透明質(zhì)酸紫杉醇聚電解質(zhì)復(fù)合納米?？诜o藥研究

1、透明質(zhì)酸紫杉醇聚電解質(zhì)復(fù)合納米?？诜o藥研究目的目的口服+靶向（1）口服化療相對(duì)于注射化療來(lái)說(shuō)具有很多優(yōu)勢(shì)，例如它改善了病人的依從性， 降低了設(shè)備及人力成本，促進(jìn)了晚期的或轉(zhuǎn)移性癌癥患者的慢性治療，口服化療提出了一個(gè)新的化即“化療在家里”（2）就是擊中靶標(biāo)，減少毒副作用內(nèi)容提要內(nèi)容提要腫瘤靶向簡(jiǎn)單介紹紫杉醇的藥理作用聚電解質(zhì)和納米粒的簡(jiǎn)單介紹口服給藥的研究制備的介紹未來(lái)的前景 腫瘤的分子靶向治療是指利用具有一定特異性的載體，將藥物或其他殺傷腫瘤細(xì)胞的活性物質(zhì)選擇性地運(yùn)送到腫瘤部位，把治療作用或藥物效應(yīng)盡量限定在特定的靶細(xì)胞、靶組織或靶器官內(nèi)，而不影響正常細(xì)胞、組織或器官的功能，從而提高療效、減

2、少毒副作用的一種方法。定義腫瘤靶向治療腫瘤靶向治療v依據(jù)已知腫瘤發(fā)生中涉及的異常分子和基因，設(shè)計(jì)針對(duì)依據(jù)已知腫瘤發(fā)生中涉及的異常分子和基因，設(shè)計(jì)針對(duì)這些特定分子和基因靶點(diǎn)的藥物，選擇性殺傷腫瘤細(xì)胞。這些特定分子和基因靶點(diǎn)的藥物，選擇性殺傷腫瘤細(xì)胞。這種治療方法稱(chēng)為腫瘤藥物的分子靶向治療這種治療方法稱(chēng)為腫瘤藥物的分子靶向治療(Molecular targeted therapy)。 藥物靶向治療的效果取決于靶向藥物的自身特性和腫瘤內(nèi)是藥物靶向治療的效果取決于靶向藥物的自身特性和腫瘤內(nèi)是否存在靶向藥物作用的分子靶點(diǎn)。否存在靶向藥物作用的分子靶點(diǎn)。 只對(duì)某個(gè)器官的腫瘤有效，如腫瘤 的介入治療、射頻熱

3、療等。器官靶向：細(xì)胞靶向： 分子靶向：選擇性地與這類(lèi)細(xì)胞特異性地結(jié)合，從而消滅 腫瘤細(xì)胞，如I131、希羅達(dá)、脂質(zhì)體阿霉素等針對(duì)腫瘤細(xì)胞特有的受體，關(guān)鍵基因和調(diào)控分子為 靶點(diǎn)的治療（阻斷信號(hào)傳導(dǎo)通路中某一個(gè)分 子靶點(diǎn)）腫瘤靶向治療的三個(gè)層次分類(lèi)1、抗體免疫偶聯(lián)物2、封閉類(lèi)抗體藥物3、作用于信號(hào)傳導(dǎo)類(lèi)藥物4、效應(yīng)子殺傷類(lèi)藥物5、抗獨(dú)特性疫苗類(lèi)抗體藥物6、納米技術(shù)改造的藥物目前主要分子靶向藥物目前主要分子靶向藥物酪氨酸激酶抑制劑吉非替尼（Gefitinib）、埃羅替尼（Erlotinib）、克唑替尼抗EGFR單抗西妥昔單抗（Cetuximab）、帕尼單抗（PANITUMUMAB）Bcr-Abl酪氨

4、酸激酶抑制劑伊馬替尼（Imatinib）、尼洛替尼（Nilotinib）、達(dá)沙替尼（Dasatinib）抗血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體（VEGFR）的單抗貝伐單抗（Bevacizumab）抗CD20的單抗利妥昔單抗(Rituximab)IGFR-1激酶抑制劑NVP-AEW541mTOR激酶抑制劑Temsirolimus(CCI-779)、Everolimus(RAD-001)泛素-蛋白酶體抑制劑硼替佐米（Bortezomib）。 多靶點(diǎn)抑制劑舒尼替尼（Sunitini）、索拉非尼（Sorafinib）、拉帕替尼（Lapatinib）、范德他尼(Vandetanib)等由抗體和特異的效應(yīng)分子連接形成作用

5、靶點(diǎn) 分化抗原、癌胚胎性抗原偶聯(lián)物的種類(lèi) 化療藥物、放射性核素、毒素代表性藥物： 利妥昔單抗抗體免疫偶聯(lián)物紫杉醇的各種參數(shù)紫杉醇的各種參數(shù)化學(xué)名稱(chēng) : 5，20-環(huán)氧-1，2，4，7，10，13-六羥基紫杉烷-11-烯-9-酮-4，10-二乙酸酯-2-苯甲酸酯-13（2R，3S）-N-苯甲酰-3-苯基異絲氨酸酯分 子 式 : C47H51NO14分 子 量 : 853.92物理性質(zhì) : 白色結(jié)晶體粉末。無(wú)臭，無(wú)味。不溶于水，易溶于氯仿、丙酮等有機(jī)溶劑。紫杉醇紫杉醇發(fā)現(xiàn)歷史1963年美國(guó)化學(xué)家瓦尼（年美國(guó)化學(xué)家瓦尼（M.C. Wani）和沃爾（）和沃爾（Monre E. Wall）首次從一）首次

6、從一種生長(zhǎng)在美國(guó)西部大森林中稱(chēng)謂太平洋杉（種生長(zhǎng)在美國(guó)西部大森林中稱(chēng)謂太平洋杉（Pacific Yew）樹(shù)皮和木材中分）樹(shù)皮和木材中分離到了紫杉醇的粗提物。在篩選實(shí)驗(yàn)中，離到了紫杉醇的粗提物。在篩選實(shí)驗(yàn)中，Wani和和 Wall發(fā)現(xiàn)紫杉醇粗提物對(duì)離發(fā)現(xiàn)紫杉醇粗提物對(duì)離體培養(yǎng)的鼠腫瘤細(xì)胞有很高活性，并開(kāi)始分離這種活性成份。由于該活性成體培養(yǎng)的鼠腫瘤細(xì)胞有很高活性，并開(kāi)始分離這種活性成份。由于該活性成份在植物中含量極低，直到份在植物中含量極低，直到1971年，他們才同杜克大學(xué)的化學(xué)教授姆克法年，他們才同杜克大學(xué)的化學(xué)教授姆克法爾（爾（Andre T. McPhail）合作，通過(guò)）合作，通過(guò)x-射線(xiàn)

7、分析確定了該活性成份的化射線(xiàn)分析確定了該活性成份的化學(xué)結(jié)構(gòu)學(xué)結(jié)構(gòu)一種四環(huán)二萜化合物，并把它命名為紫杉醇（一種四環(huán)二萜化合物，并把它命名為紫杉醇（taxol）。）。臨床應(yīng)用臨床應(yīng)用 臨床研究上，紫杉醇主要適用于卵巢癌和乳腺癌，對(duì)肺癌、大腸癌、臨床研究上，紫杉醇主要適用于卵巢癌和乳腺癌，對(duì)肺癌、大腸癌、黑色素瘤、頭頸部癌、淋巴瘤、腦瘤也都有一定療效。黑色素瘤、頭頸部癌、淋巴瘤、腦瘤也都有一定療效。 紫杉醇是新型抗微管藥物紫杉醇是新型抗微管藥物,通過(guò)促進(jìn)微管蛋白聚合抑制解聚通過(guò)促進(jìn)微管蛋白聚合抑制解聚,保持微管保持微管蛋白穩(wěn)定蛋白穩(wěn)定,抑制細(xì)胞有絲分裂。體外實(shí)驗(yàn)證明紫杉醇具有顯著的放射增敏作用，抑制

8、細(xì)胞有絲分裂。體外實(shí)驗(yàn)證明紫杉醇具有顯著的放射增敏作用，可能是使細(xì)胞中止于對(duì)放療敏感的可能是使細(xì)胞中止于對(duì)放療敏感的G2和和M期。期。 靜脈給予紫杉醇靜脈給予紫杉醇,藥物血漿濃度呈雙相曲線(xiàn)。本品蛋白結(jié)合率藥物血漿濃度呈雙相曲線(xiàn)。本品蛋白結(jié)合率89%98%,紫紫杉醇在肝臟代謝。紫杉醇主要在肝臟代謝，隨膽汁進(jìn)入腸道，經(jīng)糞便排出體杉醇在肝臟代謝。紫杉醇主要在肝臟代謝，隨膽汁進(jìn)入腸道，經(jīng)糞便排出體外（外（90%）。）。副作用副作用易引起過(guò)敏、骨髓抑制、心動(dòng)過(guò)緩、低血壓、易引起過(guò)敏、骨髓抑制、心動(dòng)過(guò)緩、低血壓、外圍神經(jīng)病、肌痛、關(guān)節(jié)痛、惡心、腹瀉、黏膜炎和禿頭癥等外圍神經(jīng)病、肌痛、關(guān)節(jié)痛、惡心、腹瀉、黏

9、膜炎和禿頭癥等：大多數(shù)抗癌藥物低的溶解度、低穩(wěn)定性和低吸收性，低生物利用度腸道或肝臟部位的細(xì)胞色素P450 酶對(duì)疏水性藥物有代謝胃液環(huán)境下或酸性條件下P-糖蛋白（P-gp）過(guò)表達(dá)引起了腫瘤組織的多藥耐藥性亟待解決的問(wèn)題1.穩(wěn)定存在于胃液環(huán)境3.在載體表面鍵接特定抗體或配體實(shí)現(xiàn)主動(dòng)靶向2.利用靶向治療控制藥物載體的納的粒徑在納米級(jí)能夠高通透和滯留（EPR）效應(yīng)實(shí)現(xiàn)被動(dòng)靶向?qū)崿F(xiàn)組織、器官或細(xì)胞的靶向改善的方面提高口服抗癌藥物的生物利用度的同時(shí)降低其毒副作用4.利用給藥載體的pH 敏感殼聚糖（CS）聚電解質(zhì)復(fù)合物（+-）殼聚糖納米微粒具有附著在生物體粘膜表面的特性，且生物薄膜表面的類(lèi)脂層的負(fù)電荷易發(fā)

10、生靜電吸附增強(qiáng)了大分子藥物透過(guò)粘膜吸收的能力，尤其適用于口服給藥途徑，延長(zhǎng)了藥物在體內(nèi)的循環(huán)時(shí)間，有效地提高藥物的生物利用度，減少副作用設(shè)計(jì)安全有效的殼聚糖給藥體系，適用于多肽、蛋白質(zhì)類(lèi)的藥物制劑殼聚糖及其衍生物能夠以凝膠、顆粒、片劑、薄膜及微囊等的形態(tài)包封藥物，應(yīng)用于藥物緩釋和定向輸送可降解性、低毒性、良好的生物相容性殼聚糖基聚電解質(zhì)復(fù)合物納米粒作為藥物載體具有控制藥物釋放延長(zhǎng)藥物療效、降低藥物毒副作用及提高疏水性藥物對(duì)細(xì)胞膜的通透性作用1、透明質(zhì)酸一種天然多糖是細(xì)胞外基質(zhì)的主要成份之一，具有低毒、生物相容性、可降解性及高度水合性等物理化學(xué)性能2.在一些惡性腫瘤或?qū)嶓w瘤邊緣組織發(fā)現(xiàn)了大量透明

11、質(zhì)酸受體CD44，它能夠與透明質(zhì)酸結(jié)合達(dá)到將其包吞的性能。3.透明質(zhì)酸酶是廣泛分布于腫瘤細(xì)胞外基質(zhì)，在降解透明質(zhì)酸的過(guò)程中扮演著重要角色?？偨Y(jié)實(shí)體瘤中CD44 與透明質(zhì)酸的這種關(guān)系，正好為化療藥物的靶向性輸送提供了一種可能的途徑，即通過(guò)透明質(zhì)酸與CD44 受體結(jié)合介導(dǎo)的胞吞作用將藥物靶向輸送到腫瘤細(xì)胞內(nèi)。透明質(zhì)酸納米粒納米粒（1）直徑小于500 nm，能在血液循環(huán)中經(jīng)由毛細(xì)血管到達(dá)腫瘤部位（2）納米材料載體可在體內(nèi)降解（1）.聚合物包封藥物進(jìn)而形成如籠和膠囊的納米結(jié)構(gòu)納米粒是指粒徑為10-1000 nm 的固態(tài)膠體顆粒，聚合物納米粒子已經(jīng)被廣泛地應(yīng)用于納米藥物載體作為理想的納米載藥輸送系統(tǒng)要有

12、以下特性三、載藥納米粒是通過(guò)以下兩種方式形成（2）通過(guò)一個(gè)簡(jiǎn)單的酯鍵或酰胺鍵化學(xué)連接藥物到聚合物骨架上禁食狀態(tài)下胃部的pH 大約為胃胃腸飯后胃膜細(xì)胞會(huì)分泌出酸來(lái)消化所吸收的食物此時(shí)胃部的pH 約為小腸最上端的pH 約為，中部和尾部的空腸和回腸pH 約為7.4。PHpH 大約為腫瘤細(xì)胞外腫瘤細(xì)胞內(nèi)正常組織細(xì)胞內(nèi)涵體內(nèi)pH 約為溶酶體內(nèi)pH 約為pH 約為7.4。PH實(shí)驗(yàn)預(yù)期CS/HA-PTX CNPs是表面富集殼聚糖的帶正電荷的聚電解質(zhì)復(fù)合納米 粒，而胃腸道組織中富含帶負(fù)電荷的糖胺多糖，通過(guò)兩者之間的正負(fù)電荷的相互 作用，明顯增加聚電解質(zhì)復(fù)合納米粒在胃腸道壁中的吸收和駐留，使得聚電解質(zhì)復(fù)合納米粒

13、能夠與胃腸粘膜上皮細(xì)胞充分接觸，被上皮細(xì)胞粘附并吸收，通過(guò) 殼聚糖打開(kāi)腸壁粘膜上皮細(xì)胞間結(jié)點(diǎn)，進(jìn)而使得HA-PTX NPs進(jìn)入血液循環(huán)，然 后通過(guò)透明質(zhì)酸介導(dǎo)的主動(dòng)靶向作用和EPR效應(yīng)成功地積聚在腫瘤組織。以pH敏感的 殼聚糖/透明質(zhì)酸-藥物的給藥系統(tǒng)，相比于游離的藥物溶液直接口服，能夠達(dá)到 保證藥物在胃腸道長(zhǎng)時(shí)間滯留，維持藥物在腫瘤部位的緩慢、持久釋放，進(jìn)而達(dá) 到提高腫瘤部位的藥物濃度，而且降低其對(duì)正常細(xì)胞的細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)方面實(shí)驗(yàn)方面 合成 檢測(cè)細(xì)胞毒性體內(nèi)組織分布實(shí)驗(yàn)釋放度PH影響胞吞實(shí)驗(yàn)婁瑩等.CYP2C9和VKORCI基因多態(tài)性對(duì)肺栓塞患者華法林維持劑量的影響J.中國(guó)藥物警戒，2012，

14、9（4）HA-PTX 較透明質(zhì)酸的主要區(qū)別在于 891、1378 及 2893 cm-1 處的吸收增強(qiáng)，1618 cm-1 處 C=O 雙鍵吸收峰變成尖銳的 強(qiáng)峰，證明了透明質(zhì)酸中的羧基發(fā)生了反應(yīng)且有新的甲基吸收出現(xiàn)，出現(xiàn)共軛 C=O 吸收峰，由此可以初步判定紫杉醇連接到了聚合物上化學(xué)位移在 7-8 ppm 的新峰代表了紫杉醇的特征峰，從而證明了我們利用化學(xué)共價(jià)鍵接成功合成了 HA-PTX。與紫杉醇對(duì)比，HA-PTX 鍵合物在 D2O 中紫杉醇在 7-8 之間的峰不明顯，而在它的良溶劑 DMSO-d6 中， 7-8 之間的峰明顯出現(xiàn)，這說(shuō)明形成的 HA-PTX 為核殼結(jié)構(gòu)。HA-PTX 鍵合物

15、中鍵合物中 PTX 的含量的含量 通過(guò)配置不同濃度的紫杉醇的乙腈溶液，用 HPLC 測(cè)試其出峰面積，以濃度 對(duì)峰面積作圖，得到紫杉醇的峰面積-濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)紫杉醇的峰面積與其濃度呈線(xiàn)性關(guān)系，經(jīng)擬合得： Y=7.4871110-5X，其中 Y 為紫杉醇濃度，X 為峰面積。根據(jù)此線(xiàn)性關(guān)系，測(cè)定 已知濃度 HA-PTX 鍵合物的出峰面積，可以計(jì)算出其中紫杉醇的濃度，進(jìn)而根 據(jù)公式 3-1 計(jì)算出 HA-PTX 中紫杉醇的含量為 10.6 wt%隨著 pH 值的增加，HA-PTX NPs 的電 位呈現(xiàn)下降的趨勢(shì)，由 5 mV 降低到-31 mV；當(dāng) pH 值為 2.1 時(shí)，納米粒的 Zeta 電位接近于

16、 0，說(shuō)明納米粒的 pKa 為 2.1.HA-PTX NPs的電位圖 3-7 A 為 HA-PTX 的電鏡照片，由材料的凍干粉再分散，制備濃度為 1 mg/mL 的材料，用透射電鏡觀察其形貌，平均粒徑 約為 50 nm 左右，呈球形，粒徑分布較均勻，分散性好。透明質(zhì)酸與紫杉醇通過(guò)共價(jià)鍵結(jié)合，自發(fā)地聚集形成殼-核的結(jié)構(gòu)，紫杉醇被保護(hù)在膠束的內(nèi)核中，膠 束外層由親水性的透明質(zhì)酸構(gòu)成。如圖 3-7 B 所示，由激光粒度儀測(cè)定的納米粒 的粒徑約為 80 nm 左右比之從 TEM 中觀察的要高，這是由于在用透射電鏡觀測(cè) 粒徑時(shí)納米粒是處于一個(gè)干態(tài)的，而在用激光粒度儀測(cè)定粒徑時(shí)，納米粒的親水 性部分能夠在

17、溶液中以一個(gè)伸展形式存在。圖 3-8 為通過(guò)熒光光譜法對(duì)一系列濃度的 HA-PTX 鍵合物水分散液進(jìn)行芘 激發(fā)光譜掃描后，以 I338/I333 對(duì)不同 HA-PTX 鍵合物濃度的對(duì)數(shù) logC 做的兩條 直線(xiàn)，如圖所示，當(dāng)鍵合物濃度較低時(shí)，呈現(xiàn)一條接近于水平的直線(xiàn)，當(dāng)鍵合物 濃度增大到一定程度時(shí)， I338/I333突然增大，這表明芘從親水環(huán)境中被包進(jìn)了疏水 區(qū)域，此時(shí)膠束開(kāi)始形成。兩條曲線(xiàn)的交點(diǎn)即是 HA-PTX 鍵合物的臨界膠束濃 度，大約是 110-3 mg/mL。小結(jié)一在 DCC 和 DMAP 的催化作用下，通過(guò)酯化反應(yīng)制備了 HA-PTX 鍵合物，F(xiàn)T-IR 及 1H-NMR 結(jié)果

18、表明，目標(biāo)產(chǎn)物被成功合成且可自組裝成核-殼 型結(jié)構(gòu)。HPLC 結(jié)果表明 HA-PTX 中紫杉醇的含量為 10.6 wt %。粒徑及電位結(jié) 果表明 HA-PTX 能在水中形成納米粒且 pKa 值為 2.1，TEM 說(shuō)明 HA-PTX 在水 中能自組裝成粒徑約為 80 nm 左右的納米粒，臨界膠束濃度為 110-3 mg/mLHA-PTX CNPs除了正負(fù) 電荷比（CS中的正電NH3+與HA-PTX中的負(fù)電-COO-）為1:1時(shí)，無(wú)法形成聚電解 質(zhì)復(fù)合納米粒，在其他電荷比如3:2、2:1、3:1和4:1時(shí)均能形成粒徑約為160-350 nm的CS/HA-PTX CNPs。當(dāng)正電荷的CS的量遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)

19、了帶負(fù)電荷的HA-PTX 時(shí)，過(guò)量的CS分子覆蓋在CS/HA-PTX CNPs表面，形成高溶解性的聚電解質(zhì)復(fù) 合納米粒。綜合各電荷比下的粒徑及載藥量，電荷比為2:1時(shí)聚電解質(zhì)復(fù)合納米 粒具有較小粒徑與較高載藥量，進(jìn)而取其為最佳合成條件CS/HA-PTX CNPs圖 4-2 A 中，在 2106 cm-1 和 1412 cm-1 處出現(xiàn)了吸收峰， 該峰的出現(xiàn)可能是由于為殼聚糖上的-NH3+與 HA-PTX 納米粒凍干粉上的-COO發(fā)生了靜電復(fù)合作用。 4CS/HA-PTX CNPs其中當(dāng)pH 值為5.0時(shí)，聚電解質(zhì)復(fù)合納米粒的粒徑最小，這就說(shuō)明此由聚陽(yáng)離子與聚陰離 子合成的聚電解質(zhì)復(fù)合納米粒在p

20、H 5.0時(shí)穩(wěn)定性最好。當(dāng)pH值為1.2或7.4時(shí)，聚 電解質(zhì)復(fù)合納米粒崩解，這是由于在pH 1.2下聚陰離子HA-PTX產(chǎn)生了去質(zhì)子化 作用而聚陽(yáng)離子殼聚糖在pH 7.4時(shí)發(fā)生去質(zhì)子化作用。CS/HA-PTX CNPs殼聚糖和HA-PTX 的pKa值分別為6.5和2.1。在pH 1.2（即飯后胃部pH）下，HA-PTX中的大部分羧 基去質(zhì)子化形成-COOH，CS與HA-PTX的靜電作用較弱，在此pH下形成的聚電 解質(zhì)復(fù)合納米粒很不穩(wěn)定，容易解體，如圖4-3 A所示。而pH 3.0時(shí)，CS/HA-PTX 形成粒徑在200 nm左右的聚電解質(zhì)復(fù)合納米粒，因此，CS/HA-PTX CNPs只能在

21、飯前服用（飯前胃部）CS/HA-PTX CNPs對(duì)比不同 pH 條 件下的三條曲線(xiàn)可知，HA-PTX NPs 具有 pH 敏感性。在酸性環(huán)境下 pH=3.0， pH=5.0，納米粒的藥物釋放速率要明顯高于在 pH=7.4 的釋放速率。這種現(xiàn)象主 要是由于在低 pH 值下，有利于聚合物材料的降解。HA 與紫杉醇通過(guò)酯鍵連接， 酸性條件可以促進(jìn)酯鍵的水解，從而有利于藥物的釋放。因此，紫杉醇從 HA-PTX NPs 中的釋放在酸性條件下釋放速率要比中性條件快。 CS/HA-PTX CNPsHA-PTX NPs 在 pH 3.0（禁食胃液環(huán)境）下兩小時(shí)紫杉醇的累計(jì)釋放 率大概為 19 %，CS/HA-

22、PTX CNPs 的釋放在 pH 3.0 下兩小時(shí)紫杉醇的累計(jì)釋放 率大概為 8 %，由此可以看出，聚電解質(zhì)納米粒外殼富余的殼聚糖可以保護(hù) PTX 在酸性條件不從 HA-PTX NPs 中釋放出來(lái)。CS/HA-PTX CNPs圖 4-7 主要是模擬飯前口服給藥的吸收，飯前服用藥物制劑其在胃里的存留 時(shí)間大概在兩小時(shí)左右，由圖 4-7 可知，在禁食胃液環(huán)境中，CS/HA-PTX CNPs 中紫杉醇的累計(jì)釋放率大概在 11 %左右，能夠很好的保持紫杉醇的穩(wěn)定性進(jìn)而 到達(dá)小腸部位。而當(dāng)其進(jìn)入小腸部位時(shí)，腸液的 pH 值在 6.0-7.0 間，在此時(shí)間段 內(nèi) CS/HA-PTX CNPs 中紫杉醇的累

23、計(jì)釋放率達(dá)到 35 %左右根據(jù)此線(xiàn)性 關(guān)系，測(cè)定已知濃度 RB-HA-PTX NPs 溶液的吸光度，可以計(jì)算出其中羅丹明 B 的濃度，計(jì)算出 RB-HA-PTX NPs 中羅丹明 B 的含量為 5.1 %羅丹明在細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)內(nèi)均有 分布，并且熒光強(qiáng)度很強(qiáng)，然而進(jìn)入正常細(xì)胞的納米粒相對(duì)來(lái)說(shuō)非常少。這主要 是由于癌細(xì)胞表現(xiàn)活躍，RB-HA-PTX NPs能夠通過(guò)胞吞作用進(jìn)入癌細(xì)胞而只能 通過(guò)擴(kuò)散作用進(jìn)入正常細(xì)胞。胞吞圖 B 與 D 比 較可知，加有游離透明質(zhì)酸的 RB-HA-PTX NPs 被細(xì)胞胞吞的量相對(duì)于 RB-HA-PTX NPs 來(lái)說(shuō)明顯降低，說(shuō)明 B 中增加的游離透明質(zhì)酸與 RB-H

24、A-PTX NPs 溶液產(chǎn)生了競(jìng)爭(zhēng)，也就表明透明質(zhì)酸介導(dǎo)納米粒內(nèi)吞入胞的有效性。綜上所 述，RB-HA-PTX NPs 進(jìn)入細(xì)胞是通過(guò)透明質(zhì)酸受體介導(dǎo)的并且可以保護(hù) PTX 不 被泵出細(xì)胞膜。當(dāng)空白材料濃度為100 g/mL時(shí)，HepG2細(xì)胞和NIH-3T3細(xì)胞的細(xì)胞存活率分別為 93 %和79 %，這充分說(shuō)明空白材料HA對(duì)于HepG2細(xì)胞和NIH-3T3細(xì)胞來(lái)說(shuō)均具 有良好的生物相容性。圖4-13B為紫杉醇制劑及HA-PTX NPs對(duì)HepG2細(xì)胞的細(xì)胞 存活狀況，結(jié)果表明，紫杉醇制劑及HA-PTX NPs對(duì)于HepG2細(xì)胞具有一定的細(xì) 胞毒性，并呈現(xiàn)良好的劑量依賴(lài)性熒光成像圖4-15為用RB熒光標(biāo)記的 口服CS/HA-PTX CNPs和紫杉醇溶液12 h后，各組織藥物的分布情況。口服游離 藥物后，藥物主要分布在肝臟，腎臟、胃部和小腸，在腫瘤部位的分布很少，這 說(shuō)明直接口服藥物會(huì)很快被肝臟及腎臟代謝掉，進(jìn)入腫瘤部位進(jìn)而發(fā)揮藥效的藥物很少小結(jié)二（1）CS/HA-PTX CNPs 在正負(fù)電荷比為 2:1 時(shí)測(cè)得的粒徑約為 120