人破傷風(fēng)疫苗免疫與抗-TT高效價(jià)血漿篩查方法的研究

1、人破傷風(fēng)疫苗免疫與抗-TT高效價(jià)血漿篩查方法的研究         【摘要】  目的 研究人破傷風(fēng)疫苗免疫方法對(duì)供血漿者抗-TT效價(jià)的影響，篩查符合制備人破傷風(fēng)免疫球蛋白標(biāo)準(zhǔn)的原料血漿的檢測(cè)方法。方法 對(duì)符合規(guī)定的志愿供血漿者進(jìn)行分組，以同一劑量不同免疫程序進(jìn)行免疫。采用ELISA定量檢測(cè)兩組供血漿者抗-TT效價(jià)水平，將抗-TT效價(jià)80IU/ml的供血漿者列為采集特免血漿對(duì)象，并將其血漿樣作小鼠試驗(yàn)進(jìn)行效價(jià)的復(fù)檢。結(jié)果 供血漿者組別間相同劑量疫苗不同免疫程序產(chǎn)生高效價(jià)抗-TT的比率比較差異明顯；0、4周免

2、疫程序組產(chǎn)生高效價(jià)的比率明顯高于0、8周免疫程序組，而且前者抗-TT高效價(jià)持續(xù)時(shí)間較后者的長(zhǎng)。經(jīng)ELISA初篩檢測(cè)達(dá)標(biāo)的血樣經(jīng)小鼠中和試驗(yàn)法復(fù)查，兩結(jié)果比較差異無(wú)顯著性。結(jié)論 采用40IU吸附破傷風(fēng)疫苗，0、4周程序免疫供血漿者可獲得高效價(jià)抗-TT原料血漿，兩種程序均可提高供血漿者的抗破傷風(fēng)抗體水平，能夠達(dá)到終身保護(hù)的濃度。同時(shí)還進(jìn)一步證實(shí)了ELISA檢測(cè)方法用于大規(guī)模篩查抗-TT高效價(jià)原料的可行性。 【關(guān)鍵詞】  破傷風(fēng)疫苗 供血漿者 抗-TT;ELISA法   【Abstract】  Objective  Investigating the

3、 effect of immunized procedure of tetanus toxoid (TT) on the anti-TT titer of plasma donor and screening the test Methods  Used for detecting Source plasma according with the demands of anti-TT IgG. The plasma donors were divided into two groups and then the subjects were immunized with tetanus

4、 toxoid with the different procedures (the same dosage). The anti-TT IgG titer of plasma donor was detected by ELISA kits. The plasma donor that the titer of anti-TT antibody is80 IU/ml was regard as a special immunol plasma donor use for selecting plasma. Results  Indicated that the ratio of t

5、he high titer of anti-TT antibody between two groups is of the distinct difference, the ratio of high titer of antibody in the group immunized according to 0 and 4 week is higher than that of other group(0 and 8 week procedure), and the anti-TT titer of the formers sample can maintain for longer tim

6、e. The results of retesting the samples which were in keeping with the standard using ELISA showed that have no difference between two groups. Conclusion  The anti-TT IgG titer plasma donor in the group (0 and 4 week procedure)is higher,but both procedures can improve the level of anti-TT IgG o

7、f plasma donor,and ELISA is practicible for screening.   【Key words】  tetanus toxoid;plasma donor; anti-TT antibody; ELISA   破傷風(fēng)是由產(chǎn)生毒素的破傷風(fēng)桿菌引起的致死性傳染病，其高毒力的痙攣毒素可阻斷中樞神經(jīng)系統(tǒng)的抑制性神經(jīng)遞質(zhì)，引起肌肉強(qiáng)直和典型的全身痙攣，目前仍是全球眾多地區(qū)的一個(gè)重要公共衛(wèi)生問(wèn)題，尤其是熱帶發(fā)展中國(guó)家最貧窮地區(qū)，母親和新生兒破傷風(fēng)的發(fā)病率和死亡率較高1。破傷風(fēng)可通過(guò)免疫接種含破傷風(fēng)類(lèi)毒素（tetanu

8、s toxoid, TT）的疫苗來(lái)預(yù)防，破傷風(fēng)疫苗與其他百日咳、白喉疫苗一起作為聯(lián)合疫苗（DTP）早已納入我國(guó)兒童計(jì)劃免疫。然而，在國(guó)家免疫計(jì)劃低覆蓋率，尤其是計(jì)劃免疫實(shí)施前出生的人群中會(huì)有破傷風(fēng)的發(fā)生，許多育齡期婦女不能預(yù)防分娩相關(guān)的破傷風(fēng)。另外，盡管已接受過(guò)基礎(chǔ)免疫，為了獲得持久的免疫力，還須加強(qiáng)免疫。除了注射疫苗外，人類(lèi)防治破傷風(fēng)主要是注射馬血清破傷風(fēng)毒素（tetanus antitoxin, TAT）和人破傷風(fēng)免疫球蛋白（human tetanus immunglobulin, TIG），由于前者系馬血清制品，常常引起過(guò)敏反應(yīng)，為此，20世紀(jì)60年代歐美各國(guó)相繼研制出TIG用于臨床，并

9、逐漸取代TAT2。TIG系由供血漿者經(jīng)吸附破傷風(fēng)疫苗免疫后采集抗-TT效價(jià)高的原料血漿制備。為了探討供血漿者進(jìn)行破傷風(fēng)疫苗免疫的影響，建立篩查符合標(biāo)準(zhǔn)的抗-TT原料血漿方法，筆者采用相同劑量不同免疫程序分別免疫符合要求的供血漿者，并將ELISA檢測(cè)方法篩查合格的血漿樣品與小鼠試驗(yàn)法檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行復(fù)檢，現(xiàn)報(bào)告如下。   1  材料與方法   1.1  材料  吸附破傷風(fēng)疫苗（0.5ml，含破傷風(fēng)類(lèi)毒素效價(jià)40IU，批號(hào)：20030701）由蘭州生物制品研究所提供，ELISA定量檢測(cè)破傷風(fēng)抗體診斷試劑（批號(hào)：20060207，20

10、060705，20060819，20070109）由珠海海泰生物藥業(yè)有限公司提供，人破傷風(fēng)免疫球蛋白標(biāo)準(zhǔn)品（10IU/ml，批號(hào)：001，中國(guó)藥品生物制品檢定所），抗-HCV、抗-HIV（）、HBsAg、梅毒等診斷試劑盒均由蘭州生物制品研究所提供，ALT試劑（自配），PCS-2型全自動(dòng)血漿采集機(jī)（美國(guó)血液技術(shù)公司），MK3酶標(biāo)儀，洗板機(jī)（芬蘭DENLEY公司）。   1.2  分組方法  將志愿供血漿者分成兩組（A組，B組），每組按各自的疫苗劑量和不同的免疫程序進(jìn)行免疫。對(duì)那些無(wú)應(yīng)答或抗-TT效價(jià)8IU/ml的供血漿者實(shí)施一次強(qiáng)化免疫。 

11、60; 1.3  原料血漿采集  按中華人民共和國(guó)藥典2005年版（三部）“血液制品原料血漿規(guī)程”要求采集。   1.4  檢測(cè)方法  初篩采用ELISA定量測(cè)定法，按診斷試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，在0160mIU/ml范圍繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，同時(shí)做20mIU/ml和40mIU/ml標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照3。超出標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍的樣品進(jìn)行100倍 稀釋?zhuān)俅螜z測(cè)其結(jié)果時(shí)乘以100。復(fù)檢按中華人民共和國(guó)藥典2005年版（三部）附錄XIF破傷風(fēng)抗毒素效價(jià)測(cè)定法進(jìn)行測(cè)定，并將其檢測(cè)結(jié)果與ELISA法檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比較。   1.5

12、0; 判定標(biāo)準(zhǔn)  檢測(cè)結(jié)果至少達(dá)到0.10.2IU/ml（ELISA法評(píng)價(jià)）1的血樣常被認(rèn)為對(duì)供血漿者具有保護(hù)作用；80IU/ml的血樣為高效價(jià)抗-TT原料血漿的供血漿者。            2  結(jié)果   2.1  相同劑量不同免疫程序免疫獲得的供血漿進(jìn)行抗-TT效價(jià)分布  見(jiàn)表1，從表1可以看出，兩組間抗-TT效價(jià)分布百分比率有明顯差異。表1  相同劑量（40IU），不同免疫程序免疫供血漿者抗體效價(jià)分布 &#

13、160; 2.2  供血漿者持續(xù)供血漿后抗-TT變化  見(jiàn)表2，由表2可以看出，A組供血漿者在進(jìn)行第5次供血漿時(shí)抗-TT8IU/ml的人數(shù)比例下降至8.82%，到第8次時(shí)下降至1.47%；B組抗-TT8IU/ml的供血漿者較A組下降趨勢(shì)更快，到第5次時(shí)下降為3.3%，第6次時(shí)已下降至零。表2  供血漿者持續(xù)獻(xiàn)血漿后抗-TT的變化   2.3  破傷風(fēng)疫苗免疫供血漿者效果的比較  見(jiàn)表3，從表3可以看出，經(jīng)0、4周或0、8周免疫程序，40IU劑量免疫30天后，免疫效果比較明顯（所有供血漿者在免前檢測(cè)抗-TT效價(jià)達(dá)到0.1IU/

14、ml保護(hù)效價(jià)的甚少，幾乎為零），有98%以上的供血漿者具有預(yù)防破傷風(fēng)的保護(hù)抗體。表3  TT免疫供血漿者效果比較   2.4  ELISA定量測(cè)定法與小鼠中和試驗(yàn)檢測(cè)法結(jié)果比較  見(jiàn)表4，由表4可以看出，通過(guò)對(duì)血漿樣品、混合漿樣品和TIG半成品樣品的檢測(cè)，兩種檢測(cè)方法結(jié)果差異不明顯，比差范圍在80%88%之間。表4  ELISA法與小鼠中和試驗(yàn)法 抗-TT效價(jià)測(cè)定結(jié)果比較 注：14為血漿單份樣品；5為血漿混合樣品；6為T(mén)IG樣品   2.5  破傷風(fēng)疫苗全程免疫供血漿者抗-TT效價(jià)趨勢(shì)分析  見(jiàn)

15、圖1。從圖1可以看出，A組（0、4周程序免疫）供血漿者隨著采漿次數(shù)的增加，其血漿抗-TT效價(jià)下降呈平穩(wěn)趨勢(shì)；B組（0、8周程序免疫）供血漿者隨著采漿次數(shù)的增加，其血漿抗-TT效價(jià)第3次采漿時(shí)已開(kāi)始下降（8IU/ml），到第6次時(shí)已降至2.1IU/ml，此時(shí)不得不進(jìn)行加強(qiáng)免疫，1個(gè)月后其血漿抗-TT效價(jià)開(kāi)始上升（8IU/ml），到第9次采漿時(shí)升至10IU/ml以上。3  討論   志愿供血漿者經(jīng)破傷風(fēng)疫苗（40IU）基礎(chǔ)免疫后，絕大部分血漿抗-TT轉(zhuǎn)陽(yáng)（約占98%以上），其中約15%20%供血漿者的血漿抗-TT效價(jià)能達(dá)到8IU/ml以上，其余供血漿者經(jīng)再次加強(qiáng)免疫后均可大大提高高效價(jià)血漿的比率，這一結(jié)果表明，無(wú)論從廣大供