麝香銀杏葉滴丸對家兔動脈粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性的影響

1、麝香銀杏葉滴丸對家兔動脈粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性的影響                          作者：王志剛 沈明勤 胡政力 沈建平 程婷婷 【摘要】  目的復制實驗性家兔動脈粥樣硬化（AS）斑塊模型，觀察麝香銀杏葉滴丸對模型家兔AS斑塊的影響。方法40只家兔隨機分為正常對照組、模型對照組、辛伐他汀組和麝香銀杏葉滴丸高、低劑

2、量組，正常對照組給予普通飼料，其它實驗組供給致動脈粥樣硬化飼料，喂養(yǎng)45 d。觀察麝香銀杏葉滴丸對家兔AS斑塊的形態(tài)學影響，測定MMP9，纖維帽厚度、中心脂質面積、斑塊面積和主動脈血管切面中總的斑塊數、血栓數。結果麝香銀杏葉滴丸能明顯降低家兔動脈粥樣硬化斑塊纖維帽厚度與中心脂質面積比值、中心脂質面積與斑塊面積比值，能夠減少斑塊數和血栓數的發(fā)生，主動脈組織中的MMP9與蛋白含量比值亦有降低趨勢。結論麝香銀杏葉滴丸具有一定的穩(wěn)定家兔主動脈粥樣硬化斑塊的作用。 【關鍵詞】  麝香銀杏葉滴丸 動脈粥樣硬化斑塊 穩(wěn)定性動脈粥樣硬化斑塊不穩(wěn)定性與多種參與動脈粥樣硬化（atherosclerosi

3、s,As）形成的因素有關。本文采用實驗性家兔AS斑塊模型，觀察了麝香銀杏葉滴丸灌胃給藥后，對模型家兔AS斑塊穩(wěn)定性的影響，探討麝香銀杏葉滴丸對AS斑塊的穩(wěn)定性作用的研究?，F(xiàn)報道如下。1  材料1.1  動物普通級家兔，雄性，體重2.02.5 kg，購于金陵種兔場，合格證號：SCXK（蘇）2002-0025；動物飼養(yǎng)環(huán)境：本院實驗動物中心，清潔級，合格證號：SYXK（蘇）2002-007。1.2  試藥麝香銀杏葉滴丸（棕褐色干粉），含生藥材2.89 g/g粉，批號：20060622，由江蘇省中醫(yī)藥研究院制劑室提供。辛伐他汀 20 mg×14片，批號：060

4、301，宜昌長江藥業(yè)有限公司。膽固醇,含量93.2%，批號：20060729，淮北市創(chuàng)凱生化原料廠產品。膽酸鈉,含量66.5%，批號：20060620，淮北市創(chuàng)凱生化原料廠產品。丙硫氧嘧啶片 50 mg×100片，批號： 0600201，廣東華南藥業(yè)有限公司產品。2  方法152.1  兔動脈粥樣硬化模型的制備取雄性健康家兔40只，體重2.02.5 kg，隨機分為5組，每組8只，分別為正常對照組、模型對照組、辛伐他汀組和麝香銀杏葉滴丸高、低劑量組。正常對照組給予普通飼料，其它實驗組供給致動脈粥樣硬化飼料（5%豬油，1%膽固醇，10%蛋黃，0.5%膽酸鈉，0.2%丙

5、基硫氧嘧啶），每日每只100 g，自由飲水，連續(xù)喂養(yǎng)45 d。2.2  給藥途徑和劑量從造模第1天起，按組分別給藥。麝香銀杏葉滴丸高劑量為1.82 g 生藥/kg（此劑量約相當于擬臨床人用等效劑量的4倍），低劑量為0.46 g生藥/kg，辛伐他汀的劑量為2.5 mg/kg，正常對照組和模型對照組給予等體積的消毒飲用水，將供試藥品配成相應濃度后，灌胃給藥，各組動物給藥量均為5 ml/kg，1次/d，連續(xù)給藥45 d。2.3  組織的采集實驗結束前24 h，禁食不禁水，實驗當日空氣栓塞處死動物，開胸分離從升主動脈直至橫膈部的主動脈段，去除外膜的脂肪組織，用生理鹽水沖洗干凈，截取

6、主動脈弓所在一段約1.0 cm血管環(huán)，置于10%福爾馬林液中固定，供病理組織學檢查切片使用，以觀察主動脈斑塊的形態(tài)學特點。余下血管速凍后于-70保存，供測定MMP9使用。2.4  主動脈斑塊染色將10%福爾馬林液固定的約1.0 cm主動脈血管環(huán)脫水，常規(guī)石臘包埋切片，把主動脈血管4等分，每個等分主動脈血管切面取連續(xù)的兩張切片分別進行HE染色和MASSON染色。通過機圖像分析儀進行分析，選取4個等分主動脈血管切面中最大的一個斑塊，測量纖維帽厚度、中心脂質面積、斑塊面積，計算纖維帽厚度/中心脂質面積的比值、中心脂質面積/斑塊面積(%)的比值；測定四個等分主動脈血管切面中總的斑塊數、血栓數

7、。2.5  結果統(tǒng)計以±s表示，統(tǒng)計學處理均采用等方差假設t-檢驗，各組結果均與模型對照組進行比較。3  結果3.1  麝香銀杏葉滴丸對家兔主動脈粥樣硬化不穩(wěn)定斑塊的形態(tài)學的影響表1  麝香銀杏葉滴丸對纖維帽厚度/中心脂質面積比值的影響（略）與模型對照組比較，*P<0.05；n=8    麝香銀杏葉滴丸高劑量組和辛伐他汀組，與模型組比較，維帽厚度/中心脂質面積比值明顯升高，有顯著性統(tǒng)計學差異（P<0.05）；麝香銀杏葉滴丸低劑量組僅有一定的升高趨勢。表2  麝香銀杏葉滴丸對斑塊數、血栓數的影響

8、（略）與模型對照組比較，*P<0.05；n=8    麝香銀杏葉滴丸高、低劑量組和辛伐他汀組4個等分主動脈血管切面中總的斑塊數，與模型組比較明顯減少，有顯著性統(tǒng)計學差異（P<0.05）。    麝香銀杏葉滴丸高劑量組和辛伐他汀組4個等分主動脈血管切面中總的血栓數，與模型組比較也有明顯減少（P<0.05）。麝香銀杏葉滴丸低劑量組血栓數，與模型組比較，發(fā)生率較低，但無顯著性統(tǒng)計學差異（P0.05）。1           

9、  結果表明，麝香銀杏葉滴丸能夠減少動脈粥樣硬化模型家兔的主動脈中斑塊數和血栓數的形成。 3.2  麝香銀杏葉滴丸對動脈粥樣硬化模型家兔主動脈組織勻漿MMP9濃度/組織勻漿蛋白濃度的比值影響結果見表4。表3  麝香銀杏葉滴丸對中心脂質面積/斑塊面積的影響（略）與模型對照組比較，*P<0.05；n=8表4  麝香銀杏葉滴丸對模型家兔MMP9與蛋白含量比值的影響（略）與模型對照組比較， *P<0.01；n=8    由表4可見，模型對照組MMP9與蛋白含量的比值，與正常對照組比較有顯著性差異(P<0.01)，而

10、麝香銀杏葉滴丸高、低劑量組、辛伐他汀組，與模型對照組比較僅有降低的趨勢，無顯著性差異（P>0.05）。結果表明，麝香銀杏葉滴丸有一定的降低主動脈組織勻漿MMP9/蛋白含量比值的作用趨勢，其作用強度可能與給藥時間的長短、給藥劑量的大小有關，這有待進一步探討。4  討論    急性心肌梗塞是由狹窄的冠脈病變引起，急性冠脈綜合征的發(fā)生與冠狀動脈狹窄程度無關，而與斑塊的穩(wěn)定性的繼發(fā)血栓形成密切相關。炎癥在不穩(wěn)定斑塊的發(fā)生、演變及破裂過程中起重要的作用，斑塊的炎性細胞及炎性產物對粥樣斑塊脂質中心的擴大，纖維組織完整性的破壞及細胞外基質的降解均有明顯的影響，可

11、造成斑塊的不穩(wěn)定破裂。    目前研究認為絕大多數急性冠脈綜合征的發(fā)生是不穩(wěn)定斑塊出現(xiàn)裂縫、糜爛或破裂的基礎上，血管內血栓閉塞、致心肌急性缺血。破裂斑塊及附壁血栓在其后的血管重塑過程中，可自行修復或加重血管狹窄。斑塊的生物特性是決定其穩(wěn)定性的主要因素6。檢出和穩(wěn)定冠狀動脈不穩(wěn)定斑塊將有助于降低冠心病的死亡率和致殘率。    麝香銀杏葉滴丸是以麝香、水蛭、銀杏葉組成的復方制劑。方中麝香性味辛溫、功效開竅、通絡、散淤；水蛭性味咸苦、平、有毒，功效破血逐淤。麝香和水蛭共為君藥，通絡祛淤，佐以銀杏葉性味甘苦、澀平、益心斂肺，調理氣機，得以活血

12、通絡止痛7。家兔對外源性膽固醇攝取率高，對高血脂的清除能力低，能形成明顯的動脈粥樣硬化斑塊模型。本文以高膽固醇混合飼料復制了該模型，觀察了其對家兔動脈粥硬化斑塊穩(wěn)定性的影響。    家兔主動脈粥樣硬化不穩(wěn)定斑塊的形態(tài)學顯示，模型組家兔主動脈內膜形成典型的主動脈硬化斑塊沉積。MASSON染色可見斑塊內大量膽固醇結晶和泡沫細胞，纖維帽厚度較薄，纖維組織少，呈藍色，有大量結締組織增生，部分標本可見斑塊內有鈣鹽沉積，顯示斑塊呈不穩(wěn)定狀態(tài)。麝香銀杏葉滴丸高、低劑量組家兔的上述組織學改變均輕于模型組。高劑量能明顯降低家兔動脈粥樣硬化斑塊纖維帽厚度與中心脂質面積比值、中心脂質面

13、積與斑塊面積比值，能夠減少斑塊數和血栓數的發(fā)生，另主動脈組織中的MMP9與蛋白含量比值有降低趨勢，以上結果提示本品具有一定的穩(wěn)定家兔主動脈粥樣硬化斑塊的作用。    血脂異常是動脈粥樣硬化的重要危險因素，已有研究證實，血清低密度脂蛋白升高，尤其是氧化型低密度脂蛋白，可以使斑塊局部的基質金屬蛋白酶（MMP9）分泌增加，導致斑塊不穩(wěn)定，而降低低密度脂蛋白本身就可以改善病變血管重構，降低斑塊內部的MMP93。本實驗研究結果表明，麝香銀杏葉滴丸可以通過降低血清總膽固醇、低密度脂蛋白以及超敏C反應蛋白（另外發(fā)表），降低主動脈斑塊內部的MMP9，從而改善病變血管重構，抑制動脈粥樣硬化的進展，以達到穩(wěn)定斑塊的目的?！尽?#160; 1 楊曉云，王 琳，曾和松，等.辛伐他汀對兔動脈粥樣硬化斑塊中核因子kB-DNA結合活性和基質金屬蛋白酶1及3表達的影響J.動脈硬化雜志，2006，14(4)：277.2 謝江嬌，程 翔，廖玉華，等.兔動脈粥樣硬化斑塊內IL-8表達的動態(tài)變化J.中國分子心臟病學雜志，2005，5(6):773.3 李天奇，李 勇，范維琥.麝香保心丸和辛伐他汀對兔股動脈粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性的影響J.中華老年心腦血管病雜志，2006，8(5)：296.4 秦 玲，張家穎，王曄玲，等.阿托伐他汀對兔動脈粥樣硬化斑塊的抑制作用J.中國微循環(huán)，2006，10(1