軟肝顆粒對四氯化碳復(fù)合法致肝纖維化大鼠血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶等

1、軟肝顆粒對四氯化碳復(fù)合法致肝纖維化大鼠血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶等 作者：畢紅征 薛敬禮 黃國鈞 章金濤 王純耀【摘要】 目的研究軟肝顆粒（HG顆粒）對CCl4（四氯化碳）復(fù)合法致肝纖維化大鼠血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、總蛋白(TP )、白蛋白（ALb）及球蛋白（Glob）含量的影響。方法70只SD大鼠，除空白對照組10只外，其余各組大鼠皮下注射CCl4，同時(shí)給予高脂飼料和20%乙醇喂養(yǎng)6周建立肝纖維化大鼠模型，存活大鼠用分組軟件按性別、體重隨機(jī)分為5組，分別予HG顆6，3，1.5 g/kg 3個(gè)劑量組、復(fù)方鱉甲軟肝片1.0 g/kg灌胃4周。對照觀察兩藥物對模型

2、大鼠血清ALT，AST，TP，Alb及Glob的影響。結(jié)果模型大鼠血清ALT、AST活力顯著增高，血清TP含量略升高，Alb含量顯著降低，Glob含量顯著升高。HG顆粒治療后降低ALT和AST活性，降低TP和Glob含量，增加Alb含量，復(fù)方鱉甲軟肝片亦可降低ALT，AST活性，降低TP和Glob含量，增加Alb含量。綜合療效HG顆粒優(yōu)于復(fù)方鱉甲軟肝片。結(jié)論HG顆粒能有效治療CCl4復(fù)合法所致肝纖維化大鼠。 【關(guān)鍵詞】 HG顆粒； 丙氨酸氨革轉(zhuǎn)移酶； 天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶； 總蛋白； 白蛋白； 球蛋白Abstract：ObjectiveTo explore the effects of HGKL

3、 on ALT，AST，TP，Alb and Glob in blood serum of HF model rats. MethodsSeventy SD rats excluding ten in blank group, were injected hypodermicly by carbon tetrar-chloride,at the same time they were fed with the high fat food and 20% ethyl alcohol for six weeks to establish HF model rats.Existing rats we

4、re divided into five groups based on sex and weight by grouping software.The HF rats were administered HGKL 6，3，1.5 g/kg and FFBJRGP 1.0g/kg respectivly for four weeks. ALT，AST，TP，Alb and Glob in blood serum were determined.ResultsActivities of ALT and AST in blood serum of model rats increased mark

5、edly as compared with blank group. The content of TP increased softly,Alb decreased markedly,Glob increased markedly. Compared with model group, activities of ALT and AST，and the contents of TP and Glob in HGKL groups decreased，Alb increased. Activities of ALT and AST in FFBJRGP group decreased，cont

6、ents of TP and Glob decreased，contents of Alb increased.The comprehensive action of HGKL was better than that of FFBJRGP. ConclusionHGKL has protective effects on HF rats induced by CCl4 compounded other factors.Key words：HGKL； ALT； AST； TP； Alb； Glob 肝纖維化(hepatic fibrosis)是各種慢性肝病進(jìn)展中由于肝內(nèi)纖維生成與降解失衡，導(dǎo)致

7、過多的膠原在肝內(nèi)沉積所致，常伴有炎癥并可為肝硬化1。肝纖維化是慢性肝病重要的病理特征，也是肝硬化發(fā)生的前奏和必經(jīng)中間環(huán)節(jié)。阻斷肝纖維化的發(fā)生和發(fā)展，對防治肝硬化和慢性肝病具有重要意義2。美國著名肝病學(xué)家Hans Popper指出:“誰能阻止或延緩肝纖維化的發(fā)生，誰將治愈大多數(shù)慢性肝病”。軟肝顆粒(HG顆粒)是由丹參、桃仁等中藥組成的復(fù)方制劑, 此方來源于知名專家的多年臨床經(jīng)驗(yàn)，對肝纖維化有著良好的治療效果。本實(shí)驗(yàn)旨在觀察HG顆粒對CCl4 及高脂和乙醇造成的肝纖維化大鼠ALT，AST，TP，Alb及Glob的影響，評價(jià)其療效。1 材料與方法1.1 藥物、動(dòng)物、儀器與試劑HG顆粒 10 g生藥/

8、袋，成都中醫(yī)藥大學(xué)中藥炮制制劑學(xué)教研室提供，批號：041014。主要成分：丹參、桃仁、白芍、柴胡、黃芪、漢防己、冬蟲夏草等；復(fù)方鱉甲軟肝片 0.5 g/片，內(nèi)蒙古福瑞中蒙藥科技有限公司出品，批號：20030710。成分： 鱉甲、三七、赤芍、冬蟲夏草、連翹、當(dāng)歸、紫河車、莪術(shù)、黨參、黃芪、板藍(lán)根。以上藥物在臨用時(shí)以蒸餾水配成相應(yīng)濃度的溶液備用。 健康SD大鼠70只，普通級，雌雄各半，3個(gè)月齡，190230g，成都中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物質(zhì)量合格證號：川實(shí)動(dòng)管質(zhì)第11號，溫度：2025，濕度：40%70%。 7530紫外可見分光光度計(jì)，Agilent公司產(chǎn)品；TG16-WS高速離心機(jī)，湖南

9、賽特儀器廠產(chǎn)品；HANGPING FA1104天平，上海良平儀器儀表有限公司產(chǎn)品。 CCl4分析純，徐州試劑廠產(chǎn)品，批號：00210201。橄欖油溶液，北京芳草醫(yī)藥公司，批號：010315；膽固醇，沈陽濟(jì)世制藥有限公司，批號：020425；ALT試劑盒，四川省邁克科技公司產(chǎn)品，批號：040302；AST試劑盒，四川省邁克科技公司產(chǎn)品，批號：040205；TP試劑盒，四川省邁克科技公司產(chǎn)品，批號：040102；Alb試劑盒，四川省邁克科技公司產(chǎn)品，批號：040404。1.2 模型建立及分組70只SD大鼠，除空白對照組大鼠10只外，其余60只第1周（首次）用純CCl45ml/kg對大鼠背部皮下注射

10、，第26周用40%CCl4-橄欖油3ml/kg對大鼠背部皮下注射，每周兩次。同時(shí)第16周內(nèi)，以高脂玉米粉飼料（79.5%玉米粉、20%豬油、0.5%膽固醇）喂養(yǎng)大鼠，并以20%乙醇作為大鼠的唯一飲水。連續(xù)6周，復(fù)制大鼠肝纖維化模型35。從第7周開始，按上述組別灌胃給予相應(yīng)的藥物或蒸餾水，空白對照組：蒸餾水0.1ml/kg體重；模型對照組：蒸餾水0.1ml/kg體重；HG顆粒高、中、低3個(gè)劑量組：6，3，1.5 g生藥/kg；復(fù)方鱉甲軟肝片組：1 g/kg，1次/d，連續(xù)4周。1.3 指標(biāo)測定與方法末次給藥后24h，從大鼠髂外靜脈放血，收集血液分離血清，冷藏待測。改良賴氏法測定血清ALT，AST

11、含量，雙縮脲法測定血清TP和Alb含量，血清Glob含量。1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理所有數(shù)據(jù)均采用SPSS12.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，多組間比較用單因素方差分析，多組間兩兩比較用q檢驗(yàn)（SNK法）。各項(xiàng)指標(biāo)結(jié)果均以s表示。2 結(jié)果2.1 HG顆粒對CCl4復(fù)合法致肝纖維化大鼠血清ALT及AST活性的影響結(jié)果見表1。從表1可知，肝纖維化模型形成后，模型組大鼠血清ALT和AST活性比空白組大鼠升高77.44%（P0.01）和56.34%（P0.01）。HG顆粒治療4周后，3劑量組使ALT活性分別降低43.2%，40.9%和32.7%（P均0.01）。HG顆粒高、中劑量組分別降低AST活性27.3%和20.9%

12、（P0.05）。復(fù)方鱉甲軟肝片亦能降低模型大鼠血清ALT及AST活性。表1 各組大鼠血清ALT及AST活性的變化（略）與模型對照組比較，*P0.05，*P0.05），模型組大鼠血清Alb含量比空白組降低15.63%（P0.05），模型組大鼠血清Glob含量比空白組增高10.4%（P0.05），10.8%（P0.05）。高、中劑量組分別使Alb增加21.5%（P0.05）和30.8%（P0.01）。高、中劑量使Glob含量分別降低16.7%和25.1%（P0.01）。復(fù)方鱉甲軟肝片對模型大鼠TP和Glob含量亦有顯著降低作用（P0.01）。1 3 討論 中醫(yī)藥肝纖維化有悠久的，肝纖維化屬中醫(yī)“脅

13、痛”范疇，中藥復(fù)方治療是祖國醫(yī)學(xué)的特點(diǎn)所在，復(fù)方的療效往往優(yōu)于單味藥物。中醫(yī)中藥治療肝纖維化，具有療效顯著、費(fèi)用相對低廉、且毒副反應(yīng)少的特點(diǎn)6。肝纖維化的病機(jī)關(guān)鍵是熱毒瘀結(jié)，肝脾損傷7。表2 各組大鼠血清TP，Alb，Glob含量的變化（略）與模型對照組比較，*P0.05，*P0.01；n=10 CCl4誘導(dǎo)的大鼠肝纖維化動(dòng)物模型在形態(tài)學(xué)、病理生的某些方面與人的肝纖維化十分相似。但單一因素注射CCl4造模雖然操作簡單，但制備的周期長，成模比例低，且死亡率較高，因此，我們采用CCl4、高脂食物、酒精復(fù)合因素制作肝纖維化模型，此種模型可靠且復(fù)制時(shí)間短、形成率高、死亡率低、肝纖維化進(jìn)展穩(wěn)定，適合于以

14、引起肝細(xì)胞損傷為始動(dòng)機(jī)制的肝纖維化發(fā)生過程的動(dòng)態(tài)研究8。 HG顆粒由丹參、桃仁、白芍、柴胡、黃芪、漢防己、冬蟲夏草藥物組成。丹參、桃仁活血養(yǎng)血，化瘀止痛為君；白芍、柴胡柔肝養(yǎng)肝為臣；佐以黃芪益氣健脾；冬蟲夏草益精補(bǔ)腎；漢防己行水消腫，清利濕熱。全方配伍，共奏活血化瘀、軟堅(jiān)散結(jié)、補(bǔ)養(yǎng)正氣之效。與復(fù)方鱉甲軟肝片相比，HG顆粒減少了化積通絡(luò)的藥物如鱉甲、莪術(shù)等，減少了補(bǔ)益藥物紫河車，增加了柔肝養(yǎng)肝止痛的白芍、柴胡。如此組方，是因?yàn)楦卫w維化屬于肝硬化起始階段，正氣不甚虛弱，瘀結(jié)不甚頑固，故藥味有別于治療肝硬化療效良好的復(fù)方鱉甲軟肝片。 HG顆?？梢燥@著降低肝纖維化大鼠血清ALT 和AST的活性。ALT

15、 和AST是反映肝細(xì)胞膜損傷的最敏感指標(biāo)，肝細(xì)胞膜的損傷，導(dǎo)致ALT 和AST大量溢入血液中，導(dǎo)致血清中ALT 和AST急劇升高。血清中ALT 和AST水平高低可以敏感地反映肝細(xì)胞損傷的程度9。提示HG顆粒通過保護(hù)肝細(xì)胞膜，改善肝損傷，對肝功能有著良好的保護(hù)作用，從而防止肝纖維化的發(fā)生和發(fā)展。 肝纖維化模型形成后，肝纖維化大鼠血清TP，Alb和Glob的代謝發(fā)生了異常變化，血清TP含量略升高，Alb含量顯著降低，Glob含量顯著升高，HG顆粒對其有著良好的調(diào)節(jié)作用，表明HG顆粒能有效改善肝纖維化大鼠的血清蛋白紊亂狀況?！尽?1 肝臟病學(xué)會(huì)肝纖維化學(xué)組.肝纖維化診斷及療效評估共識(shí)J.中華肝臟病雜志,2002,10(5):327.2 Friedman SL.Hepatic fibrosis.in:Schiff ER,Sorrell MF,Maddrey WC,eds.Schiffs Diseases of Liver.8thedM.Philadelphia:Lippncott-Raven,1999:371.3 付沛藩.小兒乙肝膠囊對大鼠肝纖維化的防治作用J.中西醫(yī)結(jié)合肝病雜志,1999,9(3):25.4 楊彥芳.王氏抗肝纖方治療肝纖維化的實(shí)驗(yàn)研究J.中國中西醫(yī)結(jié)合肝病雜志,2000,10(3):19.5 王