登革熱檢測(cè)規(guī)程VIP

1、僅供個(gè)人參考登革熱（一）登革病毒感染與機(jī)體免疫反應(yīng)登革病毒感染后，潛伏期為314天，通常47天,潛伏期內(nèi)采集的患者標(biāo)本尚不能檢出登革病毒或相應(yīng)的機(jī)體免疫反應(yīng)。發(fā)病后，病毒在血液中存在的時(shí)間（病毒血癥期）約為7天,病毒NS1抗原在血液存在的時(shí)間略長(zhǎng)。發(fā)病后45天內(nèi)，可在病人的血清、血漿、白細(xì)胞、腦脊液和尸檢組織標(biāo)本中分離到病毒，病毒核酸及NS1抗原在這個(gè)時(shí)期的檢出率高。病人血液中抗體水平，因個(gè)體免疫狀態(tài)不同而具有顯著差異。若以前沒有感染過登革病毒或其他黃病毒，或接種過黃病毒疫苗（如：乙腦、黃熱等），病人首次感染抗體免疫反應(yīng)呈現(xiàn)為特異性抗體水平緩慢升高，IgM抗體出現(xiàn)最早，隨后出現(xiàn)的是IgA和Ig

2、G抗體。在發(fā)病后35天的患者中IgM抗體檢出率約為50%發(fā)病后第5天的患者中檢出率約為80%而在發(fā)病后第10天患者中，約99%勺患者可檢出。IgM抗體水平在發(fā)病后2周達(dá)高峰，然后逐步下降，可保持23個(gè)月。IgA抗體出現(xiàn)略晚于IgM抗體，可保持約45天。在發(fā)病一周后，可在血液標(biāo)本中檢出較低滴度的IgG抗體，之后抗體滴度緩慢升高，可持續(xù)存在多月甚至終生。如果病人屬于再次感染登革病毒（登革病毒感染者以前曾感染過登革病毒，有時(shí)可能是曾接種其他黃病毒疫苗或感染過其他黃病毒），抗體滴度可快速升高并可和多種黃病毒產(chǎn)生反應(yīng)。主要為高水平的IgG抗體，在急性期即可檢出，可持續(xù)存在10個(gè)月以上，甚至終生。IgA抗

3、體也可在急性期標(biāo)本中檢出。再次感染登革病毒的病人恢復(fù)期早期的IgM抗體滴度明顯低于首次感染，甚至無法檢出，通過計(jì)算IgM/IgG抗體比例，可以區(qū)分首次或再次登革病毒感染。IgA抗體檢測(cè)試劑在臨床診斷中的應(yīng)用尚處于評(píng)價(jià)階段。不得用于商業(yè)用途僅供個(gè)人參考登革病毒IgM/IgG抗體檢測(cè)規(guī)程【方法】膠體金法【預(yù)期用途】登革熱（DengueFever）是一種由登革病毒引起的急性傳染病，主要流行于熱帶和亞熱帶國(guó)家和地區(qū)。登革病毒為單股正鏈RNA病毒，在分類學(xué)上屬于黃病毒科，黃病毒屬（flavivirus）。病毒核心為RNA與蛋白質(zhì)組成的20面立體對(duì)稱的病毒顆粒，外層為兩種糖蛋白組成的包膜，包膜含有型和群特

4、異性抗原。病毒基因編碼3個(gè)結(jié)構(gòu)蛋白（核衣殼蛋白C,膜蛋白M,包膜蛋白E）和7個(gè)非結(jié)構(gòu)蛋白（NS1,NS2a,NS2b,NS3,NS4a,NS4b,NS5）。登革病毒感染可導(dǎo)致機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答，并產(chǎn)生病毒特異性的抗體。初次感染者，發(fā)病后35天可在血液中檢出病毒IgM抗體，發(fā)病2周后達(dá)到高峰，可維持23個(gè)月，發(fā)病1周后可檢出病毒IgG抗體，IgG抗體可維持?jǐn)?shù)年甚至終生。檢測(cè)臨床登革熱癥狀的病人樣本中登革病毒抗體，有助于登革熱的輔助診斷?！緳z驗(yàn)原理】采用膠體金免疫層析技術(shù)，在玻璃纖維上預(yù)包被膠體金標(biāo)記的登革病毒抗原（Au-Dengue-Ag）和羊IgG（Au-羊IgG），在硝酸纖維素膜上IgG檢測(cè)線

5、，IgM檢測(cè)線和對(duì)照線處分別包被鼠抗人IgG單克隆抗體，鼠抗人IgM單克隆抗體和鼠抗羊IgG單克隆抗體。檢測(cè)陽性標(biāo)本時(shí)，樣本中登革熱病毒IgG抗體（或IgM抗體）與Au-Dengue-Ag結(jié)合形成復(fù)合物，由于層析作用復(fù)合物沿紙條向前移動(dòng)，經(jīng)過IgG檢測(cè)線（或IgM檢測(cè)線）時(shí)與預(yù)包被的鼠抗人IgG單抗（或鼠抗人IgM單抗）形成“Au-Dengue-AgDengue病毒抗體鼠抗人IgG單抗（或鼠抗人IgM單抗）固相材料”夾心物而富集顯色，膠體金標(biāo)記羊IgG則在對(duì)照線與鼠抗羊IgG單克隆抗體結(jié)合富集顯色，陰性標(biāo)本則僅在對(duì)照線處顯色?！驹噭┙M成成分】1 ，登革病毒IgM/IgG抗體試劑檢測(cè)線：鼠抗人I

6、gM抗體、鼠抗人IgG抗體對(duì)照線：鼠抗羊IgG抗體結(jié)合墊：膠體金標(biāo)記登革病毒抗原和膠體金標(biāo)記羊IgG2 ，梓品稀釋液3 ，2uL吸管【樣本要求】1 ，檢測(cè)樣本為血清或血漿，避免溶血。2 ，血漿可用肝素、檸檬酸鈉或EDTA抗凝。3 ，采集后的標(biāo)本及時(shí)檢測(cè)，28C密封保存7天，長(zhǎng)期保存需冷凍-20C，忌反復(fù)凍融?！緳z驗(yàn)方法】檢測(cè)前先將冷藏的試劑和待測(cè)樣本恢復(fù)至室溫1 ，處理好樣本，取出試劑檢測(cè)卡，水平放置并作好標(biāo)記。2 ，用移液器吸取樣本2uL，或以試劑配置吸管吸取樣本至2uL刻線，滴加在檢測(cè)卡樣本孔（S1孔）。3 ，在檢測(cè)卡稀釋液孔（S孔）滴加2滴（70-100uL）樣品稀釋液。4 ，20分鐘同

7、觀察記錄結(jié)果?！窘Y(jié)果報(bào)告】陽性：質(zhì)控線（C）和檢測(cè)線（G）、檢測(cè)線（M）都出現(xiàn)紫紅色條帶，表示樣品中含有登革病毒IgM/IgG抗體。質(zhì)控線（C）和檢測(cè)線（G）都出現(xiàn)紫紅色條帶，表示樣品中含有登革病毒IgG抗體。質(zhì)控線（C）和檢測(cè)線（M）都出現(xiàn)紫紅色條帶，表示樣品中含有登革病毒IgM抗體。陰性：僅在質(zhì)控線（C）出現(xiàn)紫紅色條帶，檢測(cè)區(qū)（M）、檢測(cè)區(qū)（G）未出現(xiàn)紫紅色條帶，表示樣品中沒有登革病毒抗體或抗體濃度低于試劑的檢出水平。無效：質(zhì)控線（C）未出現(xiàn)紫紅色條帶，表示操作不當(dāng)或者試劑失效，應(yīng)重新檢測(cè)?！緢?bào)告方式】檢測(cè)線（G）、檢測(cè)線（M）都出現(xiàn)紫紅色條帶登革熱病毒IgM/IgG抗體測(cè)定：IgM陽性（

8、+）IgG陽性（+）【注意事項(xiàng)】1 ，檢測(cè)按照傳染病實(shí)驗(yàn)管理規(guī)范和生物安全守則的規(guī)定操作，實(shí)驗(yàn)后按傳染性廢物處理。2 ，操作應(yīng)嚴(yán)格按說明書進(jìn)行。3 ，保持良好的實(shí)驗(yàn)室環(huán)境。4 ，嚴(yán)格控制在20分鐘內(nèi)觀察結(jié)果，20分鐘后觀察結(jié)果無效。【傳染性廢物處理】1 ，所有實(shí)驗(yàn)室工作人員應(yīng)熟知并遵守本制度；由專職清潔人員負(fù)責(zé)實(shí)驗(yàn)廢棄物處理。實(shí)驗(yàn)室放置裝有垃圾袋的有蓋污物桶，并貼有明顯標(biāo)識(shí)。2 ，每天實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，及時(shí)清理并妥善包裹廢棄物，送出實(shí)驗(yàn)室并作好實(shí)驗(yàn)室廢棄物處理記錄。3 ，不具有傳染性的實(shí)驗(yàn)室廢棄物（如產(chǎn)品包裝材料和廢紙等辦公垃圾），應(yīng)與傳染性廢棄物區(qū)分開來，作為普通廢棄物單獨(dú)送醫(yī)療廢物集中處理中心統(tǒng)

9、一處理。4 ，血袋、裝血液的試管、離心管、吸頭等由科室洗滌人員用有效氯濃度0.3的愛爾施消毒液充分浸泡（60120分鐘），進(jìn)行初步消毒處理。5 ，進(jìn)行初步消毒處理的血袋、試管和與受血液污染的棉球、紙片、一次性口罩、帽子等傳染性或可疑傳染性廢棄物一起放入黃色膠袋中，由廢物集中處理中心無害化處理中心封閉運(yùn)輸至焚燒中心進(jìn)行無害化焚燒處理。6 ，每天實(shí)驗(yàn)前，在清洗盆中加入半盆有效氯濃度0.3%的愛爾施消毒液，實(shí)驗(yàn)中將玻片、離心管、吸管、吸頭等回收物品充分浸泡（60120分鐘），進(jìn)行初步消毒處理。7 ，收集一天的污染物品用流動(dòng)水沖洗，然后進(jìn)行高壓滅菌處理。登革熱NS1抗原檢測(cè)規(guī)程【方法】膠體金法【預(yù)期用

10、途】本試劑采用免疫層析技術(shù)，定性檢測(cè)人血清、血漿或者全血中的登革熱NS1抗原。適用于登革病毒感染的早期輔助診斷和篩查。登革熱是由登革病毒（分4個(gè)血清型，DENV14）引起的，通過伊蚊傳播的急性傳染病，多見于熱帶和亞熱帶地區(qū)。臨床類型可分為登革熱、登革熱出血熱和登革休克綜合征三種，該病傳播迅速，主要臨床表現(xiàn)包括發(fā)熱、頭痛、全身肌肉關(guān)節(jié)疼痛、極度乏力、皮疹、淋巴結(jié)腫大、白細(xì)胞減少。初次感染登革熱病毒患者，一般臨床表現(xiàn)較輕，可表現(xiàn)為無癥狀隱性感染，或輕型、典型登革熱；再次感染異型登革病毒時(shí)，病情較為嚴(yán)重，臨床上出現(xiàn)登革出血熱和休克綜合征的概率增加，病死率高，是一種具有嚴(yán)重危害性的傳染病?！緳z驗(yàn)原理】

11、本試劑方法采用免疫層析法，應(yīng)用雙抗體夾心法定性檢測(cè)登革熱NS1抗原。登革熱NS1抗原測(cè)試條的硝酸纖維素膜檢測(cè)區(qū)（T）上包被有抗登革熱病毒NS1蛋白單克隆抗體，質(zhì)控區(qū)（C）上包被有抗鼠IgG多克隆抗體，當(dāng)樣本中含有登革病毒NS1抗原且濃度高于最低檢出限時(shí)，標(biāo)記有膠體金的抗登革病毒NS1蛋白單克隆抗體下血清、血漿或全血中的登革病毒NS1抗原結(jié)合形成反應(yīng)復(fù)合物，在層析作用下復(fù)合物沒著硝酸纖維素膜向前移動(dòng)，與硝酸纖維素膜上檢測(cè)區(qū)（T）預(yù)先包被的抗登革熱NS1抗原單克隆抗體結(jié)合形成復(fù)合物，并最終形成一條肉眼可見的紅色反應(yīng)線，此時(shí)的結(jié)果為陽性。相反，當(dāng)樣本中不含有登革病毒NS1抗原且濃度低于最低檢出限時(shí)，

12、則檢測(cè)區(qū)（T）無紅色反應(yīng)線出現(xiàn)，此時(shí)結(jié)果為陰性。無論樣本中是否有NSI抗原，在質(zhì)控區(qū)（C）都會(huì)形成一條紅色反應(yīng)線?！局饕M成成份】試劑盒由測(cè)試卡和吸管組成。測(cè)試條由硝酸纖維素膜、樣品墊、結(jié)合墊、吸水紙、PVC板等其他支持物組。硝酸纖維素膜包被有抗登革病毒NS1蛋白單克隆抗體和抗鼠IgG多克隆抗體，結(jié)合墊含有膠體金標(biāo)記的抗登革病毒NS1蛋白單克隆抗體?！緲颖疽蟆? ，血清、血槳、全血樣本均可用于測(cè)試。2 ，全血樣本采集后盡可能立即使用，如不能立即檢測(cè)可蔣樣本放置于2-8C冷藏，全血樣本需在3天內(nèi)完成檢測(cè)。3 ，血清/血槳如不能及時(shí)測(cè)試應(yīng)放置于2-8C冷藏，可保存兩周，如需長(zhǎng)期保存應(yīng)置-20C冷

13、凍保存，測(cè)試前注意恢復(fù)至室溫。4 ，注意高濃度的黃疸樣本、高度溶血樣本、或肉眼可見多絮狀沉積的乳糜血樣本，將對(duì)檢測(cè)結(jié)果的干擾，因此在使用樣本前注意樣本的外觀?！緳z驗(yàn)方法】不得用于商業(yè)用途僅供個(gè)人參考檢測(cè)前先將冷藏的試劑和待測(cè)樣本恢復(fù)至室溫1 ，取出測(cè)試卡平放于臺(tái)上，并做好標(biāo)記2 ，有吸管吸取樣本血清/血槳/全血樣本，垂直加入2-3滴（約60-80uL）于加樣孔中，3 ，15-20分鐘觀察顯示結(jié)果，30分鐘后顯示結(jié)果無臨床意義。【結(jié)果報(bào)告】NS1抗原陽性：兩條紅色線，即在檢測(cè)區(qū)（T）及質(zhì)控區(qū)（C）各出現(xiàn)一條紅色線。NS1抗原陽性：一條紅色線，即在質(zhì)控區(qū)（C）出現(xiàn)一條紅色。無效：即在質(zhì)控區(qū)（C）無

14、紅色反應(yīng)線出現(xiàn)。此時(shí)建義重測(cè)?！緳z驗(yàn)方法局限性】1 ，當(dāng)測(cè)試樣本中登革病毒NS1抗原低于最低檢出限或在感染的某個(gè)階段不存在將會(huì)出現(xiàn)陰性結(jié)果，陰性結(jié)果不能排除近期感染的可能性。2 ，測(cè)試時(shí)必須嚴(yán)格按說明操作，否則可能分產(chǎn)生錯(cuò)誤結(jié)果，樣本若存在個(gè)別特藥或操作技術(shù)上的原因會(huì)造成結(jié)果出錯(cuò)，若結(jié)果可凝，請(qǐng)重新測(cè)試。3 ，本試劑僅對(duì)樣本的登革病毒NS1提供定性檢測(cè)，需要檢測(cè)某一指標(biāo)的具體含量請(qǐng)借助相關(guān)儀器。4 ，本產(chǎn)品檢測(cè)結(jié)果僅供臨床參孝，不應(yīng)作為臨床診治唯一依據(jù)，對(duì)患者的臨床管理應(yīng)結(jié)合其癥狀/體征，病史，其他實(shí)驗(yàn)檢查，治療反應(yīng)及流行病學(xué)等信息綜合考慮。不得用于商業(yè)用途僅供個(gè)人參考僅供個(gè)人用于學(xué)習(xí)、研究；不得用于商業(yè)用途Forpersonaluseonlyinstudyandresearch;notforcommercialuse.Nurfurdenpers?nlichenfurStudien,Forschung,zu