基因工程試題(8)

1、基因工程試題一、選擇題（每題 1 分，共 15 分）1、下列有關(guān)基因的敘述，錯(cuò)誤的是【 A 】A蛋白質(zhì)是基因表達(dá)的唯一產(chǎn)物B 基因是 DNA 鏈上具有編碼功能的片段C 基因也可以是 RNAD 基因突變不一定導(dǎo)致其表達(dá)產(chǎn)物改變結(jié)構(gòu)2、基因工程的單元操作順序是【A 增，轉(zhuǎn)，檢，切，接C 接，轉(zhuǎn)，增，檢，切3、生物工程的上游技術(shù)是【A 基因工程及分離工程C 基因工程及酶工程B 】B 切，接，轉(zhuǎn)，增，檢D 切，接，增，轉(zhuǎn)，檢A 】B 基因工程及發(fā)酵工程D基因工程及細(xì)胞工程4、下列各組專業(yè)術(shù)語(yǔ)中，含義最為接近的是【 C 】A 終止子與終止密碼子B 基因表達(dá)與基因轉(zhuǎn)譯C DNA 退火與 DNA 復(fù)性 D

2、重組子與轉(zhuǎn)化子5、 根據(jù)酶切活性對(duì)鹽濃度的要求，限制性核酸內(nèi)切酶可分成【B 】A 2 大類 B 3 大類 C 4 大類 D 5 大類6、T4 -DNA 連接酶是通過(guò)形成磷酸二酯鍵將兩段 DNA 片段連接在一起，其 底物的關(guān)鍵基團(tuán)是【 D 】A 2' -OH 和 5'- PB 2' -OH和 3' -PC 3' -OH 和 2'- PD 5' -OH 和 3' -P7、下列有關(guān)連接反應(yīng)的敘述，錯(cuò)誤的是【 A 】A連接反應(yīng)的最佳溫度為37 CB 連接反應(yīng)緩沖體系的甘油濃度應(yīng)低于 10%C 連接反應(yīng)緩沖體系的 ATP 濃度不能高于 1m

3、MD 連接酶通常應(yīng)過(guò)量 2-5 倍8、原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化方法不大適用于【 A 】A 大腸桿菌 B 枯草桿菌 C 酵母菌 D 鏈霉菌9、下列各常用載體的裝載量排列順序，正確的是【 A 】A Cosmid > 入-DNA> PlasmidB 入-DNA > Cosmid > PlasmidC Plasmid > X -DNA > Cosmid D Cosmid > Plasmid > X -DNA10、若某質(zhì)粒帶有 lacZ 標(biāo)記基因，那么與之相匹配的篩選方法是在篩選培 養(yǎng)基中加入【 D 】A半乳糖 B異丙基巰基-B -半乳糖苷（IPTG ）C蔗糖 D 5

4、-溴4氯-3-吲哚基-B -D-半乳糖苷 X-gal ）11、下列各組用于外源基因表達(dá)的受體細(xì)胞及其特點(diǎn)的對(duì)應(yīng)關(guān)系中，錯(cuò)誤的 是【 C 】A 大腸桿菌繁殖迅速BC 鏈霉菌遺傳穩(wěn)定D枯草桿菌分泌機(jī)制健全酵母菌表達(dá)產(chǎn)物具有真核性12、分子雜交的化學(xué)原理是形成 【 D 】A 共價(jià)鍵 B 離子鍵 C 疏水鍵D 氫鍵13、某一重組 DNA （ kb ）的載體部分有兩個(gè) SmaI 酶切位點(diǎn)。用 SmaID 至少 2 個(gè)酶切后凝膠電泳上出現(xiàn)四條長(zhǎng)度不同的帶子，其長(zhǎng)度總和與已知數(shù)據(jù)吻合， 該重組分子插入片段上的 SmaI 酶切位點(diǎn)共有【 D 】A 4 個(gè) B 3 個(gè) C 2 個(gè)14、下列設(shè)計(jì)的探針中，最佳的是

5、 【 D 】A ACATTAAATTATTB GGGCAC ACCTTGATAAGGTD CGGACTTGACCATC15、cDNA法獲得目的基因的優(yōu)點(diǎn)是【A】A 成功率高 B 不含內(nèi)含子 C 操作簡(jiǎn)便 D 表達(dá)產(chǎn)物可以分泌二、名詞解釋（每題 2分，共 20 分）1、Southern blotting : Southern 印跡： Southern 發(fā)明的一種影印轉(zhuǎn)移物質(zhì)的方 法。2、Cosmid vector: 黏粒載體：含有 cos 位點(diǎn)的質(zhì)粒載體。3、cDNAibrary:cDNA 文庫(kù)：是指某生物某一發(fā)育時(shí)期所轉(zhuǎn)錄形成的 cDNA片段 與某種載體連接而成的克隆的集合。4、 RACE是一

6、種通過(guò)PCRS行cDNA末端快速克隆的技術(shù)， 是以mRNA為模板反轉(zhuǎn)錄成 cDNA 第一鏈后用PCR技術(shù)擴(kuò)增出某個(gè)特異位點(diǎn)到 3，或5，端之間未知序列的方法。5、Probe: 探針：指被標(biāo)記物質(zhì)標(biāo)記了的核酸。6 RT-PCR逆轉(zhuǎn)錄PCR先用逆轉(zhuǎn)錄酶作用于 mRNA以寡聚dT為引物合成cDNA 第一鏈，然后用已知一對(duì)引物，擴(kuò)增嵌合分子，這種方法稱為逆轉(zhuǎn)錄PCR。7、 Insert inactivation:插入失活，基因工程載體上的某些選擇標(biāo)記基因常常 含某種或某幾種限制性內(nèi)切酶的單一酶切位點(diǎn)， 在該位點(diǎn)用相應(yīng)的限制性內(nèi)切酶 處理，并將外源DNA片段插入該位點(diǎn)，則插入的外源DNA片段將破壞原有基

7、因的 讀碼框，往往導(dǎo)致原有的選擇標(biāo)記基因無(wú)法翻譯表達(dá)， 或即使翻譯表達(dá)， 形成的 也是喪失了原有生物活性的蛋白質(zhì)，這一現(xiàn)象稱為插入失活。 。8、S-D Sequenee: S-D序列：在大腸桿菌 mRNA勺核糖體結(jié)合位點(diǎn)上，含有一個(gè) 轉(zhuǎn)譯起始密碼子及同 16S 核糖體 RNA 3，末端堿基互補(bǔ)的序列，該序列最初由 Shine、Dalgarno發(fā)現(xiàn)，故后來(lái)命名為Shine Dalgarno序列，簡(jiǎn)稱S-D序列。9、Shuttle plasmid vector: 穿梭質(zhì)粒載體：指一類由人工構(gòu)建的具有兩種不同 復(fù)制起點(diǎn)的選擇標(biāo)記，因而可在兩種不同宿主細(xì)胞中存活和復(fù)制的質(zhì)粒載體。10、MCS指載體上人

8、工合成的含有緊密排列的多種限制核酸內(nèi)切酶的酶切位點(diǎn)的DNA片 段。三、簡(jiǎn)答題（每題 5 分，共 25分）1、理想質(zhì)粒載體的必備條件答： 具有較小的分子質(zhì)量和較高的拷貝數(shù)具有若干限制性核酸內(nèi)切酶的單一酶切位點(diǎn)。具有兩種以上的選擇標(biāo)記基因。缺失mob基因。插入外源基因的重組質(zhì)粒較易導(dǎo)入宿主細(xì)胞并自制和表達(dá)。2、核酸操作的基本技術(shù)有哪些答：核酸提取與純化 核酸的檢測(cè)與保存 核酸的凝膠電泳 核酸分子雜交3、影響核酸保存的關(guān)鍵因素是什么怎樣保存核酸制品答： 關(guān)鍵因素 ： 保存液的酸堿度 保存溫度保存方法： 一般保存可用濃鹽液，NaCL檸檬酸緩沖液或L醋酸緩沖液。對(duì)DNA來(lái) 說(shuō)，在pH411的范圍分子的堿

9、基較穩(wěn)定，超出此范圍 DNA易變性或降解，低 溫、稀堿下保存DNA及低溫下保存RNA勻較穩(wěn)定。固態(tài)核酸通常在0C以上低 溫干燥保存即可。4、合成cDNA第二鏈的主要策略有哪些答：自身引導(dǎo)合成法 置換合成法 PCR合成法 快速擴(kuò)增cDNA末端法 雙鏈cDNA末端的處理 cDNA與載體的連接5、基因工程誕生的理論基礎(chǔ)是什么答：是現(xiàn)代分子生物學(xué)領(lǐng)域理論上的三大發(fā)現(xiàn)和技術(shù)上的三大發(fā)明。理論上的三大發(fā)現(xiàn)： 證實(shí)了 DNA是遺傳物質(zhì) 揭示了 DNA分子的雙螺旋結(jié)構(gòu)模型和半保留復(fù)制機(jī)理 遺傳密碼的破譯和遺傳信息傳遞方式的確定技術(shù)上的三大發(fā)明： 限制核酸內(nèi)切酶的發(fā)現(xiàn)與 DNA切割 DNA連接酶的發(fā)現(xiàn)與DNA片

10、段的連接 基因工程載體的研究與應(yīng)用四、問(wèn)答題（每題 10分，共 40分）1 PCR 技術(shù)主要應(yīng)用在哪些領(lǐng)域答：核酸基礎(chǔ)研究 序列分析 檢測(cè)基因表達(dá) 從cDNA文庫(kù)中放大特定序列 研究已知片段鄰近基因或未知 DNA片段 進(jìn)化分析 醫(yī)學(xué)應(yīng)用 分析生物學(xué)證據(jù) 性別控制 轉(zhuǎn)基因檢測(cè)。2 細(xì)菌的限制與修飾系統(tǒng)有什么意義大腸桿菌 K12 限制與修飾系統(tǒng) 的遺傳分析揭示的 4 種表型是什么答： 宿主控制的限制與修飾現(xiàn)象廣泛存在于原核細(xì)菌中，它有兩方面的作用， 一是保護(hù)自身DNA不受限制；二是破壞入侵外源DNA使之降解。細(xì)菌正是利用限 制與修飾系統(tǒng)來(lái)區(qū)分自身 DNA與外源DNA的。外源DNA可以通過(guò)多種方式進(jìn)

11、入某 一生物體內(nèi)，但是它必須被修飾成受體細(xì)胞的限制內(nèi)切酶無(wú)法辯認(rèn)的結(jié)構(gòu)形式， 才能在寄主細(xì)胞內(nèi)得以生存，否則會(huì)很快被破壞。因此，在基因工程中，常采用缺少限制作用的菌株作為受體，以保證基因操作的順利完成大腸桿菌K12限制與修飾系統(tǒng)的遺傳分析揭示，它有以下 4種表型：r k+mk+ 野生型r k-mk+ 限制缺陷型r k-mk- 限制和修飾缺陷型r k+mk- 修飾缺陷型3試述5 RACE技術(shù)原理和方法。答：PCF用于擴(kuò)增代表mRNA專錄物某一單位點(diǎn)與其3'或5'末端之間區(qū)域的部 分cDNA稱為快速擴(kuò)增cDNA末端技術(shù)（RACE。如果已知mRN的片段鏈內(nèi)短序 列，據(jù)此或設(shè)計(jì)基因特異

12、引物，用原先存在的 poly（A） 尾（ 3'末端）或附加的 同聚尾（ 5'末端）互補(bǔ)的序列做末端引物，就可以獲得從未知末端直到已知區(qū) 域的部分cDNA序列。為獲得5'末端部分cDNA克隆需用基因特異引物，產(chǎn)物第 一鏈產(chǎn)物，可用末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶及 dATP加poly（A）尾。通過(guò)QT引物和反 專錄使用的上游基因特異引物生成第二鏈 cDNA。4 大腸桿菌作為基因工程受體菌具有哪些特點(diǎn)真核基因在大腸桿菌 中表達(dá)存在哪些障礙 答：特點(diǎn)：大腸桿菌培養(yǎng)方便、操作簡(jiǎn)單、成本低廉，基礎(chǔ)生物學(xué)、分子遺傳學(xué) 等方面的背景知識(shí)清楚， 對(duì)其基因表達(dá)調(diào)控的分子機(jī)理也比較了解， 而且歷經(jīng)二

13、十年的基因工程實(shí)踐， 大腸桿菌已發(fā)展成為一種安全的基因工程實(shí)驗(yàn)體系， 有多 種適用的寄主菌株和載體系列，大腸桿菌易于進(jìn)行工業(yè)化批量生產(chǎn)。存在的障礙：第一，在大腸桿菌的 mRNA勺核糖體結(jié)合位點(diǎn)上，含有一個(gè)起始密碼子及16S核糖體RNA 3末端堿基互補(bǔ)序列，即S-D序列，而真核上缺泛這個(gè)序列。 第二，許多真核基因的蛋白質(zhì)產(chǎn)物需要經(jīng)過(guò)翻譯后的加工修飾，如正確的 折疊和組裝， 而細(xì)菌中通常并沒(méi)有這樣的修飾機(jī)制， 從而可能導(dǎo)致真核基因在大 腸桿菌中的翻譯產(chǎn)物無(wú)法產(chǎn)生有活性的蛋白。第三、外源真核基因所表達(dá)的蛋白質(zhì)分子往往能夠被細(xì)菌的蛋白酶識(shí)別， 并被當(dāng)做“異 已分子”降解掉。8、S-D序列：在大腸桿菌m

14、RNA勺核糖體結(jié)合位點(diǎn)上，含有一個(gè)轉(zhuǎn)譯起始 密碼子及同 16S 核糖體 RNA 3，末端堿基互補(bǔ)的序列，該序列最初由 Shine 、 Dalgarno 發(fā)現(xiàn)，故后來(lái)命名為 ShineDalgarno 序列，簡(jiǎn)稱 S-D 序列。1、什么是包涵體重組蛋白在胞內(nèi)表達(dá)時(shí)， 常常以不溶性蛋白聚集成勺晶狀物形式存在， 這種 晶狀體即包涵體。 包涵體勺形成是外源蛋白勺高效表達(dá)時(shí)勺普遍現(xiàn)象， 這是由于 肽鏈折疊過(guò)程中部分折疊勺中間態(tài)發(fā)生了錯(cuò)誤聚合， 而不是形成成熟勺天然態(tài)或 完全解鏈勺蛋白。2、什么是a -互補(bǔ)篩選質(zhì)粒載體具有B -半乳糖苷酶基因(lac Z),當(dāng)外源DNAS入到它的lac Z, 可造成表達(dá)后

15、的B -半乳糖苷酶失活，利用這一點(diǎn)就可以通過(guò)大腸桿菌轉(zhuǎn)化子菌 落在添加有 X-gal-IPTG 培養(yǎng)基中的顏色變化鑒別出重組子和非重組子。有些大 腸桿菌上帶有 lac Z 基因的部分編碼序列，質(zhì)粒載體中含有別一部分編碼序列， 當(dāng)質(zhì)粒轉(zhuǎn)入載體后，可形成具有酶活性的蛋白質(zhì)。這種 lac Z 基因上缺失了一部 分編碼序列的突變體與帶有這一部分編碼序列的突變體之間實(shí)現(xiàn)互補(bǔ)的現(xiàn)象叫 a互補(bǔ)。3、限制性核酸內(nèi)切酶的活性受哪些因素影響酶的純度。DNA羊品的純度。(3)DNA勺甲基化程度。酶切反應(yīng)的溫度與時(shí)間。DNA分子的構(gòu)型。限制性核酸內(nèi)切酶的反應(yīng)緩沖液。5、基因工程誕生的理論基礎(chǔ)是什么是現(xiàn)代分子生物學(xué)領(lǐng)域

16、理論上的三大發(fā)現(xiàn)和技術(shù)上的三大發(fā)明。 理論上的三大發(fā)現(xiàn)： 證實(shí)了 DNA是遺傳物質(zhì) 揭示了 DNA分子的雙螺旋結(jié)構(gòu)模型和半保留復(fù)制機(jī)理 遺傳密碼的破譯和遺傳信息傳遞方式的確定技術(shù)上的三大發(fā)明： 限制核酸內(nèi)切酶的發(fā)現(xiàn)與 DNA切割 DNA連接酶的發(fā)現(xiàn)與DNA片段的連接 基因工程載體的研究與應(yīng)用四、問(wèn)答題（每題 10 分，共 40 分）1 如何有效地提高外源基因的表達(dá)效率提高啟動(dòng)子強(qiáng)度 縮短啟動(dòng)子同克隆基因間距離 高效的翻譯起 始序列 高效的轉(zhuǎn)錄終止區(qū) 提高質(zhì)?？截悢?shù)及穩(wěn)定性 用以下方法提 高翻譯水平：調(diào)整SD序列與AUG間的距離用點(diǎn)突變的方法改變某些堿基 增加mRNA勺穩(wěn)定性的減輕細(xì)胞的代謝負(fù)荷

17、：誘導(dǎo)表達(dá)表達(dá)載體的誘導(dǎo)復(fù) 制提高表達(dá)蛋白的穩(wěn)定性，防止其降解：克隆一段原核序列，表達(dá)融合蛋 白采用某種突變菌株表達(dá)分泌蛋白質(zhì)2 試述載體構(gòu)建一般方法A目的基因分析（1） ORF分析（2）酶切位點(diǎn)分析B 載體選擇與分析（ 1）多克隆位點(diǎn)分析（ 2）抗性標(biāo)記分析（ 3）啟動(dòng)子與其 他篩選標(biāo)記分析C 連接體系與連接時(shí)間確定4 大腸桿菌作為基因工程受體菌的優(yōu)缺點(diǎn)是什么優(yōu)點(diǎn)：大腸桿菌培養(yǎng)方便、操作簡(jiǎn)單、成本低廉，基礎(chǔ)生物學(xué)、分子遺傳學(xué)等方面的背景知識(shí)清楚， 對(duì)其基因表達(dá)調(diào)控的分子機(jī)理也比較了解， 而且歷經(jīng)二 十年的基因工程實(shí)踐， 大腸桿菌已發(fā)展成為一種安全的基因工程實(shí)驗(yàn)體系， 有多 種適用的寄主菌株和

18、載體系列，大腸桿菌易于進(jìn)行工業(yè)化批量生產(chǎn)。缺點(diǎn)：在通常情況下，細(xì)菌的RNA聚合酶不能識(shí)別真核的啟動(dòng)子；許多真核 基因的蛋白質(zhì)產(chǎn)物需要經(jīng)過(guò)翻譯后的加工修飾， 如正確的折疊和組裝， 而細(xì)菌中 通常并沒(méi)有這樣的修飾機(jī)制， 從而可能導(dǎo)致真核基因在大腸桿菌中的翻譯產(chǎn)物無(wú) 法產(chǎn)生有活性的蛋白； 外源真核基因所表達(dá)的蛋白質(zhì)分子往往能夠被細(xì)菌的蛋白 酶識(shí)別，并被當(dāng)做“異已分子”降解掉。二、選擇題(每題 1 分，共 15分)1( d ) 限制性核酸內(nèi)切酶是由細(xì)菌產(chǎn)生的，其生理意義是A 修復(fù)自身的遺傳缺陷B 促進(jìn)自身的基因重組C 強(qiáng)化自身的核酸代謝D 提高自身的防御能力2( a ) 生物工程的下游技術(shù)是A 基因工

19、程及分離工程B 蛋白質(zhì)工程及發(fā)酵工程C 基因工程及蛋白質(zhì)工程D 分離工程 及蛋白質(zhì)工程3 ( a ) 基因工程操作常用的酶是 :(I 內(nèi)切酶 II 連接酶 III 末端轉(zhuǎn)移酶IV 聚合酶A. I + II B. I + III + IV C. II + III + IV D. I +II + IV+ III4 ( d ) 限制性內(nèi)切核酸酶的星活性是指：A在非常規(guī)條件下，識(shí)別和切割序列也不發(fā)生變化的活性。B活性大大提高C切割速度大大加快D識(shí)別序列與原來(lái)的完全不同5( d ) 下列五個(gè) DNA 片段中含有回文結(jié)構(gòu)的是A. GAAACTGCTTTGACB. GAAACTGGAAACTGC. GAAACTGGTCAAAGD. GAAACTGCAGTTTC6 ( c ) 關(guān)于cDNA的不正確的提法是：A 同mRN互補(bǔ)的單鏈RNAB 同mRN互補(bǔ)的含有內(nèi)含子的 DNAC 以mRN為模板合成的雙鏈 RNAD 以上都不正確7 ( a ) 下列有關(guān)連接反應(yīng)的敘述，錯(cuò)誤的是A. 連接反應(yīng)的最佳溫度為37 CB. 連接反應(yīng)緩沖體系的甘油濃度應(yīng)低于 10%C. 連接反應(yīng)緩沖體系的 ATP 濃度不能高于 1mMD. 連接酶通常應(yīng)過(guò)量 2-5 倍DNA 片段連接在一和 3' -P和 3' -P8 ( c