榛花對(duì)四氧嘧啶性糖尿病小鼠肝糖原含量的影響

1、榛花對(duì)四氧嘧啶性糖尿病小鼠肝糖原含量的影響 作者：蔡英蘭，金香子，樸麗花，李相伍【摘要】 目的 觀察榛花對(duì)糖尿病小鼠肝糖原含量的影響. 方法 用四氧嘧啶制作小鼠糖尿病模型，共設(shè)6個(gè)組，即正常對(duì)照組、糖尿病對(duì)照組、藥物對(duì)照組及大、中、小劑量實(shí)驗(yàn)組（榛花濃縮液5.00，2.50，1.25mL/kg），實(shí)驗(yàn)周期為3周，采用組織化學(xué)方法顯示肝糖原. 結(jié)果 大、中、小劑量榛花濃縮液實(shí)驗(yàn)組肝糖原含量明顯增多. 結(jié)論 榛花可促進(jìn)肝組織糖原合成. 【關(guān)鍵詞】 糖尿病，實(shí)驗(yàn)性;肝糖原;植物，藥用;小鼠 榛花具有降低血糖作用，目前已被證實(shí)的降低血糖作用機(jī)制有促進(jìn)胰島B細(xì)胞的分泌功能，提高血清胰島素水平;作用于受體

2、或受體后水平，增加胰島素受體數(shù)目或提高親合力;抑制胰高血糖素分泌;促進(jìn)周圍組織及靶器官對(duì)糖的利用;清除自由基及抗脂質(zhì)過氧化等 1，2 .前期實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，榛花具有清除自由基及抗脂質(zhì)過氧化作用，而對(duì)受損胰島B細(xì)胞的再生和修復(fù)作用不明顯.本實(shí)驗(yàn)通過組織化學(xué)方法觀察了榛花對(duì)糖尿病小鼠肝糖原含量的影響，為探討榛花的降低血糖機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù). 1 材料 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 取昆明種雄性小鼠，體重為（202）g，由延邊大學(xué)醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科提供. 1.2 藥品與試劑 榛花采集于長白山地區(qū)，采用水提取法提取，具體方法為取榛花780g，加蒸餾水1500mL煮沸30min1h，過濾后濃縮至200mL，灌封備用.鹽酸

3、二甲雙胍片為貴州圣濟(jì)堂制藥有限公司產(chǎn)品，批號(hào)為20020109;四氧嘧啶為香港FARCO化學(xué)供應(yīng)公司產(chǎn)品. 1.3 儀器 Leica820型組織切片機(jī)為德國產(chǎn)，OLYMPUS VANOX型萬能顯微鏡為日本產(chǎn)，TD-2000型真彩病理細(xì)胞顯微分析系統(tǒng)為北京天地百年科技有限責(zé)任公司產(chǎn)品. 2 方法 2.1 四氧嘧啶性糖尿病小鼠模型的制作 取雄性小鼠，先適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，禁食24h，自由飲水.將四氧嘧啶用生理鹽水配制成7g/L注射液，每只小鼠按70mg/kg劑量尾靜脈1次性注射給藥.注射后第5日測(cè)定空腹血糖，將空腹血糖值大于10.00mmol/L 者判定為糖尿病模型制作成功 3，4 . 2.2 分組及

4、處理 取正常小鼠10只為正常對(duì)照組，取糖尿病小鼠50只，隨機(jī)分為5個(gè)組，分別為糖尿病對(duì)照組、藥物對(duì)照組及榛花大、中、小劑量實(shí)驗(yàn)組.實(shí)驗(yàn)期間各組小鼠均給予塊料喂養(yǎng)，大、中、小劑量實(shí)驗(yàn)組每日分別灌服給予榛花濃縮液5.00，2.50，1.25mL/kg;藥物對(duì)照組每日灌服給予鹽酸二甲雙胍1g/kg;糖尿病對(duì)照組和正常對(duì)照組每日灌服給予相應(yīng)體積的蒸餾水.實(shí)驗(yàn)周期為3周. 2.3 組織化學(xué)觀察 實(shí)驗(yàn)周期結(jié)束后將小鼠脫頸處死，迅速剖取肝臟，將肝組織在4Carnoy氏液中低溫固定68h，經(jīng)乙醇梯度脫水，二甲苯透明，石蠟包埋，切成5m切片，行碘酸雪夫氏（PAS）反應(yīng)顯示肝糖原 5 .對(duì)照實(shí)驗(yàn):用唾液消化肝組織

5、中的糖原后再行PAS反應(yīng).染色后在顯微鏡下觀察并 拍片，并利用病理顯微分析系統(tǒng)進(jìn)行定量分析，每組 隨機(jī)選擇5張標(biāo)本，每張標(biāo)本中再隨機(jī)選擇3個(gè)視野，在400倍顯微鏡下測(cè)定每個(gè)視野的糖原顆粒面積百分比. 2.4 數(shù)據(jù)處理 應(yīng)用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行方差分析. 3 結(jié)果 肝糖原經(jīng)PAS反應(yīng)染色后，在光學(xué)顯微鏡下呈紫紅色顆粒.正常對(duì)照組肝糖原顆粒含量豐富，染色深（圖1）;糖尿病對(duì)照組肝細(xì)胞糖原顆粒含量明顯減少，染色淺（圖2）;藥物對(duì)照組與大、中、小劑量實(shí)驗(yàn)組肝細(xì)胞糖原顆粒含量明顯增多，染色較深（圖3圖6），其中以大劑量實(shí)驗(yàn)組的變化最為明顯，接近正常對(duì)照組.肝糖原定量統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果表明，大、中、小劑

6、量實(shí)驗(yàn)組肝糖原面積百分比與糖尿病對(duì)照組比較明顯升高，有顯著性差異（P0.01，表1）. 表1 肝糖原定量分析結(jié)果 4 討論 肝臟是糖代謝的主要器官，主要通過促進(jìn)糖原合成、葡萄糖利用及抑制糖異生等途徑使血糖降低，而肝臟的糖代謝主要是在胰島素的誘導(dǎo)下完成的.四氧嘧啶性糖尿病小鼠體內(nèi)胰島素水平明顯下降，肝臟糖代謝出現(xiàn)紊亂，糖原合成降低，葡萄糖利用減少，糖異生加強(qiáng)，導(dǎo)致血糖升高.本實(shí)驗(yàn)組織化學(xué)染色結(jié)果表明，糖尿病對(duì)照組小鼠肝細(xì)胞內(nèi)糖原顆粒含量明顯減少，著色淺，提示糖尿病小鼠肝細(xì)胞合成糖原功能明顯減弱，與文獻(xiàn)報(bào)道相符 6 .3周實(shí)驗(yàn)周期后，藥物對(duì)照組及大、中、小劑量實(shí)驗(yàn)組肝糖原含量與糖尿病對(duì)照組相比較明顯增多，著色也較深，其中大劑量實(shí)驗(yàn)組變化最為明顯，接近于正常對(duì)照組， 提示榛花能夠改善糖尿病小鼠肝內(nèi)糖代謝紊亂，增強(qiáng)肝細(xì)胞合成糖原的功能，從而降低血糖.【參考文獻(xiàn)】 1 林蘭，魏軍平.中西醫(yī)結(jié)合防治糖尿病回顧與展望J.醫(yī)學(xué)研究通訊， 2000，29（6）:49.2 楊曉暉，張力，呂仁和.中藥降低血糖復(fù)方治療實(shí)驗(yàn)性 糖尿病研究進(jìn)展J. 中國中西醫(yī)結(jié)合雜志， 1998，18（3）:85.3 朱愉，多秀瀛. 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的疾病模型 M.天津:科技翻譯出版社，1997.252.4 徐淑云. 藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué) M.第2版.北京:人民衛(wèi)生出版社，1991.1