細(xì)胞工程宿州學(xué)院的為師弟師妹們解決一下憂慮

1、名詞解釋1細(xì)胞工程：利用細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)方法以生物細(xì)胞或組織為研究對象，按照人們的意愿進(jìn)行工程學(xué)操作，從而改變生物性狀，或產(chǎn)生新物種貨品系。2植物細(xì)胞全能性：每個植物細(xì)胞都具有該物種的全部遺傳信息，在適宜條件下具有發(fā)育成完整植株的能力。3外植體：把由活植物體上切取下來的進(jìn)行培養(yǎng)的那部分組織或器官叫外植體4愈傷組織：通常指植物受到機(jī)械、動物或微生物等傷害后，創(chuàng)傷部位的細(xì)胞脫分化而不斷增殖形成松散排列、無特定結(jié)構(gòu)和功能的非器官化組織。5脫分化：離體條件下，細(xì)胞脫離原狀態(tài)而回復(fù)到分生狀態(tài)，這一會變過程稱脫分化或去分化。6再分化：脫分化的細(xì)胞在特定條件誘導(dǎo)下，再次開始新的分化發(fā)育過程，最終形成各

2、種組織、器官或胚狀體等，稱再分化。7胚狀體：離體培養(yǎng)下沒有經(jīng)過受精過程，但經(jīng)過了胚胎發(fā)育過程所形成的胚的類似物，（不管培養(yǎng)的細(xì)胞是體細(xì)胞還是生殖細(xì)胞），統(tǒng)稱為體細(xì)胞或胚狀體。8人工種子：通過植物組織培養(yǎng)中所產(chǎn)生的體細(xì)胞胚或珠芽等包埋在“人工胚乳”和“人工種皮”里，制成的具有播種功能、類似天然種子的顆粒。9胚胎培養(yǎng)：是植物組織培養(yǎng)的一個主要領(lǐng)域。植物胚胎培養(yǎng)是指對植物的胚（種胚）及胚器官（如子房、胚珠）進(jìn)行人工離體無菌培養(yǎng)，使其發(fā)育成幼苗的技術(shù)。10原生質(zhì)體培養(yǎng)：將植物細(xì)胞游離成原生質(zhì)體，在適宜培養(yǎng)條件下，使其再生細(xì)胞壁，進(jìn)而分裂形成愈傷組織或胚狀體，最后發(fā)育形成完整植株。11體細(xì)胞雜交：原生質(zhì)

3、體融合也叫做體細(xì)胞雜交，使分離出來的不同親本的原生質(zhì)體，在人工控制條件下，相互融合成一體，形成雜種細(xì)胞，并進(jìn)一步發(fā)育成雜種植株的技術(shù)。12單細(xì)胞培養(yǎng)：指從外植體、愈傷組織、群體細(xì)胞或者細(xì)胞團(tuán)中分離得到單細(xì)胞，然后在一定條件下對其進(jìn)行培養(yǎng)的過程。13平板培養(yǎng)法：將單個細(xì)胞與融化的瓊脂培養(yǎng)基均勻混合后平鋪一薄層在培養(yǎng)皿底上的培養(yǎng)法。14看護(hù)培養(yǎng)：指用一塊活躍生長的愈傷組織來看護(hù)單個細(xì)胞，并使其生長和增殖的方法。15動物細(xì)胞與組織培養(yǎng)：是從動物體內(nèi)取出細(xì)胞或者組織，模擬體內(nèi)的生理環(huán)境，在無菌、適溫和豐富的營養(yǎng)條件下，使離體細(xì)胞或者組織生存、生長并維持結(jié)構(gòu)和功能的一門技術(shù)。是動物細(xì)胞工程的基礎(chǔ)。16接

4、觸性抑制：由細(xì)胞接觸而抑制細(xì)胞運(yùn)動的現(xiàn)象稱為接觸抑制. 接觸抑制是體外培養(yǎng)中某些貼附型細(xì)胞生長特性之一.由于細(xì)胞之間有接觸抑制特性,一般的正常細(xì)胞并不互相重疊于其上而生長,而是呈單層細(xì)胞生長.但腫瘤細(xì)胞由于無接觸抑制而能夠繼續(xù)移動和增殖,導(dǎo)致細(xì)胞向三維空間擴(kuò)展,使細(xì)胞堆積.因此,接觸抑制可作為區(qū)別正常細(xì)胞與癌細(xì)胞之一. 密度抑制：當(dāng)細(xì)胞密度進(jìn)一步增大，培養(yǎng)液中營養(yǎng)成分減少，代謝產(chǎn)物增多時，細(xì)胞因營養(yǎng)的枯竭和代謝物的影響，則發(fā)生密度抑制，導(dǎo)致細(xì)胞分裂停止的現(xiàn)象。 17有限細(xì)胞系：原代細(xì)胞經(jīng)過一次傳代后，形成的細(xì)胞系。如果不能繼續(xù)傳代或傳代有限，稱為“有限細(xì)胞系” 無限細(xì)胞系：原代細(xì)胞經(jīng)過一次傳代

5、后，形成的細(xì)胞系。如果可以連續(xù)傳代則稱為“連續(xù)細(xì)胞系”，細(xì)胞獲得不死性（持久增殖能力）。18飼養(yǎng)細(xì)胞：即滋養(yǎng)細(xì)胞，一層經(jīng)過特殊處理的用做克隆細(xì)胞底物的細(xì)胞層。19干細(xì)胞：是一類具有自我更新和分化潛能的細(xì)胞。20胚胎工程：指以動植物胚胎為研究對象而產(chǎn)生的一系列技術(shù)操作，如胚胎移植、胚胎冷凍保存、胚胎分割、體外胚胎生產(chǎn)、動物克隆、性別控制及基因?qū)氲取?1：胚胎移植：指對優(yōu)秀雌性動物進(jìn)行超數(shù)排卵處理，在其發(fā)情配種后一定時間內(nèi)從其生殖道取出早期胚胎，移植到同期發(fā)情的普通雌性動物生殖道的相應(yīng)部位，讓其生產(chǎn)后代的技術(shù)。22：超數(shù)排卵：在動物發(fā)情周期的適當(dāng)時期，用促性腺激素進(jìn)行處理，誘發(fā)其卵巢上大量卵泡同

6、時發(fā)育并排卵的技術(shù)，簡稱超排。23固定化培養(yǎng)：將游離的細(xì)胞包埋或吸附在多糖或多聚化合物制備成的網(wǎng)狀支持物中或表面，培養(yǎng)液呈流動狀態(tài)進(jìn)行無菌培養(yǎng)。選擇題、填空題1. 植物細(xì)胞工程是在植物組織培養(yǎng)基礎(chǔ)上發(fā)展的，建立在細(xì)胞學(xué)說、細(xì)胞全能性的基礎(chǔ)上。2. 細(xì)胞工程基本實驗室組成（制備室）（無菌操作室）（培養(yǎng)室）3. 細(xì)胞學(xué)觀察設(shè)備是（普通顯微鏡）（倒置顯微鏡），用于觀察細(xì)胞的生長的情況和有無污染用（倒置顯微鏡）4. 無菌操作的儀器設(shè)備有（超凈工作臺）（高壓蒸汽滅菌鍋）（過濾除菌裝置）（干熱滅菌烘箱）5. 無菌操作技術(shù)方法中常用的滅菌方法包括物理的（濕熱滅菌法），用于對一般培養(yǎng)基、玻璃器皿、橡膠制品等滅

7、菌；（過濾除菌），熱不穩(wěn)定的動物細(xì)胞培養(yǎng)液滅菌方法；玻璃器皿的滅菌用（干熱滅菌）；接種室、超凈臺或接種箱內(nèi)常用（紫外線滅菌）。化學(xué)消毒方法（熏蒸消毒）（藥劑噴霧消毒）；培養(yǎng)基滅菌用濕熱滅菌法和過濾除菌法6. 化學(xué)消毒法中常用的藥品：甲醛、高錳酸鉀、酒精、來蘇兒、次氯酸鈣、次氯酸鈉、過氧化氫、升汞7. 生長素中IBA、IAA、NAA、2,4-D誘導(dǎo)細(xì)胞的分裂和根的分化，IBA、IAA和IAA誘導(dǎo)生根，2,4-D誘導(dǎo)愈傷組織；細(xì)胞分裂素有6-BA、KT、ZT、2iP，促進(jìn)細(xì)胞分裂和分化不定芽；赤霉素，抑制愈傷組織形成，促進(jìn)芽的形成，常見的有GA3 8. 激素平衡假說：生長素/細(xì)胞分裂素高，誘導(dǎo)根的

8、生成，生長素/細(xì)胞分裂素低誘導(dǎo)芽的生成，生長素和細(xì)胞分裂素必須協(xié)調(diào)試用才能再生正常植株。9. 愈傷組織分為（胚性愈傷組織）（非胚性愈傷組織）10. 人工種子的結(jié)構(gòu)：體細(xì)胞胚、人工胚乳、人工種皮11. 植物培養(yǎng)基成分：無機(jī)成分、有機(jī)營養(yǎng)成分、生長調(diào)節(jié)物質(zhì)、培養(yǎng)材料的支持物12. 最常用的植物培養(yǎng)基是MS培養(yǎng)基，其母液的配制包括：大量元素的母液、微量元素的母液、鐵鹽的母液、有機(jī)母液、激素母液13. 離體快繁出現(xiàn)問題：污染、褐變、玻璃化14. 脫毒方法有物理方法、化學(xué)方法、生物學(xué)方法15. 莖尖脫毒（生物學(xué)方法）的原理：病毒在植物體內(nèi)分布不均，莖尖處一般無病毒或很少。16. 莖尖越小，脫毒效果越好，

9、但成活率低，剝離技術(shù)要求也越高。17. 植物脫毒效果的檢測方法：視覺觀察法、指示植物鑒定、血清鑒定法、電子顯微鏡鑒定法、分子生物學(xué)檢測法18. 花藥花粉取材時期：一般是單核期,尤其是單核中、晚期(單核靠邊期)19. 通過花粉培養(yǎng)的植株都是單倍體植株；通過花藥培養(yǎng)的植株包括單倍體、二倍體、多倍體、非整倍體等的混合群體20. 被子植物胚乳的發(fā)育根據(jù)其發(fā)育初期是否形成細(xì)胞壁可分為核型胚乳、細(xì)胞型胚乳、招生目胚乳。胚乳發(fā)育成的植株一般是三倍體21. 胚培養(yǎng)分為成熟胚培養(yǎng)和有胚培養(yǎng)22. 未授粉胚珠誘導(dǎo)愈傷組織或胚狀體再生植株，形成單倍體植株已授粉胚珠-胚正常發(fā)育過程，形成種子未授粉子房：來自性細(xì)胞（卵

10、細(xì)胞、助細(xì)胞、極核、反足細(xì)胞）發(fā)育成單倍體植株；來自體細(xì)胞（珠被、子房壁）發(fā)育成二倍體植株；已授粉子房：來自合子或體細(xì)胞（珠被、子房壁）產(chǎn)生二倍體植株；若胚乳也能形成，可得到三倍體植株23. 原生質(zhì)體體培養(yǎng)時最好取幼嫩葉片，分離方法有機(jī)械法和酶解法，常用的酶有纖維素酶和果膠酶24. 原生質(zhì)體純化方法：沉降法、漂浮法、界面法；活力檢測方法：目測法、FDA法、伊凡藍(lán)法；原生質(zhì)培養(yǎng)方法：液體淺層培養(yǎng)法、固體平板法、固液結(jié)合培養(yǎng)法；原生質(zhì)體再生的三個階段：細(xì)胞壁再生、細(xì)胞分裂、植株再生25. 分離時加入滲透壓穩(wěn)定劑的目的：保證原生質(zhì)體完整性。原生質(zhì)膜穩(wěn)定劑為了提高原生質(zhì)體膜的穩(wěn)定性和活力26. 體細(xì)胞

11、雜交能試驗緣雜交形成新物種的原因：能夠?qū)崿F(xiàn)中間雜交并能獲得可育后代27. 原生質(zhì)體融合方法：PEG法、電融合技術(shù)、無機(jī)鹽誘導(dǎo)融合、高pH-高Ca離子、PEG結(jié)合高鈣-高pH誘導(dǎo)法28. 單細(xì)胞分離的方法：機(jī)械法、酶解法29. 單細(xì)胞培養(yǎng)的方法有固體平板培養(yǎng)法、看護(hù)培養(yǎng)法、微室培養(yǎng)法。30. 最常用的單細(xì)胞培養(yǎng)方法是固體平板培養(yǎng)法，常以植板率來衡量培養(yǎng)效果。植板率：能長出細(xì)胞團(tuán)的單細(xì)胞在接種單細(xì)胞中所占的比例。植板率=（每個平板形成的細(xì)胞團(tuán)數(shù)）/(每個平板接種的細(xì)胞總數(shù))31. 植物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)主要有懸浮培養(yǎng)和固定化培養(yǎng)32. 成批培養(yǎng)/分批培養(yǎng)：將一定量細(xì)胞或細(xì)胞團(tuán)接種到一定容積的密閉容器中

12、進(jìn)行培養(yǎng)。它是進(jìn)行細(xì)胞生長和細(xì)胞分裂的生理生化研究常用的培養(yǎng)方法。特點(diǎn)：（1）除氣體交換外，培養(yǎng)系統(tǒng)不與外部進(jìn)行物質(zhì)交換。培養(yǎng)基體積固定；（2）必須適當(dāng)攪拌；（3）培養(yǎng)過程中，細(xì)胞生長，其數(shù)目不斷發(fā)生變化，呈S增長；（4）當(dāng)營養(yǎng)耗盡時，細(xì)胞停止分裂生長，完成培養(yǎng)過程，細(xì)胞和產(chǎn)物一次性收獲。但要進(jìn)行下一批培養(yǎng)，則需要繼代轉(zhuǎn)移。 半連續(xù)培養(yǎng)：每隔一定時間倒出一定量的懸浮液，同時補(bǔ)充加入等量的新鮮培養(yǎng)液33. 植物細(xì)胞懸浮培養(yǎng)的生物反應(yīng)器有機(jī)械攪拌式生物反應(yīng)器、氣升式生物反應(yīng)器34. 常用的超低溫保存方法可分為兩類，即冷凍誘導(dǎo)保護(hù)性脫水的超低溫保存和玻璃化處理的超低溫保存。超低溫保存植物種質(zhì)資源的程

13、序包括培養(yǎng)材料的準(zhǔn)備、預(yù)處理、降溫冰凍及保存、解凍處理、細(xì)胞活力和變異的評價、植株再生等幾個步聚。 傳統(tǒng)的降溫冷凍方法：快速冰凍法 、慢速冰凍法 、兩步法 、逐級冰凍法 解凍一般采用快速化凍方法，即將液氮保存后的材料在35°C40°C溫水浴中化凍35. 體外培養(yǎng)的動物細(xì)胞依據(jù)它們是否貼附在支持物表面生長而分為兩大類型，即：貼附型細(xì)胞和懸浮型細(xì)胞。 體外貼附型細(xì)胞形態(tài)大致可以分為：成纖維型細(xì)胞、上皮型細(xì)胞、游走型細(xì)胞、多形型細(xì)胞36. 培養(yǎng)細(xì)胞生命周期有三個階段：原代培養(yǎng)期、傳代期、衰退期37. 冷凍保存細(xì)胞應(yīng)選擇原代培養(yǎng)及傳代培養(yǎng)早期的細(xì)胞。進(jìn)行各種實驗的每一代中最好階段是

14、對數(shù)期38. 培養(yǎng)基和各種培養(yǎng)用液有平衡鹽溶液PBS、消化液。最常用的消化液有胰蛋白酶、EDTA39. 動物細(xì)胞培養(yǎng)基可分為天然培養(yǎng)基及合成培養(yǎng)基兩大類40. 大多數(shù)哺乳動物細(xì)胞的培養(yǎng)適宜溫度：37，最適pH為7.2-7.4之間41. 實驗室中動物細(xì)胞的培養(yǎng)方法有：懸滴培養(yǎng)法、培養(yǎng)瓶培養(yǎng)法、旋轉(zhuǎn)管培養(yǎng)法、灌注小室培養(yǎng)法、培養(yǎng)板培養(yǎng)法、克隆培養(yǎng)法（單細(xì)胞分離培養(yǎng)法）42. 細(xì)胞克隆（單細(xì)胞分離培養(yǎng)），即把一個單細(xì)胞從一個群體中分離出來單獨(dú)培養(yǎng)，使之重新繁衍成為一個新的細(xì)胞群體的培養(yǎng)技術(shù)。最常用的克隆培養(yǎng)法是稀釋鋪板法。43. 細(xì)胞轉(zhuǎn)化及惡性程度檢查一般利用軟瓊脂培養(yǎng)法檢測44. 細(xì)胞生長狀況 細(xì)

15、胞計數(shù)，血球計數(shù)板和電子細(xì)胞計數(shù)儀 生長曲線：（潛伏期，對數(shù)生長期，水平靜止期）由于細(xì)胞基數(shù)和生長進(jìn)度不同，生長曲線不一致。 細(xì)胞分裂指數(shù)，分裂細(xì)胞占全部細(xì)胞的比例 細(xì)胞貼壁率=貼壁存活細(xì)胞/接種細(xì)胞*100% 細(xì)胞周期時間測定：用同位素標(biāo)記，流式細(xì)胞儀測定細(xì)胞同期 細(xì)胞活力檢測：MTT45. 動植物細(xì)胞融合的方法：仙臺病毒法、PEG誘導(dǎo)融合法、電融合法46. 干細(xì)胞按分化潛能大小來分類：全能干細(xì)胞、多能干細(xì)胞、單能干細(xì)胞；根據(jù)來源來分：來源于胚胎-胚胎干細(xì)胞 、來源于成體-成體干細(xì)胞 47. ES/EG細(xì)胞的鑒定方法有：細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)、核型分析、堿性磷酸酶（AKP）染色、SSEA免疫熒光標(biāo)記

16、、OCT-4表達(dá)、分化能力檢測ES/EG細(xì)胞系的特性：無限增殖性、分化潛能性、種系傳遞性 簡答題1 簡述植物細(xì)胞工程的應(yīng)用。答：植物離體繁殖和脫毒、花藥花粉培養(yǎng)及單倍體育種、原生質(zhì)體的培養(yǎng)及體細(xì)胞雜交、次生代謝物的生產(chǎn)、種質(zhì)資源離題保存、植物遺傳轉(zhuǎn)化2 無菌操作的注意事項有哪些？3 植物形態(tài)建成有哪些途徑？答：器官發(fā)生途徑 器官直接發(fā)生途徑：外植體à不定芽器官間接發(fā)生途徑：外植體à愈傷組織à不定芽胚狀體發(fā)生途徑 直接發(fā)生途徑：外植體à體細(xì)胞胚間接發(fā)生途徑：外植體à愈傷組織à胚狀體4 培養(yǎng)條件下的器官發(fā)生有哪些方式？影響其發(fā)生的因素有哪

17、些？答案見作業(yè)本5 什么叫胚狀體？體細(xì)胞胚的發(fā)生有哪些特點(diǎn)？答案p526 植物離體快繁定義及意義答：植物離體快繁是通過離體培養(yǎng)，將來自優(yōu)良植株的莖尖、腋芽、鱗片、葉片等器官、組織或細(xì)胞進(jìn)行無菌培養(yǎng)，經(jīng)過不斷切割和重復(fù)培養(yǎng)，使增殖并再生形成完整植株，以期在短期內(nèi)以更快的速度獲得遺傳性均一的大量個體。 意義：a.快速繁殖新品種，使優(yōu)良品種迅速使用b.節(jié)約耕地，提高農(nóng)產(chǎn)品的商品率c生產(chǎn)無病毒種苗，防止品種退化d便于運(yùn)輸7 離體無性快繁一般可分為那幾個階段？簡述其操作的一般程序。答案見作業(yè)本（無菌培養(yǎng)物的建立：健康植物上選健壯的枝梢à去葉片用自來水沖洗à 75%酒精1分鐘à

18、;次氯酸鈉5-10分鐘à培養(yǎng)à再生）8 花藥培養(yǎng)和花粉培養(yǎng)的區(qū)別是什么?答案見作業(yè)本9 單倍體植株與它的二倍體相比較有什么特點(diǎn)？答：a.體細(xì)胞染色體數(shù)減半b生長發(fā)育弱，體形小、各器官明顯減小c.雌雄配子嚴(yán)重敗育，有的甚至不能進(jìn)入有性世代10幼胚的發(fā)育方式有哪些？答：胚性發(fā)育： 幼胚接種到培養(yǎng)基上以后，仍然按照在活體內(nèi)的發(fā)育方式發(fā)育，最后形成成熟胚(有時甚至可能類似種子)，然后再按種子萌發(fā)途徑出苗形成完整植株，這種途徑發(fā)育的幼胚一般一個幼胚將來就是一個植株。早熟萌發(fā)： 幼胚接種后，離體胚不繼續(xù)胚性生長，而是在培養(yǎng)基上迅速萌發(fā)成幼苗，通常稱之為早熟萌發(fā)。愈傷組織：在許多情況下，

19、幼胚在離體培養(yǎng)中首先發(fā)生細(xì)胞增殖，形成愈傷組織。幼胚培養(yǎng)的關(guān)鍵技術(shù)是什么？（或是注意事項）答：a.取材時，取球形胚至魚雷形胚階段的胚胎b幼胚剝離時，要注意保濕，無菌且操作要迅速，要連胚柄一同取出c剝離出來的幼胚要立刻接種到培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)11植物體細(xì)胞雜交的意義：答：a實現(xiàn)遠(yuǎn)緣雜交，形成新的物種b.創(chuàng)造細(xì)胞質(zhì)雜種c.培養(yǎng)作物新種質(zhì)和新品種12在植物細(xì)胞培養(yǎng)中如何提高植物次生代謝產(chǎn)物的產(chǎn)量？答案見作業(yè)本13比較天然培養(yǎng)基和合成培養(yǎng)基的優(yōu)缺點(diǎn)。答：（1）天然培養(yǎng)基 其優(yōu)點(diǎn)是營養(yǎng)成分豐富、含各種生長因子、激素，培養(yǎng)效果好； 缺點(diǎn)是成分復(fù)雜、來源受限，個體差異大、批次間差異大。 （2）合成培養(yǎng)基 優(yōu)點(diǎn)：

20、它能給細(xì)胞提供一個近似于體內(nèi)的生存環(huán)境，化學(xué)成分明確，組分穩(wěn)定，同時又便于控制和標(biāo)準(zhǔn)化。這些是天然培養(yǎng)基無法比擬的。 缺點(diǎn)：不能促進(jìn)細(xì)胞增殖生長；須加入胎牛血清、小牛血清等。14講述原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)的主要的過程。答案見作業(yè)本15胚胎移植的基本程序：供體和受體的選擇、供體的超數(shù)排卵、受體的同期發(fā)情處理、胚胎回收、胚胎檢查及質(zhì)量鑒定、胚胎移植16ES細(xì)胞的生物學(xué)特性有哪些？答：ES細(xì)胞來自正常的胚胎，具有完整的二倍體核型。ES細(xì)胞的形態(tài)學(xué)表現(xiàn)為體積小、核大、胞質(zhì)少、有1或2個核仁，細(xì)胞與細(xì)胞緊密地聚集在一起，細(xì)胞間界限不清，呈集落型生長，形似鳥巢，集落邊緣清晰，折光性強(qiáng)。ES細(xì)胞可以表達(dá)早期胚胎細(xì)胞特異表達(dá)的基因。ES細(xì)胞具有無限增殖的能力。ES細(xì)胞具有廣泛的體內(nèi)分化能力。ES細(xì)胞具有廣泛的體外分化能力。ES細(xì)胞具有種系傳遞功能。ES細(xì)胞可在體外培養(yǎng)、克隆、凍存及進(jìn)行遺傳操作。 論述題簡述雜交瘤生產(chǎn)單克隆抗體的原理及主要技術(shù)過程。答：（1）原理1.骨髓瘤細(xì)胞在體外培養(yǎng)能大量無限增殖，但不能分泌特異性抗體；而抗原免疫的B淋巴細(xì)胞能產(chǎn)生特異性抗體，但在體外不能無限增殖。將免疫B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合后形成的雜交瘤細(xì)胞，繼承了兩個親代細(xì)胞的特性，即具有骨髓瘤細(xì)胞能無限制增殖的特性，又具有免疫B細(xì)胞合成和分泌特