２型糖尿病心血瘀證病證結(jié)合模型大鼠心血管指標(biāo)病理改變的觀察

1、型糖尿病心血瘀證病證結(jié)合模型大鼠心血管指標(biāo)病理改變的觀察    何軍鋒謝夢(mèng)洲田浩梅陳楚桃莫楠摘要：目的：觀察2型糖尿痛心血瘀證病證結(jié)合大鼠模型的心血管指標(biāo)的病理改變。方法：采用高脂高熱量飼料喂養(yǎng)并結(jié)合小劑量鏈脲佐茵素(STZ)腹腔注射的方法制備實(shí)驗(yàn)性2型糖尿病大鼠模型，在此模型基礎(chǔ)上再予強(qiáng)的松龍和腎上腺素注射制備2型糖尿痛心血瘀證大鼠模型。結(jié)果：與其它各組比較，2型糖尿痛心血疼證模型大鼠的心臟濕重與體重的比值顯著性增高(P0.01)、心電圖ST段下移幅度顯著性增大(P0.0l或P0.05)、主動(dòng)脈與心肌形態(tài)學(xué)均有不同程度的病理改變。結(jié)論：2型糖尿痛心血瘀

2、證大鼠模型具有心血管病理的改變。關(guān)鍵詞：2型糖尿??；心血瘀證；大鼠；心血管病理中圖分類號(hào)：R285.5文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：16737717(2007)07136503糖尿病心臟病是糖尿病的主要并發(fā)癥之一，主要涉及心臟的大、中、小及微血管，包括非特異性冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病、特異性糖尿病心肌病、糖尿病植物神經(jīng)性心臟病等病變，是糖尿病人的主要死亡原因。糖尿病心臟病多見(jiàn)于中醫(yī)2型糖尿病心血瘀阻證。在控制血糖的基礎(chǔ)上。中藥復(fù)方多靶點(diǎn)干預(yù)使得中醫(yī)藥治療糖尿病具有比較優(yōu)勢(shì)。研制2型糖尿病心血瘀證動(dòng)物模型可為臨床藥物評(píng)價(jià)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，且有利于發(fā)揮中醫(yī)藥治療糖尿病心血管并發(fā)癥的優(yōu)勢(shì)作用，因而筆者進(jìn)行了

3、以下工作。1材料與方法11動(dòng)物處理清潔級(jí)雄性Wistar大鼠46只(由湖南中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供)，隨機(jī)分為空白對(duì)照組、糖尿病組、心血淤證組、糖尿病心血瘀證組(以下簡(jiǎn)稱模型組)等4組，每組12只?？瞻讓?duì)照組喂以普通飼料，其余3組喂以高脂飼料4周(10脂肪、1膽固醇、10蛋黃粉、0.2甲基硫氧嘧啶、78.8普通飼料，由湖南中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供)。4周后糖尿病組和模型組大鼠按35mg/kg腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ)。7天后模型組每只大鼠肌注0.1強(qiáng)的松龍0.1mL，連續(xù)13天，第14天每只大鼠皮下注射0.1腎上腺素1mL，再喂養(yǎng)15天。心血瘀證組、糖尿病組在模型組肌注強(qiáng)的松龍和皮下注射

4、腎上腺的同時(shí)均予等劑量的生理鹽水注射。糖尿病組和模型組大鼠坶在實(shí)施腹腔注射STZ后恢復(fù)普通飲食，而心血瘀證組于高脂飼料直至實(shí)驗(yàn)結(jié)束。整個(gè)實(shí)驗(yàn)持續(xù)60天，全部大鼠同時(shí)處死。12心電圖檢測(cè)大鼠麻醉后，使用Pdab生物醫(yī)學(xué)信號(hào)采集處理系統(tǒng)(北京微信斯達(dá)科技發(fā)展有限責(zé)任公司產(chǎn)品)記錄大鼠心電圖，將針形電極刺于大鼠四肢的皮下，紅色電極與右上肢相連，黃色電極與左上肢相連。黑色電極與右下肢相連。設(shè)置參數(shù)為(20Hz，4000)，以心電圖的標(biāo)準(zhǔn)導(dǎo)聯(lián)的ST段的下移程度作為衡量心肌的缺血程度的指標(biāo)。每只大鼠取5個(gè)心動(dòng)周期進(jìn)行分析，觀察ST段的變化值，以其平均數(shù)為標(biāo)準(zhǔn)，ST段的偏移，以TP線作為基線。13 切片制備

5、實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，10的烏拉坦腹腔注射麻醉大鼠，先行心電圖檢測(cè)后開(kāi)胸，剝離總動(dòng)脈，取出心臟，心臟稱重后10的中性福爾馬林固定，制備石蠟切片用于組織病理光鏡觀察。主動(dòng)脈于10的中性福爾馬林固定，制備石蠟切片用于組織病理光鏡觀察。2 結(jié)果21血糖和紅細(xì)胞壓積模型組血糖與糖尿病組、心血瘀證組、空白對(duì)照組比較均有升高(P0.01)；糖尿病組的血糖與空白對(duì)照組、心血瘀證組比較也有升高(P0.01)；而心血瘀證組與空白對(duì)照組差異無(wú)顯著性意義(P0.05)；該結(jié)果提示模型組、糖尿病組的2型糖尿病模型是成功的。紅細(xì)胞壓積比較，3組與正常對(duì)照組有顯著性或極顯著性差異(P0.01或P0.05)；模型組亦高于心血瘀證組(

6、P0.05)；提示模型組血液瘀積最為嚴(yán)重(見(jiàn)表1)。22 心肌光鏡觀察的結(jié)果光鏡下，模型組心肌細(xì)胞有炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、細(xì)胞壞死和肌纖維斷裂；而糖尿病組可見(jiàn)細(xì)胞輕度水腫，細(xì)胞壞死和肌纖維斷裂現(xiàn)象不明顯；心血瘀證組心肌排列較紊亂，心肌細(xì)胞水腫；空白對(duì)照組心肌則無(wú)任何異常。23 主動(dòng)脈光鏡觀察結(jié)果光鏡下，模型組的主動(dòng)脈有斑塊；糖尿病組冠狀動(dòng)脈前降支血管周?chē)醒装Y；心血瘀證組內(nèi)壁下層增厚，出現(xiàn)前期斑塊；空白對(duì)照組主動(dòng)脈光滑、無(wú)炎癥且無(wú)斑塊。24 心臟濕重與體重比值心電圖ST下移值結(jié)果與其他3組比較，模型組心臟濕重與體重的比值最大(P0.01)，提示該組大鼠心臟已有擴(kuò)大。心電圖結(jié)ST下移結(jié)果顯示，與其他3組

7、比較，模型組下降最大(P0.01或P0.05)，提示模型組大鼠存在缺血現(xiàn)象，符合糖尿病基礎(chǔ)上并發(fā)心血管疾病心電圖改變的特征(見(jiàn)表2)。3 討論心臟的病變是糖尿病最危險(xiǎn)的并發(fā)癥之一，流行病學(xué)顯示糖尿病伴發(fā)冠心病較同年齡、同性別的非糖尿病人群高4倍左右，死亡率增高56倍，2型糖尿病患者死于冠心病已超過(guò)50。對(duì)于糖尿病心病，中醫(yī)以心血瘀證糖尿病常見(jiàn)。糖尿病為本虛標(biāo)實(shí)的慢性疾病，常以燥熱為標(biāo)。陰虛為本。糖尿病患者久病之后，病乃入絡(luò)，血脈瘀阻，或因病損及陽(yáng)，氣陽(yáng)虛弱不能推動(dòng)血脈，導(dǎo)致痰濕等瘀阻心脈，心脈失常，最終表現(xiàn)為心血瘀證，故消渴患者常伴有心前區(qū)憋悶、疼痛，舌質(zhì)紫黯或有瘀阻等臨床特征。中醫(yī)藥在糖尿病

8、并發(fā)癥的防治中具有比較優(yōu)勢(shì)。然而，病證結(jié)合模型的缺乏限制了中醫(yī)藥的應(yīng)用。因而，開(kāi)展糖尿病心血瘀證模型的研制對(duì)于防治糖尿病心臟病以及篩選有效方劑均具有重要意義。STZ常和高脂飲食用來(lái)誘導(dǎo)糖尿病模型，此法較成熟、可靠。本研究采用此法發(fā)現(xiàn)模型組大鼠血糖高于正常組，因而筆者用小量STZ和持續(xù)4周高脂高熱量飼料喂養(yǎng)誘導(dǎo)出的糖尿病模型是可靠的。較長(zhǎng)時(shí)間的高脂飲食可誘發(fā)心血管的病理改變。文獻(xiàn)表明，以高脂飲食(配方：在80普通飼料中加入14蛋黃粉、1膽固醇、5豬油)喂養(yǎng)新西蘭大耳兔，42天后隨機(jī)抽取2只處死，取胸主動(dòng)脈標(biāo)本制作病理切片，可發(fā)現(xiàn)主動(dòng)脈斑塊出現(xiàn)。以高脂飲食(5豬油、2膽固醇、0.5膽酸鈉、92.5

9、基礎(chǔ)飼料、2mL/只蛋黃)喂養(yǎng)大鼠，6周后測(cè)血脂等指標(biāo)均升高，內(nèi)膜可出現(xiàn)斑塊。本研究中筆者觀察到心血瘀證組動(dòng)物在喂以高脂飲食60天后，可見(jiàn)血脂增高、主動(dòng)脈內(nèi)壁下層增厚伴前期斑塊。脂濁作為一種高凝狀態(tài)，紅細(xì)胞壓積偏高和心血管形態(tài)學(xué)改變可認(rèn)為心血瘀證模型成功。既然較長(zhǎng)時(shí)間的高脂飲食可誘發(fā)心血管病變且在此基礎(chǔ)上STZ也可誘發(fā)糖尿病模型，為何不采用持續(xù)6周的高脂飲食和STZ誘導(dǎo)出糖尿病心血瘀證模型?筆者預(yù)實(shí)驗(yàn)表明，采用這種方法確實(shí)可誘導(dǎo)出糖尿病心血瘀證模型，但由于動(dòng)物死亡率太高(高達(dá)70的死亡率)，故認(rèn)為此法在大規(guī)模藥物篩選時(shí)作為病證模型不符合實(shí)驗(yàn)要求。通過(guò)分析，筆者認(rèn)為此法高死亡率的主要原因是長(zhǎng)時(shí)間

10、高脂飲食和STL會(huì)加重糖、蛋白質(zhì)和脂肪代謝紊亂，這種快速進(jìn)展型的紊亂可使細(xì)胞獲能減少、缺氧等，從而出現(xiàn)心肌廣泛性灶性壞死等損害。為提高糖尿病心血瘀證模型的成功率，筆者擬在STZ誘導(dǎo)糖尿病模型的基礎(chǔ)上改進(jìn)心血瘀證的造模方法。通過(guò)文獻(xiàn)復(fù)習(xí)，對(duì)于血瘀證模型的制備有暴怒寒凝模型(皮下注射大劑量腎上腺素注射液模擬“暴怒”，以冰水浸泡模擬“寒邪”侵襲)，外傷受損模型(重錘造成擊傷模型)，氣虛血瘀模型(饑餓合灌服心得安，同時(shí)靜注10高分子右旋糖酐)等。比較了各種模型的優(yōu)劣，筆者擬在STZ糖尿病模型基礎(chǔ)上加用糖皮質(zhì)激素、腎上腺素法。腎上腺注射是血瘀證的常用方法，它常引起紅細(xì)胞聚集而造成邪侵絡(luò)脈的機(jī)體狀態(tài)，而糖

11、皮質(zhì)激素在“保護(hù)”機(jī)體的同時(shí)，可升高血糖、且對(duì)腎上腺素誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞肥大的促進(jìn)作用。因而，在糖尿病模型的基礎(chǔ)上兩者合用能更好地模擬心血瘀證?？傊瑢?shí)驗(yàn)表明在SIZ基礎(chǔ)上加激素和腎上腺素誘導(dǎo)的糖尿病心血瘀阻證模型。除具有高血糖、主動(dòng)脈和心肌形態(tài)病理改變、心電圖異常、心臟濕重與體重的比值改變外，其造模率也高(成模率為77)。因而，該模型可作為糖尿病心血管并發(fā)癥動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究模型，有利于該病證的病理病機(jī)的研究以及治療，有利于發(fā)揮中醫(yī)藥治療糖尿病心血管并發(fā)癥的優(yōu)勢(shì)作用。    相關(guān)論文    · 別讓“小胖墩”成為“小糖人”/兒童糖尿病有何征兆/父母要為孩子健康保駕護(hù)