總抗氧化能力測定(FRAP法)

1、小麥葉片總抗氧化能力測定fFRAP法丿時(shí)間：2021.03. 06創(chuàng)作：歐陽道二、賣驗(yàn)原理FRAP法測定總抗氧化能力的原理是酸性條件下抗 氧化煬可以還原 Ferric-tri-pyridyl-tria-zine（Fe34-TPTZ） 產(chǎn)生藍(lán)色的Fe2+-TPTZ,隨后亦593nm測;t藍(lán)色的 Fe2+-TPTZ即可獲得樣中的總、抗氧化能力。由于反應(yīng) 柱酸性條件下進(jìn)行，可以抑制內(nèi)源性的一些干擾因素。 并且由于血象等樣氐中的鐵禹子或亞鐵離子的總濃度通 常低于10pM,因此血象等樣中的鐵離子或亞鐵離子 不會(huì)顯箸干擾FRAP出的檢測反應(yīng)。由于反應(yīng)體糸中的 鐵需子或亞鐵離子是和TPTZ螯合的，樣醃本身含

2、有的 少量全屬禹子螯合利通帝也不會(huì)顯箸影響檢測反應(yīng)。AntioxidantFe3+TPTZ （桶黃色丿> Fe2+-TPTZ（藍(lán)色）三、賣驗(yàn)步驟1. FRAP工作液配制：0.3 M pH 3.6臘酸緩沖液：0.364g無水醋酸鈉+3.2mL 冰乙酸;t彖至200mL,用1M HC1調(diào)節(jié)pH至3.6； lOmmol/ETPTZ 涿液 25mL： 0.078g TPTZ 用 40mM 鹽酸溶液定彖至25mL；20mmol/L FeC13 涿液 50mL： 2.78g 用 RO 水定彖至50mL；上述徐液以10:1:1的比例混合(現(xiàn)配現(xiàn)用丿。2. 取葉片O.lg,加入2.5mL蒸館 水研磨稍沉

3、淀后取1.5mL 12000g 需心 lOmin (4oCJ ,取上請(qǐng)液。3. 堆_反應(yīng)管中加入100uL上請(qǐng)液，再加入2.4mL工作液，37 oC條件下水浴10min,于593nm處測文吸光 度，4. 棕準(zhǔn)曲線繪制：0.1-1.6mmol/L的FeSO4的櫬準(zhǔn)液 眷代樣氐繪制櫬準(zhǔn)曲線。四、結(jié)果計(jì)算以1.0mmol/L的FeSO4為標(biāo)準(zhǔn),樣抗氧化話性以達(dá)到同樣吸光度值為一個(gè)FRAP值，計(jì)算結(jié)果。2.82 Ferric Reducing/Antioxidant Power (FRAP) assay Briefly, the FRAP reagent contained 2.5 mL 10 mM

4、L_1 TPTZ solution in 40 mM HCI plus 2.5 mL 20 mM b1 FeCI3 and 25 mL 0.3 M L_1 acetate buffer, pH 3.6 was prepared freshly and warmed at 37°C. After addition of root ethanol extracts (prepared as in section 2.7) and incubation at 37°C for 5 min, absorbance of the reaction mixture was measur

5、ed at 593 nm. The final result was expressed as the concentration of antioxidants having a ferric reducing ability equivalent to that of 1 mM FeSO4 based on the standard curve for FeSO4 x 7H2O at a concerntrationange between 100 and 1000 pM L_1 3口lBenzie I F F, Strain J J. The Ferric Reducing Ability ofPlasma (FRAP) as a Measure of “Antioxidant Power'': TheFRAP AssayJ. Analytical Biochemistry, 1996, 239(1):70-6. 2Katarzyna Szafianska, Rafal Szewczyk, Kiystyna Maria Janas. Involvement of melatonin applied to Vigna radiata, L. seeds in plant response to chill