實(shí)驗(yàn)二 酵母菌的死活染色和放線菌的形態(tài)觀察VIP

1、實(shí)驗(yàn)二 酵母菌的死活染色及放線菌的形態(tài)觀察趙奕玲 1211801691 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.觀察酵母菌的形態(tài)及出芽生殖。2掌握酵母菌的死活細(xì)胞的鑒定方法。3.掌握觀察放線菌形態(tài)的基本方法，并觀察放線菌的形態(tài)特征。二實(shí)驗(yàn)原理1.酵母菌形態(tài)及出芽方式觀察的基本原理：酵母菌的死活染色通過用美藍(lán)染色制成水浸片，來觀察生活的酵母形態(tài)和出芽生殖方式。美藍(lán)是一種無毒性染料，它的氧化型是藍(lán)色的，而還原型是無色的，用它來對(duì)酵母的活細(xì)胞進(jìn)行染色，由于細(xì)胞中新陳代謝的作用，使細(xì)胞內(nèi)具有較強(qiáng)的還原能力，能使美藍(lán)從藍(lán)色的氧化型變?yōu)闊o色的還原型，所以酵母的活細(xì)胞無色，而對(duì)于死細(xì)胞或代謝緩慢的老細(xì)胞，則因它們無此還原能力或還原能力

2、極弱，而被美藍(lán)染成藍(lán)色或淡藍(lán)色。因此，用美藍(lán)水浸片不僅可觀察酵母的形態(tài)，還可以區(qū)分死、活細(xì)胞。2.酵母菌子囊孢子觀察的基本原理：子囊類酵母菌是以接合產(chǎn)生形成子囊和子囊孢子的方式進(jìn)行有性繁殖的。它們一般通過鄰近的兩個(gè)形態(tài)相同而性別不同的細(xì)胞各自伸出一根管狀的原生質(zhì)突起相互接觸、局部融合并形成一條通道，再通過質(zhì)、核配和減數(shù)分裂形成4或8個(gè)子核，然后它們各自與周圍的原生質(zhì)結(jié)合在一起，再在其表面形成一層孢子壁，這些一個(gè)個(gè)子囊孢子就成熟了，而原有的營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞則成了子囊。能否形成子囊孢子及其形態(tài)是酵母菌分類鑒定的重要依據(jù)之一。酵母菌形成子囊孢子需一定條件，其中麥?zhǔn)吓囵B(yǎng)基有利于釀酒酵母子囊孢子的形成。 孢子壁

3、厚不易著色，但是一旦著色就很難被脫色。因此先用強(qiáng)染色劑（孔雀綠）下染色，使染料進(jìn)入菌體和孢子，水洗時(shí)菌體中染色被洗脫而孢子中染料保留。在用對(duì)比度大的復(fù)染色劑染色后，菌體染上復(fù)染色劑的顏色而孢子保留原來顏色，這樣可將兩者區(qū)別開來。3.放線菌形態(tài)觀察的基本原理：放線菌在固體培養(yǎng)基上呈輻射狀生長(zhǎng)而得名。放線菌是由不同長(zhǎng)短的纖細(xì)的菌絲所形成的單細(xì)胞菌絲體。菌絲體分為兩部分，即潛入培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)菌絲（或稱基內(nèi)菌絲）和生長(zhǎng)在培養(yǎng)基表面的氣生菌絲。有些氣生菌絲分化成各種孢子絲，呈螺旋形、波浪形或分枝狀等。孢子常呈圓形、橢圓形或桿形。氣生菌絲及孢子的形狀和顏色常作為分類的重要依據(jù)。3 實(shí)驗(yàn)器材1、 菌種： 釀

4、酒酵母固體培養(yǎng)物，放線菌固體培養(yǎng)物 2、 溶液和試劑： a) 0.01%美藍(lán)水溶液，5%孔雀綠水溶液，0.5%番紅水溶液，95%乙醇，呂氏堿性美藍(lán)染液，蒸餾水等。 b) 香柏油、二甲苯 3、 儀器及其它用品： 普通光學(xué)顯微鏡、擦鏡紙、綢布、酒精燈、載玻片、接種針、培養(yǎng)皿等4 實(shí)驗(yàn)步驟1.酵母菌的死活染色：a) 涂片 在潔凈蓋玻片中部滴一滴0.01%美藍(lán)水溶液，按常規(guī)方法接種酵母 b) 加蓋玻片 加蓋玻片時(shí)首先使蓋玻片的一端接觸載玻片上的液滴的一端，然后再將另一端緩緩放下，目的是防止氣泡的產(chǎn)生，以免影響觀察； c) 放置及鏡檢 從接種開始計(jì)時(shí)，放置3min，然后在高倍鏡（×40）下觀察

5、酵母菌的形態(tài)，根據(jù)染色狀態(tài)判斷酵母菌的死活（由于新陳代謝，活細(xì)胞胞內(nèi)有較強(qiáng)還原能力，使美藍(lán)由藍(lán)色氧化型變成無色的還原型，染色后活細(xì)胞呈無色。死細(xì)胞或代謝能力微弱的衰老細(xì)胞還原能力弱，染色后細(xì)胞呈藍(lán)色或淡藍(lán)色），尋找并觀察酵母菌不同類型的出芽方式（一端出芽或兩端出芽）。 將酵母菌美蘭浸片放置30min，再用高倍鏡（×40）觀察，根據(jù)染色狀態(tài)判斷酵母菌的死活，并與3min時(shí)的情況做一對(duì)比說明。2. 放線菌的形態(tài)觀察：用鑷子小心取出用插片法培養(yǎng)的放線菌培養(yǎng)皿中的一張蓋玻片，將其背面附著的菌絲體擦凈。然后將長(zhǎng)有菌的一面向上放在潔凈的載玻片上，用低倍鏡、高倍鏡觀察。找出3類菌絲及其分生孢子。5

6、 實(shí)驗(yàn)結(jié)果正在出芽的酵母（一端出芽）死酵母活酵母 1.呂氏堿性美蘭染液作用3分鐘時(shí)，90%以上的酵母菌都存活，30分鐘后，大約有近30%的酵母菌死亡，說明美藍(lán)雖為溫和染色劑，但長(zhǎng)時(shí)間后菌體依然會(huì)被染色劑破壞或缺水導(dǎo)致大量死亡。2.酵母菌的出芽有三種方式，一端出芽，兩端出芽和多邊出芽，在這次的實(shí)驗(yàn)中，出芽效果僅觀察到一個(gè)一端出芽。3.子囊孢子的染色沒有看到結(jié)果，可能是菌株本身的問題。（以下兩幅圖是同一視野的上下兩部分，圖片有部分重疊）基生菌絲氣生菌絲長(zhǎng)在氣生菌絲上的孢子絲1. 放線菌的菌落呈灰褐色，有土腥味。2. 呈菌絲狀生長(zhǎng)，以孢子繁殖。顯微鏡下菌絲呈淺綠色，孢子絲呈深藍(lán)色。3. 氣生菌絲整體上呈現(xiàn)一種纖細(xì)的感覺，像細(xì)長(zhǎng)的柳枝；基生菌絲整體上呈現(xiàn)一種交聯(lián)的感覺，像皸裂的泥土。