預(yù)培養(yǎng)那些事

1、“預(yù)培養(yǎng)”那些事微生物研究院作者 半知菌目編輯中侖原創(chuàng)版權(quán)，請勿轉(zhuǎn)載一、預(yù)培養(yǎng)的由來中國藥典自2010年版起，在藥品微生物實驗室質(zhì)量管理指導(dǎo)原則中第一次提出：用于環(huán)境監(jiān)控的培養(yǎng)基須特別防護，最好要雙層包裝和終端滅菌，如果不能采用終端滅菌的培養(yǎng)基，那么在使用前應(yīng)進行100%的預(yù)培養(yǎng)，以防止外來的污染物帶到環(huán)境中及避免出現(xiàn)假陽性結(jié)果。2015年版中國藥典出版后，在四部“9203藥品微生物實驗室質(zhì)量管理指導(dǎo)原則”中，這句話再次出現(xiàn)。必須說明的是，中國藥典這段關(guān)于環(huán)境監(jiān)測培養(yǎng)基的要求，是出自：USP1117 MICROBIOLOGICAL BEST LABORATORY PRACTICES Speci

2、al care should be taken with media that is used in sterility tests (seeSterility Tests71for requirements) and in environmental monitoring studies. Media used for environmental monitoring of critical areas should preferably be double-wrapped and terminally sterilized. If terminal sterilization is not

3、 performed, media should be subjected to 100% pre-incubation and inspection before use within a critical area. NOTEGrowth-promotion testing for this media must be performed after the preincubation stage. This will prevent extraneous contamination from being carried into controlled environments and w

4、ill prevent false-positive results.二、預(yù)培養(yǎng)的目的之所以對環(huán)境微生物監(jiān)測培養(yǎng)基，特別是對關(guān)鍵區(qū)域環(huán)境監(jiān)測培養(yǎng)基提出特別的要求，特別是對關(guān)鍵區(qū)域環(huán)境監(jiān)測培養(yǎng)基提出特別的要求，其主要目的就是要避免環(huán)境微生物監(jiān)測的培養(yǎng)基及培養(yǎng)基的傳遞過程對關(guān)鍵區(qū)域，主要是A級、B級潔凈區(qū)造成污染或交叉污染，從風險評估的角度講，就是要避免環(huán)境微生物監(jiān)測出現(xiàn)假陰性或假陽性的結(jié)果。藥企實驗室為環(huán)境微生物監(jiān)測自行配制的培養(yǎng)基，在配制過程中可能會有個別培養(yǎng)基平板受到污染而染菌，所以就采用了“預(yù)培養(yǎng)”，期望通過“預(yù)培養(yǎng)”后發(fā)現(xiàn)的菌落，最終剔除部分染菌的培養(yǎng)基平板。風險評估整個預(yù)培養(yǎng)的過程，就

5、會發(fā)現(xiàn)如下兩個風險：1.預(yù)培養(yǎng)所設(shè)定的培養(yǎng)條件，培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時間適合污染菌的生長嗎？2.污染的微生物可以通過目視而被挑選出來嗎？答案當然是否定的。在不了解污染菌的情況下，設(shè)定一個培養(yǎng)條件，試圖發(fā)現(xiàn)制備培養(yǎng)基過程的污染菌是不現(xiàn)實的。而對于生長緩慢的微生物，或者菌落沒有超過肉眼分辨率的個別污染菌，試圖通過目檢也是無法判斷培養(yǎng)基是否染菌的。三、預(yù)培養(yǎng)的風險分析從中國藥典和USP對環(huán)境監(jiān)測培養(yǎng)基的質(zhì)量控制中明顯看得出，中國藥典之環(huán)境微生物監(jiān)測培養(yǎng)基的要求基本是翻譯了USP的章節(jié)。但是有一個很大的差別，USP文中有關(guān)鍵的一句NOTE：Growth-Promotion testing for this

6、media must be performed after the pre-incubation stage.（預(yù)培養(yǎng)之后的培養(yǎng)基必須做促生長試驗），中國藥典沒有。這樣在環(huán)境微生物監(jiān)測培養(yǎng)基，可能會留下來一個潛在的隱患：假陰性結(jié)果。也就是說，中國藥典在環(huán)境監(jiān)測的培養(yǎng)基的質(zhì)量控制方面，忽略了預(yù)培養(yǎng)過程對培養(yǎng)基營養(yǎng)成分，水分等損耗給培養(yǎng)基帶來的質(zhì)量隱患，給環(huán)境微生物監(jiān)測結(jié)果帶來的“假陰性”的可能。假陰性，這一微生物檢驗中最大的風險，沒有提及。再分析一下，假陽性可以預(yù)防嗎？目前國內(nèi)企業(yè)環(huán)境監(jiān)測培養(yǎng)基通常的做法是，實驗室自己配制培養(yǎng)基，倒平板，預(yù)培養(yǎng)，挑選后冷藏保存，直至使用。仔細考量這個環(huán)節(jié)，存在諸多的風險點：第一：預(yù)培養(yǎng)的條件如何確定？第二：挑選這一過程不可能發(fā)現(xiàn)所有長菌的平板。第三：挑選平板的過程，也存在污染或交叉污染的可能。如發(fā)現(xiàn)已污染的培養(yǎng)基平板，GMP的要求是走偏差或OOS的流程，而不是僅僅去除染菌的，剩下的繼續(xù)使用。第四：預(yù)培養(yǎng)過程，對培養(yǎng)基而言就是一個營養(yǎng)消耗的過程，預(yù)培養(yǎng)后，在沒有確認培養(yǎng)基的促生長性能之前就使用，存