培養(yǎng)系応用成熟脳細胞培養(yǎng)法開発

1、培養(yǎng)系応用成熟脳細胞培養(yǎng)法開発坂口卓也1,2,3、岡田竜美3,4、汐見理沙3,4、池井崇真3、宮本朋幸2,3,4、薬師寺宏匡2,3,4、大野節(jié)代2,3、三宅康之1,2,3、大野英治1,2,3,41加計學園細胞病理學、2倉敷蕓術科學大學生命科學部生命科學科、3産業(yè)科學技術學部生命化學科、4大學院産業(yè)科學技術研究科機能物質(zhì)化學専攻背景目的記憶司海馬、特徴的細胞構築持。 神経細胞 集合歯狀回領域顆粒細胞層、CA3CA1至領域錐體細胞層形成。歯狀回CA3、CA3CA1軸索投射興奮性形成。神経情報処理參與神経膠細胞 細胞 、共存。海馬細胞変性伴癡呆発癥病研究、海馬培養(yǎng)標本多用。培養(yǎng)海馬標本胎生期脳分散細

2、胞用、源相當數(shù)動物脳必要、細胞未熟必成熟脳反映欠點。點改善為、予長期培養(yǎng)一旦成熟海馬細胞分散再培養(yǎng)新規(guī)培養(yǎng)系開発試。培養(yǎng)深麻酔下生後5日齢脳摘出、350m 厚海馬作成。下部培地満膜靜置、培地/大気界面培養(yǎng)行。1996年版 “National Institute of Health Guide for the Care and Use of Laboratory Animals (NIH Publications No. 80-23)” 準拠、全手術行。細胞分散再培養(yǎng)1-6週間培養(yǎng)海馬蛋白分解酵素処理後、細胞分散反応血清停止。細胞洗浄後、-L-施円形含 12 穴細胞蒔布培養(yǎng)開始。一部検討、海馬歯

3、狀回領域切出培養(yǎng)。免疫細胞化學的解析標本0.1%-X処理、細胞膜透過性増大。細胞形質(zhì)解析為、次抗體用免疫反応基解析行。 TuJ1：標識、突起中微小管構成蛋白 -Tubulin対抗體。 抗繊維酸性蛋白 GFAP 抗體：細胞一種、標識抗體。 RIP：細胞一種、標識抗體。結果1週間培養(yǎng)海馬分散細胞一旦全突起失、後再培養(yǎng)行突起伸展。2-6週間培養(yǎng)海馬分散細胞、一旦全突起失後數(shù)日間突起伸展伴著形態(tài)変化観察。後者標本細胞発現(xiàn)蛋白解析、TuJ1、抗GFAP抗體、RIP各陽性反応示細胞観察。、通常観察TuJ1抗GFAP抗體、TuJ1RIP両方陽性反応示細胞観察?？疾鞌?shù)週間培養(yǎng)脳細胞分散再培養(yǎng)、源動物脳自體必要

4、成熟脳細胞培養(yǎng)系確立成功。TuJ1、抗GFAP抗體、RIP陽性反応示細胞各、相當海馬細胞示唆。TuJ1抗GFAP抗體TuJ1RIP両方陽性反応示細胞、既知細胞中間體示唆。技術成熟脳細胞研究、特損傷後脳再生機構解析為有用手段期待。參考資料坂口卓也、培養(yǎng)脳発芽起?生物物理206:176-180, 1996.坂口卓也、培養(yǎng)脳創(chuàng)薬研究応用33:614-616, 1997.坂口卓也、培養(yǎng)脳研究応用脳科學20:1345-1350, 1998胚性幹細胞由來胚様體細胞形態(tài)學的解析薬師寺宏匡2,3、宮本朋幸2,3、守本容子3、織田智博3、大野節(jié)代2、三宅康之1,2、坂口卓也1,2、大野英治1,2,31加計學園細

5、胞病理學、2倉敷蕓術科學大學生命科學部生命科學科、3大學院産業(yè)科學技術研究科機能物質(zhì)化學専攻背景目的幹細胞分化制御技術確立、再生醫(yī)療鍵。細胞分化研究際、好適材料胚性幹細胞 ES細胞 。中ES細胞倫理的問題抵觸、細胞多形分化能解析為多用。ES細胞培養(yǎng)進行個細胞分化多様性発現(xiàn)、細胞間相互関係変化起。一、胚様體呼細胞塊形成。細胞塊、ES細胞分化集合器官機能始示唆。近年、ES細胞分化機構関分子生物學的手法用研究盛行。分化誘導一端胚様體形成手法、形態(tài)解析詳細報告少。今回、胎生幹細胞形成胚様體対象形態(tài)學的解析行。胚様體形成機構解明為、発現(xiàn)蛋白解析試。、効果的分化誘導行為新規(guī)胚様體形成法検討。方法129SV

6、由來凍結胎生幹細胞解凍後、LIF含増殖培地中C処理済初代線維芽細胞用3日間培養(yǎng)、継代行。後処理細胞剝離、LIF抜分化誘導培地、微生物用、製、Hanging drop法用胚様體形成。培養(yǎng)皿中胚様體微分干渉顕微鏡観察、胚様體採取包埋切片作成、HE染色、免疫染色施検索。結果微生物用、製、Hanging drop法胚様體形成確認。形成胚様體拍動型非拍動型大別、連続切片cystic typenoncystic type2分。cystic type內(nèi)腔一層円柱上皮様細胞被覆、noncystic type、心筋様細胞、腺管様細胞種細胞観察。胚様體相互融合面特異形態(tài)観察、E-cadherin発現(xiàn)確認?？疾炫邩旙w形成ES細胞培養(yǎng)皿底部付著、底部細胞反発性持必要。今回結果確認共、既知材質(zhì)止新