醫(yī)院感染監(jiān)測(cè)方法

1、醫(yī)院感染監(jiān)測(cè)相關(guān)空氣培養(yǎng)檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)操作程序臨床意義：醫(yī)院是病原微生物聚集的場(chǎng)所， 患者和病原攜帶者體內(nèi)的微生物能以多種形式排出體外 污染周圍環(huán)境， 如不及時(shí)將其殺滅， 可能導(dǎo)致醫(yī)院感染的發(fā)生， 對(duì)其他患者甚至醫(yī)護(hù)人 員造成危害。 手術(shù)室空氣中細(xì)菌可能直接沉降到傷口上， 或沉降到醫(yī)務(wù)人員的手和器械 上，能引起傷口感染。監(jiān)護(hù)病房中病人抵抗力極差，易發(fā)生呼吸道和其他部位感染，定 期監(jiān)測(cè)可及時(shí)發(fā)現(xiàn)消毒和通風(fēng)系統(tǒng)存在的問題。原理：用9 cm直徑普通營養(yǎng)瓊脂平板在采樣點(diǎn)暴露5min后送檢。置于37C培養(yǎng)箱孵育，按照 相應(yīng)公式計(jì)數(shù)菌落總數(shù)（ N）。采樣原則：1. 采樣時(shí)間：選擇消毒處理后與進(jìn)行醫(yī)療活動(dòng)之前期間

2、采樣。2. 采樣高度：與地面垂直高度80150cm3. 布點(diǎn)方法：室內(nèi)面積w 30叭設(shè)一條對(duì)角線上取3點(diǎn)，即中心一點(diǎn)、兩端各距墻1m 處各取一點(diǎn)；室內(nèi)面積30m2設(shè)東、西、南、北、中各5點(diǎn)，各個(gè)點(diǎn)均距墻1m4. 采樣方法：用9 cm直徑普通營養(yǎng)瓊脂平板在采樣點(diǎn)暴露5min后送檢培養(yǎng)。檢查原則：采樣后必須盡快對(duì)樣品進(jìn)行相應(yīng)指標(biāo)的檢測(cè)，送檢時(shí)間不得超過6h,若樣品保存于04C條件時(shí)，送檢時(shí)間不得超過24小時(shí)。菌落總數(shù)計(jì)算：空氣細(xì)菌菌落總數(shù)（cfu/m3 ）= 50000X N/AT式中： A- 平板面積， cm2；T- 平板暴露時(shí)間， min;N- 平均菌落數(shù)， cfu/m3規(guī)定使用9cm平板，暴

3、露5min，所以經(jīng)換算，公式簡化為：空氣細(xì)菌菌落總數(shù)（cfu/m3 ）=X N報(bào)告結(jié)果和解釋：1. 有細(xì)菌生長：參照菌落總數(shù)計(jì)算公式進(jìn)行計(jì)算。2. 無細(xì)菌生長：置于35C溫箱繼續(xù)孵育24小時(shí)后再觀察結(jié)果。3. 若培養(yǎng) 48h 后仍無細(xì)菌生長，報(bào)告：無菌生長。注意事項(xiàng)：不得檢出乙型溶血性鏈球菌、金黃色葡萄球菌及其他致病性微生物。1. 溶血性鏈球菌檢查：參照細(xì)菌鑒定的標(biāo)準(zhǔn)操作程序執(zhí)行。2. 沙門氏菌檢查：參照細(xì)菌鑒定的標(biāo)準(zhǔn)操作程序執(zhí)行。3. 銅綠假單胞菌檢查：參照細(xì)菌鑒定的標(biāo)準(zhǔn)操作程序執(zhí)行。4. 金黃色葡萄球菌檢查：參照細(xì)菌鑒定的標(biāo)準(zhǔn)操作程序執(zhí)行。 各類環(huán)境下空氣培養(yǎng)衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)：環(huán)境類別范圍空氣標(biāo)準(zhǔn)

4、（ cfu/m3 ）I類層流潔凈手術(shù)室、層流潔凈病房-< 10不得檢出金黃色葡萄球菌和溶血性鏈球菌II 類普通手術(shù)室、禪房、嬰兒室、早產(chǎn)兒室、普通保護(hù)性隔離室、供應(yīng)室無菌區(qū)、燒 傷病房、重癥監(jiān)護(hù)病房-< 200不得檢出金黃色葡萄球菌和溶血性鏈球菌III 類兒科病房、婦產(chǎn)科檢查室、注射室、換藥室、治療室、供應(yīng)室清潔區(qū)、急診室、 化驗(yàn)室、各類普通病房和房間-< 500不得檢出金黃色葡萄球菌和溶血性鏈球菌物體表面采樣及檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)操作程序臨床意義：醫(yī)院感染的主要對(duì)象是住院病人和醫(yī)院職工。 住院病人抵抗力差， 更易感染。 醫(yī)院感染 的監(jiān)測(cè)是預(yù)防醫(yī)院感染的前提， 只有進(jìn)行了深入細(xì)致的監(jiān)測(cè)，

5、 發(fā)現(xiàn)各個(gè)科室存在的問題 才能有針對(duì)性和有效的防治醫(yī)院感染。在某些情況下，物體表面作為傳播媒介和儲(chǔ)源， 引起醫(yī)院感染的危險(xiǎn)是存在的。 因此，有目的和有選擇的對(duì)物體表面采樣進(jìn)行培養(yǎng)很有 必要。目的：1. 通過定性和定量檢查，了解物體表面的細(xì)菌污染情況。2. 評(píng)價(jià)物體表面的清潔和消毒結(jié)果標(biāo)本采集要求：1. 采集時(shí)間：選擇消毒處理后的 4h 內(nèi)進(jìn)行采樣。2. 采集面積：被采表面<100cm2,取全部表面。被采表面100cm2取100cm23. 采集方法：用浸有無菌生理鹽水采樣液的棉拭子 1 支在物體表面來回涂抹，若被采表面100cm2取全部表面；若被采表面100cm2取100cm21）未用消毒

6、劑的物體表面采集的標(biāo)本接種在裝有 5ml 無菌生理鹽水的試管內(nèi)送檢。2）已使用消毒劑物體表面采集的標(biāo)本接種在 5ml %硫代硫酸鈉肉湯的試管內(nèi)送檢。 檢測(cè)步驟：從5ml送檢標(biāo)本中無菌條件下吸取100卩I液體平鋪于血平板上，用接種環(huán)均勻劃線后 置于35C孵箱中培養(yǎng)2448h后計(jì)數(shù)平板上菌落總數(shù)（N）。結(jié)果計(jì)算及解釋：物體表面細(xì)菌菌落總數(shù)（cfu/cm2 ）=平皿上菌落總數(shù)（N）x采樣液稀釋倍數(shù)/采樣面 積；經(jīng)換算后，物體表面細(xì)菌菌落總數(shù)（cfu/cm2 ） =NX 2。如在平板上發(fā)現(xiàn)致病菌（如：溶血性鏈球菌、沙門菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假 單胞菌），有明顯溶血的菌落或氧化酶陽性（ +）菌落，或院

7、內(nèi)發(fā)生感染則要求作細(xì)菌 鑒定。細(xì)菌鑒定參見細(xì)菌鑒定操作規(guī)則。附：各類環(huán)境下物體表面衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)環(huán)境類別范圍物體表面標(biāo)準(zhǔn)（ cfu/cm2 ）I類層流潔凈手術(shù)室、層流潔凈病房w 5II 類普通手術(shù)室、禪房、嬰兒室、早產(chǎn)兒室、普通保護(hù)性隔離室、供應(yīng)室無菌區(qū)、燒 傷病房、重癥監(jiān)護(hù)病房w 5III 類兒科病房、婦產(chǎn)科檢查室、注射室、換藥室、治療室、供應(yīng)室清潔區(qū)、急診室、 化驗(yàn)室、各類普通病房和房間w 10IV類傳染病科及病房w 15醫(yī)務(wù)人員手采樣及檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)操作程序臨床意義：醫(yī)務(wù)人員的手經(jīng)常直接或間接地同污染物品或病人接觸， 監(jiān)測(cè)手部細(xì)菌能了解手部細(xì)菌 污染情況和評(píng)價(jià)手的清潔和消毒效果。目的：1. 通過定性

8、和定量檢查，了解手部細(xì)菌污染情況。2. 評(píng)價(jià)手的清潔和消毒效果。 標(biāo)本采集要求：1. 采樣時(shí)間：在接觸病人、從事醫(yī)療活動(dòng)前進(jìn)行采樣。2. 采樣操作： 沒有用消毒液，清水沖洗的雙手：被檢人五指并攏，將浸有無菌生理鹽水采樣液的棉拭子一支在雙手指曲面從指根到指端來回涂擦各兩次（一只手涂擦面積約 30cm2，并 隨之轉(zhuǎn)動(dòng)采樣棉拭子， 剪去手接觸部位，將棉拭子放入裝有 5ml 無菌生理鹽水管內(nèi)送檢。用消毒液，并用清水沖洗干凈的雙手：被檢人五指并攏，將浸有無菌生理鹽水采樣液 的棉拭子一支在雙手指曲面從指根到指端來回涂擦各兩次 （一只手涂擦面積約 30cm2）， 并隨之轉(zhuǎn)動(dòng)采樣棉拭子， 剪去手接觸部位， 將

9、棉拭子放入裝有 5ml 無菌生理鹽水管內(nèi)送 檢。用消毒液，但沒有用清水沖洗干凈的雙手：被檢人五指并攏，將浸有無菌生理鹽水采 樣液的棉拭子一支在雙手指曲面從指根到指端來回涂擦各兩次（一只手涂擦面積約 30cm2，并隨之轉(zhuǎn)動(dòng)采樣棉拭子，剪去手接觸部位，將棉拭子放入裝有5ml含中和劑的肉湯管內(nèi)送檢。操作步驟：從5ml送檢標(biāo)本中無菌條件下吸取25卩l(xiāng)液體平鋪于血平板上，用接種環(huán)均 勻劃線后置于35E孵箱中培養(yǎng)2448h后計(jì)數(shù)平板上菌落總數(shù)（N）結(jié)果計(jì)算及解釋：手細(xì)菌菌落總數(shù)（cfu/cm2 ）=平皿上菌落總數(shù)（N）x采樣液稀釋倍數(shù)/30 X 2 經(jīng)換算，公式簡化為：手細(xì)菌菌落總數(shù)（cfu/cm2 ）

10、=NX0如在平板上發(fā)現(xiàn)致病菌 （如：溶血性鏈球菌、沙門菌、金黃色葡萄球菌、 銅綠假單胞菌） ， 有明顯溶血的菌落或氧化酶陽性（ +）菌落，或院內(nèi)發(fā)生感染則要求作細(xì)菌鑒定0細(xì)菌 鑒定參見細(xì)菌鑒定操作規(guī)則0各類環(huán)境下醫(yī)護(hù)人員手衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)環(huán)境類別范圍手培養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)（ cfu/cm2 ）I類層流潔凈手術(shù)室、層流潔凈病房w 5II 類普通手術(shù)室、禪房、嬰兒室、早產(chǎn)兒室、普通保護(hù)性隔離室、供應(yīng)室無菌區(qū)、燒 傷病房、重癥監(jiān)護(hù)病房w 5III 類兒科病房、婦產(chǎn)科檢查室、注射室、換藥室、治療室、供應(yīng)室清潔區(qū)、急診室、 化驗(yàn)室、各類普通病房和房間w 10IV類傳染病科及病房w 1使用中消毒劑的微生物學(xué)監(jiān)測(cè)（1）采樣時(shí)間

11、： 采取更換前使用中的消毒劑。（2）采樣量及方法： 在無菌條件下，用無菌吸管吸取被檢樣液，加入到 稀釋液中混勻。 醇類和酚類消毒劑用普通營養(yǎng)肉湯作稀釋液。 含氯消毒劑、 含碘消毒劑、過氧化物消毒液需在檢驗(yàn)地帶網(wǎng)肉湯內(nèi)加入 %硫代硫酸鈉作稀 釋液。季銨鹽類消毒液需在肉湯中加入 3%Tween80 和卵磷脂作稀釋液。 含有表面活性劑的各種復(fù)方消毒劑需在肉湯中加入 3Tween80 作稀釋液。（3）細(xì)菌菌落總數(shù)檢查： 分別取 200ul 采樣液放入 2 只普通營養(yǎng)瓊脂滅菌 平皿內(nèi)，放37C溫箱內(nèi)培養(yǎng)48 h計(jì)數(shù)菌落。平板上有菌生長，證明被檢 樣液有殘存活菌，若每個(gè)平板菌落數(shù)在 10 個(gè)以下，仍可用于

12、消毒處理（但 不能用于滅菌）；若每個(gè)平板菌落數(shù)超過 10個(gè)，說明每毫升被檢樣液含菌 量已超過 100 個(gè)，不宜再用。（4）判斷標(biāo)準(zhǔn)：使用中消毒劑，細(xì)菌菌落總數(shù)w 10 cfu/ ml,病原微生物 不得檢出；。無菌物品 .縫合針、注射針頭、手術(shù)刀片、小棉球等小件醫(yī)療器械，用無菌方法 各取3-5只盛入滅菌的培養(yǎng)瓶中，待檢。 .無菌方法從無菌用具的不同部位如左上邊、中間、右下邊取2 3個(gè)盛入滅菌的培養(yǎng)瓶中，待檢。 .敷料等較大塊的物品隨機(jī)用無菌方法采取 23塊盛入較大滅菌的培養(yǎng) 皿中，待檢。.（注射器隨機(jī)抽取23個(gè)連同包裝一起采集，待檢）。.各種包如：產(chǎn)包、胸穿包、骨穿包、導(dǎo)尿包等隨機(jī)抽取 23個(gè)，

13、待檢。壓力蒸汽鍋滅菌效果監(jiān)測(cè)臨床意義： 用于壓力蒸汽鍋（包括排氣鍋和預(yù)真空鍋）滅菌效果的生物監(jiān)測(cè)。原理： 培養(yǎng)指示劑由含菌紙片、 培養(yǎng)基及塑料外殼組成， 壓力蒸汽滅菌生物培養(yǎng)指示劑紙片上 含嗜熱脂肪桿菌芽胞（ATCC7953）,選用標(biāo)準(zhǔn)抗力儀測(cè)試：121C飽和蒸汽條件下，菌 株存活時(shí)間5min,殺滅時(shí)間w 15min；操作步驟：1. 壓力蒸汽滅菌生物培養(yǎng)指示劑將壓力蒸汽滅菌生物指示劑放于一標(biāo)準(zhǔn)測(cè)試包中； 按照國家規(guī)范，分別將測(cè)試包放于鍋內(nèi)不同位置， 121C， 15 分鐘； 滅菌完畢，取出該生物指示劑；擠破內(nèi)含的安瓿，與一支對(duì)照管一起放于 56 C培養(yǎng)鍋（棕色）內(nèi)培養(yǎng)；培養(yǎng) 48h 后，閱讀結(jié)果。注： 以上第 1 至第3 步經(jīng)各部門操作完成后， 由各科護(hù)士負(fù)責(zé)送至微生物實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。 結(jié)果判斷：1. 壓力蒸汽滅菌生物培養(yǎng)指示劑 培養(yǎng)后，指