一種簡便的丹參丹酚酸提取工藝

1、一種簡便的丹參丹酚酸提取工藝水塔（北京）老陳醋生物科學有限公司車建途馮小珺于雷張丕馥陶中才摘要：丹參中藥材取自唇形科植物丹參的根， 在中醫(yī)臨床上，丹參主要用來治療 冠心病、腦血栓、肝炎及肝硬化等。該藥長期的臨床應(yīng)用背景及在治療疾 病方面的明顯效果，引起了國內(nèi)外學者對其水溶性酚類化合物的重視。 丹 酚酸B是丹參水溶性成分中最主要的活性物質(zhì)， 其含量較高，占丹參藥材 的2%-8%。丹酚酸B的活性很強，對脂質(zhì)過氧化引起的細胞膜損傷有明 顯的保護作用，還具有抗血小板聚集并對血栓形成的作用。因此，丹酚酸 B的提取技術(shù)的研究受到了醫(yī)藥界的關(guān)注。本實驗簡化了丹參中丹酚酸B的提取方法，以簡單低成本的提取方法得

2、到丹酚酸 B純度較高的干粉。實驗原料和儀器1. 主要原料：丹參飲片。本次實驗使用的丹參為：四川中江丹參（成都藥材批發(fā)市場） 陜西秦嶺野生丹參（網(wǎng)上藥店）2. 其它材料或試劑：去離子水，乙醇，10%鹽酸，乙酸乙酯3. 實驗儀器：電爐，水浴鍋，冷凝管，真空泵，低溫高速離心機，旋轉(zhuǎn)蒸 發(fā)儀，冷凍干燥器，以及燒杯等常用玻璃儀器?；咎崛」に嚵鞒虉D丹參飲片10-12倍乙醇溶液浸泡1.5h煮沸回流2h濾渣濾液8-10倍乙醇溶液煮沸回流 1.5h濾渣（棄去）濾液合并濾液，55 C濃縮至1倍量10%的鹽酸溶液濃縮液ra乙酸乙酯萃取三次濾渣（棄去）濾液過濾仃上層液體50 C減壓濃縮下層液體乙酸乙酯回收液（回收）

3、濃縮浸膏廠去乙酸乙酯殘留一并真空冷凍干燥J干粉（產(chǎn)品）提取工藝具體操作步驟1. 取丹參飲片，加10-12倍量的30%-40%勺乙醇溶液，浸泡1-2小時，煮 沸回流提取1.5-2小時，過濾，濾渣加8-10倍量的相同濃度乙醇溶液，煮沸 回流提取1.5-2小時，過濾，將兩次提取液合并。2. 將上述提取液55 C以下濃縮至1-1.5倍量，用10%的鹽酸酸化至pH為 2.5-3，抽濾或離心去掉懸浮顆粒不溶物。3. 濾液用乙酸乙酯萃取三次，分離出有機溶劑層，50E以下減壓濃縮回收 乙酸乙酯。4. 將濃縮后的浸膏（干粉）溶于1.5倍量去離子水中，繼續(xù)濃縮至干，重 復兩次，即可去除產(chǎn)品中殘留乙酸乙酯。濃縮液取

4、出經(jīng)真空冷凍干燥，既得丹酚酸總提物提取物質(zhì)量控制指標檢測項目質(zhì)量標準物理性質(zhì)性狀乳黃色粉末氣味特有的中藥材味粒徑100%通過80目化學性質(zhì)重金屬<10ppm砷（As）< 2ppm農(nóng)藥殘留w 2ppm乙酸乙酯殘留w 5 %/g乙醇殘留w 5*/g微生物細菌總數(shù)w 1000cfu/g霉菌及酵母w 100cfu/g大腸桿菌不得檢出沙門氏菌不得檢出功效成分總丹酚酸（以丹酚酸 B計）> 65%丹酚酸B> 55%迷迭香酸丹參素鈉其它貯存條件密封，置陰涼干燥處有效期提取出浸粉率提取物功效成分檢測方法HPLC法測定丹酚酸A、丹酚酸B、迷迭香酸、丹參素鈉1色譜條件色譜柱：Agile nt

5、 Zorbax C18流動相：甲醇-乙腈-甲酸-水(30:10:1:59);流 速：1.0ml/mL;檢測波長：286nm ;進樣量：20此2. 對照品溶液制備精密稱取丹酚酸B對照品，用水溶解，并稀釋成濃度為 0.20mg/mL的 溶液，作為對照品溶液。3. 供試品溶液制備精密稱取適量固形物，加適量水溶解，用水稀釋樣本溶液濃度為 0.4mg/mL，貝M乍為供試品溶液。4. 計算方法以峰面積，外標法計算含量。實驗過程及結(jié)論一、檢測酸化對提取物中丹酚酸 B含量的影響取陜西丹參200g，加入2400mL 40%的乙醇溶液按照方案二的方法提 取。濃縮后平均分四份，分別酸化至 2、2.5、3、3.5。將

6、四組置于相同 條件下萃取，并冷凍干燥，檢測所得物。以下為檢測結(jié)果:丹參品種陜西丹參酸化后pH2.02.53.03.5干燥固形物中質(zhì)量1.73g1.64g1.53g1.13g干粉得率3.47%3.28%3.05%2.26%干燥固形物中丹酚酸 A含量8.01%7.67%4.36%9.73%干燥固形物中丹酚酸 B含量75.92%83.51%86.86%87.34%干燥固形物中迷迭香酸含量3.99%3.07%3.22%4.26%干燥固形物中丹參素鈉含量4.33%3.96%3.69%2.33%丹酚酸B得率2.63%2.74%2.65%1.97%第一次測試結(jié)果明顯表明隨著pH從2-3.5的增長，丹酚酸提取

7、物中 丹酚酸B的含量也在上升。且pH為2.5、3、3.5時丹酚酸B純度相差很 小；而干粉質(zhì)量（得率）卻在直線下降。以下為第二次檢測結(jié)果（實驗方法相同，丹參質(zhì)量為300g,添加了pH=4以及不進行酸化的對照組，其余條件均與第一次一致）丹參品種陜西丹參酸化后pH2.02.53.03.54.0未酸化干燥固形物中質(zhì)量1.33g1.49g1.58g1.31g0.628g0.359g干粉得率2.71%3.05%3.22%2.69%1.28%0.73%干燥固形物中丹酚酸 A含量6.40%6.42%6.21%5.93%4.29%4.91%干燥固形物中丹酚酸 B含量73.20%89.94%91.48%88.69

8、%38.58%66.47%干燥固形物中迷迭香酸含量3.70%3.65%3.45%4.12%8.13%6.03%干燥固形物中丹參素鈉含量4.97%3.47%3.33%2.56%3.06%2.65%丹酚酸B得率1.987%2.74%2.95%2.38%0.49%0.49%第二次測試結(jié)果與第一次測試結(jié)果反應(yīng)一致， 而pH為4以及未經(jīng)酸 化（pH值大約為4.4-4.6）時提取物很難溶于水，用傳統(tǒng)冷凍干燥方法難 以檢測，故不米用。經(jīng)測試，丹參在pH為2.5-3.5條件下提取純度較高，而由于 pH=3.5 的時候有較少不溶于水的雜質(zhì)，且提取干粉質(zhì)量較低，故選取酸化pH為2.5至3。、檢測去除乙酸乙酯殘留過

9、程對丹參提取物中有效成分含量的影響實驗步驟：取四川丹參300g，做丹參丹酚酸提取。乙酸乙酯萃取后， 濃縮回收部分乙酸乙酯，剩余的有機溶液平均分為三組，標記 A、B、C。 分別濃縮至干，在相同環(huán)境下做去除乙酸乙酯殘留實驗。A組為對照組，B組C組分別加超純水溶解，在 55 E下減壓蒸餾4 次、8次，每次加水10mL并減壓蒸餾一小時，檢測其凍干產(chǎn)物中有效成 分含量。以下為測試結(jié)果：分組樣品描述樣品質(zhì)量丹酚酸A丹酚酸B迷迭香酸丹參素鈉A未減壓蒸餾3.351g4.17%76.02%4.1%4.6%B減壓蒸餾4h3.161g3.97%86.23%4.23%5.18%C減壓蒸餾8h3.127g4.35%82

10、.92%4.04%4.96%重復實驗得出結(jié)論：B和C組比較可得，經(jīng)過多次減壓蒸餾，丹酚酸A、丹酚酸B迷迭香酸、丹參素鈉的含量會隨減壓蒸餾次數(shù)和時間的增多而有所減少，但減少量并不顯著，可忽略不計。B組由于去掉大量乙酸乙酯，有效成分的純度與 A組比有較大提高。實施例實施例1取陜西丹參90g,加12倍量的40%乙醇，浸泡2小時，回流提取2小時， 提取兩次。過濾提取液并合并濾液，53C減壓濃縮至150mL,將濃縮液酸化 至pH=3,抽濾，濾液用乙酸乙酯萃取三次，分離出有機溶劑層，48C減壓濃縮，濃縮液去除殘留乙酸乙酯，并進行冷凍干燥，得到得到丹酚酸總提物 3.04g，其中丹酚酸B的含量為81.1%，丹酚酸得率為2.74%。實施例2取陜西丹參100g，力卩12倍量的40%乙醇，浸泡1.5小時，回流提取2 小時，提取兩次。過濾提取液并合并濾液，52 C減壓濃縮至150mL，將濃縮 液酸化至pH=3,抽濾，濾液用乙酸乙酯萃取三次，分離出有機溶劑層，48C 減壓濃縮，濃縮液去除殘留乙酸乙酯，并進行冷凍干燥，即得到得到丹酚酸 總提物3.32g,其中丹酚酸B的含量為81%，丹酚酸得率為2.69%。實施例3取四川丹參100g，力卩12倍量的40%乙醇，浸泡1.5小時，回流提取2 小時，提取兩次。過濾提取液并合并濾液，52 C減壓濃縮至1