shù)可手術(shù)放化療敏感（常規(guī)放化療）放化療敏感（常規(guī)放化療）放化療間隙聯(lián)合細(xì)胞免疫治療放化療間隙聯(lián)合細(xì)胞免疫治療（卵巢癌、乳

38、腺癌、小細(xì)胞肺（卵巢癌、乳腺癌、小細(xì)胞肺癌和鼻咽癌等）癌和鼻咽癌等） 放化療不敏感放化療不敏感（腎癌、前列腺癌、黑色素瘤（腎癌、前列腺癌、黑色素瘤和肝癌等）和肝癌等）放化療敏感（常規(guī)放化療）放化療敏感（常規(guī)放化療）放化療間隙聯(lián)合細(xì)胞免疫治療放化療間隙聯(lián)合細(xì)胞免疫治療（卵巢癌、乳腺癌、小細(xì)胞肺（卵巢癌、乳腺癌、小細(xì)胞肺癌和鼻咽癌等）癌和鼻咽癌等）細(xì)胞免疫治療細(xì)胞免疫治療疾病疾病穩(wěn)定期穩(wěn)定期細(xì)胞免疫治療細(xì)胞免疫治療聯(lián)合內(nèi)分泌或聯(lián)合內(nèi)分泌或靶向治療，細(xì)靶向治療，細(xì)胞因子治療胞因子治療?？浦委煂？浦委煟ㄎ?chuàng)介入）（微創(chuàng)介入）不能手術(shù)（不能手術(shù)（期，期，期）期）復(fù)發(fā)者復(fù)發(fā)者細(xì)胞免疫治療細(xì)胞免疫治療疾病疾

39、病穩(wěn)定期穩(wěn)定期 化療不敏感化療不敏感（原發(fā)性肝癌、腎癌、前列腺（原發(fā)性肝癌、腎癌、前列腺癌和黑色素瘤等）癌和黑色素瘤等）細(xì)胞免疫治療細(xì)胞免疫治療聯(lián)合?？浦委熉?lián)合?？浦委?2CIKCIK輸注不良反應(yīng)輸注不良反應(yīng)免疫活性細(xì)胞回輸后患者可出現(xiàn)一過性類流感樣癥狀，如發(fā)熱（體溫37.539.5），輕度頭痛、乏力、關(guān)節(jié)酸痛，持續(xù)時(shí)間均不超過12 h， 可自行緩解，所有患者均能很好耐受治療。 63643 3、過繼性免疫效應(yīng)細(xì)胞治療的優(yōu)點(diǎn)、過繼性免疫效應(yīng)細(xì)胞治療的優(yōu)點(diǎn) (1)(1)免疫細(xì)胞在體外處理，可繞過體內(nèi)腫瘤免疫障礙的種種機(jī)免疫細(xì)胞在體外處理，可繞過體內(nèi)腫瘤免疫障礙的種種機(jī)制，從而選擇性地操作抗腫瘤免疫

40、反應(yīng)制，從而選擇性地操作抗腫瘤免疫反應(yīng): : 如新鮮分離的腫瘤浸潤性淋巴細(xì)胞（如新鮮分離的腫瘤浸潤性淋巴細(xì)胞（tumor infiltrating tumor infiltrating lymphocytelymphocyte，TILTIL）往往缺乏抗腫瘤效應(yīng)，而在體外一定條）往往缺乏抗腫瘤效應(yīng)，而在體外一定條件下培養(yǎng)一段時(shí)間后可恢復(fù)特異性抗腫瘤作用；在體外培養(yǎng)件下培養(yǎng)一段時(shí)間后可恢復(fù)特異性抗腫瘤作用；在體外培養(yǎng)條件下，腫瘤抗原特異性耐受的免疫細(xì)胞可被逆轉(zhuǎn)。條件下，腫瘤抗原特異性耐受的免疫細(xì)胞可被逆轉(zhuǎn)。 65(2)(2)免疫細(xì)胞的活化及效應(yīng)過程往往由一免疫細(xì)胞的活化及效應(yīng)過程往往由一些細(xì)胞因子

41、介導(dǎo)，而目前基因工程可大些細(xì)胞因子介導(dǎo)，而目前基因工程可大量克隆不同的細(xì)胞因子，也可大量克隆量克隆不同的細(xì)胞因子，也可大量克隆腫瘤抗原或多肽，這使體外活化擴(kuò)增大腫瘤抗原或多肽，這使體外活化擴(kuò)增大量的抗腫瘤免疫細(xì)胞更為可行方便。量的抗腫瘤免疫細(xì)胞更為可行方便。 66(3)(3)免疫細(xì)胞的體外活化擴(kuò)增可避免一些制劑免疫細(xì)胞的體外活化擴(kuò)增可避免一些制劑 體內(nèi)大量應(yīng)用帶來的嚴(yán)重毒副作體內(nèi)大量應(yīng)用帶來的嚴(yán)重毒副作 用，如用，如: : ILIL2 2、TNFTNF、ILIL4 4、ILIL7 7、ILIL1212等具有抗腫瘤作用，等具有抗腫瘤作用，抗抗CD3CD3單克隆抗體單克隆抗體(MabCD3)(Ma

42、bCD3)的體內(nèi)應(yīng)用可激活的體內(nèi)應(yīng)用可激活T T淋巴細(xì)胞，但淋巴細(xì)胞，但這些制劑由于其復(fù)雜的多種作用，在體內(nèi)大量應(yīng)用可導(dǎo)致嚴(yán)這些制劑由于其復(fù)雜的多種作用，在體內(nèi)大量應(yīng)用可導(dǎo)致嚴(yán)重的甚至致死性副作用，這也是這些因子難以被批準(zhǔn)臨床使重的甚至致死性副作用，這也是這些因子難以被批準(zhǔn)臨床使用的重要原因，而在體外操作可避免這些副作用。用的重要原因，而在體外操作可避免這些副作用。 67 (4)(4)目前已能在體外大量擴(kuò)增自體或異基因的抗腫目前已能在體外大量擴(kuò)增自體或異基因的抗腫 瘤免疫細(xì)胞，其數(shù)量大于腫瘤疫苗在體內(nèi)激活的效瘤免疫細(xì)胞，其數(shù)量大于腫瘤疫苗在體內(nèi)激活的效 應(yīng)細(xì)胞數(shù)，一些體外培養(yǎng)的免疫細(xì)胞已進(jìn)入臨

43、床治應(yīng)細(xì)胞數(shù)，一些體外培養(yǎng)的免疫細(xì)胞已進(jìn)入臨床治 療試驗(yàn)。療試驗(yàn)。 實(shí)驗(yàn)顯示腫瘤疫苗在體內(nèi)應(yīng)用可增加體內(nèi)的腫實(shí)驗(yàn)顯示腫瘤疫苗在體內(nèi)應(yīng)用可增加體內(nèi)的腫瘤特異性瘤特異性CTLCTL數(shù)量，但到一定時(shí)候，體內(nèi)的數(shù)量，但到一定時(shí)候，體內(nèi)的CTLCTL到達(dá)到達(dá)平臺(tái)期而不再增加，這主要由體內(nèi)存在的特異性及平臺(tái)期而不再增加，這主要由體內(nèi)存在的特異性及非特異性免疫調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)限制了非特異性免疫調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)限制了CTLCTL克隆的擴(kuò)增。而克隆的擴(kuò)增。而在體外培養(yǎng)可突破此調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)，大量擴(kuò)增免疫效應(yīng)在體外培養(yǎng)可突破此調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)，大量擴(kuò)增免疫效應(yīng)細(xì)胞。細(xì)胞。68理想的過繼性免疫細(xì)胞治療應(yīng)具有以下特點(diǎn)理想的過繼性免疫細(xì)胞治療應(yīng)具有

44、以下特點(diǎn): : (1)(1)可大量獲得，實(shí)驗(yàn)室研究及臨床實(shí)踐顯示，臨床治療量可大量獲得，實(shí)驗(yàn)室研究及臨床實(shí)踐顯示，臨床治療量的免疫細(xì)胞應(yīng)在的免疫細(xì)胞應(yīng)在1 110101010以上以上 (2)(2)為腫瘤特異性為腫瘤特異性 (3)(3)抗腫瘤活性強(qiáng)抗腫瘤活性強(qiáng) (4)(4)體內(nèi)應(yīng)用可耐受體內(nèi)應(yīng)用可耐受 (5)(5)可聚集在腫瘤灶可聚集在腫瘤灶 (6)(6)可在體內(nèi)存活可在體內(nèi)存活 、增殖、增殖 69二、免疫治療的作用 腫瘤免疫治療即能夠直接清除體內(nèi)的殘存腫瘤腫瘤免疫治療即能夠直接清除體內(nèi)的殘存腫瘤細(xì)胞，又能夠提高機(jī)體的整體免疫功能，還具有將細(xì)胞，又能夠提高機(jī)體的整體免疫功能，還具有將患者個(gè)體化的

45、腫瘤抗原信息遞呈給體內(nèi)腫瘤免疫殺患者個(gè)體化的腫瘤抗原信息遞呈給體內(nèi)腫瘤免疫殺傷細(xì)胞的獨(dú)特作用。傷細(xì)胞的獨(dú)特作用。 腫瘤免疫治療已成為臨床上繼手術(shù)、化療、放腫瘤免疫治療已成為臨床上繼手術(shù)、化療、放療之后的第四種最有效的腫瘤治療方法。在腫瘤綜療之后的第四種最有效的腫瘤治療方法。在腫瘤綜合治療方案中，免疫治療成為提高腫瘤治愈率和有合治療方案中，免疫治療成為提高腫瘤治愈率和有效率的一個(gè)關(guān)鍵措施。效率的一個(gè)關(guān)鍵措施。 70三、免疫治療的臨床地位三、免疫治療的臨床地位免疫治療是最有前途的抗腫瘤手段之一免疫治療是最有前途的抗腫瘤手段之一目前尚未起主導(dǎo)作用目前尚未起主導(dǎo)作用定位于手術(shù)、放化療后清除殘留病灶定位

46、于手術(shù)、放化療后清除殘留病灶目標(biāo)是預(yù)防復(fù)發(fā)目標(biāo)是預(yù)防復(fù)發(fā)關(guān)鍵是抗原在體內(nèi)有效地被遞呈并激關(guān)鍵是抗原在體內(nèi)有效地被遞呈并激 活活T T淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞71四、免疫四、免疫治療的原則治療的原則 雖然目前免疫治療的方法還不是很有效的，只能雖然目前免疫治療的方法還不是很有效的，只能配合其他療法作為一種配合其他療法作為一種 輔助手段。但從腫瘤免疫輔助手段。但從腫瘤免疫的理論看，它涉及的是腫瘤發(fā)生發(fā)展的內(nèi)部因素和的理論看，它涉及的是腫瘤發(fā)生發(fā)展的內(nèi)部因素和內(nèi)部矛盾性。隨著它的迅速發(fā)展，為腫瘤的免疫治內(nèi)部矛盾性。隨著它的迅速發(fā)展，為腫瘤的免疫治療提出了廣泛的可能。療提出了廣泛的可能。 從宿主與腫瘤相互斗爭這

47、一矛盾出發(fā)，從增強(qiáng)宿從宿主與腫瘤相互斗爭這一矛盾出發(fā)，從增強(qiáng)宿主對(duì)腫瘤的免疫能力，以及消除腫瘤對(duì)免疫功能的主對(duì)腫瘤的免疫能力，以及消除腫瘤對(duì)免疫功能的抑制兩個(gè)方面入手，并繼續(xù)在增強(qiáng)機(jī)體非特異性免抑制兩個(gè)方面入手，并繼續(xù)在增強(qiáng)機(jī)體非特異性免疫能力方面進(jìn)行研究，腫瘤的免疫治療是大有希望疫能力方面進(jìn)行研究，腫瘤的免疫治療是大有希望的。的。 72 1 1、增強(qiáng)宿主對(duì)腫瘤的免疫能力：、增強(qiáng)宿主對(duì)腫瘤的免疫能力：1 1）提純改造抗原，提高抗原的免疫作用）提純改造抗原，提高抗原的免疫作用2 2）發(fā)揮細(xì)胞免疫的作用進(jìn)行過繼免疫治療）發(fā)揮細(xì)胞免疫的作用進(jìn)行過繼免疫治療3 3）利用細(xì)胞因子激活抗腫瘤免疫）利用細(xì)胞

48、因子激活抗腫瘤免疫4 4）抗體導(dǎo)向治療）抗體導(dǎo)向治療2 2、消除腫瘤對(duì)免疫的對(duì)抗、消除腫瘤對(duì)免疫的對(duì)抗 如何清除免疫抑制因子的作用，是腫瘤免疫治如何清除免疫抑制因子的作用，是腫瘤免疫治療很有希望的一個(gè)方面。療很有希望的一個(gè)方面。 73五、免疫治療的評(píng)價(jià)五、免疫治療的評(píng)價(jià)1 1、臨床評(píng)價(jià)：、臨床評(píng)價(jià)： 病 灶 變 化病 灶 變 化 - - - - - 臨 床 查 體 和 影 像 學(xué) 檢 查 （臨 床 查 體 和 影 像 學(xué) 檢 查 （ C TC T 、 MRIMRI、B B超、等）超、等） 內(nèi)鏡檢查內(nèi)鏡檢查 腫瘤標(biāo)志物腫瘤標(biāo)志物 肝功、腎功、血象等的改善肝功、腎功、血象等的改善 其他其他74腫瘤

49、標(biāo)志物（tumor markers,TM)19781978年年NCINCI提出提出19791979年確認(rèn)并開始使用年確認(rèn)并開始使用TMTM是表示腫瘤存在并反映其一定的生物特性的生化物質(zhì)是表示腫瘤存在并反映其一定的生物特性的生化物質(zhì)TMTM主要是指那些在血液、體液及組織中可檢測(cè)到的與腫瘤相主要是指那些在血液、體液及組織中可檢測(cè)到的與腫瘤相關(guān)的物質(zhì)，這些物質(zhì)達(dá)到一定的水平時(shí)能揭示某些腫瘤的存關(guān)的物質(zhì)，這些物質(zhì)達(dá)到一定的水平時(shí)能揭示某些腫瘤的存在。在。TMTM的臨床意義：的臨床意義： （1 1）診斷）診斷 （2 2）復(fù)發(fā)（）復(fù)發(fā)（3 3）判斷療效（）判斷療效（4 4）預(yù)后）預(yù)后75常用腫瘤標(biāo)志物甲胎

50、蛋白（甲胎蛋白（AFPAFP）癌胚抗原（癌胚抗原（CEACEA）糖類抗原（糖類抗原（CA50CA50、CA125CA125、CA15-3CA15-3、CA199CA199、CA242CA242、CA72-4CA72-4）2-2-微球蛋白（微球蛋白（ 2-MG2-MG）鐵蛋白（鐵蛋白（FtFt）細(xì)胞角質(zhì)素片段抗原細(xì)胞角質(zhì)素片段抗原21-121-1（CYFRA21-1CYFRA21-1）神經(jīng)元特異性烯醇化酶（神經(jīng)元特異性烯醇化酶（NSENSE）鱗狀上皮癌相關(guān)抗原（鱗狀上皮癌相關(guān)抗原（SCC-AgSCC-Ag）前列腺特異抗原（前列腺特異抗原（PSAPSA）前列腺酸性磷酸酶（前列腺酸性磷酸酶（PAPP

51、AP）核基質(zhì)核基質(zhì)762 2、免疫監(jiān)測(cè)、免疫監(jiān)測(cè) -觀察觀察CTLCTL的反應(yīng)、認(rèn)定的反應(yīng)、認(rèn)定CTLCTL反應(yīng)的細(xì)胞類反應(yīng)的細(xì)胞類型、等，從而評(píng)價(jià)機(jī)體對(duì)免疫治療的反應(yīng)型、等，從而評(píng)價(jià)機(jī)體對(duì)免疫治療的反應(yīng)1 1）遲發(fā)超敏試驗(yàn)（）遲發(fā)超敏試驗(yàn)（DTHDTH） -體內(nèi)抗原特異性免疫監(jiān)測(cè)技術(shù)體內(nèi)抗原特異性免疫監(jiān)測(cè)技術(shù)2 2）機(jī)體免疫功能檢測(cè)）機(jī)體免疫功能檢測(cè) 體液免疫體液免疫指標(biāo)：定量分析抗原特異性抗體的指標(biāo)：定量分析抗原特異性抗體的數(shù)量和功能數(shù)量和功能檢驗(yàn)科檢驗(yàn)科 細(xì)胞免疫細(xì)胞免疫功能：功能：FCMFCM技術(shù)檢測(cè)淋巴細(xì)胞表面標(biāo)技術(shù)檢測(cè)淋巴細(xì)胞表面標(biāo)志志 CD3CD3、CD4CD4、CD8CD8、C

52、D19CD19、CD28CD28、CD16/CD56CD16/CD56、CD25CD25、HLA-DRHLA-DR、等等。、等等。實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室室 Th1Th1、Th2Th2類因子檢測(cè)類因子檢測(cè)：應(yīng)用：應(yīng)用FCM-CBAFCM-CBA技術(shù)，技術(shù)，采用磁珠微陣列技術(shù)，同時(shí)測(cè)定血清中采用磁珠微陣列技術(shù)，同時(shí)測(cè)定血清中4 46 6種免疫種免疫相關(guān)因子的水平相關(guān)因子的水平實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室室77783 3）T T細(xì)胞增殖反應(yīng)細(xì)胞增殖反應(yīng) -3 3H H測(cè)定法測(cè)定法4 4）T T細(xì)胞毒性檢測(cè)：細(xì)胞毒性檢測(cè)： 5151CrCr釋放試驗(yàn)釋放試驗(yàn) LDHLDH MTT MTT （WST-1WST-1）5 5）T T細(xì)胞限

53、制性稀釋分析法（細(xì)胞限制性稀釋分析法（LDALDA） -分析未知頻率的淋巴細(xì)胞克隆、定量檢測(cè)外分析未知頻率的淋巴細(xì)胞克隆、定量檢測(cè)外周血中最初抗原周血中最初抗原T T特異性淋巴細(xì)胞的數(shù)目或頻率。特異性淋巴細(xì)胞的數(shù)目或頻率。 操作復(fù)雜，被操作復(fù)雜，被ELISPOTELISPOT等新技術(shù)所取代等新技術(shù)所取代796 6）細(xì)胞因子檢測(cè)）細(xì)胞因子檢測(cè) -測(cè)定測(cè)定T T淋巴細(xì)胞分泌的因子淋巴細(xì)胞分泌的因子ELISAELISA（酶聯(lián)免疫技術(shù)）（酶聯(lián)免疫技術(shù)）-檢測(cè)檢測(cè)T T淋巴細(xì)胞分泌于細(xì)胞外的因淋巴細(xì)胞分泌于細(xì)胞外的因子子ELISPOTELISPOT（酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)技術(shù)）（酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)技術(shù)）-檢測(cè)檢測(cè)T T

54、淋巴細(xì)胞分泌于細(xì)胞淋巴細(xì)胞分泌于細(xì)胞外的因子外的因子FCMFCM（流式細(xì)胞術(shù)）（流式細(xì)胞術(shù)）-檢測(cè)檢測(cè)T T淋巴細(xì)胞胞內(nèi)細(xì)胞因子淋巴細(xì)胞胞內(nèi)細(xì)胞因子807 7）其他）其他P-MHC tetramerP-MHC tetramer技術(shù)技術(shù)-檢測(cè)細(xì)胞表面受體（檢測(cè)細(xì)胞表面受體（TCRTCR）與）與MHCMHC分子遞呈的多肽的相互作用分子遞呈的多肽的相互作用定量定量PCRPCR技術(shù)技術(shù)-檢測(cè)細(xì)胞因子基因、檢測(cè)細(xì)胞因子基因、T T細(xì)胞受體復(fù)合細(xì)胞受體復(fù)合物基因等表達(dá)水平，反應(yīng)物基因等表達(dá)水平，反應(yīng)T T淋巴細(xì)胞功能狀態(tài)淋巴細(xì)胞功能狀態(tài) 81六、腫瘤免疫治療的新進(jìn)展六、腫瘤免疫治療的新進(jìn)展1、免疫卡控點(diǎn)抑

55、制劑 Checkpoimt inhibitor CTLA4、 PD-1、 PD-L1 2、TCR-T和CAR-T82協(xié)同刺激分子作用示意圖協(xié)同刺激分子作用示意圖T831、T細(xì)胞免疫卡控點(diǎn)治療細(xì)胞免疫卡控點(diǎn)治療84有兩種受體存在于有兩種受體存在于T細(xì)胞表面細(xì)胞表面B7 CD28 低親和力受體低親和力受體 CTLA-4 高親和力受體高親和力受體 B7-CD28結(jié)合結(jié)合:產(chǎn)生產(chǎn)生陽性信號(hào)陽性信號(hào)，增強(qiáng)免疫反應(yīng)。封閉，增強(qiáng)免疫反應(yīng)。封閉 CD28依賴的依賴的T細(xì)胞激活，下調(diào)免疫反應(yīng)。細(xì)胞激活，下調(diào)免疫反應(yīng)。 B7-CTLA-4結(jié)合結(jié)合:產(chǎn)生產(chǎn)生陰性信號(hào)陰性信號(hào)，下調(diào)免疫反應(yīng)。封閉，下調(diào)免疫反應(yīng)。封閉

56、CTLA-4促進(jìn)抗腫瘤反應(yīng)。促進(jìn)抗腫瘤反應(yīng)。85The Biology of Cancer86抗抗CTLA-4抗體治療黑色素瘤肺轉(zhuǎn)移患者抗體治療黑色素瘤肺轉(zhuǎn)移患者87Ipilimumab治療復(fù)治轉(zhuǎn)移性黑色素瘤(fully human, IgG1 monoclonal antibody, anti-CTLA-4)Ipi+gp100Ipi+gp100Ipi Ipi alonealonegp100 gp100 alonealonemOSmOS10.0m10.0m10.1m10.1m6.4m6.4m2y-SR2y-SR22%22%24%24%14%14%結(jié)果提示：Ipilimumab能夠延長轉(zhuǎn)移性黑色

57、素瘤患者的總生存，故2011年通過FDA批準(zhǔn)用于治療轉(zhuǎn)移性黑色素瘤。入組標(biāo)準(zhǔn)：二線治療（化療或細(xì)胞因子治療失?。?；HLA-A* 0201排除標(biāo)準(zhǔn)：既往CTLA-4抗體或疫苗治療；免疫抑制劑或自身免疫疾??；腦轉(zhuǎn)移、脈絡(luò)膜黑色素瘤88Early Response to TherapyEarly Response to TherapyCancer Investigation, 30:712720, 201289Gradual/Delayed ResponseGradual/Delayed ResponseCancer Investigation, 30:712720, 2012902011年，Nat

58、ure雜志指出：“腫瘤免疫治療的時(shí)代已經(jīng)來臨”。91抗抗PD-1抗體治療黑色素瘤肺、肝轉(zhuǎn)移患者抗體治療黑色素瘤肺、肝轉(zhuǎn)移患者T h e new engl and journa l o f medicineCD8+RECIST，為38%（44 / 117例）92Checkpoint Inhibitor: Nivolumab (BMS-936558)(fully human, IgG4 monoclonal antibody, anti-PD-1)melanomaNSCLCRCCRR28% (26/94)18% (14/76)27% (9/33)Durable OR was observed in

59、 patients with melanoma, NSCLC and RCC.l該研究中NSCLC患者的給藥濃度分別為1mg / kg、3mg / kg 和10mg / kg ；76例可評(píng)價(jià)療效NSCLC患者的ORR達(dá)18%；鱗癌與非鱗癌患者的ORR分別為33 % (6/18 ) 和12 %(7/58)。932 2、TCR-TTCR-T和和CAR-TCAR-T94基本概念基本概念 1 1、T T細(xì)胞（抗原）受體（細(xì)胞（抗原）受體（T cell receptor ,TCRT cell receptor ,TCR） TCR TCR為所有為所有T T細(xì)胞表面的特征性標(biāo)志，以非共價(jià)鍵與細(xì)胞表面的特征性

60、標(biāo)志，以非共價(jià)鍵與CD3CD3結(jié)合，形成結(jié)合，形成TCRTCRCD3CD3復(fù)合物。復(fù)合物。TCRTCR的作用是識(shí)別抗原。的作用是識(shí)別抗原。 2 2、TCR-TTCR-T TCRTCR基因轉(zhuǎn)染的基因轉(zhuǎn)染的T T細(xì)胞免疫治療細(xì)胞免疫治療 3 3、嵌合抗原受體、嵌合抗原受體(CAR)(CAR) 是通過基因改造的是通過基因改造的T T細(xì)胞抗原受體，賦予細(xì)胞抗原受體，賦予T T細(xì)胞細(xì)胞HLAHLA非依賴的方式識(shí)別腫瘤非依賴的方式識(shí)別腫瘤抗原的能力，抗原的能力，CARCAR的基礎(chǔ)設(shè)計(jì)中包括一個(gè)腫瘤相關(guān)抗原（的基礎(chǔ)設(shè)計(jì)中包括一個(gè)腫瘤相關(guān)抗原（tumor-associated tumor-associated